Djc Optometri Sağlık Bilimleri Koleji Western University tarafından sağlanan finansman. Grafik tasarım için Irisa Tam&#39;a özel teşekkürler.

Tüm hayvancılık ve deneyler onaylanmış ve ilgili kurum veya diğer yasal gereklerin Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından belirlenen kurallara uygun olarak yapılmalıdır. 1.. Zebra balığı Bakımı <ol><li> 10 saat karanlık-14 saat ışık döngüsü 16 28.5 ° C&#39;de standart koşullar altında zebrafish koruyun. </li><li> Yaklaşık 3 balık / L. tank yoğunluğunda yetişkin zebrafish tutun </li></ol> 2. Optokinetik yanıt (OKR) <ol><li> Tamburu 14,5 cm çapa, ayarlanabilir ışık şiddeti ayarları (300-8.000 lux) ile bir stereo mikroskop ve bir bilgisayar (Şekil 1a) kullanarak özel OKR kayıt cihazını oluşturun. <ol><li> Bitişik bir monitöre canlı yem sağlamak ve görüntü yakalama ve kayıt için izin verir mikroskop bir kamera takın. </li><li> Accommo bir bilgisayara bağlı bir mikrodenetleyici ile dönen bir kontroltarihi, çeşitli hız ve yön seçimleri. </li></ol></li><li> 2-3 dakika boyunca 0.016% tricaine balık anestezisi ve sonra kenar üzerinde asılı gözleri ve solungaçları ile küçük bir platform üzerinde balık yer. </li><li> Balık vücut üzerinde ince bir sünger / havlu yerleştirin ve hareketsiz tutmak için balık üzerinde balık karşılamak için şekilli köpük 2-3 adet, pin. Balık kuyruğu hareketini sınırlama balık yaralanmasına neden olmadan hareketsizleştirme için çok önemli bir yönü olduğu bulunmuştur, ve en iyi köpük düz parça kullanılarak elde edilmiştir. (Şekil 1b) </li><li> OKR kayıt cihazının döner tambur içinde uygun olduğu, silindir şeklinde bir su dolu bir tank içinde balık yerleştirin. Yaklaşık 7.3 cm tamburun kenarından gözlü, dik balık konumlandırmak için platform üzerinde mıknatıslar kullanın. Balık, birkaç dakika içinde anestezi canlandırmak gerekir - normal solunum devam eder ve rastgele göz hareketleri dikkat edilmelidir. </li><li> Bir bas yerleştirine dönen tambur içine derecesi (CPD) başına 0.07 döngüleri ızgara ve rotasyonu ve video çekimi başlamak için bilgisayar kontrolleri meşgul (12 rpm hız, bu kağıt için kullanılan, ancak 8-16 rpm hızları benzer sonuçlar vermelidir). </li><li> Bir ilk OKR ızgara tabanından ortaya sonra, kısa bir süre dönüşü duraklama ve daha küçük bir ızgara (daha yüksek uzamsal frekans) ile ızgara değiştirin. </li><li> Bir OKR artık ortaya olabilir kadar bu işlemi tekrarlayın. Bir modifiye merdiven yaklaşım aşağıdaki bir okr neden ve sonra okr kaybını doğrulamak için bir yanıt ortaya çıkarmak için başarısız ızgarayı kullanarak tekrarlamak küçük mazgal sınayın. Nihai ızgara birinci söndürme olayı için göreceli değiştirilir, bu işlem, en küçük tespit ızgara için gerçek bir yanıt doğrulamak için tekrar edilebilir. </li><li> Ters göz bitişik çizgili siyah bir plastik oklüder koyarak monoküler görme keskinliği ölçümleri alın. (2,6-2,7 adımları) yukarıdaki işlemi tekrarlayın. </li><li>Tıkayıcı yeniden konumlandırma ve yeniden adımlar 2,6-2,7 tekrarlayarak karşısında gözün keskinliği edinin. </li><li> Her bir göz doğru keskinliği önlemler, aşağıdaki adımlarda hesaplanabilir, böylece balık tank altında referans ölçüm şeridi kullanarak test prosedürü sırasında çizgili dan mesafe dikkat edin. </li></ol> 3. Görsel Keskinliğini Hesaplama <ol><li> CPD hesaplayarak görme keskinliği edinin: <img alt="Denklem 1" fo:content-width="0.7in" src="/files/ftp_upload/50832/50832eq1.jpg" width="70px" /> Bir ızgara için lens merkezinden mesafedir, ve h OKR (Şekil 1c) gözlendiği en küçük ızgaranın bir döngünün uzunluğudur. </li><li> Birleştirilen görme keskinliği ölçümleri için, ortalama sol ve sağ göz hem de a-değeri kullanılır. </li></ol>

