This work was supported by the National Heart Lung and Blood Institute (NHLBI) of the National Institutes of Health under award numbers R01 HL121212 (PI: Sen Gupta), R01 HL129179 (PI: Sen Gupta, Co-I: Li) and R01 HL098217 (PI: Nieman). The content of this publication is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health.

Tüm prosedürler ve hayvanların manipülasyonlar Amerika Birleşik Devletleri Halk Sağlığı Servisi İnsani Bakım Politika ve Hayvanların Kullanımı ve Bakımı NIH Kılavuzu ve uygun Cleveland Clinic Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komiteleri (IACUC) tarafından onaylanmıştır Laboratuar Hayvanlarının kullanımı. 1. Hazırlıklar: <ol><li> Etiketleme plateletler için floresan boya <ol><li> tuzlu su içinde, rodamin 6G çözeltisi, 0.5 mg / ml hazırlamak ve 0.22 um filtre ile çözelti sterilize edin. </li></ol></li><li> FeCl3 Çözüm <ol><li> % 30 FeCl 3 taze bir stok solüsyonu olun saf su (Susuz, 1.85 M eşittir), ve 0.45 um filtresi ile filtre. 5 ml taze FeCI istenen konsantrasyonda 3 çözeltisi [örneğin,% 2.5 (0.154 M),% 5 (0.308 M), 7.5% (0.463 M),% 10 (0.617 M) ile% 12.5 (0.771 M)] ile hazırlayın su i ile% 30 FeCl3 çözeltisi seyreltilmesina 6 cm doku kültürü çanak ve kapağı tutmak kapattı. NOT: kültür çanak kullanmak daha kolay gibi 1.5 ml mikrosantrifüj tüp olarak, dar bir kaptan onu almak için daha FeCl3 çözeltisi ile doymuş filtre kağıdı almak için yapar. FeCl3 son derece tehlikelidir ve böyle giyen eldiven vb laboratuvar önlüğü, Kişisel Koruyucu Ekipman olarak önlemler, her zaman alınması gerektiğini söyledi. </li></ol></li><li> filtre Kağıtları <ol><li> 1 mm x 2 mm boyutu filtre kağıdı kesin. Aynı çanak FeCl3 çözeltisi içinde kesilmiş filtre kağıdı yeterli parçalarını bekletin. </li></ol></li><li> Papaverin hidroklorür çözeltisi <ol><li> su içinde, papaverin hidroklorür çözeltisi (25 mg / ml) hazırlayın ve 0.22 um filtre ile çözelti sterilize edin. </li></ol></li><li> agaroz Jel <ol><li> , 6-yuvalı doku kültürü plakasında,% 2 agaroz PBS içinde jel veya tuzlu su hazırlama yaklaşık 1 cm kalınlıkta ve Cı~ 3 cm çapında yarım daire için ut. </li></ol></li></ol> 2. FeCl3 Kaynaklı Karotis Arter Yaralanması Tromboz Modeli <ol><li> Tromboz Model Cerrahi İşlemleri <ol><li> 12 haftalık C57BL6 fareleri (ya da diğer suşlar olarak gerekli) - 8 kullanın. intraperitonal enjeksiyon yoluyla ketamin (100 mg / kg) / ksilazin (10 mg / kg) karışımı ile fareler anestezi. ayak sıkıştırarak anestezi derinliği onaylayın. NOT: ketamin / xylazine Bu miktar en az 1 saat boyunca stabil anestezi hayvan ve hiç ağrı (kısma ayak yanıt) tutmak için yeterlidir. </li><li> küçük bir hayvan elektrikli kesme makinesi ile boyun ve üst göğüs kürk çıkarın. Depilasyon krem ​​gerekli değildir. anestezi sırasında kurumasını önlemek için gözleri nötr petrol göz merhemi sürün. </li><li> 15 cm doku kültürü plaka kapağı üzerinde yatar pozisyonda fare sabitleyin. hin sabitlemek için uzun bir bant (~ 10 cm) kullanınD bacaklarda ve alt gövde, ve ön ayakları korumak için küçük bir bant (2 cm x 0,5 cm) iki adettir. , Kesici dişlerin etrafına sarmak için 4-0 sütür kullanın fare boyun düz (Şekil 2) tutmak için kapağa sütür iki ucu bantlayın. </li><li> cerrahi ışık kaynağı altında operatöre doğru fare kafası ile plaka koyun. </li><li> Alkol ped ile cerrahi siteyi sterilize edin. Cildi tutmak için Mikro-Adson Forseps kullanın ve küçük bir kesi yapmak için bir cerrahi makas kullanın (2-3 mm). </li><li> forseps ile kesi cilt tutun ve çene kesi içine kapalı cerrahi makas yerleştirin. deri altı tabakadan cildi serbest makas açın manubrium veya çene doğru subkutan makas itin ve. </li><li> Hyoid kemik düzeyinde (Şekil 3A ve 3B) için manubrium bir orta hat kesi yapmak için cerrahi makas ile cilt kesin. Açık açık ince fasya (noktalı çizgi içinde teşrih <strong&gt; ince hemostatla submaksiller bezleri ve Graefe forseps (Şekil 3B ve 3C arasında Şekil 3B); mavi oklar). Not: manubrium (Şekil 3C&#39;de siyah ok) ve trakea (Şekil 3C&#39;de T) adımından sonra görülecektir. </li><li> Serbest hemostatı çeneleri açın (Şekil 3C sarı noktalı çizgi) 02:00 konumuna doğru fasya altında hemostat eklemek, yumuşak doku ve Graefe forseps ile manubrium sağında görülen cilt tutun çevreleyen dokudan juguler ven. </li><li> Sağ juguler ven (Şekil 3B, ok) ortaya çıkarmak için cerrahi makas ile 02:00 pozisyonunda (Şekil 3C) doğru fasya, yumuşak doku ve cildi kesin. </li><li> Daha sonra 22 G iğne ve değişim ile 1 ml şırınga kullanarak 300 ul rodamin 6G çözümü - yaklaşık 200 Beraberliko 30 G iğne. NOT: Bu ince ucu hasardan 30 G iğne korur. Doğrudan ucu zarar vermez 30 G iğne ile rodamin 6G çözüm çizim; Ancak enjeksiyon zor hale getirebilir hasara neden olur yanlışlıkla konteyner duvar dokunmadan. </li><li> yavaş yavaş rodamin 6G çözüm iterek 30 G iğne yıkayın, hiçbir hava kabarcığı şırınga veya iğne kalır emin olun. Enjeksiyon için 100 ul rodamin 6G çözüm tutun. </li><li> Bend 2 - şah damarından çok derin iğne takmadan önlemek ve daha kolay (Şekil 3D) kontrollü enjeksiyon yapar olacaktır iğne tutucu ile 90 ° açı, iğne 3 mm uç. </li><li> Etiket trombositlerin sağ juguler ven içine rodamin 6G çözüm enjekte. injection.Af sırasında başka bir eliyle Graefe forseps ile tek elle şırınga ve iğneyi tutun, şırınga stabilize ve pozisyonda iğne tutmak içinter enjeksiyonu, kanamayı önlemek için Graefe forseps ile enjeksiyon bölgesini kelepçe. </li><li> hemostatı çeneleri açın ve enjeksiyon yerinde damar duvarını kelepçe Graefe forseps altında yerleştirin ve sonra bir 6-0 sütür ile enjeksiyon bölgesini Arter. Not: Adım 2.1.15 bir alternatif olarak, kanamayı durdurmak 2 dakika boyunca bir parmak ile enjeksiyon yerinde basınç uygulamak; Bununla birlikte, bu yöntem, bundan başka neden enjeksiyon yerinde pıhtı kaza kaldırılırsa, kanama riskine sahiptir. </li><li> Açıkça hemostat ve Graefe forseps ile sol alt çene bezi etrafındaki yumuşak doku ve fasya teşrih ve sol sternokleidomastoid kası (Şekil 3E mavi ok) açığa çıkarmak için 07:00 pozisyonuna (Şekil 3E) doğru bezi çekin. </li><li> Açık açık bıraktı sternokleidomastoid kas ve omohyoid kas veya sternohy arasındaki fasya (Şekil 3E, noktalı çizgi) teşrihhemostatla trakea sol sitesine bulunan oid kas (Şekil 3E, yeşil ok). </li><li> Sternokleidomastoid kasının (Şekil 3E mavi ok) orta altında 6-0 ipek sütür (yaklaşık 15 cm uzunluğunda) ile bir iğne geçirin birlikte sütür iki ucu koymak ve 10:00 pozisyonunda doğru yanal sütür çekin . Not: Bu yordam sternokleidomastoid kasının dışında bulunan, sol juguler ven, bir zarar gelmemesi için dikkatle yapılmalıdır. </li><li> Açık açık ince sternohyoid kas ve / veya sternokleidomastoid kas çekerek sonra karotid arter (CA) (Şekil 3F ok) açığa omohyoid kas ayırın. gerektiğinde sternohyoid kas ve / veya omohyoid kas kesin. CA&#39;yı dokunmadan CA yumuşak dokuyu ayırmak için hemostat kullanın NOT: CA vagus siniri eşlik ediyor, beyaz yapı görülen <strong&gt; Şekil 3G (yeşil ok) ve ince sternohyoid kas ve / veya (Şekil 3F sarı noktalı çizgiler arasında) omohyoid kasın altında çoğu durumda. </li><li> vagus siniri ve CA&#39;yı kaçınarak CA etrafında yanal fasya almak için bir ince uçlu forseps kullanın CA ve vagus siniri arasındaki fasya bir delik yumruk başka ince uçlu forseps kullanın. </li><li> delikten kanca geçirin ve hafifçe CA kaldırın ve ardından CA altında ince uçlu forseps yerleştirin adventisyal yumuşak doku şerit CA boyunca zıt yönlerde kanca ve forseps taşıyın. Çevreleyen dokudan CA (Şekil 3H, mavi ok) Serbest en azından ~ 5 mm uzunluğunda. </li><li> Düz bir siyah plastik kahve karıştırıcı sonuna basın, arka plan floresan engellemek için, 3 mm parçası haline kahve karıştırıcı kesen ve ardından &quot;U&quot; şeklinde plastik (Şekil 3H, yeşil iki parça almak için kat kenarları boyunca uzunlamasına kesilmiş ) ok. </li><li&gt; Serum fizyolojik ile bu &quot;U&quot; şeklinde plastik bir parça durulayın ve forseps ile tutun ve yavaşça kanca (Şekil 3H, yeşil ok) ile CA kaldırırken CA altına yerleştirin. Hemen CA&#39;yı kurumasını önlemek için tuzlu su 2-3 damla uygulamak </li></ol></li><li> Gerçek zamanlı Kaydı Video <ol><li> 10X su mercek altında uygun bir konumda mikroskop sahne ve yere birlikte fare ve plaka kapağı aktarın. 