Name: construction of vapor chambers used to expose mice to alcohol during the equivalent of all three trimesters of human development
Uploaded: 2014-07-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development at JoVE.com

R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 ve K12-GM088021 Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenen verir. Yazarlar, teknik yardım ve Dr Samantha L. Blomquist teşekkür ederim. Eleştirel el yazması ve video değerlendirmek için Kevin Caldwell ve Donald Partridge.

Tüm Hayvan prosedürler New Mexico-Sağlık Bilimleri Üniversitesi Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. 1.. Vapor Chamber Meclisi <ol><li> (Şekil 1 ve Tablo 1) üst, alt, ön, arka, yan, ve kapı video sağlanan boyutlara dairesel testere veya dekupaj testeresi ile kesme polikarbonat levhalar. </li><li> Dairesel bir testere veya dekupaj testeresi ile, ön panelin ortasında geniş 16 inç 8 inç yüksek bir açılış kesmek. </li><li> Ölçün ve haznenin kapısı olacak 10 inç polikarbonat tabaka ile 18 inç üzerine piyano menteşe için delikleri işaretleyin. </li><li> Kapı, 5/16 inç matkap ile karşı lavabo delik ve 3/16 inç matkap ucu ile, vidalar için delik açın. Vida başlarının için kapının iç sayaç lavabo delikleri delmek için emin olun. </li><li> Kaynak için polikarbonat levhalar hazırlayın. </li><li> Fro birleştirinnt, 16. Kaynaklı kullanarak alt panel üzerine geri ve yan paneller. </li><li> # 16 Weld-on ile paneller arasında herhangi kapayınız. </li><li> # 16 Weld-on ile üst panelini takın. </li><li> Kaynaklar tedavi süre yerde her şeyi tutmak için bar kelepçeler veya ağır ders kitapları kullanın. </li><li> Kapı menteşesi bağlanması için açıklığın altında ön panel 1 inç üzerine polikarbonat, 12 inç parça ile bir 1 inç takın. </li><li> Tedavi Weld-on için en az 24 saat bekleyin. </li><li> 12 inç uzunluğunda ve 1 inç uzunluğunda PEX boru 1 adet PEX boru 2 adet kesin. </li><li> A 5/16 matkap ucu ile bir ucundan 12 inç PEX boru her biri yaklaşık 1-2 inç bir delik delin. </li><li> Uzak konnektörü mesafede bulunan delikli bir 3/8 inç T-konnektör 2 x 12 inç PEX boru takın. </li><li> 3/8 inç fişleriyle PEX Hortumun açık olan uçları Cap. </li><li> 4-40 makine vida ve somun kullanılarak ön panel ve kapı piyano menteşe takın. </li><li> Bir kılavuz olarak kullanarak, kapıyı, mhaznenin ön panelindeki 1 inç ara parçasının piyano menteşe için gerekli olan delikleri ve ark. </li><li> 3/16 inç matkap ucu ile, piyano menteşe için ön panele delmenizi. </li><li> 4-40 makine vida ve somun kullanılarak ön panele kapı ve piyano menteşe takın. </li><li> Yan kolun her iki tarafında, bir çamaşır makinesi ve somun ile video gösterildiği gibi, mafsallı kelepçeleri bir araya getirin. </li><li> Mark ve matkap geçiş için 3/16 inç delik ön panelde kelepçeler ve 4-40 makine vida ve somun ile kelepçeler geçiş eklemek. </li><li> Kapının içine 3/8 inç lastik ampul mühürler ekleyin. </li><li> Bir 5/8 inç sıkıcı matkap ucu ile, giriş ağzı için üst panelin merkezinde bir delik açın. </li><li> Çıkış noktası için arka panelin alt / merkezinde 1/2 inç delik delin. </li><li> Çıkış ağzı deliği buhar bölmesinin arka duvarı boyunca boydan boya duvar adaptörler 3/8 inç dişli bölümünü iterek çıkış noktası birleştirin. Gelen somunu takınyerinde tutmak için bölmenin içine. </li><li> Polikarbonat levhalar koruyucu kapağı çıkartın. </li><li> T-konektörüne PEX boru 1 inçlik bir parça takın ve iç bölmenin üst delikten PEX boru zorlar. </li><li> Dışarıdan 1 inç PEX boru en üstüne bir 3/8 inch 90 dirsek takın. NOT: kapı bir 1/2 inç delik açın ve deliğe 1/2 inç mühür septayı yerleştirin. </li><li> Hava sadece odasını kontrol için tekrarlayın 1-22 adımları. </li></ol> 2.. Rack ve Hava Dağıtım Meclisi <ol><li> Malzeme listesinde belirtilen sepeti / rafa odaları yerleştirerek, üreticinin talimatlarına göre sepeti monte. </li><li> Yedek somun ve cıvata ile, hava akımı regülatörleri tutmak için rafa polikarbonat bir hurda parça eklemek. </li><li> Anywhere polikarbonat, işareti ve matkap hava akımı düzenleyiciler için 3/4 inç delik hurda parçası üzerinde ve fındık ile düzenleyiciler eklemekResim. </li><li> Hava akış düzenleyicilerin giriş ve çıkış delikleri içinden geçen duvar adaptörü 3/8 inç takın. </li><li> Havalandırma taş, 8. stoper ve in-line bağlantı hızlı sürümü ile etanol şişeyi birleştirin. </li><li> Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi 3/8 inç Tygon boru kullanılarak, hava pompası ve etanol şişeye akış regülatörleri bağlayın. </li><li> Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, hava, sadece bölmesi için, giriş 3/8 inch 3/8 inç olan Tygon borusu 90 dirsek için, hava akışı regülatörünün çıkış noktası ekleyin. </li></ol><img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig1highres.jpg" width="500" /> Buhar bölmelerin yapılandırmasının Şekil 1. Şematik temsili. Bir T-konektörü düşük gürültü hava pompasına bağlanır. T-konnektörünün bir tarafı üzerine doğrudan hava yalnızca buhar odası için bir hava akımı regülatörüne bağlanır. Diğer side tekrar bölünmüş ve 2, farklı hava akış düzenleyicileri, hava ve bir etanol birine takılır. Gösterildiği gibi, hava haznesi doğrudan regülatörüne bağlanır. Etanol buhar odası için, bir hava akışı regülatörü filtre şişesi, sıvı etanol içine daldırılmış havalandırıcı taş bağlanır. Belirtildiği gibi, filtre şişenin yan kol noktası, hava regülatörünün çıkışı ile bağlanır. Birleştirilmiş etanol buhar ve hava daha sonra etanol buhar odasının girişine bağlanır. (Gösterilmemiş olan) çıkış boruları odasında bir havalandırma çıkışına bağlanır. 3.. Testi Buhar Odaları ve Etanol Düzeyleri ayarlayın <ol><li> , Filtre şişeye 190 derece etanol 600 ml ilave edilir, havalandırma taşı yerleştirin ve şişenin yan koluna tüp girişine kadar kanca. </li><li> Yakın oda kapıları ve hava pompası üzerinde dönüş. </li><li> Yaklaşık olarak yarısı kadar hava, ile karıştırılır hava gibi sıvı alkol akar, böylece hava akışı düzenleyiciler ayarlayın. Adjusetanol odasının alkol ve hava akışına birleştirilmiş havayı hava akımı sadece t. </li><li> Hava odaları etanol konsantrasyonunun ölçülmesi önce en az 30 dakika boyunca dengelenmeye bırakın. </li><li> Septum üzerinden bir 18G iğne ve bir 60 ml şırınga ile bir hava 5 ml ekstraksiyonuyla hava etanol konsantrasyonu ölçümü. Lütfen 60 ml (1:12 seyreltme) için pistonu çekerek, oda havası ile bu örnek sulandırmak. Üreticinin talimatlarına uygun olarak bir alkol ölçeri kullanarak hava etanol seviyesi ölçülür. Odacık havanın seyreltme alkol ölçer algılama aralığı içinde alkol buhar seviyeleri elde etmek için gereklidir. NOT: Alkol