Roman kullanarak Spinal Kord Yaralanması sonra Fare Hind Ekstremite Kemik Kaybı Boyuna değerlendirilmesi, In vivo, Metodolojisi

Ardışık düşük doz X-ray taramaları kullanarak omurilik yaralanması sonrası kemik kaybı, yetişkin farelerin femur ve süresince tibialar boyuna muayene yapıldı. Tibia kemik kaybı, kemik kaybı femur kadar 40 gün yaralanma tespit edilmedi ise çalışma boyunca tespit edildi.

Spinal kord yaralanması (SKY), genellikle, daha yüksek bir frekansa ^kırıkları 1 yol, pelvis ve alt ekstremite sublesional bölgelerinde osteoporoz eşlik ediyor. Bu kırıklar genellikle normal duyu fonksiyonunu kaybetmiş bölgelerde meydana geldiğinde, hasta, ölüm de dahil olmak üzere kırık-bağımlı patolojiler daha büyük bir risk,. SCI-bağımlı hem de kemik mineral yoğunluğu kaybı (KMY, g / cm ²⁾ ve kemik mineral içeriği (BMC, ^gram), 2 mekanik kullanmama, anormal nöronal ^{sinyalizasyon} 3 ve hormonal ^{değişiklikler} 4 atfedilmiştir . SCI-bağlı osteoporoz kemirgen modelleri paha biçilmez SKY osteoporoz gelişme altında yatan mekanizmaları ile ilgili bilgilerin yanı ^sıra, 5-7 yeni tedaviler ⁽⁸ Yorumlar) nesil için bir test ortamı sağlayabilir . Indirgemeci bir yaklaşımı mekanizması ba elverdiği SCI fare modelleri büyük ilgiboş ve transgenik farelerin kullanımı ile sed değerlendirmesi. Bu modellerin önemli veri sağlamış olsa da, SKY sonrası kemik kaybı ölçüde belirleyici minimal invaziv, güvenilir, tekrarlanabilir ve ölçülebilir yöntemleri için ihtiyaç tanı geliştirmek için, özellikle de zamanla ve deney hayvanlarında aynı kohort içinde, hala orada. , tedavi yöntemleri ve / veya SCI-indüklenen osteoporozun önlenmesi.

Kemirgenler kemik yoğunluğu ölçmek için ideal bir yöntem, X-ışını radyasyon düşük seviyeleri (zamanla) sıralı, çoklu pozlama izin verecek. Bu çalışma, yeni bir hayvansal tüm tarayıcı, düşük enerjili (1-3 milligray (mGy)) yüksek çözünürlüklü, yüksek büyütmeli X-ray görüntüler sağlamak için kullanılabilir IVIS Lumina XR (Kaliper Araçlar) kullanımını açıklar SKY aşağıdaki zaman fare üzerinde arka bacak kemikleri. Önemli kemik yoğunluğu kaybı, yaralanmamış bir şekilde, aynı yaştaki kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, post-spinal transeksiyonu 10 gün süresince tibialar farelerin görüldü (naif) fareler (% 13 azalma, p <0.0005). Proksimal femur yoğunluğu kaybı 40 gün yaralanma (% 7 azalma, p <0.05) kadar algılanamaz iken distal femur kemik yoğunluğu kaybı, aynı zamanda günde 10 SKY sonrası tarafından algılanamaz. SCI-bağımlı fare femur yoğunluğu kaybı, kemik yoğunluğu ölçümleri için Dual-enerji X-ray Absorbsiyometri (DXA), geçerli "altın standart" kullanımı ile post-mortem teyit edildi. Biz farelerin IVIS Lumina XR kullanarak 40 gün SKY sonrası femur BMC kaybı% 12 algılar. Bu olumlu fare femur post-mortem 30 gün SKY sonrası ⁹ DXA analizinde kullanılan önceden bildirilen BMC Picard tarafından% 13.5 kaybı ve arkadaşları ile karşılaştırır. Bizim sonuçlarımız IVIS Lumina XR bir roman, SCI aşağıdaki fare arka ekstremite kemik yoğunluğu, uzun vadeli, uzunlamasına ölçümler yapmak için high-resolution/high-magnification yöntemi öneririz.