10X objektif ve tuzlu su ile CA arasındaki boşluğu doldurmak. </li><li> Dijital video kayıt yazılımı uygulamasını başlatın ve yeni bir dosya başlatmak ve buna göre adlandırın. Normal damar görüntüleri kaydetmek ve video kayıt durduğunda kare numarasını yazınız. NOT: Kayıt için bilgisayarda bir video kayıt yazılımı Referans. Biz dijital video kayıt yazılımı kullanmak ve aşağıdaki açıklamaları bu uygulama dayanmaktadır. NOT: Mekanik tra yanauma endotel zarar ve trombüs oluşumu 20 yol açabilir, FeCl3 yaralanma öncesi damar duvarına cerrahi yaralanma olduğunu doğrulamak için gereklidir. FeCl3 indüklenen yaralanma etkisini bir bariyer oluşturur ve zayıflatmak olabilir CA etrafında kalan doku, olduğunu doğrulamak için de gereklidir. kolay, daha sonra geçen süreleri göre videoları analiz yapacak kayıtların kare sayısını yazın. </li><li> 10X objektif dışarı plaka kapağı fareyi hareket ettirin. ince ve ince ucu yapmak ve dikkatle CA etrafında tuzlu leke kullanmak için bir kağıt havlu bir köşesini katlayın cerrahi alanındaki diğer yerlerde yanı sıra (CA dokunmaktan kaçının). Bu, kullanılan FeCl3 çözeltisinin seyreltilmesinden kaçınmak önemlidir. </li><li> Ince bir uç forseps kullanın ve FeCl3 çözeltisi ile doymuş filtre kağıdı bir parça alıp CA doğrudan yerleştirin ve 1 dakika boyunca sahada tutmak. NOT: To kan ve hasat doğru veri yardım görselleştirme, yakın maruz CA (Şekil 3I) distal ucuna filtre kağıdı yerleştirin ve geç kan akışını gözlemlemek için (Şekil 3I yeşil ok) proksimal yerinde kısa bir segmenti bırakın faz (aşağıya bakınız). </li><li> Filtre kağıdı çıkarın (bu zaman noktası başlangıcı olarak tanımlanan &quot;yaralanma sonrası&quot;) ve tuzlu su (en az 2 mi) ile CA yıkayın. </li><li> geri 10X objektif plaka kapak ile fare koymak; gemi gözlemlemek ve video görüntüleri başlar. Kaydın ilk dakika sonunda video çerçeve numarasını yazın. Not: Trombüs formasyonu bilgisayar ekranında ya da mikroskop altında gerçek zamanlı video görüntüleri görülmektedir flüoresan trombositler birikimi ile tanımlanır. Tutanak video görüntüleri hemen mikroskop altında geri fare koyarak sonra. f çıkardıktan sonra ilk dakika sonuna kadar kayıt tutmakilter kağıdı. Yaralanma hakkında bilgi edinmek için proksimal sitelerine uzak gelen tüm gemi gözlemlemek ve sonra ilgi alanı odaklanmak daha görüntüleme için (genellikle yaralı bölgenin merkezidir). </li><li> 10 saniye ilk 10 dakika deneyin sonuna kadar (örneğin, 3:05 ile 02:55) ve daha sonra 10 sn her dakika için her dakika için rekor video görüntüleri. Her bir kayıt durduğunda çerçeve numaralarını yazın. NOT: Modelin bitiş noktaları şunlardır: 1) kan akımı&gt; 30 sn sona erdiğinde; veya 2) tıkanıklığı yaralanma sonrası 30 dakika içinde görülen değilse. Bu durumda, istatistiksel analiz için 30 dakika kullanımı. başında 10 msn gibi video kaydının Pozlama Saati ayarlayın, böylece trombüs üzerinde kan akışını gözlemlemek kolay olacaktır. trombüs büyük olur ve floresan kameranın sensörü doyurur, bu trombüs üzerinde kan akışını tespit etmek zorlaşır. Bu sorunu çözmek için, görüntüleme ce hareketkan akımı hala net bir şekilde görülebilir proksimal yaralanmamış sitesinden (Şekil 3I, yeşil ok) nter. Proksimal un yaralı sitede odaklanarak zaman kan akımı daha net görülebilir, böylece biz de, 15 veya 20 msn Açığa Zaman artırmak. kan akışı duracak zaman, çok sayıda büyük hücreler (lökositler) trombüsün proksimal yerinde damar duvarında rulo başlar. Büyük hücrelerin görünümü sonra 3 dakika - Akış genellikle 2 içinde durur. değişti ise kayıt kağıda Zaman Açığa yazın. normal doğal suş C57BL6 fare kullanılması durumunda, genellikle, deneyin sonuna kadar anestezi yaklaşık 30 dakika sürer. DİKKAT NOT: doğru veri vermeyecektir kan akımı kesilmesi, işareti olarak beyaz toplanan trombosit pıhtı kullanmayın ve maruz kalma süresi etkilenir. beyaz pıhtı (bkz temsili video 1) durdurdu kan akışını anlamına gelmez damar lümeni kaplı. </li><li&gt; Deney sonunda, hiçbir nefes ve kalp atışı onayladıktan sonra servikal dislokasyon tarafından takip aşırı doz ketamin / ksilazin (200/20 mg / Kg) kullanarak fareler euthanize. </li></ol></li></ol> 3. FeCl3 Kaynaklı Mezenterik Arter / Ven Trombozu Modeli <ol><li> Bölüm 2.1.1 belirtildiği gibi 12 haftalık C57BL6 fareler - 8 uyutmak. anestezi sırasında kurumasını önlemek için gözleri veteriner merhem sürün. </li><li> intraperitoneal bağırsak peristalsis inhibe Papaverin çözeltisi (toplam 0.4 mg / fare) enjekte edilir. </li><li> Bir hayvan elektrikli kesme makinesi ile boyun ve karın kürk çıkarın. Depilasyon krem ​​gerekli değildir. </li><li> 15 cm doku kültürü plaka kapağı üzerinde yatar pozisyonda fare sabitleyin. Tüm bacakları sabitlemek için küçük bir bant (2 cm x 0,5 cm) dört adet kullanın. Kesici etrafında sarmak için 4 -0 sütür kullanın, boyun düz (Şekil 2) tutmak için kapağa sütür iki ucu bantlayın. </li><li> prosedürleri 2.1.4 izleyin -2.1.15 etiket trombositlerin için rodamin 6G enjeksiyonu için juguler ven ortaya çıkarmak. </li><li> Cerrahi makas (Şekil 4A) kullanarak karın daha düşük kılıç şeklinde deri yoluyla orta hat kesi gerçekleştirin. (Olarak da adlandırılır linea alba, Şekil 4A, ok) açıktır ve herhangi bir kan damarları vardır Graefe forseps ile, yaklaşık 2 asansör orta periton Pick up - kesme sınırının altında hiçbir bağırsak onaylamak, 3 mm yüksekliğinde ve açık periton kesip uzunlamasına ince makas (Şekil 4B) ile. </li><li> Sağ lateral pozisyonda fareler yeniden sabitleyin. Karın yakın yarım daire agaroz jel yerleştirin ve yavaşça bağırsak exteriorize ve Graefe forseps (Şekil 4C) ile jel üstünde yayıldı. Tromboz deney (Şekil 4C, ok) için ikinci şubesi kullanın. NOT: bağırsakları exteriorize yardımcı hemostat veya Micro-Adson forseps kullanın. zarar kaçınınbağırsak ve damar. </li><li> bağırsak ve geminin nem tutmak için 6 damla serum fizyolojik - 5 yerleştirin. Mikroskop sahneye birlikte plaka kapaklı fare aktarın ve 10X kuru mercek altında uygun konuma yerleştirin. NOT: jejunoileal membran tuzlu su çözeltisi tutamayacak, çünkü kuru bir lensi kullanın. nemli tutmak maruz kalan dokularda tuzlu su çözeltisi damla emin olun. </li><li> tedaviden önce mezenterik arter ve ven çevresinde tuzlu kurulayın. </li><li> % 12.5 FeCl3 çözeltisi ile doymuş filtre kağıdı bir parça alıp 1 dakika (Şekil 4D) için mezenterik arter ve ven doğrudan yerleştirmek için ince uçlu forseps kullanın. Filtre kağıdı çıkarın ve tuzlu su ile yaralanan mezenterik arter ve ven durulayın (en az 2 ml) (bu zaman noktası &quot;yaralanma sonrası&quot; başlangıcı olarak tanımlanır). </li><li> geri 10X kuru mercek altında plaka kapak ile fare koymak; gemileri gözlemlemek ve rec başlar2.2&#39;de belirtildiği gibi Ord video görüntüleri). NOT: Bu deneyin bitiş noktaları şunlardır: 1) kan akımı&gt; 30 sn sona erdiğinde; ya da 2) tıkanması yaralanma sonrası 30 dakika içinde görülür değilse, ve bu durumda, istatistiksel analiz için 30 dakika kullanın. </li><li> Deney sonunda, hiçbir nefes ve kalp atışı teyit sonra servikal dislokasyon tarafından takip aşırı doz ketamin / ksilazin (200/20 mg / Kg) kullanarak fareler euthanize. </li></ol>