farklı maruz kalma seviyelerini kullanarak ise seyreltme ayarlanması gerekebilir. </li><li> Yaklaşık 4.5-5 g / dl (hava dl başına buharlaşan alkol g) bir hava alkol konsantrasyonu elde etmek için gerektiği gibi, bir başlangıç ​​noktası olarak, hava akışı düzenleyiciler ayarlayın. </li></ol> 4. Hayvan Yetiştiriciliği <ol><li> Ev grup kadın yumurtalık döngülerini senkronize etmek için, en az 1 hafta / 6 fareleri (2-3 aylık) C578BL. </li><li> Tek tek dönüştürerek en az 2 hafta boyunca erkek C57BL / 6 fareleri (2-5 aylık) ev. </li><li> Senkronize ettikten sonra, çiftleşme için izin vermek için 5 gün boyunca bir tek erkek ile bir tek kadın koymak. </li><li> Çiftleşme sonrasında erkek kaldırmak ve bireysel ev kadın ve odaların içine koyun. </li></ol> 5. Öncesi ve Sonrası-natal Etanol Vapor Pozlama <ol><li> Yavru ölümü önlemek için doğum günü hariç ışık döngüsü sırasında 10:00 başlayan günde 4 saat (06:00-18:00 itibaren ışıkları) için etanol buharı hamile barajlar Açığa. </li><li> Gebelik izlemek için gestasyonel gün (G) 5, G13-G14, G18 ve G20-on baraj tartılır; yatak kadın işleme en aza indirmek için tartılmıştır o günlerde değiştirilmiştir. </li><li> Her gün bunların emilir, etanol ile bir pelet tüketimi önlemek için etanol maruz kalan gruplar için gıda değiştirin. </li><li> Günündedoğum hayvanları maruz bırakmayın. Doğumdan sonra P1-P12 10:00 başlayan günde 4 saat boyunca baraj ve yavrular ortaya. </li><li> P2, P8, P12, P25 ve üzerinde yavrular tartılır; ve ek işleme en aza indirmek için P8 ve P12 ile ilgili yatak değiştirmek. </li><li> Derhal son maruz kalma (P12) sonra, standart hayvan konut oda kafesleri aktarın. </li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada ayrıntılı olarak buhar inhalasyon bölmelerin yapımı için yöntemleri tarif eder. Odacıkları oluşturmak için gereken malzemeler ve aletler ticari tedarikçilerden temin edilebilir ve bölmelerin yapımı için adımları nispeten doğru olan,. Burada tarif sistemi, geri akış ve karıştırma önlemek için herhangi bir in-line check valfleri içermez. Biz havada biz havaya tek odaları içine herhangi bir karıştırma veya etanol geri akışı yok düşündüren tek odalarını herhangi bir saptanabilir etanol ölçmek için koyamadık. Tek odalar periyodik etanol buhar için kontrol edilmelidir hava (bu hava haznesi her alkol ölçerin ve / veya bir şırınga içinde mevcut olan artık etanol buhar saptanmasını önlemek için önce etanol bölmesine test edilmesi gerektiği not edilmelidir). İdeal olarak, odaları fare kafesleri sürekli e süresince muhafaza edilebilir hayvan bakım tesisinde özel odalarında konulmalıdırfareler taşımak için olan ihtiyacı ortadan kaldırarak Xposure paradigması, böylece stresi azaltır. Bir havalandırma çıkışı ile standart oda, bu paradigma için gerekli hepsi bu. Oda diğer araştırmacılar ile paylaşılır Ancak, bu etanol koku diğer hayvanların maruz kalma en aza indirmek için ayrılmış kabinleri ile bir odada odalarını yerleştirmek için gerekli olabilir. Her odası örneğin daha maruz kalma daha az emek yoğun bir yöntem, mide içi sonda yaparak, 6 standart fare kafesleri kapasitelidir. Pozlama paradigma kolaylıkla belirli bir denemenin ihtiyaca göre değiştirilebilir. Hayvanlar insan gebeliğin tüm trimesterlere eşdeğer sırasında etanol maruz olabilir. Bu insan gelişimine kemirgen gelişimsel eşdeğer kabul ve gelişim hangi işlemi bir (nöron, sinaptik entegrasyon, vb) ilgi ne beyin bölgesi bağlı olarak değişebilir unutulmamalıdır. Bu çalışmada, üçüncü tri tanımlanmışmester eşdeğer beyin büyüme atağı döneminde. Araştırmacılar süresi 49 çeviri web sitesine danışmak için teşvik edilir. Şekil 2B &#39;de gösterilen sonuçlara dayanarak, maruz kalma etanol buhar (örn., ~ 3 g / dl) daha düşük bir seviyede başlayan ve giderek metabolik tolerans gelişimi için telafi etmek için arttırılabilir önerilir. Prosedürün uygulanması sırasında, araştırmacılar yakından bu gebe barajlarda daha istikrarlı düzeylerine neden olmadığını belirlemek için farklı gestasyonel günlerde BECS izlemelidir. Alkol dehidrojenaz inhibitörü buhar odalarına 50 etanol maruz bırakılan farelerde tolerans gelişimini önlemek için kullanılmıştır. Ancak, bu çalışmalar sonuç 51,52 yorumlanmasını zorlaştıracaktır verebilecek potansiyel teratojenik etkileri vardır öneririz çünkü bu ajan gebe farelerde kullanılması tavsiye edilmez. Ayrıca, herhangi bir form enjeksiyonları hamile baraja ek gerilime neden olur,potansiyel deneyi 53 karıştırıcı. Hamile baraj aksine, yenidoğan döneminde buhar odası maruz metabolik tolerans gelişimine neden yoktu. BECS P2 ve P7-12 fareler arasında farklı değildi. Tepe BECS G13-14 de baraj tespit benzer ve G18-20 tespit göre biraz daha yüksek bulunmuştur. Bununla birlikte, BECS yavrular başlangıca dönün uzun sürdü. Gebelik döneminde buhar odalarına etanol maruz etanol metabolize etmek için yenidoğan yavrularının kapasitesini değiştirir eğer tespit edilecek kalır. Ancak, literatüre dayalı, bu biraz azalmış veya etanol 54,55 metabolize değişmeden kapasite sergilemek etanole gebelik sırasında maruz kaldıkları yavrular için beklenir. Çalışmalarımızda biz ortalama yavru ağırlığında bir fark gözlemlemek vermedi ve bizim veri gebeliğin sonuna, anne BECS ancak hiçbir mor için yasal zehirlenme üzerinde yükselmeye olduğunu göstermektedir2 saat daha e. Bu veriler annelerin önemli ölçüde post-natal dönemde alkol maruz etkilenmez öneririz. Hayvanlar daha yüksek etanol düzeyde maruz eğer Bununla birlikte, bu özellikle daha araştırılmalıdır. Bu poz paradigma bazı sınırlamalar vardır. Bu dönemde erkekler ile yetiştirilen çünkü dişi fareler gebeliğin ilk beş gün boyunca maruz değildi. Daha kısa bir üreme aralığı teşebbüs (örn., 2-3 gün), ancak bu hamile kadın sayısında bir azalmaya neden olabilir. Alternatif olarak, hayvanların çiftleşme fişler için kontrol kısa sürede ve kadınlar için yetiştirilen olabilir. Diğer bir sınırlama, belirli bir bölme içinde, tüm fareler, yalnızca etanol buhar nin tek bir konsantrasyonu maruz olmasıdır. Dahası, etanol buhar odası poz paradigmanın bazı yönleri gibi barajlar tek başına gebeliğin çoğunluğu boyunca muhafaza edilir ve maruz kaldığı gerçeği gibi, stresliGüçlü etanol kokusu. Etanol buhar maruz baraj ve / veya yavruların solunum sistemindeki bazı değişikliklere neden olmakta, bu da mümkündür. Ayrıca, yenidoğan sıçanlarda maruz üçüncü trimesterde (örneğin, plasenta-fetal birim, bu modelde mevcut değildir) sırasında insan maruz kalma mükemmel bir model değildir. Bununla birlikte, bu paradigmanın avantajları zayıflıkları ağır iddia ve FASDs patofizyolojisinde rol mekanizmaları karakterize etmek için yararlı bir model olabilir.

