Chris Kassotis ve bu yazının eleştiri Audrey Bailey ve Dr. Scott Korte, Joseph Beeman, Alison Curfman, Paul Kimball, Bridget Neibreggue, Jacob Redel, Amy Schroder Maija Steinberg, ve Stacey Winkeler optimizasyonu onların yardım için özel bir teşekkür Laboratuvarımızda bu modelin. Finansman Klinik Biodetectives Eğitim Grant (NIH T90) (KEP), Missouri Yaşam Bilimleri Üniversitesi Lisans Araştırma Olanakları Programı, MU Araştırma Konseyi, MU Araştırma Kurulu hibe ve NIH R21HD056441 (SCN) tarafından sağlandı.

1. Canlı hayvan cerrahisi için Planlama <ol><li> Laboratuvar hayvanları ile çalışmak için uygun onayı alındıktan emin olun. </li><li> Sipariş fareler ve yeni bir çevre aklimasyonundan en az bir hafta izin. </li><li> Erkek feromonlar maruz kalma yokluğunda ev sahipliği Dişi fareler bisiklet durdurmak, bir fenomen Whitten etkisi 15,16 olarak anılacaktır. Fareler bisiklet transferi idrarda batırılmış erkek yataklar, her beş günde bir kadın kafes tutmak için. Alternatif olarak, üstü açık kafesler kullanılması halinde, iki erkek kafesleri arasında kadın düzenli olarak bisiklet tutmak için dişi kafes yerleştirin. </li><li> Bu farelerin (Tablo 1) ameliyat öncesinde en az bir hafta için günlük vajinal sitoloji analiz ederek 17 bisiklet vardır emin olun. <ol><li> Böylece birden fazla farelerden alınan vajinal smear toplanan bir cam slayt sekiz bölüm oluşturmak için bir mum kalem kullanın. </li><li> Vajina bir damlalık kullanarak 0,2-0,25 mL serum fizyolojik veya distile su ile yıkayın. Be sdamlalık ile servikal stimülasyon, sadece vajinal orifis damlalık ure yere pseudopregnancy neden olabilir. Hücre tiplerinin analizi için cam slayt vajinal lavaj yerleştirin. Slaytlar taze okuma (ıslak) veya alternatif olarak sabit bir dizi yöntem ve standart bir ışık mikroskobu 17 kullanılarak tespit edilebilir. </li></ol></li><li> Başarılı bir aseptik cerrahi için gerekli tüm cerrahi ekipman (bkz: Malzeme Bölüm) 18 temiz ve sterilize toplayın . </li><li> PBS içinde analjezi 0.2 mg / kg son doz sunmak için steril tekniği kullanarak buprenorfin çözüm hazırlayın. Buprenorfin çözüm konsantrasyonu 0,0333 mg / ml ortalama yetişkin C57BL / 6 fare, yaklaşık 0.025 kg ve fare başına 0.15 ml subkutan enjeksiyon hacmi ağırlığında olduğunu varsayarak olmalıdır. Buprenorfin vaktinden önce hazırlanmış ve alikot olarak saklanabilir. Buprenorfin DEA lisans ve detaylı envanter günlük gerektiren bir zamanlama III kontrollü bir madde olduğunu unutmayın. </li><li> Penisilin (100 U / ml) ve streptomisin (100 mg / ml) ile steril PBS hazırlayın. </li><li> Indüksiyon 15 kadın kafeslerde 72 saat önce idrar batırılmış erkek yataklar aktararak östrus döngülerini senkronize edin. </li></ol> 2. Cerrahi alanda canlı hayvan ameliyatı için hazırlayın <ol><li> Cerrahi alanda daha önce 18 açıklandığı gibi hazırlayın. </li><li> Elektrik kesme makineleri, oftalmik merhem ve cerrahi scrubs ortaya koyan hazırlık alanı hazırlayın. </li><li> Cerrahi alanında ameliyat boyunca vücut ısısını korumak için cerrahi alanında bir devir daim sıcak su ısıtma pedi koyarak hazırlayın. Devir daim sıcak su ısıtma pedi üzerinde steril su geçirmez bir yastık yerleştirin. Cerrahi aletler, dikiş, steril cam petri kabı, biyopsi yumruk, steril gazlı bez, yara klipleri ve yara klip aplikatörü steril cerrahi alanında düzenleyin. </li><li> Devir daim sıcak su ısıtma pedleri yarım und koyarak kurtarma alanında hazırlayıner istenirse fareler ısı uzaklaşmaya izin vermek için boş bir kafes. </li></ol> 3. Anestezi ve cerrahi için fare hazırlamak <ol><li> Farenin ağırlığını kaydedin ve vajinal sitoloji değerlendirerek östrus evresini belirlemek. </li><li> Anestezi indüksiyonu için, boş bir anestezi odası (izofluran için portal içeren katı kapaklı boş kafes) fare yerleştirin. Izofluran olmayan solunmasına anestezi sistemi açın ve izofluran% 4 (0.5 ila 1 L / dk oksijen debisi) buharlaştırıcı. </li><li> Fare hazırlık masaya koni izofluran bir koni akışı (30-60 ml şırınga kılıf) ve yerde farenin burun ve ağız geçiş anestezi altında olduğunda. Yeterli anestezi, cerrahi (~% 2.5-3.5 izofluran) geri kalanı boyunca izofluran daha düşük bir konsantrasyon ile korunabilir. Yeterli anestezi derinliği ayak tutam uyarana karşı olumsuz bir tepki ile tespit edilmelidir. </li><li> T oftalmik merhem uygulayıno Ameliyat sırasında gözleri kurutulması kaçının. </li><li> Küçük elektrik kesme makineleri kullanarak, cerrahi sitesi tıraş. </li><li> Dezenfekte ve klorheksidin fırçalayın üç alternatif bira ve% 70 etanol ile cerrahi sitesi hazırlamak. </li><li> Örtü steril bir alan ile hayvan. </li></ol> 4. Rahim ligasyonu <ol><li> 1.0 cm vajinal açılış için rostral kullanarak küçük bir makas veya 0.5 biten bir neşter bıçak ya da küçük bir (~ 1 cm) orta hat kesi olun. </li><li> Kapalı makas bıçakları vücut duvarı ve karın duvarı arasında olduğu gibi ağzına yerleştirin. Yavaşça kesi etrafındaki alanı yavaş yavaş karın duvarı cilt yeterince kopuk olduğu gibi makas açılış ve kapanış teşrih künt. Kesi site çevresinde karın duvarı ve cilt arasında kalan görünür yapışıklıklar dikkatle snipped olabilir. Kesi yeterince disseke künt takdirde, karın duvarı daha zor kapanış yapacaktır. </li><li> Küçük forceps, yavaşça sol uterin horn bulun. Rahim, bağırsak, dorsal, ilk kesi sitesine girdikten sonra ne göreceğiz. Bazı durumlarda ilk yumurtalık ve ilişkili over yağ yastığı bulmak için en kolay yoldur. Uterin horn hafifçe yukarı çekin ve bir retraktörü olarak hizmet vermeye altında açık bir forseps slayt. İsterseniz, yumurtalıklar ve rahim östrus indüksiyon aşamasında (Tablo 1) ile ilgili ek bilgi için şu anda görünümünü dikkat edin. </li><li> 5-0 siyah örgü ipek sütür 6-8 cm&#39;lik iki adet (bir iğne olmadan) gergin uterin horn altında yavaşça kaydırın. </li><li> Güvenli utero-tubual kavşağı (fallop tüpüne sadece kaudal) ve kare bir düğüm, her yerde kullanarak utero-servikal bileşke (serviks sadece rostral) boynuz Arter. Şu an için sütür uçları bırakın. </li><li> Iki ligasyonu arasında uterin horn bölümü kesip ve steril bir cam petri kabı conta