1. Fare spinal transeksiyonu modeli

1. Yetişkin, erkek, C57BL6 fareler (yaklaşık 20-25 gr), ketamin (200 mg / kg) ve ksilizin bir arada kullanarak anestezi (10 mg / kg). Tüm cerrahi işlemler, steril koşullar altında bir Kurumsal IACUC onaylı cerrahi seti yapılır.
2. Bir kez derin anestezi, arka kürk elektrik kesme makineleri kullanılarak kesilmiş. Traş arka% 70 etanol ile takip iyot çözeltisi ile ilk temizlendi.
3. Ilk kesi önce, kesilecek arka alanda ilk ameliyat sonrası ağrı en aza indirmek için bir konsantrasyon (% 0,25 <1ml/kg), bir lokal anestezik (Marcaine) ile infiltre edilir.
4. Küçük bir makas kullanarak, küçük bir delik L2 alanı çevresinde deride yapılır. Bu açılış, T2 alanı boydan boya uzanan, aynı makas ile genişletilir. Cilt kenarları daha sonra bulldog kelepçeler kullanımı yoluyla ayrı tutulur.
5. Micro-makas kullanılırtorasik seviye 8 (T8) dorsal spinal lamina kas dokusu temizlemek için. Kuh ve Wrathall (1998) ¹⁰ açıklandığı gibi T8 tespit edilebilir. Kısaca, T13, dorsal spinöz işlemi tarafından tespit edilebilir. # 5 Dumont forseps bir çift kullanarak, son kaburga palpe / tanımlanır ve T8 için geri sayılır olabilir. Gümrükten geçtikten sonra kemik Rongeurs T8 dorsal laminektomi gerçekleştirmek için kullanılır.
6. Tam Spinal transeksiyonu Lezyon sonra omurilik sterilize mikro-makas ek bir cerrahi bir mikroskop altında kablosu uzun eksenine dik düzlem omurilik sever için kullanılır, T8 az maruz kalmaktadır. Biz nazikçe lezyonun eksiksiz onaylamak için omuriliğin bir kutup kaldırmak için # 5 Dumont forseps kullanırlar.
7. Spinal transeksiyonu, steril serum fizyolojik ile ıslatılmış steril gelfoam küçük bir parça (% 0.9) ardından dikkatli bir hemostaz teşvik etmek lezyon boşluğuna yerleştirilir.
8. Gelfoam ek bir parça daha sonra maruz kalan Spin üzerine yerleştiriliral kablosu. Deri daha sonra steril, paslanmaz çelik cerrahi zımba ile kapatılır. Daha sonra denekler evlerinde kafeslerde iade yatak malzemesi aspirasyonu önlemek için kağıt havlu üzerine yerleştirilir ve yaklaşık 12 saatlik bir süre için ısıtma pedi ile ısındı. Hastalar da erken kurtarma sırasında kendi kafeslerinin katta Hidrojel paketleri (ClearH2O) ve gıda pelet ile sağlanır. Sakat konularda evlerinde kafeslerde gıda / su bir kez anestezi kurtarıldı erişmek mümkün.
9. Tüm yaralı konularda çalışma süresi (40 gün), manuel Crede yöntemi bir değişiklik kullanarak günde iki kez elle mesane tahliyeler (yaklaşık 12 saat aralıklarla) alırsınız.
10. Yaralı fareler aynı zamanda hidrasyon korumak yardımcı olmak için üç gün (0.5 cc) için, tuzlu su 0.9%, günde iki kez intraperitoneal enjeksiyonu ile verilir ve opiat buprenorfin iki günlük enjeksiyonlar bir süre için ameliyat sonrası ağrı kontrolü için (0.05 mg / kg) 5 gün. Hayvanları işaretler o gösterirlersef ağrı, ilk 5 günlük bir süre sonra, ağrı belirtileri (ele hareketliliğin azalması, hunched boy, damat, seslendirme başarısızlık) kadar günlük ek buprenorfin (0.05 mg / kg) alacak giderilmiştir.

