This study was financially supported by the Creation of Innovation Centers for Advanced Interdisciplinary Research Program's Project for Developing Innovation Systems "Cell Sheet Tissue Engineering Center (CSTEC)" of the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology (MEXT), Japan.

Polistiren blok -poli (N -isopropylacrylamide) İki aşamalı Döner İlavesi-parçalanma Zincir Transferi (RAFT) Radikal Polimerizasyon ile 1. Sentezi <ol><li> stiren (153.6 mmol) çözündürülür, 4-siyano-4- (ethylsulfanylthiocarbonyl) sülfanilpentanoik asit (ECT, 0.2 mmol), ve 4,4&#39;-azobis (4-siyanovalerik asit) (ACVA; 0.04 mmol), 1 40 ml, 4-dioksan. reaktif türler çıkarın ve yavaş yavaş oda sıcaklığında çözülmesine 15-20 dakika boyunca vakum altında sıvı azot içinde dondurularak. Çözelti tamamen çözülmüş olduğundan emin olun ve bu donma-pompa-çözülme gaz giderme döngüsü üç kez tekrarlayın. </li><li> Bir yağ banyosu içinde 15 saat boyunca 70 ° C&#39;de polimerizasyon ile makro RAFT madde olarak: polistiren (PST) (13,500 Mw) elde edilir. </li><li> Çökelti PSt makro RAFT eter 800 ml ile ajan ve vakum altında kurutulur. </li><li> 1,4-dioksan ve 4 ml IPAAm monomer (4.32 mmol) PST makro RAFT madde (0.022 mmol) ve ACVA (0.004 mmol) çözündürülür. </li><li> KaldırDondurularak-Pompalama-Eritme devinimi ile gaz giderme çözeltisi oksijen adım 1.1 belirtildiği gibi. </li><li> Gaz almadan sonra, bir yağ banyosu içinde 15 saat boyunca 70 ° C&#39;de ve polimerizasyon ile sertleştirilmesi. PSt makro RAFT madde olarak aynı şekilde: sentezlendi St-IPAAm molekül (32,800 Mw) elde edilir. </li></ol> Silisyum hidritleştirilmiş hidrofobik modifiye cam tabakaların 2. Hazırlık <ol><li> 5 dakika boyunca aseton ve etanol ve sonikasyon fazlası ile yıkayın, cam alt-tabakalar (24 mm x 50 mm), yüzey kirleri çıkarmak için. </li><li> 30 dakika boyunca 65 ° C sıcaklıkta bir fırın içinde alt tabakaların kurutun. Daha sonra oda sıcaklığında alt-tabakaların yüzeyleri aktif hale getirmek için oksijen plazma (400 W, 3 dakika) kullanın. </li><li> alt-tabakanın Silanize için gece boyunca oda sıcaklığında% 1 hexyltrimethoxysilane içeren tolüen içinde alt tabakaların bırakın. </li><li> toluen içinde silanize substratları yıkayın ve reaksiyona girmemiş maddeler çıkarmak için 30 dakika boyunca aseton içinde bırakın. </li><li> 110 ° C&#39;de 2 saat boyunca tavlama substratlar iyice s hareketsiz hale getirmekSenin yüzün. </li><li> Hücre kültürü yemekleri (: φ35 mm çanak boyutu) sığdırmak için 25 mm x 24 mm bir cam kesici ile Silanlanmış yüzeylerde kesin. </li></ol> Langmuir Film ve Film transfer Yüzeyin 3. hazırlanması <ol><li> toz birikimini önlemek için bir kabine Langmuir filmi aleti yerleştirin. </li><li> (580 mm x 145 mm boyutunda) ve damıtılmış su ve kirletici maddelerin, etanol ile engelleri Langmuir çukur yıkayın. </li><li> Bir lintless havlu ile silinerek çukur ve engelleri kurutun. Sonra damıtılmış su, yaklaşık 110 ml çukur dolgu ve çukur her iki tarafta da engeller ayarlayın. Damıtılmış su 3.5 ila 3.13 aşağıdaki adımlarda dökmeden eklenmesi gerektiğini unutmayın. </li><li> plaka kırmızı olana kadar bir gaz brülör ile yüzey gerilimini izlemek için ve daha sonra kirleri çıkarmak için distile su ile yıkayın: platin Wilhelmy plakası (39.24 mm çevre) ısıtın. bağlı bir tel VVilhelmy plaka Askıdayüzey basınç ölçüm aleti. </li><li> üreticinin protokolüne uygun olarak yüzey basınç-ölçüm aleti sıfır. Arayüz polimerin herhangi bir damla olmadan yaklaşık 50 cm, 2 ulaşana kadar oluğun her iki yanında bariyerlerle çukur hava-su ara yüzeyine sıkıştırın. </li><li> yüzey basıncı kadar aspire küçük kirleticiler yaklaşık 0 mN / m&#39;dir. </li><li> her iki tarafta engelleri yeniden getirin ve aşama 3,6 damıtılmış su düşüşü telafi için distile su ekleyin. </li><li> Kloroform bir gelişme çözeltisi, 5 ml sentezlenen St-IPAAm molekülünün 5 mg eritin. Not: diklorometan ya da tolüen, aynı zamanda çözücü olarak da kullanılabilir. </li><li> Yavaşça mikroenjektör veya mikropipet kullanarak oluk üzerine kloroform içinde çözüldü St-IPAAm 27 ul bırakın. </li><li> 5 dakika bekledikten sonra, kloroform tam buharlaşmaya izin St-IPAAm molecu sıkıştırmak için yatay olarak hareket ettirmek için engelleriarayüzde le. Cm 2 ulaşıldığında 50 hedef alan kadar 0,5 mm / sn engellerin sıkıştırma oranını korumak. Not: Bir hızlı sıkıştırma oranı Langmuir filmde kusurları neden olur. </li><li> Üreticinin protokolüne uygun olarak, sıkıştırma esnasında yüzey basınç-ölçüm cihazına takılı platin, Wilhelmy Plate yüzey basıncı (π) -A m izotermlerinin ölçün. </li><li> hedef alan boyutu ulaştıktan sonra, St-IPAAm molekülleri dinlenmek için izin 5 dakika boyunca yüzeyi korumak; moleküller sıkıştırma hemen sonra dengeye ulaşması yok. </li><li> sağlam filmi emmek için 5 dakika için bir transfer cihazı kullanılarak hidrofobik olarak modifiye edilmiş bir cam alt-tabakaya Langmuir film transfer. cihazda paralel olarak hidrofobik cam alt tabakayı sabitleyin. Bir hizalama aşamasına aygıtı bağlayın ve dik hareket ettirin. </li><li> Bir desiccato 1 gün transfer aparatı ve kuru yatay alt tabakayı kaldırınr. </li></ol> 4. Hücreler kültüre ve Langmuir Film Aktarılan Yüzey Hücre Yapışma ve Müfreze Optimize <ol><li> % 10 fetal içeren Dulbecco Modifiye Edilmiş Eagle Ortamı (DMEM) ile doku kültür polistiren (TCPS) üzerine CO2 ve% 95 hava,% 5, 37 ° C &#39;de üçte biri izdiham hücre süspansiyonları, kültür sığır karotis endotel hücrelerini (BAECs) hazırlamak için sığır serumu (FBS) ve 100 U / ml penisilin. </li><li> Ortak akışa ulaşıldıktan sonra, CO2 ve% 95 hava,% 5 37 ° C&#39;de 3 dakika boyunca% 0.25 tripsin-EDTA 3 ml BAECs tedavi. </li><li> DMEM,% 10 FBS ihtiva eden 10 ml ekleyerek tripsin-EDTA devre dışı bırakma ve 50 ml konik bir tüp hücre süspansiyonu toplanır. </li><li> 5 dakika boyunca 120 xg&#39;de santrifüj ve süpernatant aspire. DMEM 10 ml hücreleri yeniden askıya. </li><li> 5 dakika boyunca sterilize etmek için temiz bir bankta ultraviyole ışık altında St-IPAAm yüzeyleri yerleştirin. </li><li> iyileşti ce TohumlarınSt-IPAAm LLS bir kullanılıp atılabilir hemositometre ile sayıldı 1.0 x 10 4 hücre / cm2&#39;lik bir konsantrasyonda yüzeyleri ve% 5 CO2 ve% 95 ile 37 ° C&#39;de bir kuluçka ile donatılmış bir mikroskop ile yüzeye hücreleri dikkate hava. Not: Temiz bir tezgah donatılmış ultraviyole ışıkla St-IPAAm yüzeyleri sterilize edin. </li><li> 10X büyütme ile bir faz-kontrast mikroskobu ile 37 ° C&#39;de yaklaşık 24.5 saat boyunca yapışık BAECs kayıt time-lapse görüntüler. BAEC yapışma, yaklaşık 3.5 saat boyunca 20 ° C &#39;de St-IPAAm yüzeyinden BAECs kayıt ayrıldıktan sonra. </li></ol> Langmuir Film transfer Yüzeyler 5. Hücre Sac İmalatı <ol><li> Aynı şekilde kullanılan kültür BAECs bölüm 4&#39;te tarif edilen. </li><li> St-IPAAm yüzeylerde 1.0 x 10 5 hücre / cm2 bir toplam tohum ve% 5 CO2 içinde 37 ° C &#39;de 3 gün boyunca inkübe edilir. Konfluent BAECs kendiliğinden 20 ° C&#39;de ayrılır.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bae, Y. H., Kwon, I. C., Pai, C. M., Kim, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+release+of+macromolecules+from+electrical+and+chemical+stimuli-responsive+hydrogels.">Controlled release of macromolecules from electrical and chemical stimuli-responsive hydrogels.</a> Makromol. Chem., Macromol. Symp. 70-71 (1), 173-181 (1993).</li><li>Fu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+control+of+free+energy+and+topography+of+nanostructured+surfaces.">Reversible control of free energy and topography of nanostructured surfaces.</a> J. Am. Chem. Soc. 126 (29), 8904-8905 (2004).</li><li>Nykanen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+behavior+and+temperature-responsive+molecular+filters+based+on+self-assembly+of+polystyrene-block-poly(N-isopropylacrylamide)-block-polystyrene.">Phase behavior and temperature-responsive molecular filters based on self-assembly of polystyrene-block-poly(N-isopropylacrylamide)-block-polystyrene.</a> Macromolecules. 40 (16), 5827-5834 (2007).</li><li>Sun, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+switching+between+superhydrophilicity+and+superhydrophobicity.">Reversible switching between superhydrophilicity and superhydrophobicity.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 43 (3), 357-360 (2004).</li><li>Shuler, R. L., Zisman, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Study+of+the+behavior+of+Polyoxyethylene+at+the+air-water+interface+by+wave+damping+and+other+methods.">A Study of the behavior of Polyoxyethylene at the air-water interface by wave damping and other methods.</a> J. Phys. Chem. 74 (7), 1523-1534 (1970).