<ol>
	<li>Sachs, U. J., Nieswandt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+thrombus+formation+in+murine+models.">In vivo thrombus formation in murine models.</a> Circ Res. 100, 979-991 (2007).</li><li>Libby, P., Lichtman, A. H., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+effector+mechanisms+implicated+in+atherosclerosis:+from+mice+to+humans.">Immune effector mechanisms implicated in atherosclerosis: from mice to humans.</a> Immunity. 38, 1092-1104 (2013).</li><li>Ruggeri, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+adhesion+under+flow.">Platelet adhesion under flow.</a> Microcirculation. 16, 58-83 (2009).</li><li>Watson, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+activation+by+extracellular+matrix+proteins+in+haemostasis+and+thrombosis.">Platelet activation by extracellular matrix proteins in haemostasis and thrombosis.</a> Curr Pharm Des. 15, 1358-1372 (2009).</li><li>Furie, B., Furie, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombus+formation+in+vivo.">Thrombus formation in vivo.</a> J Clin Invest. 115, 3355-3362 (2005).</li><li>Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ferric+chloride-induced+murine+carotid+arterial+injury:+A+model+of+redox+pathology.">Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology.</a> Redox Biol. 1, 50-55 (2013).</li><li>Ghosh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+CD36+mediates+interactions+with+endothelial+cell-derived+microparticles+and+contributes+to+thrombosis+in+mice.">Platelet CD36 mediates interactions with endothelial cell-derived microparticles and contributes to thrombosis in mice.</a> J Clin Invest. 118, 1934-1943 (2008).</li><li>Chen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vav+guanine+nucleotide+exchange+factors+link+hyperlipidemia+and+a+prothrombotic+state.">Vav guanine nucleotide exchange factors link hyperlipidemia and a prothrombotic state.</a> Blood. , (2011).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD36+participates+in+a+signaling+pathway+that+regulates+ROS+formation+in+murine+VSMCs.">CD36 participates in a signaling pathway that regulates ROS formation in murine VSMCs.</a> J Clin Invest. 120, 3996-4006 (2010).</li><li>Chen, K., Febbraio, M., Li, W., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specific+CD36-dependent+signaling+pathway+is+required+for+platelet+activation+by+oxidized+low-density+lipoprotein.">A specific CD36-dependent signaling pathway is required for platelet activation by oxidized low-density lipoprotein.</a> Circ Res. 102, 1512-1519 (2008).</li><li>Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+model+of+arterial+thrombosis+induced+by+ferric+chloride.">Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride.</a> Thromb Res. 60, 269-280 (1990).</li><li>Konstantinides, S., Schafer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasminogen+activator+inhibitor-1+and+its+cofactor+vitronectin+stabilize+arterial+thrombi+after+vascular+injury+in+mice.">Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice.</a> Circulation. 103, 576-583 (2001).</li><li>Leadley, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacodynamic+activity+and+antithrombotic+efficacy+of+RPR120844,+a+novel+inhibitor+of+coagulation+factor+Xa.">Pharmacodynamic activity and antithrombotic efficacy of RPR120844, a novel inhibitor of coagulation factor Xa.</a> J Cardiovasc Pharmacol. 34, 791-799 (1999).</li><li>Marsh Lyle, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+thrombin+inhibitor+efficacy+in+a+novel+rabbit+model+of+simultaneous+arterial+and+venous+thrombosis.">Assessment of thrombin inhibitor efficacy in a novel rabbit model of simultaneous arterial and venous thrombosis.</a> Thromb Haemost. 79, 656-662 (1998).</li><li>Farrehi, P. M., Ozaki, C. K., Carmeliet, P., Fay, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+arterial+thrombolysis+by+plasminogen+activator+inhibitor-1+in+mice.">Regulation of arterial thrombolysis by plasminogen activator inhibitor-1 in mice.</a> Circulation. 97, 1002-1008 (1998).</li><li>Robertson, J. O., Li, W., Silverstein, R. L., Topol, E. J., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+LRP8+in+mice+is+associated+with+altered+platelet+function+and+prolonged+time+for+in+vivo+thrombosis.">Deficiency of LRP8 in mice is associated with altered platelet function and prolonged time for in vivo thrombosis.</a> Thromb Res. 123, 644-652 (2009).</li><li>Gupta, N., Li, W., Willard, B., Silverstein, R. L., McIntyre, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteasome+proteolysis+supports+stimulated+platelet+function+and+thrombosis.">Proteasome proteolysis supports stimulated platelet function and thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34, 160-168 (2014).</li><li>Srikanthan, S., Li, W., Silverstein, R. L., McIntyre, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome+poly-ubiquitin+inhibits+platelet+activation,+downregulates+CD36+and+inhibits+pro-atherothombotic+cellular+functions.">Exosome poly-ubiquitin inhibits platelet activation, downregulates CD36 and inhibits pro-atherothombotic cellular functions.</a> J Thromb Haemost. 12, 1906-1917 (2014).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymidine+phosphorylase+participates+in+platelet+signaling+and+promotes+thrombosis.">Thymidine phosphorylase participates in platelet signaling and promotes thrombosis.</a> Circ Res. 115, 997-1006 (2014).</li><li>Le Menn, R., Bara, L., Samama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+a+model+of+thrombogenesis+induced+by+mechanical+injury.">Ultrastructure of a model of thrombogenesis induced by mechanical injury.</a> J Submicrosc Cytol. 13, 537-549 (1981).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD36+participates+in+a+signaling+pathway+that+regulates+ROS+formation+in+murine+VSMCs.">CD36 participates in a signaling pathway that regulates ROS formation in murine VSMCs.</a> J Clin Invest. 120, 3996-4006 (2010).</li><li>Re-examining Acute Eligibility for Thrombolysis Task Force. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review,+historical+context,+and+clarifications+of+the+NINDS+rt-PA+stroke+trials+exclusion+criteria:+Part+1:+rapidly+improving+stroke+symptoms.">Review, historical context, and clarifications of the NINDS rt-PA stroke trials exclusion criteria: Part 1: rapidly improving stroke symptoms.</a> Stroke. 44, 2500-2505 (2013).</li><li>Mumaw, M. M., de la Fuente, M., Arachiche, A., Wahl, J. K., Nieman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+monoclonal+antibodies+against+Protease+Activated+Receptor+4+(PAR4).">Development and characterization of monoclonal antibodies against Protease Activated Receptor 4 (PAR4).</a> Thromb Res. 135, 1165-1171 (2015).</li><li>Mumaw, M. M., de la Fuente, M., Noble, D. N., Nieman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+anionic+region+of+human+protease-activated+receptor+4+inhibits+platelet+aggregation+and+thrombosis+without+interfering+with+hemostasis.">Targeting the anionic region of human protease-activated receptor 4 inhibits platelet aggregation and thrombosis without interfering with hemostasis.</a> J Thromb Haemost. 12, 1331-1341 (2014).</li><li>Modery-Pawlowski, C. L., Kuo, H. H., Baldwin, W. M., Sen Gupta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+platelet-inspired+paradigm+for+nanomedicine+targeted+to+multiple+diseases.">A platelet-inspired paradigm for nanomedicine targeted to multiple diseases.</a> Nanomedicine (Lond). 8, 1709-1727 (2013).</li><li>Anselmo, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-like+nanoparticles:+mimicking+shape,+flexibility,+and+surface+biology+of+platelets+to+target+vascular+injuries.">Platelet-like nanoparticles: mimicking shape, flexibility, and surface biology of platelets to target vascular injuries.</a> ACS Nano. 8, 11243-11253 (2014).</li><li>Modery, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heteromultivalent+liposomal+nanoconstructs+for+enhanced+targeting+and+shear-stable+binding+to+active+platelets+for+site-selective+vascular+drug+delivery.">Heteromultivalent liposomal nanoconstructs for enhanced targeting and shear-stable binding to active platelets for site-selective vascular drug delivery.</a> Biomaterials. 32, 9504-9514 (2011).</li><li>Woollard, K. J., Sturgeon, S., Chin-Dusting, J. P., Salem, H. H., Jackson, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythrocyte+hemolysis+and+hemoglobin+oxidation+promote+ferric+chloride-induced+vascular+injury.">Erythrocyte hemolysis and hemoglobin oxidation promote ferric chloride-induced vascular injury.</a> J Biol Chem. 284, 13110-13118 (2009).</li><li>Ciciliano, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolving+the+multifaceted+mechanisms+of+the+ferric+chloride+thrombosis+model+using+an+interdisciplinary+microfluidic+approach.">Resolving the multifaceted mechanisms of the ferric chloride thrombosis model using an interdisciplinary microfluidic approach.</a> Blood. 126, 817-824 (2015).</li><li>Barr, J. D., Chauhan, A. K., Schaeffer, G. V., Hansen, J. K., Motto, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red+blood+cells+mediate+the+onset+of+thrombosis+in+the+ferric+chloride+murine+model.">Red blood cells mediate the onset of thrombosis in the ferric chloride murine model.</a> Blood. 121, 3733-3741 (2013).</li><li>Dunne, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin+6+has+a+functional+role+in+platelet+aggregation+and+thrombus+formation.">Cadherin 6 has a functional role in platelet aggregation and thrombus formation.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32, 1724-1731 (2012).</li><li>Lockyer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPVI-deficient+mice+lack+collagen+responses+and+are+protected+against+experimentally+induced+pulmonary+thromboembolism.">GPVI-deficient mice lack collagen responses and are protected against experimentally induced pulmonary thromboembolism.</a> Thromb Res. 118, 371-380 (2006).</li><li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+CGHC+motif+of+protein+disulfide+isomerase+supports+thrombosis.">The C-terminal CGHC motif of protein disulfide isomerase supports thrombosis.</a> J Clin Invest. , (2015).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+underlying+FeCl3-induced+arterial+thrombosis.">Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 9, 779-789 (2011).</li><li>Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+thrombosis+models.">Murine thrombosis models.</a> Thromb Haemost. 92, 486-494 (2004).</li><li>Cooley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+thrombosis.">Murine models of thrombosis.</a> Thromb Res. 129 Suppl 2, S62-S64 (2012).</li><li>Gupta, N., Li, W., McIntyre, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deubiquitinases+Modulate+Platelet+Proteome+Ubiquitination,+Aggregation,+and+Thrombosis.">Deubiquitinases Modulate Platelet Proteome Ubiquitination, Aggregation, and Thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35, 2657-2666 (2015).</li><li>Konstantinides, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+antithrombotic+consequences+of+platelet+glycoprotein+Ibalpha+and+VI+deficiency+in+a+mouse+model+of+arterial+thrombosis.">Distinct antithrombotic consequences of platelet glycoprotein Ibalpha and VI deficiency in a mouse model of arterial thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 4, 2014-2021 (2006).</li><li>Versteeg, H. H., Heemskerk, J. W., Levi, M., Reitsma, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+fundamentals+in+hemostasis.">New fundamentals in hemostasis.</a> Physiol Rev. 93, 327-358 (2013).</li><li>Yan, S. F., Mackman, N., Kisiel, W., Stern, D. M., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia/Hypoxemia-Induced+activation+of+the+procoagulant+pathways+and+the+pathogenesis+of+ischemia-associated+thrombosis.">Hypoxia/Hypoxemia-Induced activation of the procoagulant pathways and the pathogenesis of ischemia-associated thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 19, 2029-2035 (1999).</li><li>Rahaman, S. O., Li, W., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vav+Guanine+nucleotide+exchange+factors+regulate+atherosclerotic+lesion+development+in+mice.">Vav Guanine nucleotide exchange factors regulate atherosclerotic lesion development in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33, 2053-2057 (2013).</li><li>Silverstein, R. L., Li, W., Park, Y. M., Rahaman, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+cell+signaling+by+the+scavenger+receptor+CD36:+implications+in+atherosclerosis+and+thrombosis.">Mechanisms of cell signaling by the scavenger receptor CD36: implications in atherosclerosis and thrombosis.</a> Trans Am Clin Climatol Assoc. 121, 206-220 (2010).</li><li>Liu, J., Li, W., Chen, R., McIntyre, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+biologically+active+oxidized+phospholipids+show+on-going+and+increased+oxidative+stress+in+older+male+mice.">Circulating biologically active oxidized phospholipids show on-going and increased oxidative stress in older male mice.</a> Redox Biol. 1, 110-114 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