doku~ 100 mcL PBS içeren penisilin (100 U / ml) ve streptomisin (100 mg / ml) ining. Ipek sütür son uçlarını kesin. Sütür gevşek ya da kanama olduğunda gelirse, güdük ve başka bir düğüm. </li></ol> 5. Endometriotik implantlar eksize rahim hazırlayın <ol><li> Eksize rahim manipüle edilirken, steril gazlı bez ile karın kapağı ve steril PBS içeren penisilin ve streptomisin gerektiği gibi hidrasyon korumak. </li><li> Yağ eksize uterin horn soyun. </li><li> İsterseniz, eksize uterin horn tartın. </li><li> Forseps ile boynuz tutarak lümen içine küçük makas bıçak (14 mm bıçak uzunluğu) ekleme ve uterin boynuz yavaşça aşağı makas sürgülü uterin horn açın. </li><li> Cam Petri kabı, üç eşit büyüklükteki implantlar kesip 2 mm biyopsi yumruk kullanın. </li></ol> 6. Periton boşluğuna endometriotik implantlar sütür <ol><li> Yeri sterilhemen yukarıdaki e kesi yeri ve steril PBS içeren penisilin ve streptomisin ile iyice ıslak gazlı bez. </li><li> Ile küçük, yumuşak forseps yavaşça çekum bulmak ve ince bağırsakta boyunca rostrally hareket. Bağırsak mezenter arter kaskad açıkça görülebilecek şekilde çekum en az iki arter ve önceden ıslatılmış gazlı bez üzerine bir fan gibi düzenleyebilirsiniz bağırsağın bir küçük (4-5 cm) bölümünde dışarı çekin. Steril serum fizyolojik ile bağırsak nemli tutmak için her zaman emin olun. Not: bağırsak işleme sırasında sıçan dişli forseps kullanmayın. </li><li> Bağırsak yaklaşık 0.5 cm&#39;lik bir arterin hafifçe bir implant sütür kesici iğne tersine, P-1, 11 mm, 3 / 8 daire, 6-0 siyah ethilon sütür kullanın. </li><li> Not: bağırsak mezenter periton ince bir tabaka ile kaplıdır. Arter etrafında dikilmesi ise bu katman aracılığıyla temiz bir geçiş yapmak için dikkatli olun. Periton veya rüptürü gözyaşı olarak değil yavaş ve dikkatli bir şekilde dikiş çekinarter. </li><li> Böylece kan akışı ve bağırsak ve ölüm sonraki nekroz kaybına neden olabilir gibi bir tam iki knot, dikiş çok sert sıkmak için değil dikkatli olmak, her atmak. Implant 2 mm içinde dikiş kesin. Islak bağırsak sonraki implant geçmeden önce hidrasyon korumak için tekrar devam edin. </li><li> Rostral yönde taşıma, bağırsak önümüzdeki 3-4 cm çekin ve yavaşça zaten bir implant içeren bölümün değiştirin. Önceki implant sitesinden bir veya iki arter geç ve sonraki implant sütür. Üçüncü implant için tekrarlayın. </li><li> Bağırsak karın boşluğuna değiştirin. </li></ol> 7. Şam ameliyatları <ol><li> Şam ameliyatlar dışında hiçbir doku bağırsak mezentere sütüre olduğunu endometriozis ameliyatları aynı adımları kullanarak yapılmaktadır. </li><li> Vergi 4. adımda sol uterin boynuz. </li><li> Sham Endometriyotik implantlar (adım 5) hazır değildir.istenirse eksize uterin horn atılır ya da başka amaçlar için kullanılabilir. </li><li> Dikişler, ama herhangi bir doku, 6. adımda barsak mezenter arter kaskad üç arterlerin etrafında yerleştirilmiştir. </li></ol> 8. Kapanış cerrahi yara <ol><li> Tüm organların anatomik pozisyonda yaklaşık arka emin olun. </li><li> 5-0 kaplı olmayan bir kilitleme sürekli dikiş Vicryl dikiş, karın duvarı kapatmak için kullanın. </li><li> 9 mm yara klipleri cilt kapatmak için kullanın. </li></ol> 9 - Hayvan kurtarma <ol><li> 0.2 mg / kg doz subkütan enjeksiyon yoluyla, 0,15 ml/25 g fare, 0,33 mg / ml buprenorfin yönetin. Buprenorfin ameliyat sonrası iyileşme sürecini uzatabilir kardiyovasküler / solunum depresyonu önlemek için uygulanır. </li><li> Fare, ameliyat sırasında ıslak kazanılmış varsa Kimwipes ya da kağıt havlu ile hafifçe kurulayın. </li><li> Kafes p aşağı gelecek şekilde yerleştirin hayvan ventral taraftaKısmen hayvan kurtarıldı ve sternal yatma (anestezi hızla kapalı giyer uçucu olarak beş dakika içinde) kazanmış kadar devir daim sıcak su yastığı tepesinde. </li></ol> 10. Post-operatif bakım <ol><li> Sternal yatma, sonra saatlik cerrahi sonrası normal bir davranış geri kazanana kadar korumak için mümkün olana kadar her 15 dakikada bir Fare dikkat edilmelidir. </li><li> Fare ameliyat 24 saat içinde normal görünmelidir. Fare kurtarma ve sağlık işaretleri için yedi ila on gün boyunca günlük olarak takip edilmelidir. <ol><li> , Bir hayvan, kötü sağlık, ağrı veya sıkıntı olduğunu endikasyonları, azalmış aktivite, kendini yaralama, ungroomed görünüm, ya da hunched duruş içerir. </li><li> 24 saat içinde cerrahi bir hayvan sağlık durumunun iyi görünmüyorsa, buprenorfin (0.2 mg / kg) yönetmek veya hayvan euthanize. Hayvan, ek buprenorfin yönetiminin hayvanın omuz 8 saat içinde düzelmezsebağırsak nekrozu olasılıkla d ötenazi. </li></ol></li><li> Indüksiyon sonrası 7-10 gün yara klipleri çıkarın. </li><li> Vajinal sitoloji muayene ile östrus döngüselliğin deney süresi boyunca izlemeye devam edin. 72 saat önce toplama adım 1.3 &#39;de anlatıldığı gibi dişi kafesleri idrar batırılmış erkek yataklar aktararak östrüs döngüleri senkronize edin. </li></ol> 11. Otopsi ve doku eksizyonu <ol><li> Nekropsi zamanlaması belirli bir araştırma sorusu bağlıdır ve daha temsili sonuçlar ve tartışma olarak ele alınmıştır. </li><li> Karbondioksit boğulma fare Euthanize. </li><li> (Istenirse) 1 cc şırınga, 23 gauge iğne kullanılarak kalp ponksiyonu ile kan toplayın. </li><li> Toplama 17 kez östrus evresini belirlemek için yukarıda açıklandığı gibi bir vajinal sitoloji yayma toplayın. </li><li> Utero-tubal kavşakta kalan uterin horn kesin ve serviks, yağ çıkarmak tartmak ve süreçİstenen (11.14 ve 11.15 &#39;e bakınız). </li><li> Endometriotik lezyonların etrafında siyah dikişlerle bulun. Fotoğraf bozulmamış endometriotik lezyonlar eğer istenilen. </li><li> Dikkatlice namlusu lezyonlar için dikkatli olmak, küçük bir makas ve forseps ile endometriotik lezyonları çevreleyen yapışıklıklar teşrih. RNA bozulmasını önlemek için hızlı ve dikkatli bir şekilde çalışın. </li><li> Ölçü ve kaliperler kullanarak endometriotik lezyonların uzunluk ve genişlik kaydetmek. </li><li> Vergi PBS ile ıslatılmış kağıt havlu üzerine endometriotik lezyonlar ve yer. Lezyonlar endometriotik olmayan herhangi bir doku çıkarın. Bir kesme mikroskop ya da büyüteç standı