Gebelikte İçme belirgin etkilenen bireyler ve ailelerinin yaşam kalitesini azaltan birçok organ ve sistemlerde kalıcı değişikliklere neden fetüse zarar verebilir. Bu kadınların yaklaşık% 10-30 bir alem desen 1,2 olarak% 1-8 içme, ABD&#39;de gebelik sırasında içki olduğu tahmin edilmektedir. Fetal gelişim sırasında etanol maruz tarafından üretilen etkiler aralığı toplu fetal alkol spektrum bozuklukları (FASDs) olarak da bilinir. Son tahminler FASDs ABD&#39;de 3% 2-5 gibi yüksek bir prevalansı ile önemli bir halk sağlığı sorunu olduğunu göstermektedir. FASDs daha şiddetli tezahürü büyüme geriliği, kraniofasial anormallikleri, ve öğrenme engelliler de dahil olmak üzere nörodavranışsal açıkları ile karakterizedir Fetal Alkol Sendromu (FAS), olduğunu. FAS&#39;ın prevalansı ABD&#39;de 3 0.2-0.7% olarak tahmin edilmiştir. FASDs için mevcut tedaviler sadece kısmen etkilidirve daha etkin tedavileri geliştirme bozuklukları bu karmaşık spektrum hücresel ve moleküler temelleri zayıf anlayışı ile sınırlıdır. Ulusal Doğum Kusur Önleme Çalışması (NBDPS) verileri gebelik gebelik 2 sonraki aşamalarında, tespit perhiz tarafından takip edilmiştir önce hamile kadınların en sık, 1. trimesterde içmek olduğunu göstermektedir. NBDPS ayrıca gebelik sırasında etanol tüketimi, ikinci en yaygın desen gebelik 2 her trimesterde boyunca içme içerdiğini buldu. Bunun nedeni fetal etanol maruz kalma (düşük dozlarda bile), doğum öncesi bakım için sınırlı erişim, nöropsikiyatrik hastalıklar için pozitif tarih ve kötüye veya etanol 4 bağımlılık potansiyel zararlı etkileri hakkında farkındalık eksikliği bulunmaktadır. İlginçtir, NBDPS tüketiminin üçüncü en yaygın desen 1 sırasında yoksunluk dahil olduğunu bildirdi <sup&gt; St ve genellikle Organogenezis ölçüde tamamlanmış olduğu için içme güvenli olduğu varsayılır 3. trimesterde sırasında tüketimi ardından 2. trimesterde. Bu nöronal devreler derin arıtma 2 geçmesi bir dönem olduğundan, ancak 3. trimester etanol kaynaklı sinir sistemi hasarı yüksek duyarlılık dönemidir. NBDPS de 1. ve 3. trimesterde 2 sırasında cinsel perhiz ardından 2. trimesterde genelinde tüketimi de dahil olmak üzere, gebelik sırasında oluşan alkol tüketiminin diğer, daha az sıklıkla desenleri, tespit. Gebe kadınlarda görülen etanol tüketim farklı tiplerini modellemek için bir girişim olarak, gelişim etanol maruz paradigmalar bir dizi en yaygın 5,6 olan sıçan ve fareler, çeşitli hayvan türlerinin kullanımı ile tespit edilmiştir. Bu hayvanlarda gebelik süresi tipik lasyaklaşık 3 hafta, 1 st ve insan gebeliğin 2. trimesterde karşılık ts. Birçok kemirgen çalışmalar bu dönemde değişik dozlarda ve etanol maruz kalma desen etkisini değerlendirdik. Sık sık hamile farelere etanol yönetmek için kullanılan yöntem ve sıçanların örnek sıvı diyetler 7,8, içme suyu 9,10 etanol ek olarak, sakarin-şekerli çözeltiler gönüllü içme 11, mide sondası 12, 13 üzerinden buhar inhalasyon verilmesini içerir ve deri altına ya da periton içine enjeksiyon 14. Bu çalışmaların sonuçları hamileliğin erken dönemlerinde (6,15 gözden) beyindeki nöronal devreler üzerinde zarar için yeterli olduğu maruz olduğu gösteren, FASDs insanlarda gözlenen kusurların çeşitli değinmeyecek var. Kemirgenler ile yapılan deneyler de göstermiştir ki 3 rd için eşdeğer sırasında maruz </sup&gt; Yaklaşık sıçan ve farelerde postnatal yaşamın ilk 1-2 hafta tekabül insan gebelik, trimesterde belirgin beyin gelişimini bozabilir. Bu periyot süresince maruz neonatal sıçan veya fare etanol uygulanması ile modellenmiştir. Etanol bir yapay yetiştirilen hayvanlar 16-18, mide içi entübasyon 19, deri altı enjeksiyon yoluyla 20 gastrostomi besleme dahil olmak üzere, çeşitli yöntemler, buhar ve inhalasyon 21,22 kullanarak bu hayvanlara tatbik edilmiştir. Bu çalışmalar inandırıcı beyin büyüme atağı etanol 6 gelişimsel etkilere karşı yüksek güvenlik açığı bir dönem olduğunu göstermiştir. Yukarıda belirtildiği gibi, her üç aylık gebelik sırasında içme kadınlarda 2 etanol tüketiminin bir modeldir. Ancak, nispeten az sayıda çalışmalar hayvan modelleri kullanılarak pozlama bu desen etkisini değerlendirdik. Bu çalışmaların bazıları advantag almış3. üç aylık eşdeğer sıçan ve farelerin durumunda olduğu gibi uterus yerine neonatal dönemde ortaya büyük hayvanların e. Bu hayvan modelleri, insan olmayan primatlar, koyun 23,24 ve 25-27 dahildir. Bununla birlikte, bu hayvan modelleri yaygın, çünkü, yüksek maliyet ve özel bir bakım tesisleri için ihtiyaç, kısmen, FASDs araştırmalarda kullanılan edilmemiştir. Kemirgenler daha sık fetal gelişim 5 tüm trimester etanol maruz kalma etkisini karakterize etmek için kullanılmıştır. Kobay insan 28,29 bu beyin olgunlaşmasında kendi geniş doğum öncesi gelişimini belirli bir benzerlik ve bu açıdan özellikle avantajlı olmuştur. Kobay ile, insan 3. üç aylık eşdeğer gelişme dönemi içerir rahimde etanol maruz kalma etkisini karakterize etmek mümkün olmuştur. Bu hayvanların nispeten yüksek maliyet, hem de gebeliğin nispeten uzun süresinin(~ 67 gün), FASDs araştırma üzerinde çalışıyor birkaç laboratuvarlara kullanımını sınırlandırmaktadır. Çünkü biyomedikal araştırmalarda maliyet-etkililik ve geniş kullanım, araştırmacılar hamileliğin her trimesterde etanol maruz modellemek için sıçanları kullandık. İlk çalışmalarda, fareler 0.08 g / dl baraj tepe kan düzeyleri etanol (BEC) ile sonuçlanan gastrostomi yapay yetiştirilen YENİDOĞANLARDA (doğum sonrası gün (P) 1-10) ile, etanol uygulaması takip sıvı diyetler ile hamilelik sırasında maruz bırakıldı ve yavrular 0.16 g / dl olarak. Bu paradigma optik sinir miyelinasyonda uzun süreli değişimlere neden ve beyincik 30-32 Bergmann glia liflerinin sayısını azalttı. 3. trimester eşdeğeri (P4-9) 33,34 parçası sırasında neonatal idaresi tarafından takip İntragastrik entübasyon ile bir alem gibi bir şekilde gebe sıçan barajlara etanol uygulanan yapay yetiştirme koşulları kullanılarak benzer şekilde, Maier ve işbirlikçileri. Peak anne ve yavru BECS gebeliğin 20 ve P6 hem de 0.3 g / dl idi. Bu her üç aylık dönem maruziyet paradigma gebeliğin 33 seçilmiş dönemlerinde maruz kalan yavrular gözlenen belirgin şekilde daha fazla olduğu büyüme geriliği sonuçlandı. Buna ek olarak, tüm üç aylık için eşdeğer sırasında etanole maruz kalan sıçan beyincik Purkinje ve diğer dönemlerde 34 boyunca maruz kalan hayvanlarda gözlenenden daha büyük olmuştur granül hücrelerin sayısında bir azalma sergiledi. Hipokampal hücre sayılarında azalmalar da bu paradigma ile bildirdi, ancak bu etkiler 35 trimester eşdeğer 3 rd sırasında öncelikle maruz kalma sonucu ortaya çıktığı saptanmıştır edildi. Hamile farelere ve neonatal farelerde hem de intragastrik gavaj yoluyla etanol verilmesini içeren bir yöntem olup, aynı zamanda, tüm üç aylık maruz 36 modellemek için kullanılmıştır. Barajlarda 0.13 g / dl (gestasyonel gün 17) ve P6 yavrular 0.24 g / dl, neden boylam arasında BECS vermiştir Bu yöntem,monoamin nörotransmiter hipokampus ve hipotalamusta seviyeleri ve hipokampus 37,38 protein 2 bağlayıcı DNA metiltransferaz ve metil CpG artan ekspresyonu g süreli değişiklikler. Benzer bir poz paradigma (baraj ve yavrular 0.2 g / dl BEC = 0,14-0,2 g / dl) kullanılarak, Gil-Mohapel vd. 39 yetişkin farelerin kıvrımlarının yeni olgunlaşmamış nöronların sayısında bir artış tespit ettiklerini yetişkin doğumlu nöronların olgunlaşmasında etanol neden olduğu nöronal hasar veya bir değişiklik için bir telafi mekanizması temsil edebilir. Müfettişler ayrıca sıvı diyetler yoluyla barajlar teşhir veya hamilelik ve emzirme 9,40 sırasında hem su içerek bütün trimester etanol poz modellemek için çalıştılar. Genellikle düşük yavru BECS (; 41,42 örneğin, ,002-,05 g / dl) sonuçlanır Ancak, annelerinin sütü ile yavrular teşhir yarar sınırlıdır. Fareler aynı zamanda extens kullanılmıştırgelişim etanol maruz kalma etkilerini karakterize etmek için kısaltılmıştır. Bu hayvan modeli birçok genetik olarak tadil edilmiş fare soyları 5 kullanılabilir olan ek bir avantaj, sıçan hayvan modeli için yukarıda tarif edilen güçlü birçok hisse. Fareler başarıyla 1 st, 2. ya da gebelik 43,44 arasında 3. trimesterinde etanolün etkilerini karakterize etmek için kullanılmaktadır. Bu teknik olarak daha zor insan gebeliğin tüm trimesterlere eşdeğer sırasında fareler maruz çünkü Ancak, bu hayvanların tüm trimester maruziyetin etkisi iyi karakterize edilmemiştir. Örneğin, sıçanlarda başarılı bir şekilde kullanılmış olan yapay yetiştirme ve mide sondası, fareler 45 daha özel işlemleri gerektirir. Bildiğimiz kadarıyla, bugüne kadar sadece tek bir çalışma fareleri kullanarak tüm trimester etanol maruz kalma etkisini incelemek için çalıştı; Bu hayvanlar su Duri içme etanol solusyonlarındanng gebelik ve laktasyon 46. Maternal BECS 0.07 g / dl ve yavru Becs belirlenir, ancak barajlarda olan kısım olması bekleniyor yordu. Burada, biz alkol buharı teneffüs odalarına yoluyla hamile baraj ve yenidoğanlarda hem de uygulanır farelerin tüm trimester etanol maruz kalma için yeni bir model tarif. Buhar odaları, bir önceki tasarıma 47 göre inşa edilmiştir. Biz inhalasyon odalarını inşa ve pozlama işlemlerini yürütmek konusunda ayrıntılı yönergeler sağlar. Biz de elde edilebilir BECS ve yavru hayatta kalma ve büyüme maruziyetin etkisi hakkında bilgi vermek.