FeCl3 indüklediği modeli trombosit fonksiyonu ve tromboz 7,8,16,19,31-33 genetik değişiklikler hakkında değerli bilgiler sağlayabilir sadece en yaygın olarak kullanılan tromboz modellerinde biridir, ama aynı zamanda değerli bir araç olabilir aterotrombotik hastalıkların 11,17,34-37 tedavisi ve önlenmesi için terapötik bileşikler ve stratejiler değerlendirilmesi için. Burada biz modifikasyonları ve bu modelin iyileştirmeler gösterildiği antikoagülan (tPA), anti-trombosit ilaçlar (PAR4 antikoru) etkisini belirlemek için yeterince duyarlı olan, bu teknik, bir yardımcı ek kanıt göstermiştir. tromboz mekanik çalışma ek olarak, model, aynı zamanda nanoteknolojiler bazlı, trombüs hedefli ilaç dağıtım çalışma için kullanılabilir. Ayrıca, flüoresan ROS göstergesi 21 enjeksiyonu ile damar duvarı reaktif oksijen türleri (ROS) oluşumunun saptanması için de kullanılabilir. Titizteknikler bu modeller gerçekleştirmek için gereklidir. Operatör yeterli cerrahi beceri yanı sıra damar ve kan hücre biyolojisi derin bir anlayışa sahip olmalıdır. FeCl3 kaynaklı karotid arter trombozu modelinde birçok kilit noktalarıdır 6: (1) filtre kağıdı uygulanmasına izin ve geç aşamada intravital mikroskobu altında kan akışını gözlemlemek için bir boşluk bırakmak için karotis arter (~ 5 mm) yeterli uzunluğa maruz ; (2) açıkça filtre kağıdı doğrudan damar duvara temas ve hatta yaralanma üretmek için izin karotis arter çevresinde adventisyal yumuşak doku şerit; (3) damar duvarında ve FeCl3 -saturated filtre kağıdı uygulamadan önce hiçbir trombüs oluşumuna hiçbir mekanik yaralanma onaylamak; (4) arka plan floresan engellemek için, ve FeCl3 yayılmasını önlemek için, çevre dokularda arter ayırmak için siyah plastik şeklinde &quot;U&quot; bir parça ile karotis arter altında yatan. Bu stratejilerle, biz son derece yarattıVahşi tip C57BL / 6 fareleri, bu fare türünde% 7.5 FeCl3 trombozu süresi 11.3 ± 3.16 min (n = 14) 6,7,19 olan tekrarlanabilir verileri. Rodamin 6G boyun toplardamarı enjeksiyonu zor olabilir hücreleri dolaşımdaki etiketlemek için. Bir alternatif olarak, bir kuyruk damarı enjeksiyonu 15 cm plaka kapağı fare sabitlemeden önce gerçekleştirilebilir. Karotis arter modele karşılaştırılmasında, mezenterik arter ve ven modeli daha kolay ve daha az cerrahi yoğun. nedeniyle yağ dokusu tarafından gemilerin kapsama, Sonuç bölümdeki Ancak, mezenterik tromboz modeli ven trombozu eğitim için iyidir ama farklı fareler arasında hatayı en aza indirmek için daha büyük bir örneklem büyüklüğü gerektirir. Bu modelin sınırlama mekanizması açık değildir ve hala tartışmalıdır olmasıdır. Başlangıçta, bu modelin mekanizması FeCl3 endotel hücreleri oluşturulan ROS kaynaklı denüdasyon ve su bu olduğuna inanılıyordubsequently trombosit yapışması, agregasyonu ve trombüs oluşumunu 6,11 işlemek için, protrombotik subendotelyuma kan bileşenlerinin maruz yol açtı. Trombositopenik farelere GPVI antikor ile önceden muamele edilmiş trombosit yeniden oluşturulması, biz FeCl3 modeli trombosit GPVI bağlı olduğunu göstermiştir, ve engelleme trombosit GPVI önemli ölçüde FeCl3 neden trombüs oluşumu 19 inhibe etmiştir. Bu bulgu daha önceki raporlarda 38 ile uyumludur ve FeCl3 modeli tromboz 6 aracılı insan aterosklerotik plak yırtılması patofizyolojisini taklit etmek daha muhtemel olabileceğini düşündürmektedir. Bununla birlikte, bazı son çalışmalar, damar duvarına kırmızı kan hücrelerinin yapışması ve plazma proteinleri ve kan hücrelerinin 29,30 arasında FeCl3 indüklenen agregasyon fizikokimyasal etkisi de dahil olmak üzere yeni mekanizmalar önermiştir. Bu yeni anlayışlar bu modelin potansiyel mekanizmalar daha karmaşık olabileceğini düşündürmektedir. Trombositopenik farelere Dil-etiketli eritrosit perfüzyon ve sonra FeCl3 -triggered yaralanma% 7.5 ile karotis arter FeCl3 uyararak, biz yaralı damar duvarlarına yapışan önemli hücreleri trombositlerin (Şekil 6 ve online video 5 olduğunu tespit ). Biz açık eritrositler yapışma bulamadık ve trombüs içinde eritrosit birikimi hapsine bir sonucu olması muhtemeldir görünüyordu. Bizim bulgularımız primer ve sekonder hemostaz 39 kavramlarını maç. Daha önceki raporlarda bizim gözlem farkı hipoksi ve taramalı elektron mikroskobu incelemesi için FeCl3 yaralı karotis arterler sol ventrikül önceden olmadan maruz vardı farelerde hazırlanan Barr ve arkadaşları 30, tarafından yapılan çalışmada olduğu gibi hemodinamik değişimden olabilir mekanik ventillation yardımı. Kan oksijen konsantrasyonu ve hemodinamik dramatik hem pulmoner olarak azalacak vegöğüs mekanik ventilasyon olmadan açıldıktan sonra kalp fonksiyonu hemen etkilenecektir. Oksijen yoksunluk uzun RBC yapışma artırabilir da prokoagülan yoluna ve tromboz 40 tetiklenmesi ile ilişkili bulunmuştur. Bir başka yeni bir yayın yaralı kabın 29 lümeninde ~ 50 mM&#39;de FeCl3 bir kararlı hal konsantrasyonunun 5 ya da 10 dakika için potansiyel FeCl3 (% 20), çok yüksek bir konsantrasyon ile karotid arter tedavisinin göstermiştir . Dolayısıyla doğrudan çeşitli kan bileşenleri içine FeCl3 50 mM infüzyon ve trombüs oluşumu 29 FeCl3 eylem için yeni bir, 2-faz mekanizması önermektir onları açtı toplama ex vivo FeCl3 etkisi incelenmiştir. Oldukça ilginç olsa da, bu çalışmada elde edilen sonuçlar yaygın kullanılan FeCl3 modeli temsil etmemektedir olarak dikkatle yorumlanması gerekir. FEC yüksek konsantrasyonda aksineL3 (kağıt belirtildiği gibi% 20, 1 M) ve uzun işleme (5 ya da 10 dakika), daha önceki çalışmalar, ve Barr ve ark. 1 dakika boyunca% 10 FeCl3 tedavisi, 7 dakika 6,30 olan karotid arteri hızlı tıkayıcı trombus oluşumunu teşvik etmek için yeterli olduğunu göstermiştir. Buna ek olarak, FeCl3 modeli, FeCl3 bir başka düşük bir konsantrasyonunu kullanarak deneylerin çoğunda (5-7,5%) kullanılır. Bu modelin bir diğer kısıtlılığı nedeniyle endotel ciddi oksidatif hasar yanı sıra endotel denüdasyon sonrası FeCl3 tedaviye, bu model endotel inflamasyonla ilişkili tromboz incelemek için uygun bir araç olmayabilir olmasıdır. Ancak, floresan etiketli lökositlerin perfüzyon ile birlikte karotis arter hazırlamak için bu teknikleri kullanarak, biz iltihaplı endotele 41 lökositlerin yapışmasını ve haddeleme test edebilirsiniz. summ içindeli, biz rafine ve karotid arter üzerinde bir yüksek tekrarlanabilir yaralanma üretmek ve intravital mikroskobu ile doğru kan akımı bırakma zamanı ölçmek için FeCl3 indüklediği vasküler yaralanma modeli standart var. Bu model, antikoagülan ve antitrombotik ilaçlar test etmek için yeterli ve hassastır ve aynı zamanda trombüs hedefli nanotıpta çalışmaları için uygundur. Trombositopenik fareler veya aday ilaçların doğrudan damar içi enjeksiyon, kemik iliği nakli, trombosit infüzyon ile birlikte, bu, in vivo 7-10,16,19,42,43 trombozu incelemek için, basit ve duyarlı bir araç olduğunu göstermiştir .