</li><li>Kawaguchi, M., Sauer, B. B., Yu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymeric+monolayer+dynamics+at+the+air/water+interface+by+surface+light+scattering.">Polymeric monolayer dynamics at the air/water interface by surface light scattering.</a> Macromolecules. 22 (4), 1735-1743 (1989).</li><li>Saito, W., Kawaguchi, M., Kato, T., Imae, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spreading+solvent+and+temperature+effects+on+interfacial+properties+of+Poly+(N-isopropylacrylamide)+films+at+the+air-water+interface.">Spreading solvent and temperature effects on interfacial properties of Poly (N-isopropylacrylamide) films at the air-water interface.</a> Langmuir. 7463 (11), 5947-5950 (1996).</li><li>Jheng, K. T., Hsu, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+effect+of+PMMA+on+its+miscibility+with+PS-b-PEO+at+the+air/water+interface.">Molecular weight effect of PMMA on its miscibility with PS-b-PEO at the air/water interface.</a> J. App. Polym. Sci. 125 (3), 1986-1992 (2012).</li><li>Biesalski, M. A., Knaebel, A., Tu, R., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+on+a+polymerized+peptide-amphiphile+monolayer.">Cell adhesion on a polymerized peptide-amphiphile monolayer.</a> Biomaterials. 27 (8), 1259-1269 (2006).</li><li>Da Silva, A. M. P. S. G., Lopes, S. I. C., Brogueira, P., Prazeres, T. J. V., Beija, M., Martinho, J. M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermo-responsiveness+of+poly(N,N-diethylacrylamide)+polymers+at+the+air-water+interface:+The+effect+of+a+hydrophobic+block.">Thermo-responsiveness of poly(N,N-diethylacrylamide) polymers at the air-water interface: The effect of a hydrophobic block.</a> Journal of colloid interface sci. 327 (1), 129-137 (2008).</li><li>Wang, S. Q., Zhu, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facile+method+to+prepare+smooth+and+homogeneous+polymer+brush+surfaces+of+varied+brush+thickness+and+grafting+density.">Facile method to prepare smooth and homogeneous polymer brush surfaces of varied brush thickness and grafting density.</a> Langmuir. 25 (23), 13448-13455 (2009).</li><li>Estillore, N. C., Park, J. Y., Advincula, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Langmuir&#8722;Schaefer+(LS)+macroinitiator+film+control+on+the+grafting+of+a+thermosensitive+polymer+brush+via+surface+initiated-ATRP.">Langmuir&#8722;Schaefer (LS) macroinitiator film control on the grafting of a thermosensitive polymer brush via surface initiated-ATRP.</a> Macromolecules. 43 (16), 6588-6598 (2010).</li><li>Seo, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanowire+and+mesh+conformations+of+diblock+copolymer+blends+at+the+air/water+interface.">Nanowire and mesh conformations of diblock copolymer blends at the air/water interface.</a> Nano Lett. 4 (3), 483-486 (2004).</li><li>Lu, Q., Bazuin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solvent-assisted+formation+of+nanostrand+networks+from+supramolecular+diblock+copolymer/surfactant+complexes+at+the+air/water+interface.">Solvent-assisted formation of nanostrand networks from supramolecular diblock copolymer/surfactant complexes at the air/water interface.</a> Nano lett. 5 (7), 1309-1314 (2005).</li><li>Nagano, S., Matsushita, Y., Ohnuma, Y., Shinma, S., Seki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+a+highly+ordered+dot+array+of+surface+micelles+of+a+block+copolymer+via+liquid+crystal-hybridized+self-assembly.">Formation of a highly ordered dot array of surface micelles of a block copolymer via liquid crystal-hybridized self-assembly.</a> Langmuir. 22 (12), 5233-5236 (2006).</li><li>Perepichka, I. I., Borozenko, K., Badia, A., Bazuin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-induced+order+transition+in+nanodot-forming+diblock.">Pressure-induced order transition in nanodot-forming diblock.</a> J. Am. Chem. Soc. 133 (493), 19702-19705 (2011).</li><li>Wang, X. L., Ma, X. Y., Zang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggregation+behavior+of+polystyrene-b-poly(acrylicacid)+at+the+air-water+interface.">Aggregation behavior of polystyrene-b-poly(acrylicacid) at the air-water interface.</a> Soft Matter. 9 (2), 443-453 (2013).</li><li>Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sheet+engineering.">Cell sheet engineering.</a> Mater. Today. 7 (5), 42-47 (2004).</li><li>Rollason, G., Daviest, J. E., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preliminary+report+on+cell+culture+on+a+thermally+reversible+copolymer.">Preliminary report on cell culture on a thermally reversible copolymer.</a> Biomaterials. 14 (2), 153-155 (1993).</li><li>Park, Y. S., Ito, Y., Imanishi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeation+control+through+porous+membranes+immobilized+with+thermosensitive+polymer.">Permeation control through porous membranes immobilized with thermosensitive polymer.</a> Langmuir. 14 (4), 910-914 (1998).</li><li>Kwon, O. H., Kikuchi, A., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+cell+sheet+recovery+by+co-grafting+of+PEG+with+PIPAAm+onto+porous+cell+culture+membranes.">Accelerated cell sheet recovery by co-grafting of PEG with PIPAAm onto porous cell culture membranes.</a> Biomaterials. 24 (7), 1223-1232 (2003).</li><li>Kikuchi, A., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanostructured+designs+of+biomedical+materials:+applications+of+cell+sheet+engineering+to+functional+regenerative+tissues+and+organs.">Nanostructured designs of biomedical materials: applications of cell sheet engineering to functional regenerative tissues and organs.</a> J. Control. Release. 101 (1-3), 69-84 (2005).</li><li>Fukumori, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+ultra-thin+temperature-responsive+polymer+layer+and+its+polymer+thickness+dependency+on+cell+attachment/detachment+properties.">Characterization of ultra-thin temperature-responsive polymer layer and its polymer thickness dependency on cell attachment/detachment properties.</a> Macromol. biosci. 10 (10), 1117-1129 (2010).</li><li>Takahashi, H., Nakayama, M., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+chain+length+and+graft+density+of+thermoresponsive+polymer+brushes+for+optimizing+cell+sheet+harvest.">Controlled chain length and graft density of thermoresponsive polymer brushes for optimizing cell sheet harvest.</a> Biomacromolecules. 11 (8), 1991-1999 (2010).</li><li>Nakayama, M., Yamada, N., Kumashiro, Y., Kanazawa, H., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoresponsive+poly(N-isopropylacrylamide)-based+block+copolymer+coating+for+optimizing+cell+sheet+fabrication.">Thermoresponsive poly(N-isopropylacrylamide)-based block copolymer coating for optimizing cell sheet fabrication.</a> Macromol. Biosci. 12 (6), 751-760 (2012).</li><li>Sakuma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cell+adhesion+and+detachment+on+Langmuir-Schaefer+surface+composed+of+dodecyl-terminated+thermo-responsive+polymers.">Control of cell adhesion and detachment on Langmuir-Schaefer surface composed of dodecyl-terminated thermo-responsive polymers.</a> J. Biomater. Sci., Polym. Ed. 25 (5), 431-443 (2014).</li><li>Sakuma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoresponsive+nanostructured+surfaces+generated+by+the+Langmuir-Schaefer+method+are+suitable+for+cell+sheet+fabrication.">Thermoresponsive nanostructured surfaces generated by the Langmuir-Schaefer method are suitable for cell sheet fabrication.</a> Biomacromolecules. 15 (11), 4160-4167 (2014).</li><li>Moad, G., Chong, Y. K., Postma, A., Rizzardo, E., Thang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+RAFT+polymerization:+the+synthesis+of+polymers+with+defined+end-groups.">Advances in RAFT polymerization: the synthesis of polymers with defined end-groups.</a> Polymer. 46 (19), 8458-8468 (2005).</li><li>Nishida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Reconstruction+with+Tissue-Engineered+Cell+Sheets+Composed+of+Autologous+Oral+Mucosal+Epithelium.">Corneal Reconstruction with Tissue-Engineered Cell Sheets Composed of Autologous Oral Mucosal Epithelium.</a> N. Engl. J. Med. 351 (12), 1187-1196 (2004).</li><li>Ohki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+esophageal+stricture+after+endoscopic+submucosal+dissection+using+tissue-engineered+cell+sheets.">Prevention of esophageal stricture after endoscopic submucosal dissection using tissue-engineered cell sheets.</a> Gastroenterology. 143 (3), 582-588 (2012).</li><li>Sawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineered+myoblast+sheets+improved+cardiac+function+sufficiently+to+discontinue+LVAS+in+a+patient+with+DCM:+report+of+a+case.">Tissue engineered myoblast sheets improved cardiac function sufficiently to discontinue LVAS in a patient with DCM: report of a case.</a> Surg. Today. 42 (2), 181-184 (2012).</li></ol>

