Küçük ve Büyük Kemirgen Modelleri ile Barnes Labirent Test Stratejileri

Kuru toprak Barnes labirent yaygın tepki hafif caydırıcı uyaranlara mekansal navigasyon yeteneği ölçmek için kullanılır. Ardışık gün boyunca, kontrol grubuna performans (kaçış kafes bulmak için, örneğin gecikme), normal öğrenme ve hafıza göstergesi, geliştirir. Sıçanlar ve fareler arasındaki farklar burada ayrıntılı cihaz ve yöntem değişiklikleri gerektirmektedir.

Mekansal öğrenme ve laboratuvar kemirgenler bellek sık sık su ve kuru kara (Barnes) labirentine çoğu popüler olan labirentine, içinde seyir yeteneği ile değerlendirilir. Oturumları ya çalışmalarda üzerinde geliştirilmiş performans kaçış kafes / platform konumu öğrenme ve hafıza yansıttığı düşünülmektedir. Su labirentler daha az stresli kabul edilen, Barnes labirent eşit olarak çevre kenarı etrafında aralıklı birkaç delik ile dairesel bir platform üstüne nispeten basit bir tasarımdır. Tek bir kaçış kafes neden olurken deliklerden biri ama hepsi,-yanlış dipli veya kör-bitmeyen. Hafif caydırıcı uyaranlar (örneğin parlak havai ışıkları) kaçış kafesi bulmak için motivasyon sağlar. Kaçış kafesi bulmak için Gecikme oturumu sırasında ölçülebilir, ancak ek bitiş noktası genellikle video kaydını gerektirir. Bu video kayıtları, otomatik izleme yazılımı kullanımı su labirentine üretilen bu (örneğin, benzer uç noktaları çeşitli üretebilir </ Em> katedilen mesafe, hız / hız, doğru kadranda harcanan zaman, zaman) dinlenme ve gecikme onay / hareketli geçirdi. (Yani, rastgele seri, ya da doğrudan) arama stratejisi türü de kategorize edilebilir. Barnes labirent yapı ve test yöntemleri bu gibi sıçan, fare gibi küçük kemirgenler, ve büyük kemirgenler için farklı olabilir. Ekstra-labirent ipuçları fareler için etkili iken Örneğin, küçük vahşi kemirgenler labirent çevresinde görsel bir bariyer ile intra-labirent ipuçları gerekebilir. Uygun uyaranlara kaçış kafesi bulmak için kemirgen motive hangi tespit edilmelidir. Baykal ve su labirentine hem zaman 4-7 test eden çalışmalar genellikle gelişmiş, öğrenme ve hafıza performansı (örneğin kısa gecikmeleri veya yol kaçış platformu veya kafes bulmak için uzunlukları) ve / veya deney grupları arasındaki farklar tespit için gerekli olduğu gibi alıcı olabilir. Hatta bu yüzden, Barnes labirent mekansal seyir yeteneklerini ölçen bir yaygın olarak kullanılan davranışsal değerlendirme veGenetik, nöro-davranışsal manipülasyonlar, ya da ilaç / toksikan maruz potansiyel bozulma.

Mekansal öğrenme ve laboratuar kemirgenlerde bellek ilk bir gıda güçlendiricidir ¹ bulmak için ara sokaklardan bir labirent navigasyon gıda yoksun fareler ile değerlendirildi. Birkaç yıl sonra, bir mekansal referans bellek sistem ² önerilmiştir. Bir test oturumu veya çalışma içinde belleği belirtir çalışan bellek aksine, referans hafıza testi oturumları veya deneme karşısında bellek anlamına gelir ve daha yakından uzun süreli bellek ile ilgilidir.

Labirentine çeşitli türleri bu hipokampus bağımlı uzaysal öğrenme ve bellek, küçük ve büyük kemirgenler (örneğin su labirenti, birden fazla T-labirent, radyal kollu labirent ve kuru kara labirentine) ^3-6 noninvaziv değerlendirmeler olarak geliştirilmiştir. Burada, ilk Dr Carol Barnes ⁷ tarafından 1979 yılında açıklanan dairesel platform veya Barnes labirent, odaklanın. Bu labirent sıçanlarda (Ra da dahil olmak üzere, kemirgen modellerinde geniş bir mekansal seyir öğrenme ve hafıza test etmek için kullanılmıştırttus norvegicus), fareler (Mus musculus), fareler (Peromyscus maniculatus bairdii) geyik Kaliforniya fareler (Peromyscus californicus) ve hystricomorph kemirgenler (örneğin Degus [Octodon Degus]) ^8-13. Barnes labirent kullanılarak değerlendirildi Diğer türler Amerikan hamamböceği (Periplaneta Americana) ^14, mısır yılanları (Elaphe guttata guttata) ^15, dahil   pullu sürüngenler (örn. yan blotched kertenkele [Uta stansburiana]) ^16, ve insan olmayan primatlarda (örneğin fare lemur [Microcebus murinus]) ^17. Bizim laboratuvarlarında, Barnes labirent performans gelişim bisfenol A (BPA) veya etinil estradiol (EE2) maruz ^9-1113 sonra nörotoksisitenin bir göstergesi olarak kullanılmaktadır. Ayrıca yaygın Alzheimer Hastalığı ile ilgili def çeşitli fare suşları ^18-21, yaşlanma etkilerinin ^7,22-28 değerlendirilmesi davranışı fenotipleme için kullanılır ve^3,29-33 hayvan modellerinde, hem de egzersiz ve diyet çevresel ve metabolik değişiklikler ^34-42 etkilerinde icits.