Arter trombozu (kan pıhtısı) ateroskleroz, diyabet, obezite, kanser ve kronik otoimmün romatolojik bozukluklar gibi kronik inflamasyon ile ilişkili birçok sistemik hastalığın sık görülen bir komplikasyondur. uygunsuz trombosit aktivasyonu, agregasyonu ve sonraki coagulatory mekanizmalarından arteriyel dolaşım kök meydana ve trombüs kalp krizi, felç ve ekstremite kaybına neden oluyor. Damar duvarı damar duvarındaki kan hücreleri, hormonlar ve sitokinler yanı sıra antioksidan proteinlerin ifadesini dolaşan, birden fazla hücre tiplerini içerir ve kayma gerilmesi dahil dışsal faktörlerin çok sayıda etkilenir karmaşık bir sistemdir. In vitro deneyler çoğaltma yapamaz Bu kompleks bir ortam ve bu nedenle, hayvan modelleri kullanarak in vivo çalışmalar, trombotik hastalıklarda yer alan mekanizmaların daha iyi anlaşılması izin vermek için çok önemlidir. Fareler sim sahip olduğu gösterilmiştirtromboz, ateroskleroz, enflamasyon ve diyabet 1,2 açısından insanlara Ilar mekanizmaları. Ayrıca, transjenik ve knockout farelerde kompleks fizyolojik veya patolojik bir ortamda belirli bir gen ürünlerinin işlevi test etmek için oluşturulabilir. Bu tür çalışmalar, insan patoloji taklit ve yeni yollar ve tedavilerin, keşif ile ilgili önemli mekanistik bilgi vermek yanı sıra tromboz uyuşturucu etkileri karakterize önemli ayrıntıları sağlayabilir. Patolojik arteriyel trombüs subendotelyal matrise 3,4 katman yaralanma veya disfonksiyon ve kan akışının pozlama endotel nedeniyle oluşur. Çeşitli tromboz modelleri, mekanik yaralanma, photoreactive bileşik Rose Bengal tabanlı oksidatif hasarı ve lazer yaralanması 5 olarak bu endotel hasarına neden geliştirilmiştir. Bu spektrumda, Demir klorür (FeCl3) vasküler yaralanma tromboz yaygın olarak kullanılan modeldir indüklenen. Bu reaktif olduğundadamarların dış alana uygulanabilir trombositleri ve pıhtılaşma kademeli dizisinin parçalarına dolaşımdaki endotel hücre koruma kaybı, vasküler hücreler 6-8 oksidatif hasarı neden olur. FeCl3 modeli basit ve hem antikoagülan ve anti-trombosit ilaçlara duyarlı olduğunu ve fareler, sıçan, kobay ve tavşan 6-15 yılında karotis ve femoral arterler, şahdamarından ve mezenterik ve kremasterik arteriyollerde ve venüllerden üzerinde yapılmıştır. Bu modelde biri ölçülebilir bir parametre Doppler debimetre ile veya Intravital mikroskopi 6,7,9 doğrudan gözlem altında kan akımının kesilmesi olarak ölçülen damar tıkanıklığı, tamamlamak için yaralanma geçen süredir. 5 ila 30 dakika arasında zaman bir dizi işaret, C57BL6 farelerine 7-10,16 farklı çalışmalarında rapor edildiği FeCl3 konsantrasyonları, anestezi cerrahi teknikler, fare yaş, genomik arka, b, ölçüm yönteminin türleriLood akışı ve diğer çevresel değişkenler, bu modelde anlamlı bir etkiye sahiptir. Bu geniş değişkenlik zor farklı araştırma gruplarından çalışmaları karşılaştırmak ve ince farklılıkların tespiti zor hale getirebilir yapar. Böyle bir değişkenliğe en aza indirmek ve in vivo model sisteminde bir homojen tekrarlanabilir kurmak için bir vizyon ile, minimal değişiklik 6-10,16-19 ile son derece tekrarlanabilir veri yapar FeCl3 indüklenen karotid arter modeli rafine. Bu yazıda tarif ve becerilerini paylaşmak ve bu model yararlanabilir birkaç temsilci deneysel rapor örnekleri.

<table><tbody><tr><td>Surgical Scissors - Tungsten Carbide</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>14502-14</td><td>cut and hold skin</td></tr><tr><td>Micro-Adson Forceps - Serrated/Straight/12 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>11018-12</td><td>cut and hold skin</td></tr><tr><td>Metzenbaum Fino Scissors - Tungsten Carbide/Curved/Blunt-Blunt/14.5 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>14519-14&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>to dissect and separate soft tissue</td></tr><tr><td>Ultra Fine Hemostat - Smooth/Curved/12.5 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>13021-12</td><td>to dissect and separate soft tissue</td></tr><tr><td>Graefe Forceps - Serrated/Straight/10 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>11050-10</td><td>to dissect and separate soft tissue</td></tr><tr><td>Dumont #5 Fine Forceps - Biology Tips/Straight/Inox/11 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>11254-20&amp;nbsp;</td><td>Isolate vessel from surounding tissue</td></tr><tr><td>Dumont #5XL Forceps - Standard Tips/Straight/Inox/15 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>11253-10</td><td>Isolate vessel from surounding tissue</td></tr><tr><td>Blunt Hook- 12 cm/0.3 mm Tip Diameter</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>10062-12</td><td>Isolate vessel from surounding tissue</td></tr><tr><td>Castroviejo Micro Needle Holders</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>12061-02</td><td>Needle holders</td></tr><tr><td>Suture Thread 4-0</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>18020-40</td><td>For fix the incisors to the plate</td></tr><tr><td>Suture Thread 6-0</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>18020-60</td><td>For all surgery and ligation</td></tr><tr><td>Kalt Suture Needles</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>12050-03</td><td></td></tr><tr><td>rhodamine 6G&amp;nbsp;</td><td>Sigma</td><td>83697-1G</td><td>To lebel platelets</td></tr><tr><td>FeCl&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt; (Anhydrous)</td><td>Sigma</td><td>12321</td><td>To induce vessel injury</td></tr><tr><td>Papaverine hydrochloride</td><td>Sigma</td><td>P3510</td><td>To inhibit gut peristalsis.</td></tr><tr><td>Medline Surgical Instrument Sterilization Steam Autoclave Tapes</td><td>Medline</td><td>111625</td><td>To fix the mouse to the plate</td></tr><tr><td>Fisherbrand&amp;trade;&amp;nbsp;Syringe Filters - Sterile 0.22 &amp;micro;m</td><td>Fisher</td><td>09-720-004</td><td>For sterlization of solutions injected to mice</td></tr><tr><td>Fisherbrand&amp;trade;&amp;nbsp;Syringe Filters - Sterile 0.45 &amp;micro;m</td><td>Fisher</td><td>09-719D</td><td>To filter the FeCl&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt; solution</td></tr><tr><td>Sterile Alcohol Prep Pad</td><td>Fisher</td><td>06-669-62</td><td>To sterilize the surgical site</td></tr><tr><td>Agarose&amp;nbsp;</td><td>BioExpress</td><td>E-3120-500</td><td>To make gel stage</td></tr><tr><td>Leica DMLFS fluorescent microscope</td><td>Leica</td><td></td><td>Intravital microscope</td></tr><tr><td>GIBRALTAR Platform and X-Y Stage System with heating plate attached.</td><td>npi electronic GmbH</td><td></td><td>http://www.npielectronic.de/products/micropositioners/burleigh/gibraltar.html</td></tr><tr><td>Streampix version 3.17.2 software</td><td>NorPix</td><td></td><td>https://www.norpix.com/</td></tr></tbody></table>

