Bu yöntemler nöroloji ve oftalmoloji alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir ve çeşitli kemirgen modellerinde çok çeşitli retinopatilerin ve retinal bulguların değerlendirilmesine yardımcı olabilir. Bu tekniklerin en büyük avantajı, noninvaziv boylamsal incelemelerin yapIlebilmektedir, değişkenliği azaltmak ve deneyler için gerekli hayvan sayısını azaltmak. Bu yöntemler, patolojik koşulları araştırmak veya yeni terapötiklerin potansiyel yararLarını değerlendirmek için kullanılabilecek yapı ve fonksiyonun kantitatif in vivo araştırılmasına olanak sağlar.
Ancak, özellikle kemirgen modellerde optik koherens tomografi teknolojisinin uygulanması, özellikle küçük göz boyutu nedeniyle, hala zorlu. Prosedürleri gösteren Michael Dietrich, bizim laboratuvardan bir doktora öğrencisi olacaktır. Kemirgen anestezi sonra, pupillary genişleme için her göz fenilefrin Tropicamide bir damla uygulayın.
Bir dakika sonra fazla göz damlası ıslak silin. Ve göz kurumasını önlemek ve bulanık bir kornea oluşturmak için gözleri metilselüloz bazlı oftalmik jel yağlayın. Sonra göze özel bir kontakt lens yerleştirmek için forceps kullanın.
Satın alma modunu başlatmak için kontrol paneli ekranının sağ köşesindeki Başlat düğmesine basın. Daha sonra, sol gözü niçin görüntüleyip, kemirgenin sol göz ampulünün kameraya dönük olduğundan emin olmak için tutucuyu yerleştirin. Filtre düzeyini R olarak ayarlayın ve yazılımda mavi yansımalar fundus görüntüleme ve B-taraması edinimi için BR ve OCT'yi seçin.
Ardından, kameranın arka tarafındaki odak tonuzunu kullanarak odak mesafesini yaklaşık 38 diyoptriye ayarlayın. Ve okt taraması ekranda görünene kadar retinayı yakınlaştırın. Daha sonra tüm düzlemlerde retinanın ortogonal açısı ile, öğrencinin ortasından bir ışın yolu sağlamak için, ışıklı alanın ortasında optik disk konumlandırın.
Ve tutucuyu döndürerek yatay ve dikey b-taramalarını yatay bir seviyeye ayarlayın. Yazılım ekranında ses tarama modunu seçin ve 50 otomatik gerçek zamanlı izleme yüksek çözünürlük modunda 25 B-taramaları ayarlayın. Optik diskteki ses tonu ızgarasının ortasını ortalayın ve siyah hassasiyet düğmesine basarak satın almaya başlayın ve ardından kontrol panelinde edinin.
Edinme tamamlandıktan sonra, filtre düzeyini kontrol panelindeki A.Select Blue Autofluorescence olarak ayarlayın. Ve duyarlılık tonlasıyla görüntü parlaklığını ayarlayın. Duyarlılık tonuna basın ve ardından floresan hücreleri veya otofloresan mevduatları görüntülemek için edinin.
Birim taramalarının analizi için, taramaüzerine sağ tıklayarak OCT cihazının yazılımının otomatik bölümlemesi kullanılır. Ve Segmentasyon, sonra Tüm Katmanlar seçin. İstenilen tarama çift tıklayarak katmanların manuel düzeltme gerçekleştirin.
Kalınlık Profilini seçin. Ve Katman Bölümlerini Edit'e tıklayın. Her seferinde bir katman seçin.
Ve gerekirse sürükleyerek ve doğru konuma bırakarak kırmızı nokta hareket ettirerek yeşil çizgi düzeltin. Ardından sekme Kalınlık Haritası'nı seçin. 1, 2, 3 milimetrelik ETDRS ızgarasını seçin.
Optik diskteki iç daireyi ortala. Son olarak, farklı retinal sektörler için yazılım tarafından sağlanan kalınlık değerlerinden retina katmanlarının kalınlığını hesaplayın. Birim taramalarından ana kalınlık değerlerini hesaplamak için, optik diski içeren iç bir milimetrelik daire hariç, yaklaşık 25 derecelik bir açıyı kaplayan 1, 2, 3, milimetrelik ETDRS ızgarasının tamamını kullanın.
Kemirgenleri ölçmek için bir platform seçerek başlayın. Yazılımı çift tıklatarak Ayarlar penceresini açın. Yeni Grup'u seçin ve grup adını, konu sayısını, türünü ve suşlarını seçin.
Açılan menüden değişken bir uyarıcı, spatiotemporal frekans, kontrast hassasiyeti, hız veya oryantasyon seçin ve Yeni Grup Oluştur'a basın. Odanın üstündeki kameranın odak halkasını manipüle ederek platforma odaklanın. Ve platformdaki siyah dairenin etrafındaki kırmızı daireyi hizalayarak sistemi kalibre edin.
Daha sonra, platformüzerine kemirgen yerleştirin ve yaklaşık beş dakika boyunca çevreye uyum sağlar. Daha sonra hayvan takip ediyorsa veya takip etmiyorsa, evet için sol oku veya hayır için kareyi seçerek ölçümü başlatın. Değişken uyarıcının yanındaki Yukarı ve Aşağı Oklara tıklayarak uyarıcının adım boyutunu el ile seçin.
Son olarak, Özet sekmesini seçin ve istenen veri kümesini dışa aktarmak için Dosya, Dışa Aktarma Tablosu veya Grafik'e tıklayın. Sonuçlar, iç retina tabakalarının dejenerasyonunun azaldığını göstermektedir. Ve klinik AAE skoru Madde 1 uygulandığında EAE kursu sırasında zayıflatılır.
Ayrıca, OKR 120 günlük bir süre içinde mekansal frekans eşik testi ile ölçülen işlenmemiş MOG EAE fareler ile karşılaştırıldığında madde 1 ile tedavi hayvanların geliştirilmiş bir görme keskinliği ortaya koymaktadır. OCT ölçümleri yaparken, kritik bir adım, kalınlık değerlerinin kalitesini ve tekrarlanabilirliğini sağlamak için retinaile ilgili tüm düzlemlerde lazer ışınının ortogonal yönüdür. OKR tekniği için, hayvanın izleme ve normal davranış hareketleri arasında ayrım, araştırmacı bazı eğitim gerektirir.
Deney grubu için kör olmak önemlidir. Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit bağlamında meydana gelen yapısal ve fonksiyonel hasar bu araştırmalar sonrasında, prosedür de retinopati modelleri de dahil olmak üzere ancak retinopati modelleri ile sınırlı olmamak üzere görme sistemi içeren diğer modellerde yararlı olabilir, veya optik sinir hasarı. Bu teknikler nöroloji ve oftalmoloji alanlarında in vivo araştırmanın önünü açmakta ve klinik çalışmalara kolayca aktarılabilmekte.