<table><tbody><tr><td>Polycarbonate 1/4&quot; clear 48&quot; x 24&quot;</td><td>McMaster-Carr</td><td>8574K23</td><td>10</td></tr><tr><td>Foam Rubber bulb seal 3/8&quot;w x 7/32&quot;h</td><td>McMaster-Carr</td><td>93085K67</td><td>10 ft</td></tr><tr><td>Weld-on #16</td><td>McMaster-Carr</td><td>7515A11</td><td>3</td></tr><tr><td>Piano hinge 12&quot; long</td><td>McMaster-Carr</td><td>1658A11</td><td>2 x 1 ft</td></tr><tr><td>Hold-down toggle clamps standard</td><td>McMaster-Carr</td><td>5126A26</td><td>8</td></tr><tr><td>PEX tubing 1/2&quot;</td><td>McMaster-Carr</td><td>51275K88</td><td>10 ft</td></tr><tr><td>Barbed Tee tube fitting (Black) Pkg 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K608</td><td>1</td></tr><tr><td>Barbed plug fitting (Black) Pkg 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5462K79</td><td>1</td></tr><tr><td>Barbed Elbow tube fitting (Black) Pkg 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K596</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8&quot; Through-Wall Adapters, Tube to Threaded Pipe</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K851</td><td>1</td></tr><tr><td>Phillips Machine screw 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>91772A112</td><td>1</td></tr><tr><td>Machine screw hex nut 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>90480A005</td><td>1</td></tr><tr><td>Panel-mount flowmeter 2-20</td><td>McMaster-Carr</td><td>41945K76</td><td>3</td></tr><tr><td>FLASK, FILTER 1,000 ml 6/PACK</td><td>VWR</td><td>89001-800</td><td>2</td></tr><tr><td>Precision Seal Septa</td><td>VWR</td><td>89084-490</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Black Rubber Stopper #8 1-hole</td><td>VWR</td><td>59581-367</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBE TYGON R3603 3/8X9/16 50&#039;</td><td>VWR</td><td>89068-556</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBE TYGON R3603 1/4X11/16 50&#039;</td><td>VWR</td><td>89068-502</td><td>1</td></tr><tr><td>Aerator Stone P2120</td><td>VWR</td><td>32573-007</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8&quot; T-connectors Pk of 20</td><td>VWR</td><td>46600-060</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Disconnectors tapered Pk of 10</td><td>VWR</td><td>46600-110</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8 Hose Barb valved in-line coupling</td><td>Colder Products Company</td><td>HFCD17612</td><td>1</td></tr><tr><td>Air pump medium capacity</td><td>LMI Manufacturers</td><td>DB60L</td><td>1</td></tr><tr><td>Nexelate Wire Shelving 36&quot;W X 24&quot;D X 63&quot;H</td><td>Global industrial</td><td>T9A990135</td><td>1</td></tr><tr><td>Stem Casters Set of (4) 5&quot; Polyurethane Wheel</td><td>Global industrial</td><td>T9A500591</td><td>1</td></tr></tbody></table>