2. Spinally transeksiyon fareler aynı kohort IVIS Lumina XR kullanarak kemik yoğunluğu Boyuna değerlendirme

1. Gün 10 SKY sonrası başlayan ve 40 gün kadar 10 gün aralıklarla devam eden, sağ ve sol femur ve yaşam süresince tibialar, anestezi konular (transeksiyonu SCI ve yaralanmamış bir şekilde yaş eşleştirilmiş kontrol grubu) değerlendirdi.
2. Tarama gününde, denekler evlerinde kafeslerde Kurum Vivarium alan kaliper IVIS Lumina XR ev sahipliği olduğu odaya transfer edildi. Tüm denekler, daha önce SCI teslim kullanılan aynı Ketamin / ksilizin kokteyl ile daha sonra anestezi. Bu kokteyl, 1 ila 1.5 saat arasında bir süre için anestezi durumuna sağlar; scann süresi için yeterliing prosedür.
3. Araştırmacı Lumina XR cihazı başlatır ve dahili kamera, çalışma sıcaklığı (-90 ° C) (~ 10 dakika) ulaşmasını sağlar.
4. Bir kez anestezi, konuyu (transection veya kontrol) hafifçe Lumina XR içinde hayvan platform üzerinde yer almaktadır. Femur ve tibia bölgelerinde (yüksek büyütmeli objektif ile görüntüsü 2.4X2.4cm Alanı) hem de yüksek büyütme lens odak izin cihazın içine sokulur. Konu yanlış görüş alanının dışına yerleştirilmiş ise, kapı açılır ve sol ya da sağ arka ekstremite merkezli kadar (arka bacak uygun yerleşimi için Şekil 2a) yeniden konumlandırılan konu.
5. Doğru konumda, X-ray işlevi yürütür. Hayvan için uygun (Oturma konu, 35 Kv 100uA, X-Rays süzülmüş) Enerji açılan listesinde bir seçim yapın
6. Hayvan doğru pozisyonda sonra, check-işaretleme X-Ray X-ray özelliği etkinleştirmekkontrol paneli. X-ray görüntü elde edin. Tüm femur ve tibia (bkz. Şekil 2b) görünür olduğundan emin olun. Ham görüntü verileri otomatik olarak sabit diske kaydedilir. Temsilcisi. TIFF dosyaları da kaydedilir. Fare, sonra eve kafes döndü ve araştırmacı gözlem altında kurtarmak için izin verilir. Süreç, daha sonra sonraki fare ile tekrarlanır.
   Not: The Living Image yazılımı, varsayılan olarak dönüştürülmüş X-ray görüntüler. Düzeltmeler / Filtreleme araçları, X-Işını Absorbsiyon ham X-ray görüntüleri görüntülemek için, yanındaki onay işaretini kaldırmak . X-ray veri emilimi için giderilmiştir, bağıl kemik yoğunluğu ölçümü ROI'ler sinyal intensitesi karşılaştırarak değerlendirmek. ROI yoğunluğu artan doku yoğunluğu ile artar.