diseksiyonu yardımcı olmak için kullanılabilir. </li><li> Üç sıvı dolu endometriotik lezyonlar dikiş çıkarmadan önce tartılır. </li><li> Endometriotik lezyonlar dikiş yavaşça çıkarın. </li><li> Histoloji için, formalin düzeltme sıvısı, üç otuz dakika PBS yıkar ve nihai depolama takip iki saat için endometriotik bir lezyon dolu In% 70 etanol. Dehydrate ve parafin gömün. </li><li> Endometriotik lezyonların Lance iki. Yine bu tartılır. Siklik hormonal değişiklikler, kist sıvısı miktarını değiştirebilir, bu kistin ağırlığı artı 11.10 olarak ölçülen sıvı yanı sıra, doku ıslak ağırlık bir ölçü verir. </li><li> RNA izolasyonu ve gen ekspresyon çalışmaları için, hemen -80 lizis bağlayıcı çözüm ve mağaza fırlattı endometriotik lezyonlar (ya da ~ 20 mg rahim dokusu) ° C RNAqueous kiti (Ambion) ya da diğer bir yöntem ile gelecekteki RNA izolasyonu için homojenize İstenen. </li><li> , RNA, DNA veya protein gelecek izolasyonu için, hemen ikinci fırlattı endometriotik lezyon snap-dondurma (veya ~ 20 mg rahim dokusu) -80 ° C sıvı nitrojen ve mağaza </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar Fare modelinde, cerrahi olarak uyarılan endometriozis Endometriyotik lezyonlarının gözlenen morfolojik ve histolojik olarak çok benzemektedirkadınlar. Kadın ve fare modelinde hem de endometriozis histolojik analiz endometriotik lezyonlar endometrial bezler ve stroma (Şekil 2A) içerdiğini gösterir. Farelerde Endometriyotik lezyonlar aynı zamanda kadınlarda endometriozis ortak bir hallmark (Şekil 2B) 19 hemosiderin yüklü makrofajlar, içerir . Fareler kaldırılır Endometriyotik lezyonlar üç gün sonrası indüksiyon iltihaplı ve hemorajik (Şekil 3A) görünür. Fare modelinde büyüme endometriotik lezyonların 2-4 hafta sonra kist gibi peritoneal yapışıklıklar, sıvı dolu ve çevrilidir (Şekil 3B ve 3C). Indüksiyon lezyon ağırlığı ile karşılaştırıldığında, sıvı dolu lezyonlar 306% 862% daha büyük ve iki ay sonrası indüksiyon ve fırlattı lezyonlar sırasıyla% 51 ve% 172 daha büyük, (Şekil 4A ve 4B) ve. Biz beş farklı deneylerde (Şekil 5) üzerinden bir ay sonrası indüksiyon dolu ve tutarlı bir sıvı fırlattı endometriotik lezyon ağırlıkları elde edilmiştir. Bir ay sonrası,duction sıvı dolu (7.44 ± 3.75 mg) ve fırlattı (2.92 ± 1.23 mg) endometriotik lezyon ağırlığı önemli ölçüde korele idi (Pearson korelasyon katsayısı = 0,669, p &lt;0,001) . Fare Yaş, üç yaş ve on ay arasında fareler için lezyon büyüklüğü etkilemedi. Ne bir ay dolu ya da endometriotik lezyonun ağırlık fırlattı sıvı-indüksiyon sonrası önemli ölçüde hayvanın yaşı ile korelasyon (r = -0,136, p = 0.380 ve r = -0,063, p = 0.698, sırasıyla ). Fare rahim östrus döngüsü sırasında steroid hormonlarının etkisi nedeniyle boyutu değişir, sıvı retansiyonu, hücre çoğalması ve görünüm uğrar. Biz farklı östrus evrelerinde hayvanlardan elde kalan sağlam uterin horn ağırlığı endometriotik lezyon ağırlığı karşılaştırıldı. Biz uterus ağırlığı ve sıvı dolu veya fırlattı endometriotik l arasında anlamlı bir korelasyon bulamadıkbir aylık Mesaj indüksiyon (sırasıyla r = -0,046, p = 0.765 ve r = 0.232, p = 0.155) esion ağırlık. , Farelerin endometriotik lezyonlar gözlenen gen ekspresyonu desen yakından 5 hastalık kadınlarda bildirilen aynalar . Üç gün-indüksiyon sonrası ekstrasellüler matriks remodeling, hücre adezyon ve anjiyogenez düzenleyen genler yüksek upregüle ve büyüme bir ay boyunca bu genlerin çoğu upregüle kalır. Şekiller ve Tablolar <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3396/3396fig1.jpg" /> Şekil 1. fare otolog rahim dokusu transferi ile endometriozis cerrahi indüksiyon. Sol uterin boynuz, bağlandı eksize ve endometrium maruz boyuna açtı. Üç 2 mm 2 biyopsileri bağırsak mesente arteriyel kaskad hazırlanır ve her bir arter sütürery. By-indüksiyon sonrası bir ay endometriotik lezyonlar sıvı dolu ve yapışıklıklar ile çevrilidir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3396/3396fig2.jpg" /> Şekil 2, bir ay sonrası indüksiyon endometriozis fare modelinde bir endometrial lezyon Hematoksilen ve eosin ile boyanan bölümünde gösteren (A) endometriyal bezler ve varlığı stromada; ölçek çubuğu = 50 mm ve (B) hemosiderin yüklü makrofajlar , bazıları oklarla gösterilen; ölçekli bar = 20 mikron. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3396/3396fig3.jpg" /> Şekil 3 ötenazi aşağıdaki fare modeli Endometriyotik lezyonlar, ya üç gün-indüksiyon sonrası (A) veya bir ay sonrası indüksiyon (B ve C). <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3396/3396fig4.jpg" /> Şekil 4 Endometriyotik lezyonlar cerrahi tr ikna farelerdedometriosis bir ya da iki ay sonrası indüksiyon eksize ve tartıldı. Veriler ortalama ± SEM. Veri dönüştürülmüş giriş ve farklı harf, tek taraflı Fisher En Önemli Fark mulitple Karşılaştırmalar takip tek yönlü ANOVA her panelin içinde önemi gösterir. (A), sıvı dolu endometriotik lezyonlar, Kist (N = indüksiyon, bir ay, iki ay sonrası indüksiyon, sırasıyla 10, 7 veya 5). (B) fırlattı endometriotik lezyonlar (n = indüksiyon, bir ay veya iki ay-indüksiyon sonrası sırasıyla 10, 8 ya da 7). <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/3396/3396fig5.jpg" /> Şekil 5 Endometriyotik lezyon ıslak ağırlık ve sıvı ile bir ay beş ayrı deney sonrası indüksiyon fırlattı. Veriler ortalama ± SEM. Fareler N = 10, 6, 8, 7 ve sıvı dolu lezyonlar ve 0, 7 için 7, 10, 8 ve fırlattı lezyonlar için sırasıyla deney 1, 2, 3, 4, 5, 8. <img alt="Tablo 1" src = &quot;/ files/ftp_upload/3396/3396table1.jpg&quot; /&gt; Tablo 1. Yumurtalıklar ve Rahim ve İndüksiyon Vajinal Sitoloji ve Görsel Görünüm östrus Sahne Gözlem. Yumurtalık ve rahim Görünüm zamana bağlı olacak. Aşağıdaki her bir döngüsü gün sabah saat 08:00 civarında kurban dayanmaktadır. Dahası, gözlemler subjektif ve yumurtalık ve rahim boynuzları karşılaştırırken sadece rahim boynuzları daha iyi bir tahmin olacaktır. Bu gözlemler, günlük vajinal sitoloji okumalarından elde edilen bilgilere ek içindir. <img alt="Tablo 2" src="/files/ftp_upload/3396/3396table2.jpg" /> Tablo 2. Fare ve sıçan cerrahinin karşılaştırılması.