construction of vapor chambers used to expose mice to alcohol during the equivalent of all three trimesters of human development

Gelişimi sırasında alkole maruz kalma toplu Fetal Alkol Spektrum Bozuklukları (FASDs) olarak bilinir morfolojik ve davranışsal anormallikler takımyıldızında neden olabilir. Yelpazenin en şiddetli sonunda büyüme geriliği, kraniofasial dysmorphology ve nörodavranışsal açıkları ile karakterize Fetal Alkol Sendromu (FAS), olduğunu. Kemirgenler gibi hayvan modellerinde, yapılan çalışmalar FASDs patofizyolojisinde dahil birçok moleküler ve hücresel mekanizmaları aydınlatmıştır. Hamile kemirgenler için etanol uygulaması gebeliğin birinci ve ikinci trimesterde insan poz modellemek için kullanılır olmuştur. İnsanlarda üçüncü trimester etanol tüketimi neonatal kemirgenler kullanılarak modellenmiştir. Ancak, birkaç kemirgen çalışmalar insan hamilelik, gebe kadınlarda sık görülür maruz kalma bir desen her üç trimesterde için eşdeğer sırasında etanol maruz kalma etkisini nitelendirmiştir. İşte, biz o kolayca gelen buhar odaları oluşturmak için nasıl göstermekHer altı standart fare kafesleri kapasitelidir btainable malzemeler. Biz her üç trimesterde minimal kullanımı ile, etanol maruz modellemek için kullanılan bir buhar odası paradigma açıklar. Bizim çalışmalar hamile barajlar etanol önemli metabolik tolerans geliştirmiştir göstermektedir. Ancak, yenidoğan farelerin metabolik hoşgörü ve fetusların sayısını, fetus ağırlığı, plasenta ağırlığı, yavrular / çöp sayısı, ölü yavrular / çöp sayıda geliştirmek vermedi ve yavru ağırlığı önemli ölçüde etanol maruz tarafından etkilenmemiştir. Bu paradigmanın önemli bir avantajı genetiği değiştirilmiş fareler ile çalışmalara uygulanabilmesidir. Ayrıca, bu paradigma hayvanların kullanımı, fetal alkol araştırma önemli bir bulandırabilir en aza indirir.