Barnes labirent bir kullanım önemli avantajı hem farelerde ⁴⁴ plazma kortikosteron konsantrasyonları, akut artışı neden olabilir, ancak bu, bu tür Morris su labirenti ⁴³ gibi su labirentine, göreli olarak kişilerde daha az stres neden olmasıdır. Bir kuru toprak labirent gibi, Barnes labirent karasal kemirgenler ⁴⁵ daha ethologically-alakalı olabilir. Su labirenti performans farelerde ^3,46,47 genetik değişikliklerin daha duyarlı olduğu gösterilmiş olmasına rağmen, Barnes labirent performans diğer bazı değişiklikler ^48,49 karşı daha duyarlıdır. Su labirenti kullanılması mümkün değildir kemirgen modellerinde, Barnes labirent uzamsal bellek tutma ³¹ bir ince ayarlı bir değerlendirme sağlayabilir. Tipik Barnes Labirent (yani parlak ışıklar) kullanılan hafif caydırıcı uyaranlar,Ancak, kaçış kafesi ⁴⁵ bulmak için kemirgen için yeterli motivasyon sağlamak olmayabilir. Dahası, kemirgenler onlar kaçış kafesi girmezseniz hiçbir ceza oluştuğunu öğrenebilirsiniz. Böylece, yerine aktif kaçış kafes ararken, bazı kemirgenler aktif her deneme uzun süreler için labirenti keşfetmek. Kennard ve Woodruff-Pak ²⁴ tarafından gözden olarak, bu artan keşif kaçış kafesi, yol uzunluğunu bulmak için gecikme uzatmak, ve hataların sayısını artıracaktır. Böylece, gecikme, hata oranı, doğru ve yanlış kadran, hız harcanan zaman, zaman hareketli, zaman dinlenme ve arama stratejisi de dahil olmak üzere birden fazla parametrelerin ölçümü, topluca her deneğin mekansal seyir öğrenme ve hafıza yeteneği ⁸ daha iyi bir gösterge sağlayabilir ^-10. Ayrıca, performansı ilk kaçış kafesini (birincil önlemler) veya kaçış kafesi (toplam ölçü) girmek için gecikme bulmak için gecikme olarak ölçülebilir. Bazı argU varperformans birincil önlemlerin toplam önlemler ⁵⁰ daha uzamsal öğrenme daha doğru bir yansıması olduğunu ed. Burada anlatılan örnekler de dahil olmak üzere çoğu çalışma, hata oranını ve arama stratejisini belirlemek için kaçış kafesi girmek için gecikme kullanın. Ayrıca, bazı izleme yazılım sistemleri doğru vs yanlış delik koklama frekansları ölçebilen bir üç nokta vücut algılama sistemi var. Son olarak, labirent iyice yardımlar sağlamak veya sonraki hayvanlara dikkat dağıtıcı olabilecek koku ipuçlarını kaldırmak için çalışmalar arasındaki etanol ile temizlenmesi gerekir.

Barnes labirent tasarımları değişebilir fakat genel olarak her bir ev ya da bir çıkış kafes neden sadece bir tanesi, 12 veya 20 olası çıkış delikleri vardır. Escape kafes (duvarsız labirentine için) doğrudan labirent üst kaçış deliğinin altında ya yer ya da labirentin çevreleyen duvarın içine inşa edilebilir. Ipuçları m mesafede, yaklaşık 16.5 cm yükseklik veya genişlik (büyüklüğü değişebilirAze) yatay bir çizgi yerden labirentin dışında oda duvar tavana yerleştirilen genişliği 21,6 cm. Peromyscus türler için Barnes labirent tasarımlar 1-5 gösterisi örnekleri (Şekil 1) ve sıçanlarda (Şekil 2-5) Rakamlar. Fiş veya yanlış dipleri labirentten dışarı düşmesini hayvan önlemek için nonescape delikleri kapatmak gerekir. Test Oda büyüklüğü değişebilir (~ 20 m ²⁾ ama o, odasına hayvanları habituating Video set-up (eğer kullanılıyorsa) ile bir bilgisayar, uzlaşmacı ve bir yer, labirent için yeterli yer sağlamak için yeterince büyük olması gerekir deneyci onların varlığı hayvanın performansı ile karışmaz böyle labirent aparatının bir mesafede (en az ~ 122 cm) oturmak için. Kaçış kafes konumu atama tedavi grupları ve cinsiyet arasında dengeli olmalıdır. Burada anlatılan belirli prosedürler içi labirent koku ipuçları, bazı çalışmalar kullanımını vazgeçirmek için çalışmalar arasındaki labirent dönen dahil yok ikenBu işlemi ⁵⁰ dahil. Bizim prosedürlerde, labirent koku ipuçlarını ortadan kaldırmak için çalışmalar arasındaki etanol ile silinerek temizlenir.

1) rastgele, operasyonel olarak tanımlanan labirent merkezini geçerek yolları ayrılmış deliklerin lokalize aramalarda, 2) seri olarak tanımlanır: kaçış kafesi yerini, arama stratejileri üç tip (Barnes ⁷ tarafından orijinal olarak adlandırılan "desen") tanımlanmış sistematik bir saat yönünde ya da saat yönünün tersine ardışık delik arama, ve 3) doğrudan veya mekansal, birden fazla kez ve üç ya da daha az hata ile labirent merkezini geçmeden doğru kadranda doğrudan navigasyon olarak tanımlanır. Genel olarak, tekrarlanan test ile, kemirgenler tipik (rastgele seri ve direkt) ⁵¹ listelenen sırayla arama stratejileri yoluyla ilerleme. Kaçış kafes olmadan bir prob deneme de bellek ⁵⁰ ilave bir önlem olarak kullanılabilir.