<ol>
	<li>Brockerhoff, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+screen+for+isolating+zebrafish+mutants+with+visual+system+defects.">A behavioral screen for isolating zebrafish mutants with visual system defects.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 10545-10549 (1995).</li><li>Neuhauss, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+disorders+of+vision+revealed+by+a+behavioral+screen+of+400+essential+loci+in+zebrafish.">Genetic disorders of vision revealed by a behavioral screen of 400 essential loci in zebrafish.</a> J. Neurosci. 19, 8603-8615 (1999).</li><li>Schumann, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+objective+determination+of+visual+acuity+on+the+basis+of+the+optokinetic+nystagmus.">The objective determination of visual acuity on the basis of the optokinetic nystagmus.</a> Am. J. Optom. Arch. Am. Acad. Optom. 29, 575-583 (1952).</li><li>Gorman, J. J., Cogan, D. G., Gellis, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+apparatus+for+grading+the+visual+acuity+of+infants+on+the+basis+of+opticokinetic+nystagmus.">An apparatus for grading the visual acuity of infants on the basis of opticokinetic nystagmus.</a> Pediatrics. 19, 1088-1092 (1957).</li><li>Fulton, A. B., Manning, K. A., Dobson, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+method+for+efficient+screening+of+visual+acuity+in+young+infants.+II.+Clinical+application.">A behavioral method for efficient screening of visual acuity in young infants. II. Clinical application.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 17, 1151-1157 (1978).</li><li>Huizinga, E., Van Der Meulen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vestibular+rotatory+and+optokinetic+reactions+in+the+pigeon.">Vestibular rotatory and optokinetic reactions in the pigeon.</a> Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 60, 927-947 (1951).</li><li>Tappeiner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+Acuity+and+Contrast+Sensitivity+of+Adult+Zebrafish.">Visual Acuity and Contrast Sensitivity of Adult Zebrafish.</a> Front. Zool. 9, 10 (2012).</li><li>Mueller, K. P., Schnaedelbach, O. D., Russig, H. D., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VisioTracker,+an+innovative+automated+approach+to+oculomotor+analysis.">VisioTracker, an innovative automated approach to oculomotor analysis.</a> J. Vis. Exp. (56), e3556 (2011).</li><li>Zou, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+the+optokinetic+response+to+study+visual+function+of+zebrafish.">Using the optokinetic response to study visual function of zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (36), e1742 (2010).</li><li>Mueller, K. P., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+measurements+of+the+optokinetic+response+in+adult+fish.">Quantitative measurements of the optokinetic response in adult fish.</a> J. Neurosci. Methods. 186, 29-34 (2010).</li><li>Li, L., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dominant+form+of+inherited+retinal+degeneration+caused+by+a+non-photoreceptor+cell-specific+mutation.">A dominant form of inherited retinal degeneration caused by a non-photoreceptor cell-specific mutation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 11645-11650 (1997).</li><li>Ren, J. Q., McCarthy, W. R., Zhang, H., Adolph, A. R., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+visual+responses+of+wild-type+and+hypopigmented+zebrafish.">Behavioral visual responses of wild-type and hypopigmented zebrafish.</a> Vision Res. 42, 293-299 (2002).</li><li>Maaswinkel, H., Mason, B., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ENU-induced+late-onset+night+blindness+associated+with+rod+photoreceptor+cell+degeneration+in+zebrafish.">ENU-induced late-onset night blindness associated with rod photoreceptor cell degeneration in zebrafish.</a> Mech. Ageing Dev. 124, 1065-1071 (2003).</li><li>Stujenske, J. M., Dowling, J. E., Emran, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bugeye+mutant+zebrafish+exhibits+visual+deficits+that+arise+with+the+onset+of+an+enlarged+eye+phenotype.">The bugeye mutant zebrafish exhibits visual deficits that arise with the onset of an enlarged eye phenotype.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 4200-4207 (2011).</li><li>Veth, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+zebrafish+lrp2+result+in+adult-onset+ocular+pathogenesis+that+models+myopia+and+other+risk+factors+for+glaucoma.">Mutations in zebrafish lrp2 result in adult-onset ocular pathogenesis that models myopia and other risk factors for glaucoma.</a> PLoS Genet. 7, e1001310 (2011).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> THE ZEBRAFISH BOOK, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2007).