ferric chloride-induced murine thrombosis models

Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, diabetes, obesity, cancer and chronic autoimmune rheumatologic disorders. Thrombi are the cause of most heart attacks, strokes and extremity loss, making thrombosis an extremely important public health problem. Since these thrombi stem from inappropriate platelet activation and subsequent coagulation, targeting these systems therapeutically has important clinical significance for developing safer treatments. Due to the complexities of the hemostatic system, in vitro experiments cannot replicate the blood-to-vessel wall interactions; therefore, in vivo studies are critical to understand pathological mechanisms of thrombus formation. To this end, various thrombosis models have been developed in mice. Among them, ferric chloride (FeCl3) induced vascular injury is a widely used model of occlusive thrombosis that reports platelet activation and aggregation in the context of an aseptic closed vascular system. This model is based on redox-induced endothelial cell injury, which is simple and sensitive to both anticoagulant and anti-platelets drugs. The time required for the development of a thrombus that occludes blood flow gives a quantitative measure of vascular injury, platelet activation and aggregation that is relevant to thrombotic diseases. We have significantly refined this FeCl3-induced vascular thrombosis model, which makes the data highly reproducible with minimal variation. Here we describe the model and present representative data from several experimental set-ups that demonstrate the utility of this model in thrombosis research.

Karotis Arter Trombozu Modeli C57BL6 kökenli farelerde, biz bir başlangıç ​​noktası olarak 1 dakika boyunca gemi tedavisi için% 7.5 FeCl 3 kullanmanızı öneririz. % 7.5 tedavisi FeCl3 altında, yaralı alanı ve normal damar duvarında sınırları kolayca (Bkz online video 1) mikroskop altında tespit edilir, endotel tabakası önemli ölçüde hasar gördü düşündürmektedir. Trombüs FeCl3 tedavi üzerine hemen oluşmuş ve yaralanma sonrası tüm WT C57BL6 fareler 1 dakika görülmektedir. başlangıçta oluşan trombüs kararsız ve bunların parçaları genellikle uzak kan akışı ile yıkanır, bu yüzden oluşan trombüs 2 daha küçük hale - yaralanmadan sonra 3 dakika. Filtre kağıdı çıkardıktan sonra 4 dakika ve bunlar daha sonra oluşan trombüs kararlı ve genellikle yıkanarak değil - trombüs 3&#39;ten büyütmek için başlar. Ortalama tıkayıcı zaman (n = 14), C57BL6 farelerde 11.3 ± 3.16 dakika olduğu zaman% 7.5 FeCl 3 6,7,19 (Şekil 5A ve online video 1) kullanılır. Daha önceki çalışmalarda bir azalma ve FeCl3 konsantrasyonlarının artması, hem bir anti-trombotik fare türüne ve WT farelerinde 6 arasındaki fark azalır olduğunu göstermiştir; Deneyimlerimize göre, 1 dakika boyunca% 7.5 FeCl3 ile karotid arter tedavisi amaçlarımız tüm karşılamak için yeterlidir. Buna ek olarak, bu model kullanılarak dört Örnek deneyler, aşağıdaki nakavt fareleri 7,8,16,19,21 kullanarak belirli genlerin fonksiyonunu test etmek: Doku tipi plazminojen aktivatörü aracılığı ile trombolitik intravenöz perfüzyon Doku tipi plasminojen etkinleştiricisi (tPA), Amerika Birleşik Devletleri 22 tromboliz tedavisi için FDA onaylı ilaçlar biridir. Böylece karotid arter trombozu modelinde, tPA-aracılı tromboliz görülmektedir. tromboz olduFeCl3% 7.5 ile başlatılmış ve tPA önce 5 dakika için oluşturmasına izin verilir (1 mg / kg vücut ağırlığı) bir boyun damarı kateterinin (22GA) ile perfüze edildi. Şekil 5B ve online video 2&#39;de gösterildiği gibi, trombus sürekli büyütülmüş ve yaralanma sonrası lümeni 5 dakika yaklaşık% 50 işgal. trombüs tPA perfüzyon tPA trombosit aktivasyonu ve agregasyonunu etkilemez düşündüren sonra büyütmek için devam etti. Tromboliz tPA enjeksiyonundan sonra yaklaşık 4 dakika başladı. oluşan trombüs 30 dakika gözlem dönemi ve bu durumda olanlar hiçbir damar tıkanıklığı sırasında defalarca boyut varyasyonlarını geçmesi bulundu. Bu veriler açık bir şekilde tPA tamamen bu trombolitik neden olsa bile, platelet dolayımlı trombus oluşumunu inhibe olduğunu göstermiştir. Bu nedenle, FeCl3 indüklenen arteryel tromboz modeli kullanılarak gelecekteki deneyler önemli bir önceki olabilir trombolitik ve diğer yardımcı tedaviler değerlendirmek için kullanılabileceği tasavvurTrombus oluşumunun ilgili entative etkisi. Fare ile PAR4 Antikor perfüzyon trombozu önlediğini Proteaz aktive edilmiş reseptör 4 (PAR4) N-terminal exodomain 23 proteolitik bölünme ile aktive edilir ve daha sonra trombosit aktivasyonu adımları yol açtığı trombosit bir G protein bağlı reseptör (GPCR) &#39;dir. Nieman laboratuvar bir keçi poliklonal PAR4 antikor PAR4 anyonik küme hedef ve böylece PAR4 aracılı trombosit aktivasyonu 24 için kritik bir adım etkileyen, PAR4 bölünme geciktirir (CAN12) üretti. 1 mg perfüzyon / C57BL6 farelerine, bu antikorun kg biz PAR4 parçalanmasının inhibisyonu anlamlı şekilde uzun zaman% 7.5 FeCl3 kaynaklı karotid arter trombozu modelinde, trombus oluşumunu tıkayıcı olduğu bulunmuştur (Şekil 5C ve online video 3). Bu FeCl3 tromboz modeli c indüklenen gösterirBir anti-trombosit maddeler etkilerini değerlendirir ve potansiyel terapötik stratejiler karakterize etmek için kullanılabilir. Nanoparçacık aracılı Trombusların özgü Hedefleme kan akışını yeniden sağlamak için hızlı pıhtı kaldırma iskemik inme ve miyokard enfarktüsü dahil tıkayıcı damar hastalıklarının tedavisinde çok önemlidir. Böyle tPA gibi trombolitik ilaçlar, sistemik teslim oluşan trombüs lize olabilir, yukarıda gösterdi, ama tamamen trombosit aktivasyonu ve yeniden toplama / oklüzyon engel olamaz. Ek olarak, serin proteaz ajanların sistemik doğrudan dağıtım kanama dahil olmak üzere, önemli yan etkilere yol açan, gelişigüzel hedef dışı harekete yol açar. Sen Gupta laboratuvar hemodinamik kesme akımı 25-27 altında pıhtı ile ilişkili aktive trombositler ve proteinlere bağlanabilen trombosit ilham nanoparçacık tabanlı sentetik teslim araçları mühendisliği var. Böylece incelenen bu nanopartiküller can olsunbir arter aktif şekillendirme trombüslerinin bağlanırlar. tPA perfüzyon için deneyde belirtildiği gibi, kateter boyun damarına yerleştirilir ve düzgün bir akış oranında, nano enjeksiyonu için bir enjeksiyon pompası bağlanmıştır. Bu deney içinde, hiç flöresan boyası trombositleri etiket fareye enjekte edildi. Bunun yerine, nanopartiküller Rohdamine B ile etiketlenmiş; bu nedenle Intravital mikroskop altında görülebilir başardık. Daha önce belirtildiği gibi, tromboz, 1 dakika boyunca% 7.5 FeCl3 tedavi başlatıldı. WT farelerinde, trombus önemli miktarda yaralanma sonrası 5 dakika oluşturmak için bulunan bu yana, nanopartiküller aktif oluşturucu trombüs verimli bağlanan algılamak için nanopartiküllerin enjekte bu zaman noktası seçilir. Şekil 5D ve online video 4&#39;te gösterildiği gibi, floresan nanopartiküllerin enjekte edilmesinden sonra, bir dağ şeklinde tespit etmişlerdirgiderek floresan parçacıklar tarafından koruyorum trombüs. Bu çalışmalar, pıhtılaşma hedefli partıküler İlaç Taşıma Sistemlerinin hedefleme kabiliyeti (ve daha sonraki tedavi etkinliğini) değerlendirmek için FeCl3 indüklenen trombozu modelinde yararını göstermektedir. Trombüsü Formasyonu&#39;nda Trombositler dışındaki Kırmızı kan hücrelerinin rolü. Son çalışmalar kırmızı kan hücreleri (eritrositler) FeCl3 trombozu modelinde 28 önemli rol oynadığını ileri sürmüşlerdir ve yaralı damar duvarının 29,30 ilk yapışık kan bileşenidir. Bu fenomen keşfetmek için, 1,1-dioktadesil-3,3,3 &#39;, 3&#39;-Tetramethylindocarbocyanine perklorat (Dil, 10 uM nihai konsantrasyon) ile eritrositlerde etiketli. Dil-etiketli eritrositler PBS ile iki kez yıkandı ve% 35 hematokrit tuzlu su içinde yeniden süspansiyona alınmıştır. Dil etiketli RBC süspansiyonu (fare başına 100 ul) enjekte oldulethally 5 gün deney 19 önce ışınlanmış olan trombositopenik farelere ed. Bu trombositopenik fareler önemli eğer onlar yapmak, damar duvarına biding RBC şansını artıracaktır trombosit, azalmıştır. Floresan etiketli trombositleri (Şekil 5) kullanılarak yapılan deneyler aksine, floresan hücre belirgin bir birikiminin damarı çeperi üzerinde bulunmuştur damar hasarı (Şekil 6A ve online V ideo 5) sonra. Bununla birlikte, trombosit