Protokol ve temsilBurada sonuç kemirgenler iki tür (Peromyscus türe aksi adlandırılan küçük kemirgenler) ve sıçanlar için geliştirilmiştir. Bu genel prosedürler ayrıca doğuştan ve / veya outbred farelerde (Mus musculus) tutun da, diğer çalışmalar bu ikincisi türler ^18-21 potansiyel metodoloji farklılıkları danışılmalıdır.

1.. Küçük Kemirgenler için Barnes Maze Prosedürü

1. Labirent ve yerin üstünde havai ışıkları açın laboratuvar kapı dış işaretleri "Girmeyin".
2. Yaklaşık 30 dakika önce alışma izin ilk deneme başlamadan test odasına normal ev kafeslerde fareler getirin. Oda sessiz ise, aksi takdirde bu tedbir, kabul edilebilir, beyaz gürültü dahil etmek gerekli olmayabilir.
3. Izleme programı kurmak.
4. Yavaşça kendi ev kafesinden ilk fareyi çıkarın ve uzun boylu kapalı plastik kutuda yerleştirin. Belirlenen kaçış deliğinin altında kaçış (temiz ev) polipropilen kafesini (29 cm x 19 cm x 13 cm) yerleştirin.
   1. Bu çıkış deliğinden çıkarılır ve diğer tüm delikleri takılı tüp engelleyen kağıdı emin olun.
   2. Labirent çevresinde perde çizin.
5. Labirent merkezinde içinde fare ile plastik kutu yerleştirin ve yaklaşık 8 saniye sonra, yavaşça takafesinden hayvan ke ve labirent üzerine yerleştirin.
   1. Labirentin merkezindeki hayvan yerleştirdikten sonra, sessizce bilgisayar alanında (labirent ~ 150 cm) hareket ettirin.
   2. Zaten program kendi performansını belgeleyen başlayıncaya kadar hayvan labirent sürüldüğü zaman geçtikten (birkaç saniye içinde) en az zaman sağlamak için açık olmalı, uygun yazılım programı izleme başlatın.
6. Bilgisayar monitörü ve rekor delik sayısı, deneme sayısına, arama stratejisi ve yapılan hataların sayıda hayvanın performansı gözlemlemek. Bir hata yanlış bir deliğinin koklama olarak tanımlanır. Arama stratejisinin Değerlendirilmesi izleme modeline dayanarak canlı veya daha sonra yapılabilir.
   1. Arama strateji Doğrudan olarak kategorize edilmektedir (3 ya da daha az hata ile kaçış kafesin içine doğrudan giderek),
   2. Seri (kaçış kafes bulunduğu kadar labirent çevresi boyunca seyahat), ya da
   3. Rastgele </ Strong> (çeşitli deliklerini kontrol labirent merkezini birden çok kez kapısı).
7. Hayvan kaçış kafesin içinde dört pençeleri olduğunda izleme programı durdurun.
8. Fare, 5 dakika içinde kaçış kafesini girmek için başarısız olursa, nazikçe doğru konuma ve kaçış kafesin içine kılavuz. Fare 2 dakika için çıkış kafes içinde kalmasına izin verin.
9. Kaçış kafesten fareyi çıkarın ve ev kafes yerleştirin.
10. Labirent üst sprey ve% 70 etanol ile kafes kaçış ve kurulayın. Ikinci deneme çalıştırmadan önce 30 dakika için bir kenara ilk kafes / fare ayarlayın.
11. Sonraki fareyi başlamadan önce, önceden doğru kaçış deliği takın ve bir sonraki konu için belirlenmiş kaçış deliğinden delik engelleme kağıt fişini çıkarın.
12. Her bir fare, yaklaşık 30 dakika arası bir çalışma aralığı ile / gün 2 denemeleri için test edilir.
13. Tüm fareler yedi gün boyunca test edilmiştir kadar o olasılığını artırabilir, hangi adımları tekrarlayınf geliştirilmiş performans ve / veya veri sadece dört gün göre tedavi grupları arasındaki farklılıklar gözlem.

2. Rats Barnes Labirent Testi Bir Takip Programı Not Available olduğunda

1. Labirent (doğrudan ışıkları altında ortalanmış) onun doğru yerleşim olduğundan emin olun, nonescape deliklerini ve düşmesini hayvan önlemek sahte dipleri labirent güvenli, ve kaçış kafes ilk konu için belirlenen konumda. Labirent Yukarıdaki havai ışıkları açık olmalıdır.
2. Sağlamak, bilgisayar ve kamera hazır ve bir kronometre mevcuttur.
3. Diğer yakın yerlerde herhangi bir gürültü azaltmak için beyaz gürültü açmak. Tester sandalyesi labirent üst yakın kenarından yaklaşık 122 cm ve test boyunca aynı konumda kalır.
4. (2 dk ayarlı) bir zamanlayıcı (sadece test 1. Gününde gerekli) mevcut olmalıdır. Timer "bip" ya da başka gürültü yapmamalıyız. R test etmek için kapı (lar)oom dışarıda oturum "Girmeyin" olmalıdır.
5. Konular için bir test sipariş levha gecikme ve her konu için günün saatini yanı sıra herhangi bir alanı kaydetmek için konu testleri, oturum sayısı, her bir konu için kaçış kafesin delik sayısı konumu, ve alanların sırasını listeler gerekli notları (Şekil 6).
6. İlk sıçan test edilecek önce 30-60 dak, alışkanlık sağlamak için test odasına evlerinde kafeslerde hayvan getirmek.
7. Sıçan bir deneme başında içine yerleştirilen merkezi boru labirent merkezinde yer almaktadır. Üstüne ilk hayvan kimliğini gösteren karton sayfasını ayarlayın. Bu video kayıt videonun ilk birkaç saniye gözlemleyerek her konunun kolay tanımlanması için hayvan kimlik yakalayabilirsiniz.