</li><li>Cagenello, R., Arditi, A., Halpern, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binocular+enhancement+of+visual+acuity.">Binocular enhancement of visual acuity.</a> J. Opt. Soc. Am. A Opt. Image Sci. Vis. 10, 1841-1848 (1993).</li><li>Brockerhoff, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+optokinetic+response+of+zebrafish+larvae.">Measuring the optokinetic response of zebrafish larvae.</a> Nat. Protoc. 1, 2448-2451 (2006).</li><li>Hodel, C., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer-based+analysis+of+the+optokinetic+response+in+zebrafish+larvae.">Computer-based analysis of the optokinetic response in zebrafish larvae.</a> CSH Protoc. 2008, pdb prot4961 (2008).</li><li>Huber-Reggi, S. P., Mueller, K. P., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+optokinetic+response+in+zebrafish+by+computer-based+eye+tracking.">Analysis of optokinetic response in zebrafish by computer-based eye tracking.</a> Methods Mol. Biol. 935, 139-160 (2013).</li><li>Tappeiner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+acuity+and+contrast+sensitivity+of+adult+zebrafish.">Visual acuity and contrast sensitivity of adult zebrafish.</a> Front. Zool. 9, 10 (2012).</li><li>Saszik, S., Bilotta, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+temperature+on+the+dark-adapted+spectral+sensitivity+function+of+the+adult+zebrafish.">The effects of temperature on the dark-adapted spectral sensitivity function of the adult zebrafish.</a> Vision Res. 39, 1051-1058 (1999).</li><li>Haug, M. F., Biehlmaier, O., Mueller, K. P., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+acuity+in+larval+zebrafish:+behavior+and+histology.">Visual acuity in larval zebrafish: behavior and histology.</a> Front. Zool. 7, 8 (2010).</li><li>Curcio, C. A., Sloan, K. R., Kalina, R. E., Hendrickson, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+photoreceptor+topography.">Human photoreceptor topography.</a> J. Comp. Neurol. 292, 497-523 (1990).</li><li>Kalloniatis, M., Luu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Visual Acuity. , (1995).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Vesileyle balık su tankının içine kaçabilir. Bu kuyruk hareketsiz hale getirmek için önemlidir. Balığın vücut üzerinde ince bir sünger / havlu Ayrıca kullanımı da uzun süre askıya balık tutmak için çok değerli olduğu tespit edildi. Biz balık zarar vermeden bu yordamı kullanarak daha 30 dakika boyunca hareketsiz balık tutmayı başardık. Zaman bu miktar binoküler ve monoküler hem keskinliği yapmak için fazlasıyla yeterli. Fiziksel olarak dönen bir birimin ya da dijital bir görüntü 18-22 sunarak buradan ve başka bir yerde tarif edildiği gibi ızgaranın sunumu ya da yapılabilir. Her iki tür avantaj ve dezavantajları var. Biz hem maliyet nedenleri ve teknik özellikleri için fiziksel rotasyon kullanmayı seçti. Bilgisayar ve görüntüleme cihazları hariç, burada açıklanan OKR cihaz yaklaşık 150 $ için inşa edilebilir. OKR vis belirleyici bir amacı, bir araçtıryetişkin Zebrafish ual keskinliği. Vizyon için birkaç diğer visuomotor analizler önceki deneylerde kullanılan ve ağır konu olmamışsa olsa bile elektroretinogram başarıyla, yetişkin zebrabalıkları gözünde yapılmış olsa da, yetişkin zebrabalıkları OKR birçok yeni deneysel şartlarda 22 kapıyı açar. Bu çalışmada göz hastalığı modellerinde görme keskinliği farkı tanımlayarak, zamanla görme keskinliği değişiklikleri ölçmede okr adlı programını gösterdi ve monoküler görme keskinliği belirlemede gelmiştir. İlginç olarak, erişkin zebra balığı görme İnsan gözü (20/20) ile karşılaştırıldığında, yaklaşık 20/1, 000 (0.60 cpd -0,3 logMAR&#39;dan dönüştürüldüğünde) &#39;dir. Bu kötü görünse de, Zebra balığı gözleri çok iyi çevresi için uygundur. 6.5 su cm, polikarbonat birkaç milimetre, ve hava başka bir santimetre bakarak görsel görevi rağmen, balık oldukça iyi bir performans! Biz yetişkin zebrabalıkları keskinliği Abo olduğunu bulunduut. 23. Kontrast bunların fotoreseptör aralık verilmiş çıkarsanabilecek% 70 olduğu optimum insan performans ile ~ 20/12, ki bu yaklaşık% 80 20/10 öngörülen ve yetişkin Zebrafish görme yeteneğini ölçmek için OKR teknik etkileyici 24 25. Bağımsız göz görme keskinliği ölçüm tekniği, bir gözü tedavi edilebilir ve diğer bir kontrol olarak kullanılmıştır edildiği çalışmalar için olanak sağlayacaktır. Ayrıca, bu tür katarakt gelişir lrp2/bugeye veya balık gibi asimetrik göz gelişimi ile balık daha doğru takip edilebilir. Bu bakım doğru çizgiler için gözlerden mesafeyi ölçmek için ve görüş alanını tam tıkamak için alınması gerektiği unutulmamalıdır. Bu teknik Zebrafish görme fonksiyonunun daha doğru ve spesifik önlemlere kapıyı açmak gerekir.