<ol>
	<li>Simoens, S., Hummelshoj, L., D'Hooghe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis:+cost+estimates+and+methodological+perspective.">Endometriosis: cost estimates and methodological perspective.</a> Hum. Reprod. Update. 13, 395-404 (2007).</li><li>Grummer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+endometriosis+research.">Animal models in endometriosis research.</a> Hum. Reprod. Update. 12, 641-649 (2006).</li><li>Vernon, M. W., Wilson, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+surgical+induction+of+endometriosis+in+the+rat.">Studies on the surgical induction of endometriosis in the rat.</a> Fertil. Steril. 44, 684-694 (1985).</li><li>Cummings, A. M., Metcalf, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+endometriosis+in+mice:+a+new+model+sensitive+to+estrogen.">Induction of endometriosis in mice: a new model sensitive to estrogen.</a> Reprod. Toxicol. 9, 233-238 (1995).</li><li>Pelch, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+gene+expression+profile+in+a+mouse+model+of+endometriosis+mirrors+that+observed+in+women.">Aberrant gene expression profile in a mouse model of endometriosis mirrors that observed in women.</a> Fertil. Steril. 93, 1615-1627 (2010).</li><li>Flores, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+profiling+of+experimental+endometriosis+identified+gene+expression+patterns+in+common+with+human+disease.">Molecular profiling of experimental endometriosis identified gene expression patterns in common with human disease.</a> Fertil. Steril. 87, 1180-1199 (2007).</li><li>Giudice, L. C., Kao, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Lancet. 364, 1789-1799 (2004).</li><li>Lin, Y. J., Lai, L. e. i., Y, H., Wing, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils+and+macrophages+promote+angiogenesis+in+the+early+stage+of+endometriosis+in+a+mouse+model.">Neutrophils and macrophages promote angiogenesis in the early stage of endometriosis in a mouse model.</a> Endocrinology. 147, 1278-1286 (2006).</li><li>Fang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intact+progesterone+receptors+are+essential+to+counteract+the+proliferative+effect+of+estradiol+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+endometriosis.">Intact progesterone receptors are essential to counteract the proliferative effect of estradiol in a genetically engineered mouse model of endometriosis.</a> Fertil. Steril. 82, 673-678 (2004).</li><li>Fang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+or+enzymatic+disruption+of+aromatase+inhibits+the+growth+of+ectopic+uterine+tissue.">Genetic or enzymatic disruption of aromatase inhibits the growth of ectopic uterine tissue.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 87, 3460-3466 (2002).</li><li>Cummings, A. M., Metcalf, J. L., Birnbaum, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+endometriosis+by+2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin+in+rats+and+mice:+time-dose+dependence+and+species+comparison.">Promotion of endometriosis by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in rats and mice: time-dose dependence and species comparison.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 138, 131-139 (1996).</li><li>Foster, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+characteristics+of+endometriosis+in+the+mouse+model:+application+to+toxicology.">Morphologic characteristics of endometriosis in the mouse model: application to toxicology.</a> Can. J. Physiol. Pharmacol. 75, 1188-1196 (1997).</li><li>Cummings, A. M., Metcalf, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+surgically+induced+endometriosis+on+pregnancy+and+effect+of+pregnancy+and+lactation+on+endometriosis+in+mice.">Effect of surgically induced endometriosis on pregnancy and effect of pregnancy and lactation on endometriosis in mice.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 212, 332-337 (1996).</li><li>Lu, Y., Nie, J., Liu, X., Zheng, Y., Guo, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trichostatin+A,+a+histone+deacetylase+inhibitor,+reduces+lesion+growth+and+hyperalgesia+in+experimentally+induced+endometriosis+in+mice.">Trichostatin A, a histone deacetylase inhibitor, reduces lesion growth and hyperalgesia in experimentally induced endometriosis in mice.</a> Hum. Reprod. 25, 1014-1025 (2010).</li><li>Whitten, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+the+oestrous+cycle+of+the+mouse+by+external+stimuli+associated+with+the+male.">Modification of the oestrous cycle of the mouse by external stimuli associated with the male.</a> J. Endocrinol. 13, 399-404 (1956).</li><li>Whitten, W. K., Bronson, F. H., Greenstein, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrus-inducing+pheromone+of+male+mice:+transport+by+movement+of+air.">Estrus-inducing pheromone of male mice: transport by movement of air.</a> Science. 161, 584-585 (1968).</li><li>Goldman, J. M., Murr, A. S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rodent+estrous+cycle:+characterization+of+vaginal+cytology+and+its+utility+in+toxicological+studies.">The rodent estrous cycle: characterization of vaginal cytology and its utility in toxicological studies.</a> Birth. Defects. Res. B. Dev. Reprod. Toxicol. 80, 84-97 (2007).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon.">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586-e2586 (2011).</li><li>Moen, M. H., Halvorsen, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histologic+confirmation+of+endometriosis+in+different+peritoneal+lesions.">Histologic confirmation of endometriosis in different peritoneal lesions.</a> Acta. Obstet. Gynecol. Scand. 71, 337-342 (1992).</li><li>Cummings, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methoxychlor+as+a+model+for+environmental+estrogens.">Methoxychlor as a model for environmental estrogens.</a> Crit. Rev. Toxicol. 27, 367-379 (1997).</li><li>Fowler, R. E., Edwards, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+superovulation+and+pregnancy+in+mature+mice+by+gonadotrophins.">Induction of superovulation and pregnancy in mature mice by gonadotrophins.</a> J. Endocrinol. 15, 374-384 (1957).</li><li>Wilson, E. D., Zarrow, M. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+superovulation+in+the+immature+mouse+and+rat.">Comparison of superovulation in the immature mouse and rat.</a> J. Reprod. Fertil. 3, 148-158 (1962).</li><li>Lee, B., Du, H., Taylor, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+murine+endometriosis+induces+DNA+methylation+and+altered+gene+expression+in+eutopic+endometrium.">Experimental murine endometriosis induces DNA methylation and altered gene expression in eutopic endometrium.</a> Biol. Reprod. 80, 79-85 (2009).</li><li>Somigliana, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+ability+to+implant+in+ectopic+sites+can+be+prevented+by+interleukin-12+in+a+murine+model+of+endometriosis.">Endometrial ability to implant in ectopic sites can be prevented by interleukin-12 in a murine model of endometriosis.</a> Hum. Reprod. 14, 2944-2950 (1999).</li><li>Hirata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+experimental+model+of+endometriosis+using+mice+that+ubiquitously+express+green+fluorescent+protein.">Development of an experimental model of endometriosis using mice that ubiquitously express green fluorescent protein.