İlk Test 1. Gün:

1. Bilgisayar video kaydı başlar (eğer kullanılıyorsa) ve Subj için hayvan kimlik levha ile deneme yaklaşık 5 saniye dahilvb tanımlama. Dosya adı (ya da oluşturulan tarih) testi gün / zaman belirleyecektir.
2. (Birden çok hayvanlar kafeste ise kimliğini kontrol edin) ve yavaşça kaçış kafesin içine kafa ilk yer onun ev kafesinden ilk hayvan çıkarın. Ekstra bir sahte dip kaçış kafesi örtün ve 2 dk sayacını başlatmak. Bu hayvan kaçış kafese alıştırmak için izin verir.
3. 2 dakika zamanlayıcı sona erdikten sonra, yavaşça, (hem de yanlış alt kapağı çıkarın ve uzak labirent set) kaçış kafesinden hayvan kaldırmak asansör kimliği levha ve hemen merkez tüp içindeki sıçan yerleştirin. Karton ID levha ile merkez tüp üst kapağı.
4. Ve yavaşça karton kapaklı merkezi tüp kaldırın ve bir kenara koyun. Merkezi boru hayvan üzerinde kaldırıldığında olarak kronometreyi başlatın. Tester sandalyede oturmak taşı.
5. Hayvan ve kronometre hem izlerken, sandalyede sessizce oturun. Her bir hayvan, çıkış kafes bulmak için 5 dakikalık bir maksimum vardır.
6. Sıçan de çıkış kafes bulursa daha ucuz5 dk test sipariş kağıda kronometre ve kayıt gecikme ve günün zamanı durdurmak. Kaçış Kafesinden hayvan kaldırmak ve eve geri kafesin içine yerleştirin.
7. Sıçan 5 dakika içinde kaçış kafesi bulamazsa, yavaşça kaçış kafesine hayvan rehberlik ve 15 sn kaldırılması ve ev kafesine hayvan dönmeden önce geçmesine izin verir.
   1. Bu 15 sn süre deney odasının duvarına ikinci el ile bir saat kullanarak zamanlı olabilir.
   2. Sıçan kaçış kafesi bulamadık test düzeni levha ve rekor günün rekor zamanı.
8. Rat düşerse / süre kronometre de test gerektiği bakışta, labirent kapalı atlar. Tester sonra hızlı hayvanı almak için çalışmalıdır.
   1. Bu 10 saniye içinde yapılabilir eğer, labirentin merkezine üzerine hayvan değiştirin ve test sayfasına (tester bir düşme veya atlama ayırt edebilir, bu ifade edilmelidir) üzerindeki sonbahar / atlama zamanını kaydetmek. Denemeye devam edin.
   2. Ani almak durumundamal, 10 saniye daha uzun sürer kronometreyi durdurmak ve geri eve kafese hayvan koymak. Sonbahar / atlama kayıt zamanı (test cihazı bu not, düşme veya atlama ayırt eğer).
   3. Bir hayvan / düştü atladı ve 10 saniye içinde alınamadı hangi çalışmalardan elde edilen veriler istatistiksel analizler çıkarılmıştır.
9. Bilgisayarınızda video kaydı durdurun. Dava hakkında herhangi bir yorum kaydedin.
10. , Labirent üst herhangi bir idrar veya dışkı çıkarmak% 70 etanol ile sprey, ve iyice kurulayın. Kaçış kafesini çıkarın ve% 70 etanol ile temizleyin.
11. Sonraki konu için belirlenen yerleşim temiz bir kaçış kafes koydu. Birden fazla çıkış kafes sahip kuru hava her etanol kokuyu azaltmak için izin verir. (Bir delik ama yanlış bir tabana sahiptir ve bir delik kaçış kafesi içerecek şekilde) Önceki deliğe temiz bir yanlış alt koydu.
12. Labirent merkezinde sonraki konu ID levha ile merkez tüp ayarlayın. Bilgisayarınızda video kaydı başlar.
13. (Gün / Oturum 1 ise) ve 2 dk zamanlayıcıyı başlatmak, test edilecek bir sonraki hayvan çıkarın kaçış kafesin içine yerleştirin (yalnızca Gün / Oturum 1 ise). Yukarıdaki 2. adımdan devam edin. Her konu 1 deneme / gün alır.
14. Tüm hayvanlar test edildikten sonra, labirent temizlemek ve kafes kaçış, havai ışıklar ve beyaz gürültü kapatın. Kapı (lar) dan işaretini (ler) "Girmeyin" çıkarın.

Gün 2 7 Test yoluyla

1. Test odası kurmak ve yukarıda açıklandığı gibi test için labirent.
2. Üstüne ID levha ile labirent merkezinde merkezi tüp ayarlayın. Video kaydı başlar. Evde kafes ilk hayvan çıkarın ve merkez tüp içine yerleştirin.
3. Bu adım Gün 1 Gün 2-7 farklılaştıran, özellikle gün 2-7, konu yapılmaz evde kafes kaldırma ve kaçış kafes içinde 2 dk alışma süresinden sonra merkez tüp içine doğrudan yerleştirilir.
4. Yukarıdaki adım 4 itibaren işlemi tekrarlayın.