Zebra balığı (Br.rerio) nedeniyle diğer omurgalılar, kısa yaşam döngüsü, ve genetik olarak değiştirilmiş mutantlar 1,2 kullanılabilirliği kendi retinanın benzerliği görsel fizyoloji çalışmak için iyi bir model vardır. Optokinetik refleks / tepki / nistagmus (OKR) düzgün takip ve hızlı sakkaddan göz hareketlerinin bir kombinasyonudur. 60 yılı aşkın için klinisyenler OKR objektif hastalarda görme keskinliği ölçümü için kullanılan ve bebek görme yeteneklerinin 3-5 belirlenmesi için özellikle yararlıdır edilebilir olduğunu göstermiştir. Hayvanlarda okr kaydedilmiş ilk kullanımı 1950&#39;lerde 6 güvercin kullanıyordum. Daha yakın zamanlarda, OKR larva zebrabalıkları görsel fonksiyonu değerlendirmede ve genellikle görme bozukluğu 1,2 olan genetik mutantlar için ekran için kullanılan için değerli bir araç haline gelmiştir. OKR yaygın larva Zebrafish görme fonksiyonunu belirlemek için kullanılmış olsa da, sadece son zamanlarda yetişkin zebra kanıtlanmıştır7-10 arası balık. Tappeiner tarafından yeni bir kağıt ve diğ. Geleneksel fareler için kullanılan piyasada mevcut optomotor sistemi kullanır, OptoMotry, yetişkin zebrafish görme keskinliği hatta çeşitli açısal hızlarda 7 karşısında, derece başına 0.59 çevrimler (CPD) ~, oldukça sabit kaldığını göstermek için . OKR larva zebra balığı çalışmalarda oldukça yararlı olduğu kanıtlanmıştır, ancak görsel davranışı için diğer yöntemler başarıya ilişkin olarak değişen derecelerde zebra balığı yetişkinlerde kullanılmıştır. Kaçış tepkisi deneyi hem pigmentasyon mutantlar, parlak ışık koşullarında 11,12 görsel tepkiler azalttı, albino ve yakut Zebra balığı gösterdi. Bu aynı kaçış tepkisi deneyi de başarıyla yaş 13 2 yıllık da olsa, gece körlüğü d mutantlar belirlemiştir. Ancak, kaçış tepkisi tahlil kusurları olmadan değildir. Bu kesin bir görme fonksiyonu atfetmek zordur ve sadece bir brüt approximatio olduğunuGörsel değişikliklerin n - değişiklik tanımlanır önce büyük bir değişiklik alır anlamına gelir. Görme bozukluğu olan yetişkin zebrafish belirlenmesi için geliştirilmiş olan bir başka yöntem, optomotor tepkisi (OMR) 11&#39;dir. Bu deneyde, balık merkezinde bir opak sütun ile dairesel tankı yerleştirilir. Siyah ve beyaz çizgili tankı etrafında döndürün ve balık şerit hareket yönünde yüzme ile görevlendirilmiştir. Kaçış tepkisi gibi, OMR yetişkin zebrafish visuomotor yetenekleri üzerinde duruluyor. Ancak böyle lrp2/bugeye mutantlar 14 gibi görme bozuklukları, balık tanımlamak için başarıyla kullanılmaktadır. Lrp2/bugeye Zebra balığı sergi buphthalmos, yüksek göz içi basıncı, OMR azalmış, ve progresif retinal dejenerasyon 14,15. Birçok çalışmalar genellikle öznel ve kant olamaz yetişkin zebrabalıkları visuomotor yetenekleri, kullanmışitatively analiz edilmiştir. Okr kullanarak, bir daha objektif yetişkin balık görme keskinliği eğitim görebilirsiniz. Biz başlangıçta larva çalışmaları 1 için kullanılan bir sonra modellenmiştir kendi OKR cihazı, inşa etmişlerdir. Bu çalışmada OKR tek gözlü ve zebrabalıkları binoküler görme keskinliği her iki hesaplamak için kullanılabileceğini göstermektedir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="593">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:209px;">Super Low Light Black White Video Security Camera</td>
			<td style="width:143px;">Super Circuits</td>
			<td style="width:119px;">PC164CEX-2</td>
			<td style="width:124px;"> Any low light camera may be used</td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:209px;">Arduino Duemilanove microcontroller</td>
			<td style="width:143px;">Adafruit Industries</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td style="width:124px;"> The Arduino Uno is also compatible with the speed control software.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tricaine Methanesulfonate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101107-950</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the optokinetic response as a quantitative measure of visual acuity in zebrafish