All authors contributed equally to writing the manuscript and have approved the final version. The authors declare that they have no competing financial interests.

Olan, ısıya duyarlı bir yüzey Langmuir-Schaefer yöntemi ile imal edilmiş, ve hücre yapışması / sökme ve hücre yapraklan geri kazanımı için yüzey özellikleri optimize edilmiştir. yüzeylerin imalatı için bu yöntemi kullanırken, birkaç adım çok önemlidir. St-IPAAm moleküllerinin moleküler bileşim olup, hücre yapışması ve ayrılması yüzey yapısı üzerinde büyük bir etkiye ve yüzey stabilitesini, ve dolayısıyla, yer alır. Özellikle, St-IPAAm molekülleri dar bir molekül ağırlığı dağılımına sahip olmalıdır. Bizim bir yöntemde, farklı PIPAAm zincir uzunlukları olan iki St-IPAAm moleküller, molekül ağırlığı ve molekül ağırlığı dağılımı kontrol sağlayan, RAFT polimerizasyonu ile sentezlenmiştir. Adımlar nanoyapılardaki kusurları önlemek için St-IPAAm yüzeyin hazırlanması sırasında hava-su arayüzü kirlenmesini önlemek için alınmalıdır. arayüzü üzerine bir polimer molekülleri bırakarak, contaminan önceYüzey basıncı yaklaşık 0 mN / m ulaşana kadar ts aspire edilmelidir. Kirlilik çukur ve Wilhelmy plakası kenarlarında birikir eğilimindedir. VVilhelmy plâka yüzeyi üzerinde bir kirlenme için onu tavlanmıştır. Bir kağıt VVilhelmy plâka kullanıldığında, ara yüzeyde aspirasyon aşama iki kez, en azından tekrar edilmelidir. Π-A m izoterm eğrisi de hava-su ara kirlenme varlığına bağlıdır. Biz izotermlerinin eğri filmin imalatı önce bir kez daha elde edilmesi önerilir. Hidrofobik modifiye cam alt-tabaka safsızlığın meydana gelebileceğinden, alt-tabaka kontaminasyonu gidermek için taze hava ya da azot gazı ile üflenmelidir. sürekli olarak Langmuir film transfer yüzeyleri (St-IPAAm yüzey) imal etmek için, bir polimerin hidrofobik bölümü önemlidir, çünkü Langmuir film ve hidrofobik modifiye cam i arasında hidrofobik etkileşim<html> Reaksiyonun itici gücü s. Blok kopolimer yüksek hidrofob bir polistiren, ve oda sıcaklığında hidrofilik PIPAAm oluşmaktadır, bu çalışmada, transfer edilmiş film stabil olarak da su ve hücre kültürü koşulları altında bir yüzeye yapıştırılır edildi. Bu hidrofobik bölümler sağlam St-IPAAm yüzey imal edilmesinde önemli bir rol oynadığını göstermektedir. olan, ısıya duyarlı bir yüzeye, hücre yapışmasını ve ayrılmasını kontrol etmek için, molekül yapısı ve yoğunluğu çok hassas biçimde kontrol açısından önemlidir. Bu Langmuir-Schaefer yöntemde, bırakılan moleküller belirli bir miktar ve bir hava-su ara hedef alan ile sentezlenen polimer molekülü başına alanı (A m) sıkıştırma ile kontrol edilebilir. St-IPAAm molekülleri bırakarak A m teorisi aşağıdaki denklemle hesaplanabilir: d / 53465 / 53465eq1.jpg &quot;/&gt; burada A arayüzü, Mw alanıdır St-IPAAms moleküler ağırlığı, Cı kloroform çözeltisinin konsantrasyonu, NA Avogadro sayıdır ve V Polimer çözeltisinin hacmi bırakılır. Amfifilik polimerler, bir hava-su arayüzünde kendi kendine organize yapılar oluşturmak için önceki çalışmalarda 13-17 açıklandığı gibi nano ölçekli deniz ada yapıları, imalattan sonra St-IPAAm yüzeylerde gözlenmektedir. Nano ölçekli yapıları boyutu ve miktarı, m St-IPAAms molekül ağırlığı ile kontrol edilmiştir. Hücre yapışması ve ayrılma 19-27 kaplama elektron ışını ışınlama, yüzey tarafından başlatılan RAFT polimerizasyon ve bir dönüş dahil olmak üzere çeşitli yöntemler ile imal PIPAAm kaplı yüzeylerde değerlendirilmiştir. Çünkü yoğunluk, molekül ağırlığı ve PIPAAm yapısı cel etkileyenl yapışma ve dekolmanı, PIPAAm kaplı yüzey imalatı için kesin teknikler önemlidir. Yukarıda tarif edildiği gibi, bu Langmuir-Schaefer yöntemde, yoğunluk, molekül ağırlığı ve yüzey nano kontrol edilebilir. St-IPAAm yüzeylerde hücre yapışması ve dekolmanı ölçüde çeşitli bir m ve St-IPAAm moleküler kompozisyonu etkilenen ve St-IPAAm bazı koşulları daha optimize edilebilir hücre yapışması ve dekolmanı yüzeyleri bulundu. Bu sonuçlar, bu yöntem, St-IPAAm yüzeyi ve hücreler arasındaki etkileşimi kontrol edilebileceğini gösterir. tekrarlanabilir sağlam hücre tabakasını geri kazanılması için, bir amfifilik polimerin tasarımı çok önemlidir. Sadece hidrofilik polimerler bir Langmuir-Schaefer yöntemi ile bir yüzey üzerinde imal edildiğinde, kaplanmış polimerler kolayca damıtılmış su veya kültür ortamı ile yıkanır. Bu sonuç, zayıf hidrofobik polimer yeniden üretilebilir, bu Meth hücre tabakasını geri kazanılması için kullanılmamalıdır göstermiştirod polimer modifiye yüzey su durumda kararsız çünkü. Bizim bir yöntemde, bir amfifilik polimerin hidrofilik kademeli bir sulu çözeltisi ile yıkanmasından olmayan bir yüzey üzerine sağlam bir imalat sağlar. Langmuir filmi paralel bu çalışmada, bir cam alt-tabaka aktarıldı İlave olarak, nano ölçekli deniz ada yapılar yüzeyinde gözlenmiştir. Bazal tarafında Langmuir filmin yapısı iyi apikal tarafınkinden farklı olduğu bilinse de, yapı paralel bir aktarım ile tespit edildi. Hücre tedavisi ve rejeneratif tıp, diğer tedavilere yanıt vermeyen hastalar şifa olasılığı üzerine yoğunlaşmıştır. Laboratuvarımız doku mühendisliğinde potansiyel uygulamalar ile sıcaklık-duyarlı kültür yüzeyinde fabrikasyon hücre sac mühendisliği kullanılarak özgün, benzersiz iskele-serbest doku mühendisliği yaklaşımı geliştirmiştir. hücre tabakaları ile çok sayıda klinik çalışmalar are alreadevam dy ve dokuların 29-31 çeşitli türlerde başarılı sonuçlar ortaya koymuştur. BAECs kök hücreleri dahil olmak üzere hücre tabakaları, diğer hücre kaynaklarına, imal etmek için, hücre kaynağı olarak kullanılmıştır, ancak A m kombinasyonlarını St-IPAAm moleküllerinin moleküler yapısı optimize ederek St-IPAAm yüzeyi yaprak imal etmek için de kullanılabilir. Bu geleneksel olmayan teknoloji nano yapılı yüzeylerinin kolay üretimi için değil, rejeneratif tıpta kullanım için temel bir hücre kültürü stratejilerine sadece katkıda bulunacaktır.