3. İstatistiksel AnalizBarnes Labirent bitiş noktaları için

1. Veri analizleri çeşitli istatistiksel testler gerekebilir. Bu tür gecikme ve hata oranı gibi sürekli değişkenler, uzay ve zaman ⁵² bölünmüş bir arsa olarak analiz edilebilir.
2. Bazı hayvanların maksimum ayrılan süre içinde kaçış veya ev kafesi bulun yoksa, gecikme veri maksimum olarak atanan ve SAS versiyon 9.2 yazılım analizi de ProcLife test kullanılarak analiz edilebilir.
   1. Bu yöntem, istatistiksel bir üst sınır kesim var olan davranış verileri için yararlıdır.
3. Arama strateji veri PROC GLIMMIX ve SAS 9.2 sürümü yazılım analizi ile bir tekrarlanan ölçü tasarım kullanılarak analiz edilebilir.
   1. Bu ilk analiz kümülatif bunu log linki ve her üç arama stratejileri (rastgele seri ve direkt) bu analize dahil olduğu böyle bir terimli dağılımı kullanır.
   2. Hayvanlar daha verimli arama stratejisi (doğrudan), bir secon kullanmayı öğrenme olup olmadığını belirlemek içinİki daha az verimli strateji (random ve seri) bir araya getirilmiş ve daha verimli bir doğrudan arama stratejisi ile mukayese edildiği arama stratejisi d analizi gerçekleştirilebilir.
   3. Bu ikinci yöntem, bir binom dağılımı ile sonuçlanır ve aynı zamanda İŞLEM GLIMMIX kullanır.

Cinsel olgun erkek geyik fareler yaygın çevre boyunca dissemine potansiyel üreme ortakları bulmak için gelişmiş mekansal seyir yeteneği bağlıdır. Prenatal ve testosteron yetişkin maruz Hem bu daha sonra yetişkin erkek davranışı ⁵³ organize ve aktive gereklidir. Bunun gibi, endokrin bozucu bileşiklere erken maruz kalma erkeklerde daha sonra bu özellik rahatsız olabileceği tahmin edildi. Bu hipotezi test etmek için, erkek ve dişi geyik fareler gelişimsel bir fitoöstrojen ücretsiz diyet, bir fitoöstrojen serbest diyet pozitif östrojen kontrol (etinil östradiol [EE2]), ya da baz BPA birçok çevreyle ilgili dozlarda maternal diyet yoluyla maruz bırakıldı fitoöstrojen içermeyen rafine diyet kontrolü ve yetişkin olarak Barnes labirent performansı değerlendirildi. 1, bu türler için Barnes labirent düzeneği göstermektedir. Iki yüksek değil düşük maruz kalan erkek, BPA dozları göstermekmekansal öğrenme d eşdeğer açıkları, uzun süreli gecikme ile kendini gösteren gibi, hata oranı, ve deneme süresi (Şekil 7-9) üzerinden doğrudan arama stratejisine dönüştürmek için bir yetersizlik arttı. Ancak, EE2 ve orta BPA dozuna maruz kalan kadın, ancak diğer BPA dozlar ^9,13 (yani doğrudan arama stratejisinin gecikme ve artan kullanımı azaldı) uzaysal öğrenme ve hafıza erilleştirilmiş modellerini sergiledi.

Eşli geyik fareler, onların ilgili kuzenleri, tek eşli erkek California farelerde aksine, çifti birleştirme ile üreme başarısını artırmak ve tek bir kadın ile topraklarında kalan ve ebeveynlik sorumlulukları ^54,55 paylaşımı. Bu nedenle, mekansal seyir yeteneği California farelerde kuvvetli evrimsel bölüme tabi olmamıştır. Sonuç olarak, karine erken BPA ve EE2 poz Kaliforniya farelerde bu davranışı hedef olmaz oldu. Bu hipotez desteksis, BPA veya EE2 gelişimsel maruz tüm tedavi gruplarında benzer tepkiler (Şekil 10 ve 11) ¹⁰ göstermiştir erkek ya da kadın, mekansal seyir davranışları (gecikme, hata oranı, ya doğrudan arama stratejiye dönüştürme) değiştirmedi. , Geyik, kontrol fareleri Kaliforniya fareler yedi ardışık sınama gün içinde yapılan hataların sayısını azaltmak vermedi kontrol ne de kontrol Kaliforniya erkek fareler doğrudan arama stratejisi kullanımını artırmak yoktu karşılaştırıldığında. Bu öğrenme yeteneği bir tür farklılık yansıtıyor olabilir, fakat görsel-uzamsal öğrenme ve hafıza testleri değerlendirilmesi için daha rafine Kaliforniya fareler için gerekli olması mümkündür.