Zebra balığı genellikle larva balık odaklanmış veya basit bir tepki göstermiştir önceki yöntemlerden ancak birçok görme araştırma için kanıtlanmış bir modeli vardır. Daha yakın Zebrafish yetişkin görsel davranış ilgi haline gelmiştir, ancak belirli tepkilerini ölçmek için yöntemler gelen yeni. Bu açığı gidermek için, biz tekrar tekrar ve doğru bir yetişkin zebrabalıkları görme keskinliği ölçmek için optokinetik yanıtı (OKR) kullanmak için bir yöntem geliştirmek için yola çıktı. Burada Yetişkin Zebra Görme keskinliği, binoküler ve monoküler keskinliği dahil olmak üzere, ölçülebilir olduğunu göstermektedir. Balık işlemi sırasında zarar olmadığından, görme keskinliği zaman kısa veya uzun süreler boyunca ölçülebilir ve karşılaştırılabilir. Burada anlatılan görme keskinliği ölçümleri istenirse hızlı, yüksek verim için ve ek görsel işlemler için izin de yapılabilir. Bu analiz türü ilaç müdahale çalışmalarında ya da hastalığın ilerlemesine soruşturmalarına vesile olur.

OKR Cihaz İşlevsellik Yukarıda açıklandığı ve Şekil az bakım ile 1 fonksiyonlar gösterildiği gibi OKR cihaz. Kuyruk immobilize, aşama 2.3 &#39;de belirtildiği gibi, kayıt sırasında ölçülü balıkları tutmak için çok önemlidir. Yeterince hareketsiz, balık zaman uzun süreler için OKR cihazda tutulabilir. Daha fazla veri, her bir balık için toplanır, böylece Sonuç olarak, bakım, ilk hareketsiz adımları sırasında alınmalıdır. Görme keskinliği ölçümleri Binoküler OKR kolayca normal erişkin balık açığa çıkartılır. Yukarıdaki prosedürü izleyerek bir çok yaştan zebrabalıkları (Şekil 2) için görme keskinliği bulabilirsiniz. Biz kaydedilen en iyi dürbün mekansal keskinliği 0.74 gbm oldu. Şekil 2 &#39;de belirtildiği gibi, iki gözlü keskinliği genellikle yaşla orantılı olarak artar (n = 46, p = 0.002 ile SPSS V14 ANOVA), fakat düzeyleri offyaş yaklaşık 12 ay sonra. Yabani tip, biz yaştaki lrp2/bugeye balık 5 aylık vahşi tip balık olarak ölçülen görme keskinliği karşılaştırıldığında, biz lrp2/bugeye balık anlamlı keskinliği (p &lt;0.001 azaltılmış buldu: 0.49 ± 0.05 gbm; n = 8; lrp2/bugeye: 0.35 ± 0.06, n = 10; Excel kullanarak Student T-testi). Sağ göz tıkanmasıyla sol göz için görme keskinliği tam tersi tespit edilebilir. Binoküler keskinliği karşılaştırıldığında, binoküler toplama insan görme 17 (Şekil 3) benzer görülmektedir. Binoküler görme keskinliği genellikle sağ (OD) veya sol bağımsız olarak ölçülen (OS) keskinliği ya% 5-10 daha iyi oldu. Bazı bireysel balık için fark% 25 iyileşme oldu. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50832/50832fig1.jpg" width="500px" /> Şekil 1. OKR recording. A) OKR cihaz ayarlanabilir ışık yoğunluğu ayarlarında (300-8.000 lux) ile davul ve mikroskop dönen 14,5 cm çapında oluşur. Bir kamera bitişik bir monitörde bir canlı yayın sağlar. Derece (GBM) göre gereken şekilde dönen tambur saat yönünde ve saatin tersi yönde değiştirilebilir ve uzamsal frekans ızgaralar hem de çeşitli hız ayarı vardır yerleştirilir ve çıkarılır. B) Balık güvenli ve döner tamburun ortasına yerleştirilir. C) döngüleri hesaplanır Mhg = kullanarak <img alt="" src="img2.png" /> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/50832/50832fig1highres.jpg" target="_blank">Daha büyük resmi görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 2," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50832/50832fig2.jpg" width="500px" /> Şekil 2. Görme keskinliği yaşla birlikte değişir. Grafik 5 ölçülen bağımsız görme keskinliğini gösterir -<html> Yaş 15 ay. Görme keskinliği genellikle gelişmenin ilk yıl boyunca artar ve daha sonra 15 aylıkken (p = SPSS v14 kullanarak 0.002 ANOVA) de biraz azalır. Her nokta ya 1 ya da birkaç balık temsil edebilir. Görme keskinliği devir / derece (CPD) olarak ölçülür. (N = toplam 46, 5 ayda 8; 6 ayda 4; 8 ayda 7, 9 ayda 6; 10 ayda 11; 11 aylıkken 2; 12 ayda 2 ve 15 ayda 6). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/50832/50832fig2highres.jpg" target="_blank">buraya tıklayın Daha büyük resmi görmek için</a> . <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50832/50832fig3.jpg" width="500px" /> Şekil 3,. Binoküler görme keskinliği toplamı etkisi. Binoküler (OU) görme keskinliği sağda (OD) veya sola (OS) göz keskinliği göre genellikle daha yüksektir. Bu özel gruptaki OS keskinliği daha düşük bulunmuştur. (* P = 0.006, N = 8),jove.com/files/ftp_upload/50832/50832fig3highres.jpg &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın.