</a> Hum. Reprod. 20, 2092-2096 (2005).</li><li>Story, L., Kennedy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+studies+in+endometriosis:+a+review.">Animal studies in endometriosis: a review.</a> Ilar. J. 45, 132-138 (2004).</li><li>Cummings, A. M., Hedge, J. M., Birnbaum, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+prenatal+exposure+to+TCDD+on+the+promotion+of+endometriotic+lesion+growth+by+TCDD+in+adult+female+rats+and+mice.">Effect of prenatal exposure to TCDD on the promotion of endometriotic lesion growth by TCDD in adult female rats and mice.</a> Toxicol. Sci. 52, 45-49 (1999).</li><li>Cummings, A. M., Metcalf, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+estrogen,+progesterone,+and+methoxychlor+on+surgically+induced+endometriosis+in+rats.">Effects of estrogen, progesterone, and methoxychlor on surgically induced endometriosis in rats.</a> Fundam. Appl. Toxicol. 27, 287-290 (1995).</li><li>Sharpe-Timms, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriotic+lesions+synthesize+and+secrete+a+haptoglobin-like+protein.">Endometriotic lesions synthesize and secrete a haptoglobin-like protein.</a> Biol. Reprod. 58, 988-994 (1998).</li><li>Yavuz, E., Oktem, M., Esinler, I., Toru, S. A., Zeyneloglu, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genistein+causes+regression+of+endometriotic+implants+in+the+rat+model.">Genistein causes regression of endometriotic implants in the rat model.</a> Fertil. Steril. 88, 1129-1134 (2007).</li><li>Dmitrieva, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocannabinoid+involvement+in+endometriosis.">Endocannabinoid involvement in endometriosis.</a> Pain. 151, 703-710 (2010).</li><li>Efstathiou, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonsteroidal+antiinflammatory+drugs+differentially+suppress+endometriosis+in+a+murine+model.">Nonsteroidal antiinflammatory drugs differentially suppress endometriosis in a murine model.</a> Fertil. Steril. 83, 171-181 (2005).</li><li>Becker, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endostatin+inhibits+the+growth+of+endometriotic+lesions+but+does+not+affect+fertility.">Endostatin inhibits the growth of endometriotic lesions but does not affect fertility.</a> Fertil. Steril. 84, 1144-1155 (2005).</li><li>Becker, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+synthetic+endostatin+peptides+inhibit+endothelial+migration+in+vitro+and+endometriosis+in+a+mouse+model.">Short synthetic endostatin peptides inhibit endothelial migration in vitro and endometriosis in a mouse model.</a> Fertil. Steril. 85, 71-77 (2006).</li><li>Sharpe-Timms, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+rats+as+a+research+model+for+the+study+of+endometriosis.">Using rats as a research model for the study of endometriosis.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 955, 318-327 (2002).</li><li>Stilley, J. A., Woods-Marshall, R., Sutovsky, M., Sutovsky, P., Sharpe-Timms, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+Fecundity+in+Female+Rats+with+Surgically+Induced+Endometriosis+and+in+Their+Daughters:+A+Potential+Role+for+Tissue+Inhibitors+of+Metalloproteinase+1.">Reduced Fecundity in Female Rats with Surgically Induced Endometriosis and in Their Daughters: A Potential Role for Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1.</a> Biol. Reprod. 80, (2009).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Farelerde endometriozis cerrahi indüksiyon yaparken dikkat edilmelidir birçok kritik parametre vardır. İlk olarak, endometriozis östrojen bağımlı bir hastalıktır ve sağlam hayvanların veya alternatif östrojenler 20 ile desteklenmiş ovarektomize hayvanlar gibi bu cerrahi olarak yapılmalıdır. İkinci olarak, arteryel kaskad endometriyal biyopsiler dikilmesi çok dikkatli yapılmalıdır. Biz biriyle sadece iki nispeten gevşek knot kullanarak, bağırsak ve sonraki doku nekrozu ve hayvan ölümü kan dolaşımı ligasyonu önlerken her yerde biyopsi tutar atmak bulduk. Önemle dikişlerle yeterince güvenli olmadığını doku kaybına yerleştirilir sağlamak için gerçek deneme öncesinde birkaç fareler üzerinde pratik öneririz, ancak bağırsak nekroz neden olarak çok sıkı değil. Üçüncü olarak, s sırasında steril PBS içeren penisilin ve streptomisin ile bağırsak dokusu nemli tutmak için çok önemlidir.urgery. Dördüncüsü, çabaları endometriotik implant boyutunun tutarlı olmasını sağlamak için alınmalıdır. Bu amaçla biyopsi yumruk sürekli ölçekli endometriotik implantlar eksize rahim dokusu oluşturmak için 2 mm. Araştırmacı ve bilimsel sorular bireysel ihtiyaçlarını karşılamak için bu protokolü yapılabilir bazı değişiklikler vardır. Hayvanın hormonal profili için potansiyel bir değişiklik ilgilidir. Endometriotik lezyonlar Gen ve protein ekspresyonu, kalan sağlam uterin horn ve bağışıklık sistemi doğrudan östrus evresinde ilgili toplama zamanlaması etkilenebilir. Toplama zamanda östrus aşamada kontrol etmek için çeşitli yaklaşımlar, her biri kendine özgü avantajları ve dezavantajları vardır. Örneğin, bozulmamış, bisiklet hayvanlar indüksiyon veya tahsilat gibi hayvanların üç gün önce, dişi kafes içine idrar batırılmış erkek yataklar aktararak senkronize edilebilir cerrahi induCED ve aynı östrüs aşamada 15 sırasında toplanan. Sağlam bisiklet hayvanların kullanılması halinde, östrüs döngüselliğin vajinal sitoloji 17 muayene ile günlük olarak takip edilmelidir. Bu daha önemli fizyolojik olma avantajına sahiptir, ama ulaşmak döngüsü eşzamanlılık% 100 başarılı değildir. Alternatif olarak, sağlam hayvanlar eksojen gonadotropin yönetiminin 21,22 ile senkronize olabilir. Bu yöntem biraz daha doğru olsa da, normalden daha yüksek östrojen düzeyleri oluşturur. Diğer bir yaklaşım, hayvanların ovariectomize ve silastik kapsül, mini ozmotik pompa, ya da günlük enjeksiyonlar 4,8 ekzojen hormonlar yoluyla sabit bir seviyede geri vermek olmuştur . Bu yöntem birçok hayvan genelinde tek tip bir hormon profili elde etme avantajı vardır, ancak hayvanlar bisiklet değildir çünkü dezavantajlı. Etkileri, etkileri attributab karşı cerrahisi geçiren sonucu olan Şam ameliyatları değerlendirmek için yapılabilirendometriosis le. Sahte ameliyatlarda sol uterin horn kaldırılır ve sütür bağırsak mezenter arter kaskad arterler çevresinde yerleştirilen ancak hiçbir endometriotik implantlar 5,8,23 dikilir. Alternatif olarak, uterin boynuz eksize kaldırılır yağ barsak mezenter 3,14 sütüre edilebilir. Biz son zamanlarda sahte rahim ve cerrahi olarak endometriozis 5 ikna hayvanlardan elde sağlam kalan uterin horn arasında cDNA mikroarray ile ölçülen gen ekspresyonu olarak görece az sayıda farklılıklar olduğunu bildirdi. Ayrıca, yedi endometriozis ile ilgili genler için kantitatif gerçek zamanlı PCR kullanarak, biz sadece haptoglobin ifade uteri sahte ve endometriozis fareler arasında belirgin bir farklılık bulundu. Lee ve ark. Ancak, endometriozis sahte kontrolleri 23 indüklenen farelerden alınan rahim içinde beş genlerin diferansiyel ifade bildirdi. Bu önerir endometriotik lesio varlığıns eutopic rahim içinde değişmiş gen ekspresyonu neden olabilir. Cerrahi olarak endometriozis