Fareler için Barnes labirent cihaz ve ilişkili donanım Şekil 2-5 de gösterilmektedir. Bu cihaz, doğum sonrası gün 47-51 üzerinde erkek ve dişi Sprague-Dawley sıçanlarının uzaysal öğrenme ve bellek (5 sonuçlara yol değerlendirmek için kullanıldıABAS gün, 1 deneme / gün). Son gün (yani günde 5) üzerinde, kaçış kafes günlerde 1-4 özgün konumundan 180 ° taşındı. Bu konular önceden doğrulma refleksi ve eğik tahta davranışı (sütten kesim öncesi) için değerlendirildi ve davranışını, açık alan aktivite düzeyleri ve motor koordinasyon oynamak olmuştu. Onların barajlar gestasyonel gün 6-21 ml su / kg vücut ağırlığı 1 dağıtıldı bunun üzerine vanilyalı gofret 3 küçük parçalar içmişlerdir. Denekler kendilerini oral su 1 ml / kg vücut ağırlığı, günde iki kez, doğum sonrası günlerde 1-21 ile muamele edilmiştir. Çıkışta, bir eşcinsel kardeşi ile çift-yer vardı. Ancak, yalnızca 1/sex/litter Barnes labirent performansı değerlendirildi. 12. 5 test günün her biri her cinsiyet için kaçış kafes bulmak için ortalama gecikme göstermektedir. Cinsiyet (p <0.04) ve oturumun (p <0.01) anlamlı temel etkiler günde 1 göreli gün 2-5 kadın ve kısa gecikmeleri daha kısa gecikmeleri belirtti. Diğerleri have de dişi sıçanlarda ⁵⁶ daha kısa gecikmeleri rapor, ancak, benzer cinsiyet etkileri her zaman bizim laboratuvarda ¹¹ not edilmemiştir. Böylece, sıçanlarda tutarlı bir seks etkisi belirlenmeye henüz gecikme dışında Endpoints henüz mevcut değildir,. Ancak izleme yazılımı, sıçanlarda hata oranını ve arama stratejisi incelemek için benzer bir çalışmada kullanılıyor.

Şekil 1.. Peromyscus türler. A) için Barnes labirent aparat içi labirent geometrik ipuçları (örneğin daire, kare, üçgen ve yıldız) labirent duvarına her 90 ° içine yerleştirilir, orada her 30 ° yerleştirilmiş 12 kaçış delikleri vardır ve labirent siyah bir perde ile çevrelenmiştir (gösterilmemiştir). B) labirent topBir polipropilen stand üzerine yerleştirilmiş ve 100 cm yerden yükselmiş. resmi büyütmek için buraya tıklayın .

Şekil 2. Barnes labirent fareler için aparat. Labirent üst ve destek standları gösterilen yerden labirent üst çapı ve yüksekliği ile görülebilir. Katta Numaraları delik numaralarını gösterir ve (kat numaralarının özne tarafından görülemez) test belirlenen yerde kaçış kafesi yerleştirmek için izin verir. Ekstra-labirent görsel ipuçlarının biri kadar duvar (yani siyah dikey çizgiler) görülebilir. resmi büyütmek için buraya tıklayın .

Şekil 3. Sıçanlar için Barnes labirent aparatın yakından görünümü. Labirent üst alt oluklar içine beyaz kaçış kafes slaytları. Benzer oluklar her bir çevre delik için labirent üst alt kısmında bulunur. resmi büyütmek için buraya tıklayın .

Şekil 4. Örnek konu sıçanlar için Barnes labirent aparatının üstüne sayfasını belirlenmesi ile merkezi tüp. Kapak karton Plac uzakta asansörlerie tüp içinde fare ve sonra değiştirilir. Merkezi tüp kolu kolay kaldırma deneme başlamasını sağlar. resmi büyütmek için buraya tıklayın .

Şekil 5. Girerken boyutları ile fareler için kaçış kafes. Aşağı rampa üzerinde küçük basamaklar sıçan için çekiş gücü sağlar. resmi büyütmek için buraya tıklayın .

Şekil 6,. Barnes Labirent için örnek test yaprağı. diğer bilgileri önceden oluşturulan iken el yazısı bilgiler test oturumu sırasında kaydedilir. Sütunlar şunlardır: 1) testi sipariş hayvan kafesleri sırasına göre düzenlenmiş olabilir ve deneyci, 2) seans sayısı (genellikle, 5-7 gün üst üste), 3) hayvan kimlik, 4) test sırasını bilir ki seks ( Her konu için kaçış kafes, bu sütundaki onay işaretleri ile belirtildiği gibi 6), hayvan sayıları 106 ve 131 ayrılan süre içinde kaçış kafesi bulamadık), test sayfasında gerekli olmayabilir, 5) konum, 7) Her hayvanın deneme başında ve kaçış kafesini (sn) bulmak için 8) gecikme için günün saati. Test sayfasının alt kısmında yorumlarınızı ve bu oturum sırasında meydana gelmiş olabilecek herhangi bir gürültü veya kesintileri gibi notları, kayıt deneyci için bol bol yer. larg görmek için buraya tıklayıner görüntü.

. Şekil 7 Barnes Labirent arama stratejisi BPA veya EE2 erkek ve dişi geyik farelerin gelişim maruz kalmanın etkileri A) Örnek üç tanımlı arama stratejileri gösteren diyagramlar:.) Random (üst), seri (orta) ve doğrudan (alt random (sarı), seri (yeşil istihdam BPA, EE2 ve kontrol farelerinin. B) Yüzde), ya da satın alma test genelinde doğrudan (siyah) arama stratejileri. CTL erkek düşük doz BPA erkek ve EE2 kadın (tüm P değerleri <0.05) dışındaki diğer tüm gruplara göre art arda 7 günlük test dönemi boyunca daha sık doğrudan arama stratejisi kullanılmıştır. CTL = kontrol; EE2 = etinil östradiol, BPA = bisfenol A izniyle uyarlanmıştır.0;. ^13. büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın .

Şekil 8... A) Erkekler. B) Dişiler labirent Barnes kaçış kafesi bulmak için gecikme üzerinde BPA veya EE2 (Şekil 3 de aynı gruplar) erkek ve dişi geyik farelerin gelişim maruz kalmanın etkileri. CTL = kısa gecikmeleri örneklediği gibi daha hızlı CTL kadınlarda (p = 0.0103), EE2 maruz kalan erkek (p <0.0008), üst ve orta-doz BPA erkek (p = 0.03, p daha, doğru kaçış kafesi bulunan erkekler sırasıyla 0.02,). CTL erkek Ancak, (P> 0.05), düşük doz BPA erkek ve EE2 kadın gibi benzer tepkiler gösterdi. Buna karşılık, EE2 kadın d vardıEE2 maruz erkeklerde (p = 0.0013) daha deneme süresi boyunca ecreased gecikme süreleri. Veriler ± SEM ortalaması olarak sunulmuştur. Jasarevic vd. ^13. izniyle uyarlanmıştır büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın .

Şekil 9. BPA ve EE2 kaçış hataları (Şekil 3 aynı gruplar) erkek ve dişi geyik farelerin Gelişim maruz kalma. A) Erkekler. B) Kadın. CTL erkek CTL kadınlarda (p = 0.0002) ve EE2 erkek (P = 0.02) göre yanlış deliklere hataları veya girişlerin sayısının yaklaşık yarısını gösterdi. Ayrıca, KVK erkekler üst doz BPA erkeklerde (p = daha az hata taahhüt0.02) ancak orta ya da düşük doz BPA erkeklerden (P> 0.05) hata oranı farklı değildi. Öte yandan, EE2 kadın bu grup EE2 erkeklere göre CTL erkeklerde ve azaltılmış hata (p = 0.002) ile aynı hata oranı sahip böyle bir erilleştirilmiş gelişme göstermiştir. Orta doz BPA maruz kalan kadınlar da, düşük doz BPA ve CTL kadınlarda (sırasıyla, p = 0.0005 ve 0.01) daha az hataları göstermiştir. Veriler ± SEM ortalaması olarak sunulmuştur. Jasarevic vd. ^13. izniyle uyarlanmıştır büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın .

Şekil 10. Barnes labirent test erkek ve dişi Kaliforniya farelerin arama stratejileri. Arama stratejileri are renk kodlu: random (sarı), seri (yeşil) ve doğrudan (siyah). 7 günlük test süresince, bu hayvanlar için arama stratejisi kullanımı üzerindeki zehiri ya da seks anlamlı etkisi vardı. Williams ve ark. ^10. izniyle uyarlanmıştır büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın .

Şekil 11. Kaçış kafesi bulmak ve erkek (A & C) ve dişi (B & D) Kaliforniya farelerde (Şekil 6 ile aynı gruplar) için Barnes labirent test hataları kaçmak için Gecikme. A ve B) Gecikme. C ve D) hataları Kaçış . 7 günlük test süresince, hiçbir signi vardı bu hayvanlar için arama stratejisi kullanımı üzerindeki zehiri ya da seks etkilerini ficant. Veriler ± SEM ortalaması olarak sunulmuştur. Williams ve ark. ^10. izniyle uyarlanmıştır büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın .

Şekil 12. Gecikme son gün (gün 5) On. Erkek ve doğum günlerinde 47-51 (1 deneme / gün) değerlendirilir dişi Sprague-Dawley sıçanlar için kaçış kafes bulmak için, kaçış kafes aslına 180 ° taşındı yer. Dişiler 1. gün gecikme önemli ölçüde daha kısa olan gün 2-5 erkek ve gecikmeleri önemli ölçüde daha kısa gecikmeleri sergiledi. Veriler ± SEM ortalaması olarak sunulmuştur.tp :/ / www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51194/51194fig12highres.jpg "target =" _blank "> büyük resmi görebilmek için buraya tıklayın.

Barnes labirent test prosedürlerinde kritik adımlar şunlardır: 1), kaçış kafes bulmak için hayvan motive etmek için uygun hafif caydırıcı bir uyarı sağlayan 2) personel, dış gürültü kontrolü, test (tekdüze koşullar hayvan deneylerinde boyunca korunur örneğin test zaman sağlanması ve performansını etkileyebilecek diğer uyaranlara), 3) deneyleri Video optimize ve sağlanması uygun video kayıt ve geri dosya, kayıt, ve 4)% 70 etanol ile labirentin temizlik denemeleri arasında koku ipuçlarını kaldırmak istiyorsak.

Kaçış kafesi bulmak için konuyu motive etmek için en iyi uyaranlara belirlenmesi bazı değişiklikler ve / veya sorun giderme gerektirebilir. Tipik bir uyarıcı parlak aydınlatma yükü olduğunu. Bununla birlikte, bu, bazı türler için yeterli olmayabilir. Sadece bizim tarafımızdan anekdotal kaydetti rağmen, yoğun davranışsal değerlendirildi (ve bu nedenle, kapsamlı bir biçimde ele) olan sıçanlar standart B altında daha az motive görünüyorOnlar değişik cihaz ve / veya ortamlarda daha uysal ve alışabilirsin çünkü arnes olasılıkla koşulları, labirent. İşitsel uyaranlar (örneğin yırtıcı sesleri) kabul edilebilir, ancak bu test odaya aynı anda diğer hayvanları alıştırarak yeteneğini sınırlar. Başarıyla kullanılan diğer uyaranlar labirent üst ^57,58 veya Barnes yerine caydırıcı ^56, iştahlı olmak labirent değiştirerek de hava doğrudan havai vantilatörü.