açısından zengin trombus oluşumu ile birlikte, eritrosit pıhtı (Şekil 6A) şeklini görüntülemektedir trombüs birikmesine başlamıştır. Yaralı karotis İmmünfloresan boyama Dil-etiketli eritrositler özellikle trombüs (Şekil 6B &amp; C) içinde sıkışıp kalırlar ise damar duvarına yapışık büyük hücreler, (CD41 pozitif, yeşil) trombositler olduğunu göstermiştir. Bu çalışmalar göstermektedirFeCl3 indüklenen tromboz modeli trombus oluşumunda hücresel ve moleküler bileşenleri ve uzay-zamansal olaylar mekanik anlamada kullanılabilir. Mezenterik Tromboz Modeli Mezenterik trombozu modelinde, FeCl3 yüksek bir konsantrasyon - gemiler genellikle yağ dokusu ile çevrili olarak (10% 12.5) tavsiye edilir, damar duvarına doğru FeCl3 dağılmasını engellemek ve hangi nedenle FeCl3 indüklediği gelen gemi önler yaralanma 7. Bu model, venöz tromboz çalışma için uygundur. Online video 6&#39;da gösterildiği gibi, trombüs yaklaşık görülmüştür ~ mezenterik ven 15 sn topikal% 12.5 FeCl3 çözeltisi ama trombus oluşumu ile doymuş filtre kağıdı uygulandıktan sonra önemli ölçüde mezenterik arter geciktirilir. trombüs oluşumunu tıkayıcı ortalama zaman ~ 17 ± 7.2 dakika (n = 11) m<html> esenteric damar ve mezenterik arter, yaklaşık 23 ± 9.9 dakika (n = 10) 12.5% ​​FeCl3 7 kullanılır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54479/54479fig1.jpg" /> Şekil 1. Cerrahi Aletler. Fare cerrahi için asgari gerekli araçları gösterilir. Daha detaylı bilgi için malzemeler listesine bakın. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/54479fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54479/54479fig2.jpg" /> Cerrahi Şekil 2. Fare Fiksasyon. Karotid arter trombozu modelinde veya mezenterik tromboz modeli için rodamin 6G boya enjeksiyonu için 15 cm kültür çanak kapağı üzerinde fare sabitleyin.= &quot;_ Blank&quot; olsun&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54479/54479fig3.jpg" /> Şekil 3. Karotis Arter Trombozu Modeli. Prosedürler Rodamin 6G enjeksiyonu gösterilmiştir kan sistemi ve sol karotis maruz içine boya floresan, juguler ven ortaya çıkarmak. (A) &#39;da, hattı dil kemiği seviyesine manubrium kesi belirtir; (B), mavi oklar submaksiller bezleri gösterir ve sarı noktalı çizgiler alt çene bezlerinden arasındaki fasya temsil eder; (C), mavi oklar submaksiller bezleri gösterir, siyah ok manubrium gösterir ve noktalı sarı çizgi juguler ven maruz kesmek için konumu belirtir; (D), mavi ok juguler ven belirtir; (E), sarı ok sol alt çene bezi, mavi ok Indicat gösterires sternokleidomastoid kas sol noktalı sarı çizgi fasya gösterir ve yeşil ok omohyoid kas veya kas sternohyoid belirtir; (F) &#39;de, mavi ok sarı noktalı çizgiler ince sternohyoid kas ve / veya omohyoid kas göstermek, karotid arter belirtir; (G), mavi ok karotis arter gösterir ve yeşil ok vagus siniri gösterir; (H), mavi ok karotis arter gösterir ve yeşil ok plastik &quot;U-şeklinde&quot; kahve karıştırıcı belirtir; ve (I), mavi ok FeCl3 çözeltisi ile yer filtre kağıdı gösterir ve yeşil ok karotis arter gösterir. T trakea gösterir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/54479fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54479/54479fig4.jpg" /><br/&gt; Şekil 4. mezenterik arter ve mezenterik damarların Ven Trombozu Modeli. Pozlama yanı sıra FeCl3 tedavi gösterilmiştir. (A), mavi ok linea alba, geminin olmadan beyaz lifli doku gösterir; (B), bir kesi yalnız kesilmiş olarak linea alba gösterilmiştir; (C), mavi oklar mezenterik arterler ve venler ikinci kemer gösterir; (D), mavi ok FeCl3 çözeltisi ile yer filtre kağıdının gösterir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/54479fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/54479/54479fig5.jpg" /> Karotis Arter Trombozu Modeli kullanılarak Şekil 5. Temsilcisi deneyler. (A). TheC57Bl / 6 farede trombüs oluşumu 7 ile tedavi0,5% FeCl3. (B). TPA trombolitik etkisi aracılı. (C). Tromboz gösterilmiştir fare trombin reseptör PAR4 hedefleyen antikor enjeksiyonu. (D). Trombüs-site hedefli nanovehicles özellikle aktif şekillendirme trombüs gösterildi bağlamak . Enj. P parçacığın enjeksiyon gösterir; ve zirve B trombus partiküllerin pik şerit gösterir. Tüm görüntüler de aynı büyütme altına alındı. Ölçek çubuğu = 300 mikron. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/54479fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/54479/54479fig6.jpg" /> Trombüsü Oluşumu Üzerine RBC Şekil 6. Rolü. (A)% 7.5 FeCl sonra karotid arter trombozu modelinde ve görüntülere maruz bırakıldı Dil-etiketli eritrosit perfüzyon aldı Trombositopenik fareler <su&gt; 3 tedavisi b gösterildi. Bar = 300 mikron. (B &amp; C) yaralandı karotis arterler toplandı ve frozen hazırlanmıştır. Trombositler CD41 (Yeşil) ve eritrosit ile boyandı kırmızı (DIL) olarak gösterilmiştir. Çekirdekler DAPI ile boyanmıştır. (B ve C) &#39;de gösterilen kaplar, iki farklı farelerden edildi. Ölçek çubukları 50 mikron =. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/54479fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Video 1" src="/files/ftp_upload/54479/54479video1.jpg" /> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/Video1_WT.wmv" target="_blank">Video 1: vahşi tip (WT), farelerde karotid arter trombozu modeli Örnek bir video. (Indirmek için sağ tıklatın.)</a> Bu video yer topikal uygulayarak filtre kağıdı ile uyarılan WT farelerin karotis arter temsili trombüs oluşumunu gösterirFeCl3 çözüm% 7.5 ile. Trombositler Rodamin 6G intravenöz enjeksiyon ile etiketlendi ve video tek renkli modunda alınmıştır. beyaz kütle pıhtılaşmış trombositler olduğunu. <img alt="Video 2" src="/files/ftp_upload/54479/54479video2.jpg" /> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/Video2_tPA_on_thrombosis.wmv" target="_blank">Video 2: karotid arter trombozu modelinde saptanan doku plazminojen aktivatörü (tPA) aracılı trombolitik etki. (Indirmek için sağ tıklatın.)</a> Videoda 1&#39;de belirtildiği gibi Trombosit etiketleme ve trombüs oluşumu başlandı ve tPA damardan 5 dk% 7.5 sonra FeCl3 yaralanma enjekte edildi. <img alt="Video 3" src="/files/ftp_upload/54479/54479video3.jpg" /> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/Video3_PAR4_antibody_on_thrombosis.wmv" target="_blank">Video 3: Antitrombositik ilaç, na</a><html> karotid arter trombozu modelinde saptanan antitrombotik etkisi aracılı markalama anti-proteaz aktive edilen reseptör 4 (PAR4) antikor. Trombüs oluşumu topikal% 7.5 FeCl3 ile yer filtre kağıdının uygulanarak başlatılmıştır önce (indirmek için sağ tıklatın.) Bu deneyde, farelerin PAR4 antikor ve rodamin 6G enjeksiyonu 10 dk aldı. <img alt="Video 4" src="/files/ftp_upload/54479/54479video4.jpg" /> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/Video4_nanoparticles_binding_to_thrombus.wmv" target="_blank">Video 4: Nanopartikül aracılı trombüs-özel hedefleme. (Indirmek için sağ tıklatın.)</a> Bu deneyde, karotid arter trombüs oluşumu etiketleme trombosit olmadan FeCl3% 7.5 ile başlatılmıştır. Nanopartikül Rodamin B ile etiketlenmiş ve damar hasarı sonrası Fare 5 dakika enjekte edilmiştir. Video 5 &quot;src =&quot; / files / ftp_upload / 54479 / 54479video5.jpg &quot;/&gt; <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/Video5_RBC_on_thrombosis.wmv" target="_blank">Video 5: karotid arter trombozu modelinde saptanan kırmızı kan hücrelerinin bağları. (Indirmek için sağ tıklatın.)</a> Kırmızı kan hücreleri (eritrositler) 1,1-dioktadesil-3,3,3 &#39;, 3&#39;-Tetramethylindocarbocyanine perklorat (Dil, 10 uM son konsantrasyon) ve 100 ul ile etiketlendi Dil-etiketli eritrositler (% 35 hematokrit) trombositopenik farelere enjekte edildi. Resim trombosit markalama bu deneyde yapılmıştır. With7.5% FeCl3 yukarıda da belirtildiği gibi trombüs başlatılmıştır. <img alt="Video 6" src="/files/ftp_upload/54479/54479video6.jpg" /> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54479/Video6_Mesenteric.wmv" target="_blank">Video 6: WT fareler üzerinde mezenterik arter ve ven trombozu modelinde Temsilcisi videosu. (Sağ-cli</a>ck indirmek için). Plateletler rodamin 6G intravenöz enjeksiyon ile etiketlendi ve trombüs 1 dakika için% 12.5 FeCl3 çözeltisi ile filtre kağıdı bir parça uygulandıktan sonra lokal olarak başlatıldı. gemi 10X kuru mercek altına gözlendi.