indüklenen farelerin toplama zamanlaması belirli bir araştırma sorusu ile tespit edilmelidir. Farelerin toplanması-indüksiyon sonrası üç gün, başlangıç ​​nötrofil ve machrophage infiltrasyonu ve sitokin üretimi gibi daha önce 8 bildirilmiştir de dahil olmak üzere, endometriozis kurulmasında kritik, erken olaylar değerlendirmenizi sağlar. Endometriotik lezyonlar-indüksiyon sonrası üç gün hemorraghic, küçük toplanan olduğunu göstermiştir ve kalan uterin boynuz 4 göre gen ekspresyonu önemli ölçüde değiştirmiştir . Iki hafta sonrası indüksiyon endometriotik lezyonlar iyi kurulmuş ve çoğu zaman kist benzeri yapılar oluşturmuşlardır. Fare, endometriotik lezyonlar sıvı dolu ağırlığı ile uzunluk, genişlik ve Kat yüksekliği tarafından belirlenen lezyon hacmi tarafından değerlendirilecek ve lezyonlar (Şekil 4) yanı sıra fırlattı, boyut artış devam ediyorht iki ay sonrası indüksiyon 9 ile ölçümleri. Yukarıda belirtildiği gibi, cerrahi olarak endometriozis modeli ilk sıçan geliştirilen ve hala yaygın olarak 3 kullanılır. Bu ameliyatı yaparken sıçan olarak Tablo 2&#39;de, protokol için aşağıdaki değişiklikler yapmak. Sıçan, kullanılan tüm sütür 4-0 boyutu ve daha sıkı bir şekilde bağlı olmalıdır. Ayrıca, periton boşluğuna bağırsak mezenter altı 5 mm 2 endometriotik implantlar dikin. Bu protokolde, izofluran, inhale anestetik kullanımını tanımlamak. Alternatif olarak, iyileşme süresi biraz daha uzun olmasına rağmen, kombine enjektabl anestezi, ketamin ve Domitor (medetomidine hidroklorür) ya da başka bir alfa-2 agonist kullanılabilir. 75 mg / kg intraperiotneal enjeksiyon uygulanan ketamin, özellikleri, bir rahatlatma minimal akut ağrı ile dissosiyatif anestetik bir ajandırnd DEA lisans ve ayrıntılı ilaç stok gerektiren bir zamanlama III ilaçtır. 1 mg / kg uygulanan Domitor, bir alfa-2 adrenerjik agonist ve kolayca Antisedan (atipamezole hidroklorür) yönetimi ile ters. Domitor kas gevşemesi ve ağrının sağlayan bir yatıştırıcı. Domitor ve ketamin steril tekniği kullanarak PBS kombinasyon önceden hazırlanmış olabilir. Antisedan Domitor için geri ajan, buprenorfin ile birlikte PBS içinde hazırlanan ve post-op 1 mg / kg uygulanmalıdır. Buprenorfin Programı III uyuşturucu ve alternatifler non-steroid anti-enflamatuar banamine (flunixin meglumin) ve Ketoprofen. Tüm modellerde kemirgenler endometriozis cerrahi indüksiyon ile ilgili bazı sınırlamalar vardır. En önemlisi kemirgenler bir adet döngüsü ve bu nedenle endometriozis kendiliğinden ortaya çıkmaz. Kemirgen mod yapmak için bir çabaEl bazı araştırmacılar 24,25 dikilmesi gerek kalmadan doğrudan periton boşluğuna syngenic hayvanlardan elde edilen otolog veya homolog, rahim dokusu parçaları enjekte seçen insanlarda durum daha fizyolojik benzer. Farelerde, enjekte edilen doku, kist benzeri endometriotik lezyonlar oluşturur ancak, indüksiyon enjeksiyon yöntemi sıçanlarda doku periton boşluğuna 3 takın ve işgal başarısız olarak çalışmak için görünmüyor . Kemirgen modeli etyoloji, patoloji, endometriozis 2,8,26-29 risk faktörlerinin yanı sıra yenilikçi tedavilerin 14,30-34 keşfetmek için yoğun bir çalışma olmuştur . Cerrahi olarak indüklenmiş endometriozis kemirgen modeli, düşük doğurganlık ve doğurganlığını ve değişmiş bir gen ve protein ifade 5,6,35,36 dahil olmak üzere, insanlarda hastalığa pek çok benzerlikler gösteriyor. Nispeten düşük maliyetler ve hazır durumu, cerrahi indu kemirgen modeli ile birlikte ele alındığındaCED endometriozis kadınlarda endometriozis için mükemmel bir model.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Wax kalem </td><td> Balıkçı </td><td> NC9954135 </td></tr><tr><td> Cam slayt </td><td> Balıkçı </td><td> 12-550-433 </td></tr><tr><td> Damlalık </td><td> Balıkçı </td><td> S79383 </td></tr><tr><td> Vajinal sitoloji smear değerlendirilmesi için standart ışık mikroskobu </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfin HCL c3 (CARJET) 10X1ml </td><td> Butler Hayvan Sağlık Kaynağı </td><td> 022891 </td></tr><tr><td> Steril fosfat tamponlu salin (PBS) </td><td> Gibco </td><td> 14040-117 </td></tr><tr><td> 10.000 U / ml penisilin,% 0.85 NaCl içinde 10.000 mg / ml Streptomisin </td><td> Hyclone </td><td> SV30010 </td></tr><tr><td> İsofluranın </td><td> AbbottHayvan Sağlığı </td><td> 05260-05 </td></tr><tr><td> İsofluranın olmayan solunmasına anestezi sistemi </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Devridaim sıcak su ısıtma pedi </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 30 ml şırınga kılıf </td><td> Balıkçı </td><td> 14-823-16G </td></tr><tr><td> Toz ücretsiz steril eldiven </td><td> Fisherbrand </td><td> 19020558 </td></tr><tr><td> Oftalmik merhem </td><td> Binbaşı İlaç </td><td> 10033691 </td></tr><tr><td> Küçük elektrik kesme makineleri </td><td> Wahl </td><td> 9861-600 </td></tr><tr><td> Klorheksidin fırçalayın </td><td> Balıkçı </td><td> NC9863042 </td></tr><tr><td> % 70 Etanol </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Polylined steril alan </td><td> Busse Hastanesi Tek </td><td> 696 </td></tr><tr><td> Boyut 3 neşter </td><td> Balıkçı </td><td> 22-079-657 </td></tr><tr><td> Number 10 bisturi ağızları </td><td> Balıkçı </td><td> 22-079-681 </td></tr><tr><td> Küçük cerrahi makas </td><td> Roboz </td><td> RS-5850 </td></tr><tr><td> Küçük tırtıklı yarı kavisli bir forseps </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 </td></tr><tr><td> 5-0 siyah örgü ipek sütür </td><td> Ethicon </td><td> K870H </td></tr><tr><td> Sterilize pyrex cam Petri kapları </td><td> Corning </td><td> 70160-101 </td></tr><tr><td> 2 mm punch biyopsi </td><td> Miltex </td><td> 33-31 </td></tr><tr><td> Steril gazlı bez </td><td> Kendall </td><td> 1806 </td></tr><tr><td> 6-0 siyah monofilament ethilon naylon sütür </td><td> Ethicon </td><td> 697G </td></tr><tr><td> İğne sürücüleri (isteğe bağlı) </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> 500023 </td></tr><tr><td> 5-0 boyasız örgülü kaplı vicryl sütür </td><td> Ethicon </td><td> J490G </td></tr><tr><td> 9mm AutoCLIP klipleri yara </td><td> Becton Dickinson </td><td> 427631 </td></tr><tr><td> AutoCLIP uygulayıcısı ve sökücü </td><td> Becton Dickinson </td><td> 427630 </td></tr><tr><td> 23G iğne </td><td> Becton Dickinson </td><td> 305193 </td></tr><tr><td> 1 cc şırınga </td><td> Becton Dickson </td><td> 301025 </td></tr><tr><td> 5X büyüteç standı (isteğe bağlı) </td><td> Balıkçı </td><td> 14-648-23 </td></tr><tr><td> % 10 formalin Tamponlu </td><td> Balıkçı </td><td> SF100-4 </td></tr><tr><td> Kumpaslar </td><td> Roboz </td><td> RS-6466 </td></tr><tr><td> İşleme / gömme kasetleri </td><td> Balıkçı </td><td> 15-197-700A </td></tr><tr><td> Biyopsi köpük pedler </td><td> Balıkçı </td><td> 22-038-222 </td></tr><tr><td> RNAqueous RNA izolasyon kiti </td><td>Ambion </td><td> AM1912 </td></tr><tr><td> Sıvı azot </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Snap kap mikrosantrifüj düz üst boru </td><td> Balıkçı </td><td> 02-681-240 </td></tr><tr><td> Ketamin (isteğe bağlı) </td><td> Simga </td><td> K4138 </td></tr><tr><td> Domitor (medetomidine hidroklorür) (isteğe bağlı) </td><td> Tocris </td><td> 2023 </td></tr><tr><td> Antisedan (atipamezole) (isteğe bağlı) </td><td> Sigma </td><td> A9611 </td></tr></tbody></table>

mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue

Endometriozis, etyolojisi bilinmemektedir, ağrılı, kronik bir hastalık. Ayrıca, tedavi endometriozis lezyonlarının laparoskopik çıkarılması ve / veya kronik ağrı ve kısırlık belirtileri, ilaç yönetimi gerektirebilir. Endometriozis ile ilişkili maliyet Amerika Birleşik Devletleri 1 yılda 22 milyar dolar olarak tahmin edilmiştir. Anlayışımız bu gizemli hastalığın altında yatan mekanizmaları daha için, hayvan modelleri istihdam edilmiştir. Primatlar kendiliğinden endometriozis geliştirmek ve bu nedenle primat modelleri en yakın kadınlarda hastalık benzer. Kemirgen modelleri Ancak, daha uygun maliyetli ve 2 hazır. Burada tarif modeli, rahim dokusunun (Şekil 1) bağırsak mezenter otolog transfer içerir ve ilk 3 sıçan geliştirilen ve daha sonra fare 4 transfer edildi . Amaç, cerrahi ile indüklenen endometriozis otolog kemirgen modeli taklit etmek.kadınlarda hastalık. Biz ve diğerleri daha önce değişmiş gen ekspresyonu desen fare ya da hastalığı 5,6 ile kadınlarda gözlenen sıçanlarda aynalar endometriotik lezyonlar gözlenen olduğunu göstermiştir . Fare ameliyat yerine bir avantajı mevcut transgenik fare suşlarının bolluğu endometriozis kurulması ve büyüme önemli rolü belirli bileşenleri belirleyen araştırmacılar yardımcı olabilir. Eksize insan endometrium parçaları immün sistemi baskılanmış farelerin periton tanıtıldı olduğu alternatif bir model de yaygın olarak kullanılan ancak 2,7 endometriozis önemli olduğu düşünülmektedir normal bir bağışıklık sistemi eksikliği ile sınırlıdır. Daha da önemlisi, cerrahi olarak uyarılan endometriozis fare modelinde, bağışıklık sistemi, 8, 9,10 ve çevresel faktörler 11,12 hormonların yanı sıra endometriozis etkileri Fert üzerinde endometriozis nasıl etkilediğini incelemek için kullanılan bir çok yönlü bir model.ility 13 ve ağrı 14.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue at JoVE.com

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Fare ve sıçanlarda barsak mezenter arter kaskad rahim dokusundaki otomatik nakli endometriozis cerrahi indüksiyon açıklaması.

Uterus Doku Otomatik nakli Cerrahi indüklenen Endometriozis Fare Modeli

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

mouse-model-surgically-induced-endometriosis-auto-transplantation

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

28.5K Görüntüleme.  University of Missouri. Fare ve sıçanlarda barsak mezenter arter kaskad rahim dokusundaki otomatik nakli endometriozis cerrahi indüksiyon açıklaması.

Video: Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

Stroke is the third cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic stroke accounts for approximately 80% of all strokes. However, the thrombolytic tissue plasminogen activator (tPA) is the only treatment of acute ischemic stroke that exists. This led researchers to develop several ischemic stroke models in a variety of species. Two major types of rodent models have been developed: models of global cerebral ischemia or focal cerebral ischemia. To mimic ischemic stroke in patients, in whom approximately 80% thrombotic or embolic strokes occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), the intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is quite relevant for stroke studies. This model was first developed in rats by Koizumi et al. in 1986 1. Because of the ease of genetic manipulation in mice, these models have also been developed in this species 2-3.
	Herein, we present the transient MCA occlusion procedure in C57/Bl6 mice. Previous studies have reported that physical properties of the occluder such as tip diameter, length, shape, and flexibility are critical for the reproducibility of the infarct volume 4. Herein, a commercial silicon coated monofilaments (Doccol Corporation) have been used. Another great advantage is that this monofilament reduces the risk to induce subarachnoid hemorrhages. Using the Zeiss stereo-microscope Stemi 2000, the silicon coated monofilament was introduced into the internal carotid artery (ICA) via a cut in the external carotid artery (ECA) until the monofilament occludes the base of the MCA. Blood flow was restored 1 hour later by removal of the monofilament to mimic the restoration of blood flow after lysis of a thromboembolic clot in humans. The extent of cerebral infarct may be evaluated first by a neurologic score and by the measurement of the infarct volume. Ischemic mice were thus analyzed for their neurologic score at different post-reperfusion times. To evaluate the infarct volume, staining with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) was usually performed. Herein, we used cresyl violet staining since it offers the opportunity to test many critical markers by immunohistochemistry. In this video, we report the MCAO procedure; neurological scores and the evaluation of the infarct volume by cresyl violet staining.

The intraluminal middle cerebral occlusion model in mice is herein presented. The extent of cerebral infarct is evaluated by a neurologic score and cresyl violet staining, an alternative staining to TTC, offering the great advantage to test in parallel many interest markers.

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

Tıp

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

Fare Modeli Inferior Vena Cava İnterpozisyon Greft İmplantasyonu

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed results. However, the cellular and molecular mechanisms of the neotissue development, valve thickening, and stenosis development are not researched extensively. To answer the above questions, we developed a murine heterotopic heart valve transplantation model. A heart valve was harvested from a valve donor mouse and transplanted to a heart donor mouse. The heart with a new valve was transplanted heterotopically to a recipient mouse. The transplanted heart showed its own heartbeat, independent of the recipient&#8217;s heartbeat. The blood flow was quantified using a high frequency ultrasound system with a pulsed wave Doppler. The flow through the implanted pulmonary valve showed forward flow with minimal regurgitation and the peak flow was close to 100 mm/sec. This murine model of heart valve transplantation is highly versatile, so it can be modified and adapted to provide different hemodynamic environments and/or can be used with various transgenic mice to study neotissue development in a tissue engineered heart valve.

In order to understand the cellular and molecular mechanisms underlying neotissue formation and stenosis development in tissue engineered heart valves, a murine model of heterotopic heart valve transplantation was developed. A pulmonary heart valve was transplanted to recipient using the heterotopic heart transplantation technique.

Heterotopik Kalp Nakli bir Fare Modeli Kullanarak Pulmoner Vana Nakli

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Utero-tubal Embryo Transfer and Vasectomy in the Mouse Model

The transfer of preimplantation embryos to a surrogate female is a required step for the production of genetically modified mice or to study the effects of epigenetic alterations originated during preimplantation development on subsequent fetal development and adult health. The use of an effective and consistent embryo transfer technique is crucial to enhance the generation of genetically modified animals and to determine the effect of different treatments on implantation rates and survival to term. Embryos at the blastocyst stage are usually transferred by uterine transfer, performing a puncture in the uterine wall to introduce the embryo manipulation pipette. The orifice performed in the uterus does not close after the pipette has been withdrawn, and the embryos can outflow to the abdominal cavity due to the positive pressure of the uterus. The puncture can also produce a hemorrhage that impairs implantation, blocks the transfer pipette and may affect embryo development, especially when embryos without zona are transferred. Consequently, this technique often results in very variable and overall low embryo survival rates. Avoiding these negative effects, utero-tubal embryo transfer take advantage of the utero-tubal junction as a natural barrier that impedes embryo outflow and avoid the puncture of the uterine wall. Vasectomized males are required for obtaining pseudopregnant recipients. A technique to perform vasectomy is described as a complement to the utero-tubal embryo transfer.

Utero-tubal embryo transfer uses the utero-tubal junction as a barrier to prevent the embryo outflow that may occur when performing uterine transfer. Vasectomized males are required to obtain pseudopregnant recipients for embryo transfer. Both techniques are discussed.

Fare Modelinde utero-tubal Embriyo Transferi ve Vazektomi

The transfer of preimplantation embryos to a surrogate female is a required step for the production of genetically modified mice or to study the effects ...