Nano yapılı yüzeyleri son zamanlarda nedeniyle desenleme, hücre kültürü, temizlik ve yüzey geçiş dahil olmak üzere çeşitli potansiyel uygulamalara önemli ilgisini çekmiştir. Örneğin, Lotus, yaprak ve başka duyarlı yüzeylerin nano esinlenerek süperhidrofobik yüzeyler dış stimuli 1-4&#39;e reaksiyona girebilir. Langmuir filmi üzerinde en çok çalışılan polimer kaplamaların biridir. Langmuir film, hava-su arayüzünde 5-8 üzerine amfifilik moleküller bırakarak oluşturulur. Film daha sonra fiziksel veya kimyasal adsorpsiyonuyla bir katı yüzey üzerine transfer edilebilir, ve bir katı yüzey üzerinde bir moleküler konformasyon, dikey ve yatay aktarım yöntemleri 9-12 kullanılarak kontrol edilebilir. Langmuir filmin yoğunluğu tam olarak hava-su arayüzü sıkıştırılmasıyla ayarlanabilir. Son zamanlarda, bu yöntem aynı zamanda nano skalasmdaki deniz ada structur imal edilmesi için etkili olduğu kanıtlanmıştıramfifilik blok kopolimerler kullanılarak es. Nano hidrofilik bölümlere bir çekirdek ve hidrofilik kısımlar 13-17 bir kaplamadan oluşmaktadır varsayılır. Buna ek olarak, bir yüzey üzerine nano sayısı ara yüzeyinde blok kopolimerinin molekül başına alanı (A m) kontrol edilmesi suretiyle kontrol edilir. Biz bir sıcaklık duyarlı kültür yüzey kullanarak, bir orijinal, benzersiz iskele-serbest doku mühendisliği yaklaşımıyla, hücre sac mühendisliği üzerine odaklanmıştır. Geliştirilen teknoloji, çeşitli organlarda 18 için rejeneratif tedaviler uygulanmıştır. Olan, ısıya duyarlı bir kültür yüzey yüzeye 19-27 üzerine poli (N -isopropylacrylamide) (PIPAAm), bir sıcaklık duyarlı molekül, aşılanmasıyla imal edilmiştir. PIPAAm ve kopolimerleri sergiler 32 ° C&#39;ye yakın bir sıcaklıkta sulu ortam, daha düşük bir kritik çözelti sıcaklığı (LCST&#39;nin). Kültür yüzey aynı zamanda bir sıcaklığa duyarlı alternatif akım sergiledi<html> hidrofobiklik ve hidrofilisite arasındaki ilgili. 37 ° C &#39;de, PIPAAm-aşılı bir yüzey hidrofobik hale geldi ve hücreler hali hazırda bağlanmış ve yüzey üzerinde yanı sıra, geleneksel doku kültürü polistiren üzerinde çoğaldı. Sıcaklık 20 ° C&#39;ye düşürülür zaman, yüzeyi hidrofilik hale geldi ve hücreler kendiliğinden yüzeyinden ayrılmaktadır. Bu nedenle, yüzey üzerinde kültürlenmiş konfluent hücreler sıcaklığı değiştirerek sağlam bir tabaka olarak hasat edilebilir. Bu hücre yapışma ve sıyrılma özellikleri de. Laboratuar gösteri 26, 27, Langmuir film kaplama ile imal edilmiş yüzey sergilendi polistiren (P (St)) ve PIPAAm (St-IPAAm) oluşan blok kopolimerlerinin bir Langmuir filmin imal edilmiştir. Belirli bir m Langmuir Film yatay olarak hidrofobik olarak modifiye edilmiş bir cam alt-tabakaya aktarılabilir. Buna ek olarak, sıcaklığa tepki olarak hazırlanmış yüzeyinden hücre üzerindeki yapışma ve sıyrılma değerlendirildi. _content &quot;&gt; Burada, bir cam alt-tabaka üzerinde termo-duyarlı amfifilik blok kopolimerlerinden Nano yapısındaki Langmuir filmin imalatı için protokolleri açıklanmıştır. Önerilen yöntem yüzey bilimi çeşitli alanlarda organik nanofilms için etkili bir imalat bir teknik olabilir ve daha çok kolaylaştırabilir hücre yapışması etkili kontrolü ve bir yüzeyden kendiliğinden dekolmanı.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="777">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">N-isopropylacrylamide</td>
			<td style="width:193px;">Kohjin</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">No catalog number</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Azobis(4-cyanovaleric acid)</td>
			<td style="width:193px;">Wako Pure Chemicals</td>
			<td style="width:119px;">016-19332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Styrene</td>
			<td style="width:193px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S4972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">1,3,5-trioxane</td>
			<td style="width:193px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T81108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">1,4-Dioxane</td>
			<td style="width:193px;">Wako Pure Chemicals</td>
			<td style="width:119px;">045-24491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:193px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:119px;">D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td style="width:193px;">Nakarai</td>
			<td style="width:119px;">11482-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:193px;">GIBCO BRL</td>
			<td style="width:119px;">15140-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Penicillin</td>
			<td style="width:193px;">GIBCO BRL</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:193px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T4174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">FBS</td>
			<td style="width:193px;">Japan Bioserum</td>
			<td style="width:119px;">JBS-11501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:299px;">BAECs</td>
			<td style="width:193px;">Health Science Reserch Resources Bank</td>
			<td style="width:119px;">JCRB0099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Cover Glasses</td>
			<td style="width:193px;">Matsunami Glass Industry</td>
			<td style="width:119px;">C024501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">AFM NanoScope V</td>
			<td style="width:193px;">Veeco</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:299px;">1H NMR INOVA 400</td>
			<td style="width:193px;">Varian, Palo Alto</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">ATR/FT-IR NICOLET 6700</td>
			<td style="width:193px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">GPC HLC-8320GPC</td>
			<td style="width:193px;">Tosoh</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">TSKgel Super AW2500, AW3000, AW4000</td>
			<td style="width:193px;">Tosoh</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Langmuir-Blodgett Deposition Troughs&#160;</td>
			<td style="width:193px;">KSV Instruments</td>
			<td style="width:119px;">KN 2002</td>
			<td>KSV NIWA Midium trough</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Nikon ECLIPSE TE2000-U</td>
			<td style="width:193px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of thermoresponsive nanostructured surfaces for tissue engineering

Thermoresponsive poly(N-isopropylacrylamide) (PIPAAm)-immobilized surfaces for controlling cell adhesion and detachment were fabricated by the Langmuir-Schaefer method. Amphiphilic block copolymers composed of polystyrene and PIPAAm (St-IPAAms) were synthesized by reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) radical polymerization. A chloroform solution of St-IPAAm molecules was gently dropped into a Langmuir-trough apparatus, and both barriers of the apparatus were moved horizontally to compress the film to regulate its density. Then, the St-IPAAm Langmuir film was horizontally transferred onto a hydrophobically modified glass substrate by a surface-fixed device. Atomic force microscopy images clearly revealed nanoscale sea-island structures on the surface. The strength, rate, and quality of cell adhesion and detachment on the prepared surface were modulated by changes in temperature across the lower critical solution temperature range of PIPAAm molecules. In addition, a two-dimensional cell structure (cell sheet) was successfully recovered on the optimized surfaces. These unique PIPAAm surfaces may be useful for controlling the strength of cell adhesion and detachment.