Watch this Scientific Journal Video about The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish at JoVE.com

The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

Zebra balığı birçok araştırma alanları için değerli bir araç olmuştur. Burada görsel bir yanıt ortaya çıkarmak ve yetişkin Zebrafish fonksiyonel görme keskinliği hesaplamak için bir yöntem ortaya koymaktadır.

Zebra balığı görme keskinliğinin bir nicel ölçü olarak Optokinetik Tepki

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the  earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple  ...

the-optokinetic-response-as-quantitative-measure-visual-acuity

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

20.4K Görüntüleme.  Western University of Health Sciences.  Zebra balığı birçok araştırma alanları için değerli bir araç olmuştur. Burada görsel bir yanıt ortaya çıkarmak ve yetişkin Zebrafish fonksiyonel görme keskinliği hesaplamak için bir yöntem ortaya koymaktadır. 

Video: The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh frozen brain sections. Our group has successfully used this approach to study gene co-regulation. More specifically, we have used this dFISH method to explore the anatomical organization, neurochemical properties, and the impact of sensory experience in central sensory circuits, at single cell resolution. This protocol has been validated in brain tissue from mice, rats and songbirds but is expected to be easily adaptable to other vertebrate species, as well as to an array of non-neural tissues. In this film we provide a detailed demonstration of the main steps of this procedure.

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

This protocol involves a non-radioactive in-situ hybridization procedure that enables the simultaneous identification of two transcript species, at a single cell resolution, in thin sections of the vertebrate brain.

Çift Floresans In situ Taze Beyin Bölüm Hibridizasyon

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

Nörobilim

Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often hampered by a phenomenon known as "bait shyness". Mice and rats cannot vomit, due to the tightness of the cardiac sphincter of the stomach, so to overcome the problem of potential food toxicity they have evolved a strategy of first ingesting only very small amounts of novel substances. The amounts ingested then gradually increase until the animal has determined whether the substance is safe and nutritious. So the old rat-catchers would first put a palatable substance such as oatmeal, which was to be the vehicle for the toxin, in the infested area. Only when large amounts were being readily consumed would they then add the poison, in amounts calculated not to affect the taste of the vehicle. The poisoned bait, which the animals were now readily eating in large amounts, would then swiftly perform its function.
Bait shyness is now used in the behavioural laboratory as a way of measuring anxiety. A highly palatable but novel substance, such as sweet corn, nuts or sweetened condensed milk, is offered to the mice (or rats) in a novel situation, such as a new cage. The latency to consume a defined amount of the new food is then measured.
Robert M.J. Deacon can be reach at <a href="mailto:robert.deacon@psy.ox.ac.uk">robert.deacon@psy.ox.ac.uk</a>

Mice and rats, due to their innate cautiousness, are initially slow in consuming a novel food, particularly in a novel place. This hyponeophagia can readily be measured in the laboratory, even though laboratory animals are much less anxious than their wild counterparts

Hyponeophagia: Fare Anksiyete ölçün

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often ...

A Dual Tracer PET-MRI Protocol for the Quantitative Measure of Regional Brain Energy Substrates Uptake in the Rat

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the rat. The developed method is a small-animal positron emission tomography (PET) protocol, in which&#160;11C-AcAc and 18F-fluorodeoxyglucose (18F-FDG) are injected sequentially in each animal. This dual tracer PET acquisition is possible because of the short half-life of 11C (20.4 min). The rats also undergo a magnetic resonance imaging (MRI) acquisition seven days before the PET protocol. Prior to image analysis, PET and MRI images are coregistered to allow the measurement of regional cerebral uptake (cortex, hippocampus, striatum, and cerebellum). A quantitative measure of 11C-AcAc and 18F-FDG brain uptake (cerebral metabolic rate; &#956;mol/100 g/min) is determined by kinetic modeling using the image-derived input function (IDIF) method. Our new dual tracer PET protocol is robust and flexible; the two tracers used can be replaced by different radiotracers to evaluate other processes in the brain. Moreover, our protocol is applicable to the study of brain fuel supply in multiple conditions such as normal aging and neurodegenerative pathologies such as Alzheimer&#39;s and Parkinson&#39;s diseases.