Biyoloji

A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The development of novel therapies and diagnostic tools for endometriosis has been limited due in part to challenges in studying the disease. Outside of primates, few mammals menstruate, and none develop spontaneous endometriosis. Rodent models are popular but require artificial induction of endometriosis, with many utilizing either immunocompromised mice or surgically induced disease. Recently, more attention has been given to models involving intraperitoneal injection. We present a murine model of endometriosis that integrates several features of existing endometriosis models into a novel, simplified system that relies on microscopic quantification in lieu of subjective grading. In this model, we perform hormonal stimulation of donor mice, intraperitoneal injection, systematic abdominal survey and tissue harvest, and histologic quantification that can be performed and verified at any time after necropsy. This model requires minimal resources and training; does not require expertise by lab technicians in murine survival surgery or in the identification of gross endometriotic lesions; can be used in immunocompromised, immunocompetent, and/or mutant mice; and reliably creates endometriotic lesions that are histologically consistent with human endometriotic disease.

Many rodent models of endometriosis are limited by technical complexity, reproducibility, and/or need for immunocompromised animals or special reporter mice. We present a simplified system of lesion induction using any experimental mouse with an independently verifiable, objective scoring system and with no requirement for ovariectomy or survival surgery.

Doğal Bisiklet Fareleri Kullanarak Endometriozis Bir Syngeneic Murine Modeli

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The ...

Noninvasive Monitoring of Lesion Size in a Heterologous Mouse Model of Endometriosis

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time through noninvasive monitoring of fluorescence emitted by implanted ectopic human endometrial tissue. For this purpose, biopsies of human endometrium are obtained from donor women ongoing oocyte donation. Human endometrial fragments are cultured in the presence of adenoviruses engineered to express cDNA for the reporter fluorescent protein mCherry. Upon visualization, labeled tissues with an optimal rate of fluorescence after infection are subsequently chosen for the implantation in recipient mice. One week prior to the implantation surgery, recipient mice are oophorectomized, and estradiol pellets are placed subcutaneously to sustain the survival and growth of lesions. On the day of surgery mice are anesthetized, and peritoneal cavity accessed through a small (1.5 cm) incision by the linea-alba. Fluorescently labeled implants are tweezed, briefly soaked in glue and attached to the peritoneal layer. Incisions are sutured, and animals left to recover for a couple of days. Fluorescence emitted by endometriotic implants is usually non-invasively monitored every 3 days for 4 weeks with an in vivo imaging system. Variations in the size of endometriotic implants can be estimated in real time by quantification of the mCherry signal and normalization against the initial time-point showing maximal fluorescence intensity.
Traditional preclinical rodents of models of endometriosis do not allow non-invasive monitoring of lesion in real time but rather allow evaluation of the effects of drugs assayed at the end point. This protocol allows one to track lesions in real time and is more useful to explore the therapeutic potential of drugs in preclinical models of endometriosis. The main limitation of the model thus generated is that non-invasive monitoring is not possible over long periods of time due to the episomal expression of Ad-virus.

Here, we present a protocol for live-imaging of fluorescently labeled human endometrial fragments grafted in mice. The method allows studying the effects of drugs of choice on endometriotic lesion size through monitoring and quantification of fluorescence emitted by the fluorescent reporter on real time

Lezyon boyutu endometriozis, kapaklı fare modeli noninvaziv izlenmesi

Here, we describe a protocol for the implementation of a heterologous mouse model in which progression of endometriosis can be assessed in real time ...

Development of a Novel Endometrioma-Simulating Mouse Model

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals diagnosed with endometriosis. Women with OMA often experience compromised fertility, yet the exact mechanisms underlying OMA-associated infertility remain unclear. Notably, existing animal models simulate superficial peritoneal endometriosis (SUP) and deep infiltrating endometriosis (DIE), leaving a notable gap in research focused on OMA. In response to the gap of knowledge, this paper introduces a pioneering OMA-simulating mouse model and provides a comprehensive description of the techniques and procedures employed in the model. With a high success rate of 83% and ovarian lesion specificity, this model holds significant promise for advancing our understanding of OMA, particularly in the context of infertility. It offers a valuable platform for conducting targeted research into OMA-associated fertility challenges, potentially paving the way for improved diagnostic and therapeutic strategies in the field of reproductive medicine.

This study introduces a novel mouse model specifically designed to simulate endometrioma, a clinically significant subtype of endometriosis. By utilizing C57BL/6J mice, the model aims to elucidate the pathophysiological mechanisms underlying endometrioma-related infertility, offering a refined tool to bridge the current knowledge gap in reproductive medicine.

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals ...

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of luminal and glandular epithelium, a stromal compartment, a vascular network, and a complex immune cell population. Mouse models have been a powerful tool to study the endometrium, revealing critical mechanisms that control implantation, placentation, and cancer. The recent development of 3D endometrial organoid cultures presents a state-of-the-art model to dissect the signaling pathways that underlie endometrial biology. Establishing endometrial organoids from genetically engineered mouse models, analyzing their transcriptomes, and visualizing their morphology at a single-cell resolution are crucial tools for the study of endometrial diseases. This paper outlines methods to establish 3D cultures of endometrial epithelium from mice and describes techniques to quantify gene expression and analyze the histology of the organoids. The goal is to provide a resource that can be used to establish, culture, and study the gene expression and morphological characteristics of endometrial epithelial organoids.

This protocol describes methodologies to establish mouse endometrial epithelial organoids for gene expression and histological analyses.

Fare Rahiminden 3D Endometriyal Organoidlerin Kurulması

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

Optimized Thin Endometrium Mouse Model with Low Mortality and Minimal Adhesions

Establishing a Mouse Model of Thin Endometrium

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory treatment options are still urgently needed. Several animal models of TE have been developed, but the mouse model involving abdominal surgery and injection of 95% ethanol presents a formidable challenge due to the high mortality rate and risk of intrauterine adhesions if not performed correctly. Here, we describe a detailed protocol that produces reliable and reproducible TE with a very low mortality rate and minimal intrauterine adhesions by injecting 95% ethanol into the mouse uterus with varying infusion times. The results showed that all of the mice successfully developed TE with infusion times ranging from 1-3 min, characterized by a typical reduction in endometrial thickness and the number of glands, as well as excessive endometrial fibrosis. These findings suggest that this mouse model is suitable for studying thin endometrium and can serve as a platform for developing future TE treatments.

This article describes a detailed protocol for producing a reliable and reproducible thin endometrium with a very low mortality rate and minimal intrauterine adhesions by injecting 95% ethanol into the mouse uterus within 1-3 min.

Thin endometrium (TE) has been widely recognized as a critical cause of infertility. However, the pathogenesis of TE remains unclear, and satisfactory ...

Modeling Metastatic Endometrial Cancer  Model: A Technique to Generate Endometrial Cancer with Lymph Node Metastasis in Rabbit Models

Use a number 11 scalpel blade to make a 2.5-centimeter incision, 1 centimeter cranial to the symphysis pubis through skin and subcutaneous tissue. Incise the rectus fascia and dissect the rectus muscles laterally to expose the underlying peritoneum. Confirm that the under surface is clear of bowel or other abdominal organs. Sharply enter the peritoneum to identify the urinary bladder and sweep a gloved finger superiorly, posteriorly, and laterally over the apex of the bladder to locate the uterine horns.
Extract the uterine horns through the abdominal incision to rest on the abdominal wall. Use a 3-0 braided absorbable suture to perform a single suture ligation of each uterine horn, approximately 1.5 to 2 centimeters distal to the cervices and just medial to the uterine arteries. Then, tie the sutures snugly to occlude the distal uterine horns.
To inoculate the myometrium with the previously prepared VX2 cell suspension, load a 1-milliliter syringe equipped with a 27 gauge needle with 1 milliliter of cells. Slowly inject 0.5 milliliters of the cell suspension over 1 minute into each uterine horn proximal to the suture site between the suture and the cervix. Then, apply pressure to the myometrial injection site for 30 seconds to minimize cell leakage. Inspect the injection and suture sites for hemostasis before placing the uterine horns back into the abdomen.