Polistiren ve spesifik molekül ağırlıklarına sahip poli (N -isopropylacrylamide) (St-IPAAms) oluşan blok kopolimerleri RAFT radikal polimerizasyonu ile sentezlenmiştir. Moad ve ark., 28 de tarif edildiği gibi, ECT, bir zincir transfer maddesi olarak elde edilmiştir. Farklı PIPAAm zincir uzunlukları iki St-IPAAm moleküller sentez edildi ve elde edilen blok polimerleri 1H Nükleer manyetik rezonans (NMR) ve jel sızdırma kromatografisi (GPC) ile karakterize edilmiştir. St-IPAAms molekül ağırlıkları dar bir molekül ağırlığı dağılımına (1.31 ve 1.50) ile, 32.800 ve 67.900 idi. polistiren makro RAFT madde ve PIPAAm monomer dönüşüm% 17,4 fazla% 85.0 olarak bulunmuştur. Sentezlenen St-IPAAms sırasıyla St-IPAAm170 ve St-IPAAm480 adlandırılmıştır. Molekül başına çeşitli alanlarda (A m) Langmuir filmler bir de imal edilmiştirKloroform çözeltisi (Şekil 1A) içinde çözülmüş St-IPAAm molekülleri bırakarak hava-su arayüzü. St-IPAAm molekülleri bıraktıktan sonra, hava-su ara yüzey basıncı 0 mN / m sabit ve sürekli engelleri (Şekil 1B) ile sıkıştırma sırasında arayüzü kapatarak artmıştır. Bir hava-su arayüzü üzerinde oluşan Langmuir filmlerde herhangi bir kusurları π-A m izotermi anlaşılmaktadır olabilir. Hazırlanan St-IPAAm Langmuir film hidrofobik olarak modifiye edilmiş bir cam alt-tabaka (St-IPAAm yüzeyi) (Şekil 1C) üzerine aktarıldı. Film transfer yüzey atomik kuvvet mikroskobu (AFM) ile değerlendirildi. 2 St-IPAAm170 ve St-IPAAm480 yüzeylerin AFM topografik görüntülerini (1 x 1 mikron) göstermektedir. Bu tür yapılar çok nadir çıplak hidrofobik alt-tabaka üzerine gözlenirken Nano, St-IPAAm yüzeylerde gözlenmiştir. Nanoyapıların büyüklüğü ve şekli şiddetle bağımlı hazırlık edildiBir m t ve St-IPAAm bileşimi. AFM topografik görüntüler Langmuir filmleri homojen hidrofobik modifiye cam alt tabaka üzerine ve yüzey morfolojileri moleküler kompozisyonu ve A m tarafından kontrol edilebileceğini transfer edilebilir doğruladı. St-IPAAm Langmuir filmin stabilitesi zayıflatılmış toplam yansıma ile değerlendirilmiştir infrared spektroskopi (ATR / FT-IR) Fourier dönüşümü. Hidrofobik bir cam alt-tabaka üzerinde PIPAAms miktarı 1000 cm tepe yoğunluk oranı -1 cam (Si-O) ve 1650 cm-1 PIPAAm (C = O) türetilen türetilmiş elde edilen bir kalibrasyon hattı ile tahmin edilebilir. Kalibrasyon hattı hidrofobik cam üzerinde PIPAAm döküm bilinen miktarlarda bir dizi hesaplandı. St-IPAAm170 (10 mil 2 / molekül) St-IPAAm480 alt-tabaka üzerine (40 mil 2 / molekülü) arasında PIPAAm miktarları 0.87 ug olduğu bulundu/ cm2 ve sırası ile 0.63 mg / cm2. Damıtılmış su ile yıkandıktan sonra yüzeyde PIPAAm miktarı neredeyse yıkanmadan yüzeylerde aynı oldu. Bu sonuçlar, imal St-IPAAm yüzeyler bir su durumda stabil olduğunu göstermiştir. Önümüzdeki yapışma ve St-IPAAm yüzeylerde sığır karotid arter endotel hücreleri (BAECs) ayrılmasını incelenmiştir. 40 nm 2 / molekülün St-IPAAm480 yüzeyinde yapışık ve ayırma BAECs Time-lapse fotoğraf hızla azalan sonra St-IPAAm170 ve St-IPAAm480 hem müstakil 37 ° C&#39;de Hareketli Şekil 1. Yapışık BAECs gösterilmektedir 20 ° C sıcaklık. 37 ° C&#39;de St-IPAAm170 St-IPAAm480 yapışık hücre sayısı 0.6 x 10 4 hücre / cm2 ve 0.9 x 10 4 hücre / cm2 olduğu sırasıyla belirten yapışık hücre sayısıs St-IPAAm yüzeyinin bileşimi ile modüle edilmiş. Hücre levhalar ayrıca St-IPAAm yüzeylerden konfluent kültür BAECs ayırarak kurtarıldı olabilir. Toplanan hücre tabakası, bir iki-boyutlu bir hücre yapısı (Şekil 3) olarak görselleştirildi. St-IPAAm170 St-IPAAm480 kültürün üç gün sonra bir araya gelerek konfluens Hücreler, 37 ° C &#39;de yüzeyleri ve hücre yapraklan hızla 20 ° C&#39;ye kadar 37 ° C sıcaklığın azaltılması sonrasında geri kazanıldı. Molekül ağırlığı ve hücre yapraklan geri St-IPAAms arasında bir erime etkisi Tablo 1 &#39;de özetlenmiştir. Hücre tabakaları yaşayabilirliği BAECs tabakasının ayrılmasından sonra tripan mavi boyama ile değerlendirildi. 37 ° C&#39;de bir cam alt tabaka üzerinde tripsin-EDTA ile işleme tabi hücreleri, kontrol olarak kullanılmıştır. St-IPAAm170, St-IPAAm480 ve bir kontrol olarak, hidrofobik bir cam alt-tabaka üzerinde ölü hücre oranları sırası ile yaklaşık% 11.0,% 7.7 ve% 11.7 olduğu hesaplandı. Bu sonuçlar, ce belirtilmedikçell canlılığı pek sıcaklık azalması etkilenmiştir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53465/53465fig1.jpg" /> Şekil 1: a. Thermoresponsive Langmuir film transfer yüzeyin hazırlanması (A) polistiren blok -poli (N -isopropylacrylamide) (St-IPAAm) kloroform çözüm yavaşça bir hava-su ara üzerine düştü. Yüzey basıncı Langmuir filmde herhangi bir kusur tespit etmek sıkıştırma sırasında ölçüldü. (B) iki bariyer 2 ulaşıldı 50 cm bir hedef alanı kadar arabirimde St-IPAAm molekülleri sıkıştırmak için kullanılmıştır. (C) sıkıştırıldıktan sonra, hidrofobik olarak modifiye edilmiş cam kapak alt-tabaka yatay 5 dakika boyunca bir hizalama evresi arayüzü üzerine yerleştirilmiştir. alt-tabaka, yatay kaldırılır ve 1 gün için kurutulmuştur. Bu rakam biraz Sak tarafından yayından modifiye edilmiştirUma ve ark., 27 <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/53465/53465fig2.jpg" /> Şekil 2:. Langmuir film transfer yüzeyleri (St-IPAAm yüzeyi) Atomik kuvvet mikroskobu (AFM) topografik görüntüler (1 x 1 mikron) Sol panel: 10 nm 2 / molekülünün A m St-IPAAm170 ve Nanostructured yüzeyleri. Sağ paneli: 40 nm 2 / molekülünün A m St-IPAAm480 ve Nanostructured yüzeyleri. AFM ve görüntüler bir yay 3 N / m sabit ve 70-90 kHz&#39;lik rezonans frekansı ile bir fosfat içerikli silikon bir konsol hafifçe vurma modunda elde edildi. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53465/53465fig3.jpg" /> Şekil 3, St-IPAAm480 bir Langmuir film transfer yüzeyi üzerinde bir geri kazanılmış hücre tabakası ve 40 nm&#39;lik bir A m makroskopik görüntüsü <s&gt; 2 / molekülü kadar. Sığır karotid arter endotel hücreleri (BAECs) St-IPAAm480 yüzeylerde tohumlanmış ve 37 ° C de 3 gün süreyle inkübe edildi. kaynaşmaya eriştikten sonra, BAECs kendiliğinden 20 ° C&#39;de ayrılır ve hücre yapraklan sonra yaklaşık 30 dakika geri kazanılmıştır. Ankastre görüntü faz kontrast mikroskobu (10X) tarafından gözlemlenen yüzey üzerinde confluently kültürlü BAECs gösterir. <img alt="film 1" src="/files/ftp_upload/53465/53465movie1.jpg" /> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53465/movie1.mp4">Hareketli Resim 1:</a> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53465/movie1.mp4">. (Sağ indirmek için tıklayın)</a> St-IPAAm480 ve 40 nm 2 / molekülünün bir Am ile Langmuir film transfer yüzeyinde BAECs yapışma ve dekolmanı Time-lapse fotoğraf. Çıkan 2 dakikalık aralıklarla toplandı ve toplanan resimler 960x hızda bir film olarak verilmiştir.Filmde ölçek çubuğu 50 mm. <table fo:keep-together.within-page="1"><colgroup><col /><col span="2" /><col /><col span="2" /></colgroup><tbody><tr><td colspan="3"> St-IPAAm170 </td><td colspan="3"> St-IPAAm480 </td></tr><tr height="23"><td> 3 [mil 2 / molekül] </td><td> 10 [nm 2 / molekül] </td><td> 40 [mil 2 / molekül] </td><td> 3 [mil 2 / molekül] </td><td> 10 [nm 2 / molekül] </td><td> 40 [mil 2 / molekül] </td></tr><tr><td> zayıf yapışma </td><td> İyi </td><td> pek kurtarıldı </td><td> zayıf yapışma </td><td> zayıf yapışma </td><td> İyi </td></tr></tbody></table> Tablo 1:. Çeşitli yoğunluklarda ve PIPAAm zincir uzunlukları ile bir Langmuir film transfer yüzeyinin Sığır karotid arter endotel hücre (BAEC) levha kurtarma &quot;İyi&quot; bozulmamış ce temsilll levha kurtarma. &quot;Hemen hemen geri&quot; hücreler confluently kültürlenmiş olabilir ve kültürlenmiş hücreler daha sıcaklığında bir azalma sonrasında yüzeyinden çok az veya hiç ayrılmasını gösterdi anlamına gelir. &quot;Zayıf yapışma&quot; hücreler, 3 gün boyunca 37 ° C&#39;de izdiham kültürlendi olmadığı anlamına gelir.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Thermoresponsive Nanostructured Surfaces for Tissue Engineering at JoVE.com