Şekil 2A hamile fareler ve yenidoğan yavrular hem odalarında nispeten istikrarlı etanol buhar yoğunluklarına maruz kaldıklarını göstermektedir. Bunlar arasında değişen 4-6 g / dl arasındadır. Şekil 2B, zamanın bir fonksiyonu olarak hamile farelerde elde BECS gösterir. BECS standart bir alkol dehidrojenaz göre deney 48 kullanılarak ölçülmüştür. G5 anda, BECS hızla maruz kalma başladıktan sonra ~ 60 mM 2 saat yükseldi ve 4 saat temas süresi sonunda zirve yaptı. BECS yavaş yavaş maruz sonuna aşağıdaki ek 4 saat sonra ~ 12 mm azalmış. G13-14 tarafından, G5 tespit seviyelerinin yaklaşık% 60 BECS dramatik bir azalma vardı. Buna ek olarak, BECS düzeyi daha yavaş arttı ve gebe farelerin kanında etanol kısa bir mevcudiyetinde sonuçlanan, daha hızlı bir şekilde azalmıştır. Kısa vadede (G18-20) de, BECS ayrıca G5 tespit seviyelerinin yaklaşık% 30 azaldı. Bu bulgular developm ile tutarlıdırgebe farelerde etanol hızlı metabolik hoşgörü ent. Şekil 2C yenidoğan yavrular 30 mM yakın BECS maruz kaldıklarını göstermektedir. BECS kademeli olarak 4 saatlik temas süresi sonunda bir zirveye ulaşan, bu hayvanlarda artmıştır ve yavaş yavaş 8 saat, 4 saat maruz bırakma paradigma sonunda taban seviyelerine azalmaktadır. Hamile baraj aksine, erken (P2) maruz kalan yenidoğanlarda ölçülen BECS arasında hiçbir fark yenidoğan döneminde vs geç (P7-P12) oldu. Bu bulgular yenidoğan farelerin etanol metabolik tolerans geliştirmek olmadığını göstermektedir. <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig2highres.jpg" width="500" /> Etanol düzeyleri Şekil 2.. Karakterizasyonu. A) Etanol buhar odası düzeyleri maruziyet paradig gestasyonel ve postnatal aşamaları boyunca nispeten sabit kalmıştırm. Bu seviyelerini ölçmek için, odacık hava çevre havası ile seyreltildi, kauçuk septum içinden bir şırınga ile çekilir ve (ayrıntılar için video), bir alkol ölçer giriş portuna atıldı. Değerleri sırasıyla, gebelik ve doğum sonrası aşamaları için 5 ve 4 farklı pozlama turlarından elde edilmiştir. B) hamile baraj (n = 5-7 barajlarda) olarak belirtilen tahmini gestasyonel gün için farklı zaman noktalarında ölçülen kan etanol seviyeleri. Yasal zehirlenmesi sınırı (17.4 mM ya da 0.08 g / dl) kesikli çizgi ile gösterilmektedir. Gri çubuk) barajlar etanol B gibi. C) Aynı maruz kalan süreyi gösterir fakat farklı yavrularda yenidoğan farelerde (n = 5-9 yavrular. Şekil 3 pozlama paradigma önemli ölçüde ağırlık barajlarda kazanç veya yavrular etkilemediğini göstermektedir. Tablo 2 etanol maruz kalma önemli ölçüde uygulanabilir Fetu sayısını etkilemediğini gösteriyorses, (yakın dönemde ölçülen) rezorbe fetus, fetus ağırlığı ve plasenta ağırlığı. Tablo 2 sayısı da çöp ve yavru ölümlerinin başına yavruların sayısı önemli ölçüde etanol maruz etkilenmez olmadığını göstermektedir. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51839/51839fig2highres.jpg" target="_blank">daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız Bu rakamın.</a> <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig3highres.jpg" width="500" /> Baraj ve yavru ağırlıkları üzerinde etanol maruz kalma bir etkisi Şekil 3.. Eksikliği. Bir tahmini gebelik günün fonksiyonu (n = 8-12) gibi A) Barajı kilo. Tahmini gebelik 5. günde ağırlık, yaş fonksiyonu (n = 7-9) gibi maruz ilk günü. B) Pup ağırlık kazancı ölçülür ağırlığına karşılık gelir. Her iki panel, hata çubukları, semboller daha küçüktür. &lt;a href = &quot;https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51839/51839fig3highres.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" ><tbody><tr ><td > Boyutlar (inç) </td><td > Yükseklik </td><td > Genişlik </td></tr><tr ><td > Üst </td><td> 32 </td><td> 22 </td></tr><tr ><td > Alt </td><td> 32 </td><td> 22 </td></tr><tr ><td > Ön </td><td> 32 </td><td> 14 </td></tr><tr ><td > Geri </td><td> 32 </td><td> 14 </td></tr><tr ><td > Yan 1 </td><td> 21.5 </td><td> 14 </td></tr><tr ><td > Side 2 </td><td> 21.5 </td><td> 14 </td></tr><tr ><td > Kapı </td><td> 18 </td><td> 10 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Polikarbonat levhalar Boyutları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" ><tbody><tr ><td ></td><td > Hava </td><td > EtOH </td></tr><tr ><tFETUSLARA d&gt; sayısı: ~ E18 </td><td > 7.50 ± 1.08, n = 6 </td><td > 7.33 ± 1.52, n = 6 </td></tr><tr ><td > Ortalama Fetus Ağırlık (g): ~ E18 </td><td > 1.04 ± 0.09, n = 6 </td><td > 0.82 ± 0.09, n = 6 </td></tr><tr ><td > Ortalama Plasenta Ağırlık (g): ~ E18 </td><td > 0.12 ± 0.003, n = 6 </td><td > 0.14 ± 0.01, n = 6 </td></tr><tr ><td > Yeniden emilen FETUSLARA sayısı: ~ E18 </td><td > 0.50 ± 0.34, n = 6 </td><td > 0.50 ± 0.50, n = 6 </td></tr><tr ><td > Yavrular / çöp Sayısı </td><td > 7.11 ± 0.67, n = 9 </td><td > 6.89 ± 0.42, n = 9 </td></tr><tr ><td > Ölü yavrular / çöp Sayısı </td><td > 0.11 ± 0.11, n = 9 </td><td > 0.66 ± 0.24, n = 9 </td></tr></tbody></table> Tablo 2. Öncesi ve fare buhar maruziyet paradigmanın post-natal karakterizasyonu.

Watch this Scientific Journal Video about Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development at JoVE.com

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

Biz aynı anda 6 fare kafesleri ev hazır malzemeler kullanılarak alkol buhar odaları inşaatı göstermektedir. Biz ayrıca, insan gebelik 3 üç aylık denk fetal alkol maruz kalmanın bir fare modelinde bunların kullanımını tarif eder. Bu paradigma, gebelik ve doğum sonrası günlerde 1-12 sırasında hayvanlar ortaya koyar.

İnsani Gelişim her üç trimesterde Eşdeğeri sırasında Alkol Fare Expose Kullanılan Buhar Odaları İnşaatı

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

construction-vapor-chambers-used-to-expose-mice-to-alcohol-during

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

14.6K Görüntüleme.  University of New Mexico Health Sciences Center.  Biz aynı anda 6 fare kafesleri ev hazır malzemeler kullanılarak alkol buhar odaları inşaatı göstermektedir. Biz ayrıca, insan gebelik 3 üç aylık denk fetal alkol maruz kalmanın bir fare modelinde bunların kullanımını tarif eder. Bu paradigma, gebelik ve doğum sonrası günlerde 1-12 sırasında hayvanlar ortaya koyar. 

Video: Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop within the uterus. A newly developed ex vivo upright droplet culture method provides an attractive alternative to studies performed in utero. The ex vivo droplet culture provides the ability to examine and manipulate cellular interactions and diverse signaling pathways through use of various blocking and activating compounds; additionally, the effects of various pharmacological reagents on the development of specific organs can be studied without unwanted side effects of systemic drug delivery in utero. As compared to other in vitro systems, the droplet culture not only allows for the ability to study three-dimensional morphogenesis and cell-cell interactions, which cannot be reproduced in mammalian cell lines, but also requires significantly less reagents than other ex vivo and in vitro protocols. This paper demonstrates proper mouse fetal organ dissection and upright droplet culture techniques, followed by whole organ immunofluorescence to demonstrate the effectiveness of the method. The ex vivo droplet culture method allows the formation of organ architecture comparable to what is observed in vivo and can be utilized to study otherwise difficult-to-study processes due to embryonic lethality in in vivo models. As a model application system, a small-molecule inhibitor will be utilized to probe the role of vascularization in testicular morphogenesis. This ex vivo droplet culture method is expandable to other fetal organ systems, such as lung and potentially others, although each organ must be extensively studied to determine any organ-specific modifications to the protocol. This organ culture system provides flexibility in experimentation with fetal organs, and results obtained using this technique will help researchers gain insights into fetal development.