Small-animal positron emission tomography enables the assessment of the brain&#39;s two main energy substrates:&#160;glucose and ketones. In the present method, 11C-acetoacetate and 18F-fluorodeoxyglucose are injected sequentially in each animal, and their uptake is measured quantitatively in specific brain regions determined from the magnetic resonance images.

Rat Bölgesel Beyin Enerji Yüzeyleri Alımına Kantitatif Tedbir için A Çift Tracer PET-MR Protokolü

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the ...

Electroretinogram Analysis of the Visual Response in Zebrafish Larvae

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the surface of the cornea, electrical activity generated in response to light can be measured and used to assess the activity of retinal cells in vivo. This manuscript describes the use of the ERG to measure visual function in zebrafish. Zebrafish have long been utilized as a model for vertebrate development due to the ease of gene suppression by morpholino oligonucleotides and pharmacological manipulation. At 5-10 dpf, only cones are functional in the larval retina. Therefore, the zebrafish, unlike other animals, is a powerful model system for the study of cone visual function in vivo. This protocol uses standard anesthesia, micromanipulation and stereomicroscopy protocols that are common in laboratories that perform zebrafish research. The outlined methods make use of standard electrophysiology equipment and a low light camera to guide the placement of the recording microelectrode onto the larval cornea. Finally, we demonstrate how a commercially available ERG stimulator/recorder originally designed for use with mice can easily be adapted for use with zebrafish. ERG of larval zebrafish provides an excellent method of assaying cone visual function in animals that have been modified by morpholino oligonucleotide injection as well as newer genome engineering techniques such as Zinc Finger Nucleases (ZFNs), Transcription Activator-Like Effector Nucleases (TALENs), and Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/Cas9, all of which have greatly increased the efficiency and efficacy of gene targeting in zebrafish. In addition, we take advantage of the ability of pharmacological agents to penetrate zebrafish larvae to evaluate the molecular components that contribute to the photoresponse. This protocol outlines a setup that can be modified and used by researchers with various experimental goals.

We present a method for the electroretinographic (ERG) analysis of zebrafish larvae utilizing micromanipulation and electroretinography techniques. This is a simple and straightforward method for assaying visual function of zebrafish larvae in vivo.

Zebra balığı Larva Görsel Tepki Elektroetinogram Analizi

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise from extra-retinal sources. Ex vivo ERG provides an efficient method to dissect the function of retinal cells directly from an intact isolated retina of animals or donor eyes. In addition, ex vivo ERG can be used to test the efficacy and safety of potential therapeutic agents on retina tissue from animals or humans. We show here how commercially available in vivo ERG systems can be used to conduct ex vivo ERG recordings from isolated mouse retinas. We combine the light stimulation, electronic and heating units of a standard in vivo system with custom-designed specimen holder, gravity-controlled perfusion system and electromagnetic noise shielding to record low-noise ex vivo ERG signals simultaneously from two retinas with the acquisition software included in commercial in vivo systems. Further, we demonstrate how to use this method in combination with pharmacological treatments that remove specific ERG components in order to dissect the function of certain retinal cell types.

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Ex vivo ERG can be used to record electrical activity of retinal cells directly from isolated intact retinas of animals or humans. We demonstrate here how common in vivo ERG systems can be adapted for ex vivo ERG recordings in order to dissect the electrical activity of retinal cells.

Eşzamanlı<em&gt; Ex vivo</emİki retina&gt; Fonksiyonel Test tarafından<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogram Sistemi

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to monitor the disease course in the follow-up period. Changes in the VEP parameters closely correlate with pathological damage in the optic nerve. This protocol provides a detailed description about the rodent model of optic nerve microinjection, in which a partial demyelination lesion is produced in the optic nerve. VEP recording techniques are also discussed. Using skull implanted electrodes, we are able to acquire reproducible intra-session and between-session VEP traces. VEPs can be recorded on individual animals over a period of time to assess the functional changes in the optic nerve longitudinally. The optic nerve demyelination model, in conjunction with the VEP recording protocol, provides a tool to investigate the disease processes associated with demyelination and remyelination, and can potentially be employed to evaluate the effects of new remyelinating drugs or neuroprotective therapies.