Preparation of Thermoresponsive Nanostructured Surfaces for Tissue Engineering

Nanoscaled sea-island surfaces composed of thermoresponsive block copolymers were fabricated by the Langmuir-Schaefer method for controlling spontaneous cell adhesion and detachment. Both the preparation of the surface and the adhesion and detachment of cells on the surface were visualized.

Doku Mühendisliği Thermoresponsive Nanostructured Yüzeylerin Hazırlanması

Thermoresponsive poly(N-isopropylacrylamide) (PIPAAm)-immobilized surfaces for controlling cell adhesion and detachment were fabricated by the ...

preparation-thermoresponsive-nanostructured-surfaces-for-tissue

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Bioengineering

8.2K Görüntüleme.  Tokyo University of Science. Nanoscaled sea-island surfaces composed of thermoresponsive block copolymers were fabricated by the Langmuir-Schaefer method for controlling spontaneous cell adhesion and detachment. Both the preparation of the surface and the adhesion and detachment of cells on the surface were visualized.

Video: Preparation of Thermoresponsive Nanostructured Surfaces for Tissue Engineering

Fabrication of Biologically Derived Injectable Materials for Myocardial Tissue Engineering

This protocol provides methods for the preparation of an injectable extracellular matrix (ECM) gel for myocardial tissue engineering applications. Briefly, decellularized tissue is lyophilized, milled, enzymatically digested, and then brought to physiological pH. The lyophilization removes all water content from the tissue, resulting in dry ECM that can be ground into a fine powder with a small mill. After milling, the ECM powder is digested with pepsin to form an injectable matrix. After adjustment to pH 7.4, the liquid matrix material can be injected into the myocardium. Results of previous characterization assays have shown that matrix gels produced from decellularized pericardial and myocardial tissue retain native ECM components, including diverse proteins, peptides and glycosaminoglycans. Given the use of this material for tissue engineering, in vivo characterization is especially useful; here, a method for performing an intramural injection into the left ventricular (LV) free wall is presented as a means of analyzing the host response to the matrix gel in a small animal model. Access to the chest cavity is gained through the diaphragm and the injection is made slightly above the apex in the LV free wall. The biologically derived scaffold can be visualized by biotin-labeling before injection and then staining tissue sections with a horse radish peroxidase-conjugated neutravidin and visualizing via diaminobenzidine (DAB) staining. Analysis of the injection region can also be done with histological and immunohistochemical staining. In this way, the previously examined pericardial and myocardial matrix gels were shown to form fibrous, porous networks and promote vessel formation within the injection region.

Methods for preparing an injectable matrix gel from decellularized tissue and injecting it into rat myocardium in vivo are described.

Miyokard Doku Mühendisliği Biyolojik Türetilmiş Enjektabl Malzeme imalatı

This protocol provides methods for the preparation of an injectable extracellular matrix (ECM) gel for myocardial tissue engineering applications.  ...

Biyomühendislik

Micropatterned Surfaces to Study Hyaluronic Acid Interactions with Cancer Cells

Cancer invasion and progression involves a motile cell phenotype, which is under complex regulation by growth factors/cytokines and extracellular matrix (ECM) components within the tumor microenvironment. Hyaluronic acid (HA) is one stromal ECM component that is known to facilitate tumor progression by enhancing invasion, growth, and angiogenesis1. Interaction of HA with its cell surface receptor CD44 induces signaling events that promote tumor cell growth, survival, and migration, thereby increasing metastatic spread2-3. HA is an anionic, nonsulfated glycosaminoglycan composed of repeating units of D-glucuronic acid and D-N-acetylglucosamine. Due to the presence of carboxyl and hydroxyl groups on repeating disaccharide units, native HA is largely hydrophilic and amenable to chemical modifications that introduce sulfate groups for photoreative immobilization 4-5. Previous studies involving the immobilizations of HA onto surfaces utilize the bioresistant behavior of HA and its sulfated derivative to control cell adhesion onto surfaces6-7. In these studies cell adhesion preferentially occurs on non-HA patterned regions.
To analyze cellular interactions with exogenous HA, we have developed patterned functionalized surfaces that enable a controllable study and high-resolution visualization of cancer cell interactions with HA. We utilized microcontact printing (uCP) to define discrete patterned regions of HA on glass surfaces. A "tethering" approach that applies carbodiimide linking chemistry to immobilize HA was used 8. Glass surfaces were microcontact printed with an aminosilane and reacted with a HA solution of optimized ratios of EDC and NHS to enable HA immobilization in patterned arrays. Incorporating carbodiimide chemistry with mCP enabled the immobilization of HA to defined regions, creating surfaces suitable for in vitro applications. Both colon cancer cells and breast cancer cells implicitly interacted with the HA micropatterned surfaces. Cancer cell adhesion occurred within 24 hours with proliferation by 48 hours. Using HA micropatterned surfaces, we demonstrated that cancer cell adhesion occurs through the HA receptor CD44. Furthermore, HA patterned surfaces were compatible with scanning electron microscopy (SEM) and allowed high resolution imaging of cancer cell adhesive protrusions and spreading on HA patterns to analyze cancer cell motility on exogenous HA.

A novel approach that allows the high-resolution analysis of cancer cell interactions with exogenous hyaluronic acid (HA) is described. Patterned surfaces are fabricated by combining carbodiimide chemistry and microcontact printing.