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

The&#160;ex vivo&#160;upright droplet culture is an alternative to current&#160;in vitro&#160;and&#160;in vivo&#160;experimental techniques. This protocol is easy to perform and requires smaller amounts of reagent, while permitting the ability to manipulate and study fetal vascularization, morphogenesis, and organogenesis.

Kullanımı<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Tüm Fetal Organları Dik Damlacık Kültürleri Fare Organogenesis sırasında Gelişim Süreçleri Eğitim için

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Gelişim Biyolojisi

Moderate Prenatal Alcohol Exposure and Quantification of Social Behavior in Adult Rats

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several independent laboratories have demonstrated robust alterations in the social behavior of rodents exposed to alcohol during brain development across a wide range of exposure durations, timing, doses, and ages at the time of behavioral quantification. Prior work from this laboratory has identified reliable alterations in specific forms of social interaction following moderate prenatal alcohol exposure (PAE) in the rat that persist well into adulthood, including increased wrestling and decreased investigation. These behavioral alterations have been useful in identifying neural circuits altered by moderate PAE1, and may hold importance for progressing toward a more complete understanding of the neural bases of PAE-related alterations in social behavior. This paper describes procedures for performing moderate PAE in which rat dams voluntarily consume ethanol or saccharin (control) throughout gestation, and measurement of social behaviors in adult offspring.

The goal of the protocol presented here is to describe procedures to expose rats to moderate levels of alcohol during prenatal brain development and to quantify resulting alterations in social behavior during adulthood.

Orta Prenatal Alkol Pozlama ve Yetişkin Sıçanlarda Sosyal Davranış Kantitasyonu

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several ...

Davranış

Wheel Running and Environmental Complexity as a Therapeutic Intervention in an Animal Model of FASD

Aerobic exercise (e.g., wheel running (WR) extensively used in animal research) positively impacts many measures of neuroplastic potential in the brain, such as rates of adult neurogenesis, angiogenesis, and expression of neurotrophic factors in rodents. This intervention has also been shown to mitigate behavioral and neuroanatomical aspects of the negative impacts of teratogens (i.e., developmental exposure to alcohol) and age-related neurodegeneration in rodents. Environmental complexity (EC) has been shown to produce numerous neuroplastic benefits in cortical and subcortical structures and can be coupled with wheel running to increase the proliferation and survival of new cells in the adult hippocampus. The combination of these two interventions provides a robust &#34;superintervention&#34; (WR-EC) that can be implemented in a range of rodent models of neurological disorders. We will discuss the implementation of WR/EC and its constituent interventions for use as a more powerful therapeutic intervention in rats using the animal model of prenatal exposure to alcohol in humans. We will also discuss which elements of the procedures are absolutely necessary for the interventions and which ones may be altered depending on the experimenter&#39;s question or facilities.

Cardiovascular exercise and stimulating experiences in a complex environment have positive benefits on multiple measures of neuroplasticity within the rodent brain. This article will discuss the implementation of these interventions as a &#34;superintervention&#34; which combines wheel running and environmental complexity and will address the limitations of these interventions.

FASD bir hayvan Modelinde Terapötik Müdahale olarak tekerlek Koşu ve Çevre Karmaşıklık

Aerobic exercise (e.g., wheel running (WR) extensively used in animal research) positively impacts many measures of neuroplastic potential in the brain, ...

Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This is mostly due to the difficulty of microdissection of fetal brains and their sectioning for determination of apoptotic cells caused by prenatal exposure to alcohol. The experiments described here provide visualized techniques from mice breeding to the identification of cell death in fetal brain tissue. This study used C57BL/6 mice as the animal model for studying fetal alcohol exposure and the role of trophic peptide against alcohol-induced apoptosis. The breeding consists of a 2-hr matting window to determine the exact stage of embryonic age. An established fetal alcohol exposure model has been used in this study to determine the effects of prenatal alcohol exposure in fetal brains. This involves free access to alcohol or pair-fed liquid diets as the sole source of nutrients for the pregnant mice.
The techniques involving dissection of fetuses and microdissection of fetal brains are described carefully, since the latter can be challenging. Microdissection requires a stereomicroscope and ultra-fine forceps. Step-by-step procedures for dissecting the fetal brains are provided visually. The fetal brains are dissected from the base of the primordium olfactory bulb to the base of the metencephalon.
For investigating apoptosis, fetal brains are first embedded in gelatin using a peel-away mold to facilitate their sectioning with a vibratome apparatus. Fetal brains embedded and fixed in paraformaldehyde are easily sectioned, and the free floating sections can be mounted in superfrost plus slides for determination of apoptosis or cell death.
TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick End Labeling; TdT: terminal deoxynucleotidyl transferase) assay has been used to identify cell death or apoptotic cells. It is noteworthy that apoptosis and cell-mediated cytotoxicity are characterized by DNA fragmentation. Thus, the visualized TUNEL-positive cells are indicative of cell death or apoptotic cells.
The experimental designs here provide information about the use of an established liquid diet for studying the effects of alcohol and the role of neurotrophic peptides during pregnancy in fetal brains. This involves breeding and feeding pregnant mice, microdissecting fetal brains, and determining apoptosis. Together, these visual and textual techniques might be a source for investigating prenatal exposure of harmful agents in fetal brains.

The experimental designs proposed here focus on studying the effects of alcohol exposure in apoptosis and the application of neurotrophic peptide during pregnancy in fetal brain. A detailed description from the breeding to the collection of fetal brains is described. Techniques for determination of apoptosis are also described in detail.

Alkole bağlı C57BL Hamilelik sırasında Apoptoz / 6 Fare Karşı, Nörotrofik Peptit, ADNF-9 Etkilerinin Test için Deneysel Yöntemler

Experimental designs for investigating the effects of prenatal alcohol exposure during early embryonic stages in fetal brain growth are challenging. This ...

Nörobilim

Assessment of Ultrastructural Neuroplasticity Parameters After In Utero Transduction of the Developing Mouse Brain and Spinal Cord

The present study combines in utero transduction with transmission electron microscopy (TEM) aiming at a precise morphometrical analysis of ultrastructural parameters in unambiguously identified topographical structures, affected by a protein of interest that is introduced into the organism via viral transfer. This combined approach allows for a smooth transition from macrostructural to ultrastructural identification by following topographical navigation maps in a tissue atlas. High-resolution electron microscopy of the in-utero-transduced tissue reveals the fine ultrastructure of the neuropil and its plasticity parameters, such as cross-sectioned synaptic bouton areas, the number of synaptic vesicles and mitochondria within a bouton profile, the length of synaptic contacts, cross-sectioned axonal areas, the thickness of myelin sheaths, the number of myelin lamellae, and cross-sectioned areas of mitochondria profiles. The analysis of these parameters reveals essential insights into changes of ultrastructural plasticity in the areas of the nervous system that are affected by the viral transfer of the genetic construct. This combined method can not only be used for studying the direct effect of genetically engineered biomolecules and/or drugs on neuronal plasticity but also opens the possibility to study the in utero rescue of neuronal plasticity (e.g., in the context of neurodegenerative diseases).

The combination of transmission electron microscopy and in utero transduction is a powerful approach for studying morphological changes in the fine ultrastructure of the nervous system during development. This combined method allows deep insights into changes in structural details underlying neuroplasticity with respect to their topographical representation.