Watch this Scientific Journal Video about Ferric Chloride-induced Murine Thrombosis Models at JoVE.com

Ferric Chloride-induced Murine Thrombosis Models

Biz trombüsler oluşumunu tıkayıcı zaman izlemek için intravital mikroskopi kullanılarak etkin bir şekilde karakterize bir rafine demir klorür (FeCl3) karotis ve mezenterik arter üzerinde indüklenen trombozu modelleri prosedürü yanı sıra damar, rapor.

Ferrik klorit indüklenen fare tromboz modellerinde

Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, ...

ferric-chloride-induced-murine-thrombosis-models

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

21.5K Görüntüleme.  Lerner Research Institute, Cleveland Clinic.  Biz trombüsler oluşumunu tıkayıcı zaman izlemek için intravital mikroskopi kullanılarak etkin bir şekilde karakterize bir rafine demir klorür (FeCl3) karotis ve mezenterik arter üzerinde indüklenen trombozu modelleri prosedürü yanı sıra damar, rapor. 

Video: Ferric Chloride-induced Murine Thrombosis Models

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential therapeutic compounds (1). New compounds to be utilized in the treatment and prevention of DVT are currently being developed. The delivery of potential therapeutic antagonist compounds to an affected thrombosed vein has been problematic. In the context of therapeutic applications, a model that uses partial stasis and consistently generates thrombi within a major vein has been recently established. The Electrolytic Inferior vena cava Model (EIM) is mouse model of DVT that permits thrombus formation in the presence of continuous blood flow. This model allows therapeutic agents to be in contact with the thrombus in a dynamic fashion, and is more sensitive than other models of DVT (1). In addition, this thrombosis model closely simulates clinical situations of thrombus formation and is ideal to study venous endothelial cell activation, leukocyte migration, venous thrombogenesis, and to test therapeutic applications (1). The EIM model is technically simple, easily reproducible, creates consistent thrombi sizes and allows for a large sample (i.e. thrombus and vein wall) which is required for analytical purposes.

Electrolytic Inferior Vena Cava Model EIM of Venous Thrombosis

The electrolytic induction of endothelial activation to the internal surface of the Inferior Vena Cava results in venous type thrombus formation due to endothelial activation and partial blood stasis, two components of Virchow's triad.

Ven Trombozu Elektrolitik inferior vena kava Modeli (EIM)

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential ...

Tıp

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

İnferior Vena Kava Trombozu Fare Komple Durağanlık Model

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

Segmentasyon ve Mürin Obezite Modelleri Yağ Hacimleri ölçümü X-ray Bilgisayarlı Tomografi Kullanımı

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have been developed to facilitate the study of the molecular and cellular pathophysiology of this disease. In this manuscript we describe specific techniques for the quantification and characterization of atherosclerotic lesions in the murine aortic sinus and ascending aorta. The advantage of this procedure is that it provides an accurate measurement of the cross-sectional area and total volume of the lesion, which can be used to compare atherosclerotic progression across different treatment groups. This is possible through the use of the valve leaflets as an anatomical landmark, together with careful adjustment of the sectioning angle. We also describe basic staining methods that can be used to begin to characterize atherosclerotic progression. These can be further modified to investigate antigens of specific interest to the researcher. The described techniques are generally applicable to a wide variety of existing and newly created dietary and genetically-induced models of atherogenesis.

We describe procedures to quantify and characterize atherosclerotic lesions in mouse models using precision sectioning of the aortic sinus and ascending aorta combined with histochemical and immunohistochemical analysis.

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective treatment and failure of large clinical trials aimed at hemostasis and clot removal demonstrate the need for further mechanism-driven investigation of ICH. This research may be performed through the framework provided by preclinical models. Two murine models in popular use include intrastriatal (basal ganglia) injection of either autologous whole blood or clostridial collagenase. Since, each model represents distinctly different pathophysiological features related to ICH, use of a particular model may be selected based on what aspect of the disease is to be studied. For example, autologous blood injection most accurately represents the brain&#39;s response to the presence of intraparenchymal blood, and may most closely replicate lobar hemorrhage. Clostridial collagenase injection most accurately represents the small vessel rupture and hematoma evolution characteristic of deep hemorrhages. Thus, each model results in different hematoma formation, neuroinflammatory response, cerebral edema development, and neurobehavioral outcomes. Robustness of a purported therapeutic intervention can be best assessed using both models. In this protocol, induction of ICH using both models, immediate post-operative demonstration of injury, and early post-operative care techniques are demonstrated. Both models result in reproducible injuries, hematoma volumes, and neurobehavioral deficits. Because of the heterogeneity of human ICH, multiple preclinical models are needed to thoroughly explore pathophysiologic mechanisms and test potential therapeutic strategies.

Preclinical models of intracerebral hemorrhage are utilized to mimic certain aspects of clinical disease. Thus, mechanisms of injury and potential therapeutic strategies may be explored. In this protocol, two models of intracerebral hemorrhage are described, intrastriatal (basal ganglia) injections of autologous blood or collagenase.

İntraserebral Kanama Fare Modellerinden olarak Otolog Blood veya Klostridyal Kollajenazının intrastriatal Enjeksiyon

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Vasküler Klipsler Kullanılarak Bir Fare Kanser Modelinde Optimize Edilmiş Venöz Tromboz Testi

Venous Thrombosis Assay in a Mouse Model of Cancer

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis (CAT). Deep venous thrombosis is a common complication in cancer survivors and can be potentially fatal. The current murine venous thrombosis models typically involve a complete or partial mechanical occlusion of the inferior vena cava (IVC) using a suture. This procedure induces a total or partial stasis of blood and endothelial damage, triggering thrombogenesis. The current models have limitations such as higher variability in clot weights, significant mortality rate, and prolonged learning curve. This report introduces surgical refinements using vascular clips to address some of these limitations. Using a syngeneic colon cancer xenograft mouse model, we employed customized vascular clips to ligate the infrarenal vena cava. These clips allow residual lip space similar to a 5-0 polypropylene suture after IVC ligations. Mice with the suture method served as controls. The vascular clip method resulted in a consistent reproducible partial vascular occlusion and greater clot weights with less variability than the suture method. The larger clot weights, greater clot mass, and clot to the IVC luminal surface area were expected due to the higher pressure profile of the vascular clips compared to a 6-0 polypropylene suture. The approach was validated by gray scale ultrasonography, which revealed consistently greater clot mass in the infrarenal vena cava with vascular clips compared to the suture method. These observations were further substantiated with the immunofluorescence staining. This study offers an improved method to generate a venous thrombosis model in mice, which can be employed to deepen the mechanistic understanding of CAT and in translational research such as drug discovery.

Yazar Spotlight: Kemirgen Modellerinde Kanserle İlişkili Tromboz Araştırmalarını İlerletmek 

This article aims to present an optimized method for assessing venous thrombosis in a mouse cancer model, using vascular clips to achieve venous ligation. Optimization minimizes variability in thrombosis-related measurements and enhances relevance to human cancer-associated venous thrombosis.

Bir Fare Kanser Modelinde Venöz Tromboz Testi

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis ...

Kanser Araştırmaları

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric chloride injury is now a well-established technique to rapidly and accurately induce the formation of thrombi in exposed veins or artery of small and large diameter. This model has played a key role in the study of the pathophysiology of thrombosis, in the discovery and validation of novel antithrombotic drugs and in the understanding of the mechanism of action of these new agents. Here, the implementation of this technique on a mesenteric vessel and carotid artery in mice is presented. The method describes how to label circulating leukocytes and platelets with a fluorescent dye and to observe, by intravital microscopy on the exposed mesentery, their accumulation at the injured vessel wall which leads to the formation of a thrombus. On the carotid artery, the occlusion caused by the clot formation is measured by monitoring the blood flow with a Doppler probe.

The FeCl3 induced thrombosis model in mice is described herein. A method to monitor thrombus growth by intravital microscopy observation on a mesenteric vessel and by blood flow measurement in the carotid artery is presented.

Ferric Klorür kaynaklı Karotis Arter ve Mezenter Gemi Tromboz Fare Modeli

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Ferrik klorit indüklenen fare tromboz modellerinde

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Ven Trombozu Elektrolitik inferior vena kava Modeli (EIM)

İnferior Vena Kava Trombozu Fare Komple Durağanlık Model

Segmentasyon ve Mürin Obezite Modelleri Yağ Hacimleri ölçümü X-ray Bilgisayarlı Tomografi Kullanımı

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

İntraserebral Kanama Fare Modellerinden olarak Otolog Blood veya Klostridyal Kollajenazının intrastriatal Enjeksiyon

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Bir Fare Kanser Modelinde Venöz Tromboz Testi

Bir Fare Kanser Modelinde Venöz Tromboz Testi

Bir Fare Kanser Modelinde Venöz Tromboz Testi

Ferric Klorür kaynaklı Karotis Arter ve Mezenter Gemi Tromboz Fare Modeli