Micropatterned Yüzeyler Kanser Hücreleri ile Hyaluronik Asit Etkileşimleri Eğitim

Cancer invasion and progression involves a motile cell phenotype, which is under complex regulation by growth factors/cytokines and extracellular matrix ...

Elastomeric PGS Scaffolds in Arterial Tissue Engineering

Cardiovascular disease is one of the leading cause of mortality in the US and especially, coronary artery disease increases with an aging population and increasing obesity1. Currently, bypass surgery using autologous vessels, allografts, and synthetic grafts are known as a commonly used for arterial substitutes2. However, these grafts have limited applications when an inner diameter of arteries is less than 6 mm due to low availability, thrombotic complications, compliance mismatch, and late intimal hyperplasia3,4. To overcome these limitations, tissue engineering has been successfully applied as a promising alternative to develop small-diameter arterial constructs that are nonthrombogenic, robust, and compliant. Several previous studies have developed small-diameter arterial constructs with tri-lamellar structure, excellent mechanical properties and burst pressure comparable to native arteries5,6. While high tensile strength and burst pressure by increasing collagen production from a rigid material or cell sheet scaffold, these constructs still had low elastin production and compliance, which is a major problem to cause graft failure after implantation. Considering these issues, we hypothesized that an elastometric biomaterial combined with mechanical conditioning would provide elasticity and conduct mechanical signals more efficiently to vascular cells, which increase extracellular matrix production and support cellular orientation.
The objective of this report is to introduce a fabrication technique of porous tubular scaffolds and a dynamic mechanical conditioning for applying them to arterial tissue engineering. We used a biodegradable elastomer, poly (glycerol sebacate) (PGS)7 for fabricating porous tubular scaffolds from the salt fusion method. Adult primary baboon smooth muscle cells (SMCs) were seeded on the lumen of scaffolds, which cultured in our designed pulsatile flow bioreactor for 3 weeks. PGS scaffolds had consistent thickness and randomly distributed macro- and micro-pores. Mechanical conditioning from pulsatile flow bioreactor supported SMC orientation and enhanced ECM production in scaffolds. These results suggest that elastomeric scaffolds and mechanical conditioning of bioreactor culture may be a promising method for arterial tissue engineering.

Elastomeric PGS scaffolds with vascular smooth muscle cells cultured in a pulsatile flow bioreactor may lead to promising small-diameter arterial constructs with native ECM production in a relatively short culture period.

Elastomerik PGS Arter Doku Mühendisliği Yapı iskeleleri

Cardiovascular disease is one of the leading cause of mortality in the US and especially, coronary artery disease increases with an aging population and ...

Postproduction Processing of Electrospun Fibres for Tissue Engineering

Electrospinning is a commonly used and versatile method to produce scaffolds (often biodegradable) for 3D tissue engineering.1, 2, 3 Many tissues in vivo undergo biaxial distension to varying extents such as skin, bladder, pelvic floor and even the hard palate as children grow. In producing scaffolds for these purposes there is a need to develop scaffolds of appropriate biomechanical properties (whether achieved without or with cells) and which are sterile for clinical use. The focus of this paper is not how to establish basic electrospinning parameters (as there is extensive literature on electrospinning) but on how to modify spun scaffolds post production to make them fit for tissue engineering purposes - here thickness, mechanical properties and sterilisation (required for clinical use) are considered and we also describe how cells can be cultured on scaffolds and subjected to biaxial strain to condition them for specific applications.
Electrospinning tends to produce thin sheets; as the electrospinning collector becomes coated with insulating fibres it becomes a poor conductor such that fibres no longer deposit on it. Hence we describe approaches to produce thicker structures by heat or vapour annealing increasing the strength of scaffolds but not necessarily the elasticity. Sequential spinning of scaffolds of different polymers to achieve complex scaffolds is also described. Sterilisation methodologies can adversely affect strength and elasticity of scaffolds. We compare three methods for their effects on the biomechanical properties on electrospun scaffolds of poly lactic-co-glycolic acid (PLGA).
Imaging of cells on scaffolds and assessment of production of extracellular matrix (ECM) proteins by cells on scaffolds is described. Culturing cells on scaffolds in vitro can improve scaffold strength and elasticity but the tissue engineering literature shows that cells often fail to produce appropriate ECM when cultured under static conditions. There are few commercial systems available that allow one to culture cells on scaffolds under dynamic conditioning regimes - one example is the Bose Electroforce 3100 which can be used to exert a conditioning programme on cells in scaffolds held using mechanical grips within a media filled chamber.4 An approach to a budget cell culture bioreactor for controlled distortion in 2 dimensions is described. We show that cells can be induced to produce elastin under these conditions. Finally assessment of the biomechanical properties of processed scaffolds cultured with or without cells is described.

Electrospun scaffolds can be processed post production for tissue engineering applications. Here we describe methods for spinning complex scaffolds (by consecutive spinning), for making thicker scaffolds (by multi-layering using heat or vapour annealing), for achieving sterility (aseptic production or sterilisation post production) and for achieving appropriate biomechanical properties.

Doku Mühendisliği için elektrospinning Liflerin Postprodüksiyon İşleme

Electrospinning is a commonly used and versatile method to produce  scaffolds (often biodegradable) for 3D tissue engineering.1, 2, 3 Many tissues in vivo ...

Capillary Force Lithography for Cardiac Tissue Engineering

Cardiovascular disease remains the leading cause of death worldwide1. Cardiac tissue engineering holds much promise to deliver groundbreaking medical discoveries with the aims of developing functional tissues for cardiac regeneration as well as in vitro screening assays. However, the ability to create high-fidelity models of heart tissue has proven difficult. The heart&#8217;s extracellular matrix (ECM) is a complex structure consisting of both biochemical and biomechanical signals ranging from the micro- to the nanometer scale2. Local mechanical loading conditions and cell-ECM interactions have recently been recognized as vital components in cardiac tissue engineering3-5.
A large portion of the cardiac ECM is composed of aligned collagen fibers with nano-scale diameters that significantly influences tissue architecture and electromechanical coupling2. Unfortunately, few methods have been able to mimic the organization of ECM fibers down to the nanometer scale. Recent advancements in nanofabrication techniques, however, have enabled the design and fabrication of scalable scaffolds that mimic the in vivo structural and substrate stiffness cues of the ECM in the heart6-9.
Here we present the development of two reproducible, cost-effective, and scalable nanopatterning processes for the functional alignment of cardiac cells using the biocompatible polymer poly(lactide-co-glycolide) (PLGA)8 and a polyurethane (PU) based polymer. These anisotropically nanofabricated substrata (ANFS) mimic the underlying ECM of well-organized, aligned tissues and can be used to investigate the role of nanotopography on cell morphology and function10-14.
Using a nanopatterned (NP) silicon master as a template, a polyurethane acrylate (PUA) mold is fabricated. This PUA mold is then used to pattern the PU or PLGA hydrogel via UV-assisted or solvent-mediated capillary force lithography (CFL), respectively15,16. Briefly, PU or PLGA pre-polymer is drop dispensed onto a glass coverslip and the PUA mold is placed on top. For UV-assisted CFL, the PU is then exposed to UV radiation (&#955; = 250-400 nm) for curing. For solvent-mediated CFL, the PLGA is embossed using heat (120 &#176;C) and pressure (100 kPa). After curing, the PUA mold is peeled off, leaving behind an ANFS for cell culture. Primary cells, such as neonatal rat ventricular myocytes, as well as human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes, can be maintained on the ANFS2.

In this protocol, we demonstrate the fabrication of biomimetic cardiac cell culture substrata made from two distinct polymeric materials using capillary force lithography. The described methods provide a scalable, cost-effective technique to engineer the structure and function of macroscopic cardiac tissues for in vitro and in vivo applications.

Kardiyak Doku Mühendisliği kılcal Kuvvetleri Litografi

Cardiovascular disease remains the leading cause of death worldwide1. Cardiac tissue engineering holds much promise to deliver groundbreaking medical ...