Sonra Ultrastructural nöroplastisite parametrelerinde Utero iletim gelişmekte olan fare beyin ve omurilik değerlendirilmesi

The present study combines in utero transduction with transmission electron microscopy (TEM) aiming at a precise morphometrical analysis of ...

Quantification of Ethanol Levels in Zebrafish Embryos Using Head Space Gas Chromatography

Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASD) describe a highly variable continuum of ethanol-induced developmental defects, including facial dysmorphologies and neurological impairments. With a complex pathology, FASD affects approximately 1 in 100 children born in the United States each year. Due to the highly variable nature of FASD, animal models have proven critical in our current mechanistic understanding of ethanol-induced development defects. An increasing number of laboratories has focused on using zebrafish to examine ethanol-induced developmental defects. Zebrafish produce large numbers of externally fertilized, genetically tractable, translucent embryos. This allows researchers to precisely control timing and dosage of ethanol exposure in multiple genetic contexts and quantify the impact of embryonic ethanol exposure through live imaging techniques. This, combined with the high degree of conservation of both genetics and development with humans, has proven zebrafish to be a powerful model in which to study the mechanistic basis of ethanol teratogenicity. However, ethanol exposure regimens have varied between different zebrafish studies, which has confounded the interpretation of zebrafish data across these studies. Here is a protocol to quantify ethanol concentrations in zebrafish embryos using head space gas chromatography.

This work describes a protocol to quantify ethanol levels in a zebrafish embryo using head space gas chromatography from proper exposure methods to embryo processing and ethanol analysis.

Kafa Uzayı Gaz Kromatografisi Kullanan ZebraBalığı Embriyolarında Etanol Düzeylerinin Ölçülmesi

Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASD) describe a highly variable continuum of ethanol-induced developmental defects, including facial dysmorphologies ...

Alkol Wasabi Reaksiyonlarını Azaltır: Farelerde Davranışsal ve Yapay Zeka Analizi

Integration of Animal Behavioral Assessment and Convolutional Neural Network to Study Wasabi-Alcohol Taste-Smell Interaction

The commercial wasabi pastes commonly used for food preparation contain a homologous compound of chemosensory isothiocyanates (ITCs) that elicit an irritating sensation upon consumption. The impact of sniffing dietary alcoholic beverages on the sensation of wasabi spiciness has never been studied. While most sensory evaluation studies focus on individual food and beverages separately, there is a lack of research on the olfactory study of sniffing liquor while consuming wasabi. Here, a methodology is developed that combines the use of an animal behavioral study and a convolutional neural network to analyze the facial expressions of mice when they simultaneously sniff liquor and consume wasabi. The results demonstrate that the trained and validated deep learning model recognizes 29% of the images depicting co-treatment of wasabi and alcohol belonging to the class of the wasabi-negative liquor-positive group without the need for prior training materials filtering. Statistical analysis of mouse grimace scale scores obtained from the selected video frame images reveals a significant difference (P &lt; 0.01) between the presence and absence of liquor. This finding suggests that dietary alcoholic beverages might have a diminishing effect on the wasabi-elicited reactions in mice. This combinatory methodology holds potential for individual ITC compound screening and sensory analyses of spirit components in the future. However, further study is required to investigate the underlying mechanism of alcohol-induced suppression of wasabi pungency.

Yazar Spotlight: Tat-Koku Etkileşimini Keşfetmek - Wasabi Yanığını Hafifletmek İçin Alkol Kokularını Kullanma

This article describes a set of methods for measuring the suppressive ability of sniffing alcoholic beverages on the wasabi-elicited stinging sensation.

Wasabi-Alkol Tat-Koku Etkileşimini İncelemek için Hayvan Davranışsal Değerlendirmesi ve Evrişimli Sinir Ağının Entegrasyonu

The commercial wasabi pastes commonly used for food preparation contain a homologous compound of chemosensory isothiocyanates (ITCs) that elicit an ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain undergoes rapid organizational change and is similar to accelerated brain changes that occur during the third trimester in humans. This model of fetal alcohol spectrum disorders (FASDs) produces severe brain damage, mimicking the amount and pattern of binge-drinking that occurs in some pregnant alcoholic mothers. We describe the use of trace eyeblink classical conditioning (ECC), a higher-order variant of associative learning, to assess long-term hippocampal dysfunction that is typically seen in alcohol-exposed adult offspring. At 90 days of age, rodents were surgically prepared with recording and stimulating electrodes, which measured electromyographic (EMG) blink activity from the left eyelid muscle and delivered mild shock posterior to the left eye, respectively. After a 5 day recovery period, they underwent 6 sessions of trace ECC to determine associative learning differences between alcohol-exposed and control rats. Trace ECC is one of many possible ECC procedures that can be easily modified using the same equipment and software, so that different neural systems can be assessed. ECC procedures in general, can be used as diagnostic tools for detecting neural pathology in different brain systems and different conditions that insult the brain.

Trace eyeblink classical conditioning (ECC) was used to assess hippocampal-dependent associative learning in adult rats that were administered a high concentration (11.9% v/v) of alcohol during early neonatal brain development. In general, ECC procedures are sound diagnostic tools for detecting brain dysfunction across many psychological and biomedical settings.

Hipokampal disfonksiyon Fetal alkol spektrum bozuklukları, fare modeli değerlendirmek için izleme Eyeblink Klasik koşullanma kullanımı

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

İnsani Gelişim her üç trimesterde Eşdeğeri sırasında Alkol Fare Expose Kullanılan Buhar Odaları İnşaatı

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Kullanımı

Orta Prenatal Alkol Pozlama ve Yetişkin Sıçanlarda Sosyal Davranış Kantitasyonu

FASD bir hayvan Modelinde Terapötik Müdahale olarak tekerlek Koşu ve Çevre Karmaşıklık

Alkole bağlı C57BL Hamilelik sırasında Apoptoz / 6 Fare Karşı, Nörotrofik Peptit, ADNF-9 Etkilerinin Test için Deneysel Yöntemler

Sonra Ultrastructural nöroplastisite parametrelerinde Utero iletim gelişmekte olan fare beyin ve omurilik değerlendirilmesi

Kafa Uzayı Gaz Kromatografisi Kullanan ZebraBalığı Embriyolarında Etanol Düzeylerinin Ölçülmesi

Wasabi-Alkol Tat-Koku Etkileşimini İncelemek için Hayvan Davranışsal Değerlendirmesi ve Evrişimli Sinir Ağının Entegrasyonu

Wasabi-Alkol Tat-Koku Etkileşimini İncelemek için Hayvan Davranışsal Değerlendirmesi ve Evrişimli Sinir Ağının Entegrasyonu

Wasabi-Alkol Tat-Koku Etkileşimini İncelemek için Hayvan Davranışsal Değerlendirmesi ve Evrişimli Sinir Ağının Entegrasyonu

Hipokampal disfonksiyon Fetal alkol spektrum bozuklukları, fare modeli değerlendirmek için izleme Eyeblink Klasik koşullanma kullanımı