Focal demyelination is induced in the optic nerve using lysolecithin microinjection. Visual evoked potentials are recorded via skull electrodes implanted over the visual cortex to examine the signal conduction along the visual pathway in vivo. This protocol details the surgical procedures underlying electrode implantation and optic nerve microinjection.

Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous system. SC-selective genetic manipulation in living animals is a powerful technique for studying the molecular and cellular mechanisms of SC myelination and demyelination in vivo. While knockout/knockin and transgenic mice are powerful tools for studying SC biology, these methods are costly and time consuming. Viral vector-mediated transgene introduction into the sciatic nerve is a simpler and less laborious method. However, viral methods have limitations, such as toxicity, transgene size constraints, and infectivity restricted to certain developmental stages. Here, we describe a new method that allows selective transfection of myelinating SCs in the rodent sciatic nerve using electroporation. By applying electric pulses to the sciatic nerve at the site of plasmid DNA injection, genes of interest can be easily silenced or overexpressed in SCs in both neonatal and more mature animals. Furthermore, this in vivo electroporation method allows for highly efficient simultaneous expression of multiple transgenes. Our novel technique should enable researchers to efficiently manipulate SC gene expression, and facilitate studies on SC development and function.

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Here, we present an in vivo technique for gene transfer to Schwann cells (SCs) in the rodent sciatic nerve. This simple technique is useful for investigating signaling mechanisms involved in the development and maintenance of myelinating SCs.

Elektroporasyon tarafından Kemirgen Siyatik Sinir Schwann Hücreleri için Vivo Gen Transferi

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

Öğrenme ve Bellek Tedrisi Olan Drosophila Kurbanlığı İklimlendirme

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for the investigation of processes of neurodegeneration, neuroprotection and neuro-repair involving the visual system, as these often correlate well with retinal changes. As a functional readout, visually evoked compensatory eye and head movements are commonly used in experimental models involving the visual function. Combining both techniques allows a quantitative in vivo investigation of structure and function, which can be used to investigate the pathological conditions or to evaluate the potential of novel therapeutics. A great benefit of the presented techniques is the possibility to perform longitudinal analyses allowing the investigation of dynamic processes, reducing variability and cuts down the number of animals needed for the experiments. The protocol described aims to provide a manual for acquisition and analysis of high quality retinal scans of mice and rats using a low cost customized holder with an option to deliver inhalational anesthesia. Additionally, the proposed guide is intended as an instructional manual for researchers using optokinetic response (OKR) analysis in rodents, which can be adapted to their specific needs and interests.

A detailed protocol for the assessment of structural and visual readouts in rodents by optical coherence tomography and optokinetic response is presented. The results provide valuable insights for ophthalmologic as well as neurologic research.

Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% of the total stroke-related mortality with an important morbidity in terms of neurological outcome. A delayed cerebral vasospasm (CVS) may occur most often in association with a delayed cerebral ischemia. Different animal models of SAH are now being used including endovascular perforation and direct injection of blood into the cisterna magna or even the prechiasmatic cistern, each exhibiting distinct advantages and disadvantages. In this article, a standardized mouse model of SAH by double direct injection of determined volumes of autologous whole blood into the cisterna magna is presented. Briefly, mice were weighed and then anesthetized by isoflurane inhalation. Then, the animal was placed in a reclining position on a heated blanket maintaining a rectal temperature of 37 &#176;C and positioned in a stereotactic frame with a cervical bend of about 30&#176;. Once in place, the tip of an elongated glass micropipette filled with the homologous arterial blood taken from carotid artery of another mouse of the same age and gender (C57Bl/6J) was positioned at a right angle in contact with the atlanto-occipital membrane by means of a micromanipulator. Then 60 &#181;L of blood was injected in the cisterna magna followed by a 30&#176; downward tilt of the animal for 2 minutes. The second infusion of 30 &#181;L of blood into the cisterna magna was performed 24 h after the first one. The individual follow-up of each animal is carried out daily (careful evaluation of weight and well-being). This procedure allows a predictable and highly reproducible distribution of blood, likely accompanied by intracranial pressure elevation that can be mimicked by an equivalent injection of an artificial cerebral spinal fluid (CSF), and represents an acute to mild-model of SAH inducing low mortality.

We described in this protocol a standardized subarachnoid hemorrhage (SAH) mouse model by a double injection of autologous whole-blood into the cisterna magna. The high degree of standardization of the double-injection procedure represents a middle-to-acute model of SAH with relative safety regarding mortality.

Subaraknoid Kanama Modeli olarak Cisterna Magna içine Kan Çift Doğrudan Enjeksiyon

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...