Design of a Biaxial Mechanical Loading Bioreactor for Tissue Engineering

We designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for transplantation. While the device primarily functions as a bioreactor that mimics the native mechanical strains, it is also outfitted with a load cell for providing force feedback or mechanical testing of the constructs. The device subjects engineered cartilage constructs to biaxial mechanical loading with great precision of loading dose (amplitude and frequency) and is compact enough to fit inside a standard tissue culture incubator. It loads samples directly in a tissue culture plate, and multiple plate sizes are compatible with the system. The device has been designed using components manufactured for precision-guided laser applications. Bi-axial loading is accomplished by two orthogonal stages. The stages have a 50 mm travel range and are driven independently by stepper motor actuators, controlled by a closed-loop stepper motor driver that features micro-stepping capabilities, enabling step sizes of less than 50 nm. A polysulfone loading platen is coupled to the bi-axial moving platform. Movements of the stages are controlled by Thor-labs Advanced Positioning Technology (APT) software. The stepper motor driver is used with the software to adjust load parameters of frequency and amplitude of both shear and compression independently and simultaneously. Positional feedback is provided by linear optical encoders that have a bidirectional repeatability of 0.1 &mu;m and a resolution of 20 nm, translating to a positional accuracy of less than 3 &mu;m over the full 50 mm of travel. These encoders provide the necessary position feedback to the drive electronics to ensure true nanopositioning capabilities. In order to provide the force feedback to detect contact and evaluate loading responses, a precision miniature load cell is positioned between the loading platen and the moving platform. The load cell has high accuracies of 0.15% to 0.25% full scale.

We designed a novel mechanical loading bioreactor that can apply uniaxial or biaxial mechanical strain to a cartilage biocomposite prior to transplantation into an articular cartilage defect.

Doku Mühendisliği için iki eksenli Mekanik Yükleniyor Biyoreaktör tasarımı

We  designed a loading device that is capable of applying uniaxial or biaxial  mechanical strain to a tissue engineered biocomposites fabricated for  ...

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide. Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture systems, which inadequately reflect physiological conditions in vivo. Biological 3D matrices provide cells an environment in which cells can self-organize, allowing the study of tissue organization and cell differentiation. Such scaffolds can be seeded with a mixture of different cell types to study direct 3D cell-cell-interactions. To mimic the 3D complexity of cancer tumors, our group has developed a 3D in vitro tumor test system.	
	Our 3D tissue test system models the in vivo situation of malignant peripheral nerve sheath tumors (MPNSTs), which we established with our decellularized porcine jejunal segment derived biological vascularized scaffold (BioVaSc). In our model, we reseeded a modified BioVaSc matrix with primary fibroblasts, microvascular endothelial cells (mvECs) and the S462 tumor cell line. For static culture, the vascular structure of the BioVaSc is removed and the remaining scaffold is cut open on one side (Small Intestinal Submucosa SIS-Muc). The resulting matrix is then fixed between two metal rings (cell crowns).	
	Another option is to culture the cell-seeded SIS-Muc in a flow bioreactor system that exposes the cells to shear stress. Here, the bioreactor is connected to a peristaltic pump in a self-constructed incubator. A computer regulates the arterial oxygen and nutrient supply via parameters such as blood pressure, temperature, and flow rate. This setup allows for a dynamic culture with either pressure-regulated pulsatile or constant flow.	
	In this study, we could successfully establish both a static and dynamic 3D culture system for MPNSTs. The ability to model cancer tumors in a more natural 3D environment will enable the discovery, testing, and validation of future pharmaceuticals in a human-like model.

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Methods to create human 3D tumor tissues as test systems are described. These technologies are based on a decellularized Biological Vascularized Scaffold (BioVaSc), primary human cells and a tumor cell line, which can be cultured under static as well as under dynamic conditions in a flow bioreactor.

İnsan 3D Doku Mühendisliği<em&gt; In vitro</em&gt; Tümör Test Sistemi

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. Collagen has been extensively used for a wide range of biomedical applications and is considered a valid alternative to synthetic materials due to its inherent biocompatibility (i.e., low antigenicity, inflammation, and cytotoxic responses). However, the limited mechanical properties and the related low hand-ability of collagen gels have hampered their use as scaffold materials for vascular tissue engineering. Therefore, the rationale behind this work was first to engineer cellularized collagen gels into a tubular-shaped geometry and second to enhance smooth muscle cells driven reorganization of collagen matrix to obtain tissues stiff enough to be handled.
The strategy described here is based on the direct assembling of collagen and smooth muscle cells (construct) in a 3D cylindrical geometry with the use of a molding technique. This process requires a maturation period, during which the constructs are cultured in a bioreactor under static conditions (without applied external dynamic mechanical constraints) for 1 or 2 weeks. The &#8220;static bioreactor&#8221; provides a monitored and controlled sterile environment (pH, temperature, gas exchange, nutrient supply and waste removal) to the constructs. During culture period, thickness measurements were performed to evaluate the cells-driven remodeling of the collagen matrix, and glucose consumption and lactate production rates were measured to monitor the cells metabolic activity. Finally, mechanical and viscoelastic properties were assessed for the resulting tubular constructs. To this end, specific protocols and a focused know-how (manipulation, gripping, working in hydrated environment, and so on) were developed to characterize the engineered tissues.

In this work, we present a technique for the rapid fabrication of living vascular tissues by direct culturing of collagen, smooth muscle cells and endothelial cells. In addition, a new protocol for the mechanical characterization of engineered vascular tissues is described.

Vasküler Doku Rejenerasyon için Mühendislik 3D cellularized Kollajen jeller

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Tissue Engineering by Intrinsic Vascularization in an In Vivo Tissue Engineering Chamber

In reconstructive surgery, there is a clinical need for an alternative to the current methods of autologous reconstruction which are complex, costly and trade one defect for another. Tissue engineering holds the promise to address this increasing demand. However, most tissue engineering strategies fail to generate stable and functional tissue substitutes because of poor vascularization. This paper focuses on an in vivo tissue engineering chamber model of intrinsic vascularization where a perfused artery and a vein either as an arteriovenous loop or a flow-through pedicle configuration is directed inside a protected hollow chamber. In this chamber-based system angiogenic sprouting occurs from the arteriovenous vessels and this system attracts ischemic and inflammatory driven endogenous cell migration which gradually fills the chamber space with fibro-vascular tissue. Exogenous cell/matrix implantation at the time of chamber construction enhances cell survival and determines specificity of the engineered tissues which develop. Our studies have shown that this chamber model can successfully generate different tissues such as fat, cardiac muscle, liver and others. However, modifications and refinements are required to ensure target tissue formation is consistent and reproducible. This article describes a standardized protocol for the fabrication of two different vascularized tissue engineering chamber models in vivo.

Tissue Engineering by Intrinsic Vascularization in an In Vivo Tissue Engineering Chamber

This is a guideline for constructing in vivo vascularized tissue using a microsurgical arteriovenous loop or a flow-through pedicle configuration inside a tissue engineering chamber. The vascularized tissues generated can be employed for organ regeneration and replacement of tissue defects, as well as for drug testing and disease modeling.

Bir ıntrinsic Vaskülarizasyon tarafından Doku Mühendisliği<em&gt; İn Vivo</em&gt; Doku Mühendisliği Odası

In reconstructive surgery, there is a clinical need for an alternative to the current methods of autologous reconstruction which are complex, costly and ...

A Protocol for Decellularizing Mouse Cochleae for Inner Ear Tissue Engineering

In mammals, mechanosensory hair cells that facilitate hearing lack the ability to regenerate, which has limited treatments for hearing loss. Current regenerative medicine strategies have focused on transplanting stem cells or genetic manipulation of surrounding support cells in the inner ear to encourage replacement of damaged stem cells to correct hearing loss. Yet, the extracellular matrix (ECM) may play a vital role in inducing and maintaining function of hair cells, and has not been well investigated. Using the cochlear ECM as a scaffold to grow adult stem cells may provide unique insights into how the composition and architecture of the extracellular environment aids cells in sustaining hearing function. Here we present a method for isolating and decellularizing cochleae from mice to use as scaffolds accepting perfused adult stem cells. In the current protocol, cochleae are isolated from euthanized mice, decellularized, and decalcified. Afterward, human Wharton&#39;s jelly cells (hWJCs) that were isolated from the umbilical cord were carefully perfused into each cochlea. The cochleae were used as bioreactors, and cells were cultured for 30 days before undergoing processing for analysis. Decellularized cochleae retained identifiable extracellular structures, but did not reveal the presence of cells or noticeable fragments of DNA. Cells perfused into the cochlea invaded most of the interior and exterior of the cochlea and grew without incident over a duration of 30 days. Thus, the current method can be used to study how cochlear ECM affects cell development and behavior.

The goal of this protocol is to demonstrate an effective method to decellularize and decalcify mouse cochleae for utilization as scaffolds for tissue engineering applications.

Fare Cochleae iç kulak doku mühendisliği için Decellularizing için bir iletişim kuralı

In mammals, mechanosensory hair cells that facilitate hearing lack the ability to regenerate, which has limited treatments for hearing loss. Current ...