Ekstra-labirent görsel ipuçları fareler ile Barnes labirent testi için norm vardır. Tipik bir laboratuvar faresi türlerinin, ekstra-labirent ipuçları içi labirent kuyrukları ^59,60 daha iyi sonuçlar doğurabilir öne sürülmüştür. Ancak, geyik fareler başarıyla kaçış kafesi bulmak ve başarıyla doğrudan arama stratejisi ^8,9 kullanmak için test dönemde dönüştürmek mi intra-labirent ipuçlarını kullanabilirsiniz. Dahası, dış duvar labirent düşme veya atlama hayvanlar önler. California farenin geyik farelerden daha büyük işlemek için daha kolay ve yaklaşık 2-3x gibi, diğerleri başarılı bir duvar ^40,61 kullanılmadan labirent Barnes, bu tür test ettik. Bununla birlikte, bu durumda labirent daha içe yerleştirilmiş 16 delikli (1.3 cm) ile (çapı 65 cm) daha küçüktü.

Metodolojik, Barnes labirent prosedürü ve sonuçları intrepretation etkileyebilecek küçük ayrıntılar vardır. Kemirgenler için labirent üst nispeten büyük ve deney odası test labirent çevresinde serbestçe hareket etmesine izin verecek kadar büyük olmalıdır. Test sıçan almak ve uygun konumda kaçış kafes yerleştirmek için çevresinde hareket etmek gerekir gibi bir köşede labirent yerleştirilmesi tavsiye edilmez. Kemirgen kaygı düzeyleri, artmış plazma kortikosteron konsantrasyonu ⁴⁴ ile kanıtlandığı gibi, test ve yabancı uyaranlara exacerbating olabilir sırasında yükselir. Kemirgenler genellikle ani işitsel uyaranlara da dondurmakve böylece, test ortamı gürültülü alanda yer olmadığı önemlidir. Ancak, kişinin davranışlarına doğrudan dikkat esastır, bu, belirli bir günde ve gün boyunca uzun bir değerlendirme olabilir, çünkü deneme dikkatli kalması test için zor olabilir. Bu nedenle ve performans sirkadiyen etkileri önlemek için, bu belirli bir gün zaman (örneğin sabah veya öğleden sonra) bir seçim penceresinde için hayvanların sınırlı sayıda test uygunudur. Bu açıkça test edilmemiş olmasına rağmen nihayet, etanol koku, konuya caydırıcı olabilir. Kafesleri etanol ile püskürtülür sonra kuru hava için zamanımız var, böylece birkaç kaçış kafesleri ve ek sahte dipleri önerilmektedir.

Barnes labirentin başlıca avantajları kullanan diğer labirent türlerine nazaran ve deneysel kaynaklı impairm daha kapsamlı bir değerlendirme sağlayabilir ki elde edilebilir ek uç noktaları kolaylığı vardırveliler. Ayrıca, bu kuru toprak labirent iyi kara kemirgenler için doğal çevreyi özetlemek olabilir. Gecikme, hata oranı ve doğrudan arama stratejisi (rastgele veya seri) verimsiz bir arama stratejisi test boyunca dönüşüm kanıtladığı gibi multiday test dönemi, değişmiş performans daha sağlam kanıtlar sağlayabilir.

Barnes labirent Sonuçlar mekansal navigasyon diğer testler ile kontrol edilebilir. Buna ek olarak, potansiyel Barnes labirent performans açıklarının anksiyete, aktivite, ya da motor yetenekleri değişikliklerin bir sonucu olmadığını belirlemek önemlidir. Barnes bozuklukları mekansal gösterime gerçek değişimleri yansıtan labirent eğer Böylece, anksiyete ve / veya yükseltilmiş artı labirent veya açık alan davranış olarak lokomotor değerlendirmeler, sonuçları belirleyebilir. Ancak, anksiyete yaygın kemirgen testleri her zaman Barnes labirent performans ⁴⁴ prediktif olmayabilir. Gerçek mekansal navigasyon değişiklikler mevcut, mo varsaBu beyin bölgeleri, bu öğrenme ve hafıza tepkileri ^62-64 yönetmek için göründükleri gibi Molecular, histopatolojik elektrofizyolojik veya synaptogenic değişiklikler, hipokampus, entorhinal korteks veya diğer kortikal alanlarda belirgin olabilir.

Bu belge, Amerika Birleşik Devletleri Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) politikasına uygun olarak gözden ve yayın için onaylanmıştır. Onay içeriği mutlaka FDA konumunu veya görüşlerini yansıtmaktadır ne de ticari isimleri veya ticari ürünlerin söz kullanımı için destek ya da öneri yok olduğu anlamına gelmez. Bu rapordaki bulgular ve sonuçlar yazarlara aittir ve FDA görüşlerini temsil etmemektedir. Yazarlar herhangi bir çıkar ve ifşa hiçbir şey yok.

Yazarlar Sayın Eldin Jasarevic, Bay Scott Williams, Bay Roger W. Meissen, Sarah A. Johnson, Dr R. Michael Roberts, Dr Mark R. Ellersieck ve Üniversitesi'nde Dr David C. Geary'yi kabul Missouri, ve Bay C. Delbert Hukuk ve Toksikoloji Araştırma / FDA için Ulusal Merkezi'nde hayvan bakım personeli. Bu çalışma, KSS (RC1 ES018195), (KSS ve DSG'deki) bir Mizzou Advantage Grant, Veteriner fakültesi ödülü University of Missouri College (KSS) lütfet bir NIH Mücadelesi Grant tarafından desteklenen ve Ulusal Merkezi'nde protokol E7318 edildi Toksikoloji Araştırma / FDA için.