3. IVIS X-ray taramaları Görüntü analizi

1. Yaşayan Görüntü simgesine çift tıklayarak yazılımı açın.
2. Tıklayarak bir X-ray görüntü yükleyin Tara düğmesine basın. Görüntülenen iletişim kutusunda, faiz klasörü seçin ve Tamam'a tıklayın. Yaşam Görüntü tarayıcı kullanıcı kimliği, etiket bilgileri ve kamera yapılandırma bilgileri ile birlikte seçilen verileri görüntüler. Aşağıdaki verileri açmak için birini yapın: veri satırı çift tıklatın, veri adını sağ tıklatın ve kısayol menüsünde Yük seçin, veri satırı seçin ve Yükle'yi tıklatın ya da minik resmini çift tıklatın . Görüntü ve Aracı Paleti görüntülenir. Açık veri tarayıcı yeşil vurgulanır.
3. Aracı Paleti ROI Araçları tıklayın. ROI Araçları Türü açılan listesinden seçin Ölçüm ROI. Bu deneyde kullanılan 3 ROI yüklemek için, Kare simgesini tıklatın ve yük 3 kareler.
4. Bir cetvel kullanarak, femur uzunluğunu ölçmek. Toplam femur uzunluğu 1 / 8 ^inci karelerinin iki uzunluğunu ayarlayın. Toplam femur uzunluğu 1/24th bu iki kare genişliğini ayarlayın. Cetvel ile, 1 / 8 ölçü femur proksimal ucundan mesafe ^inci ve kare femur içinde ortalanmış şekilde bulunurdu. Femur distal ucu (Şekil 3) elde edilen toplam femur uzunluğu 1/4th yatıyor böylece ikinci kare bulunurdu. Bu ROI hem proksimal ve distal femur bölgeleri ölçmek için kullanılabilir.
5. Cetvel kullanarak, tibia uzunluğu ölçer. Tibial toplam uzunluğunun 1 / 8 ^th olmak için üçüncü kare uzunluğu ayarlayın. Genişliği, toplam tibial uzunluğu 1 / ³⁰ th ayarlayın . Kare bulunurdu çok merkezli ve 1 / 8 ^th toplam uzunluğu, tibia proksimal sonunda (bkz. Şekil 3) tibia mesafe olduğundan emin olun .
6. (Bir kalem ve cetvel) Ölçü simgesini tıklayın. ROI yoğunluğu ölçümleri, X-ray görüntü görünür ve ROI ölçümleri tablo görünür. Bu tablo t İhracat. csv dosyası olarak istenen konuma o. Bu excel kullanarak tablo açmak için izin verecektir.
7. Tüm kaydedilmiş görüntüler ile bu işlemi tekrarlayın.
8. Bir excel kağıda tüm verilerinizi birleştirin. Microsoft Excel veya SigmaPlot 11.0 yazılımı (Systat Yazılım) ya da öğrenci t-testi ile istatistiksel anlamlılık tespit edildi.

4. Post-mortem kemik yoğunluğu analizi:

1. IVIS Lumina XR içinde son uzunlamasına X-ray tarama satın alınmasının ardından, fareleri Beuthanasia (pentobarbital 75 mg / kg) ile daha sonra derin anestezi. Derin anestezi sağlandıktan sonra, farelerin transcardially buzlu-soğuk ile perfüze olan fosfat tamponlu salin heparain (40 mg / litre) ile asıl bulbus olfaktoryusları alındı.
2. Bir kere exsanguinated, tüketim hem de femur. Yoğunluğu ölçümü ¹¹ etkiler kanıtlanmıştır için, mümkün olduğunca yumuşak doku kaldırmak için özel dikkat edin. Suya batırılmış gazlı bez ve mağaza ile femur sarın-20C onları analiz etmek için hazır olana kadar.

5. Hologic QDR 4000 Kemik Dansitometre kullanarak DXA Analizi

1. Çözülme gazlı bez bulanmış femur ve Kemik Dansitometre, takımı için transfer.
2. Üretici protokolüne göre cihazın kalibre, BMC ve BMD değerleri kabul edilebilir sınırlar içinde kalan emin.
3. Makine pirinç kolimatör yerleştirin. Bu kullanıcı, belirli bir hedefe odaklanmak için X-ışını boyut ve açı sınırlamak için izin verir.
4. Batmak, su (sol kondiller, yatağa paralel femur) ve sadece lazer sağ konumu ile dolu bir Petri kabı içine çözülmüş femur.
5. Femur taramak için bir Özgeçmiş (hayvan kimlik bilgileri, tedavi, vb içeren açıklayıcı bir başlık) girin.
6. Seçimler Menü Tarama girin, sonra regionA hi-res seçin. Tarama parametrelerini belirtiniz: 0,01 inç satır aralığı ve 0,00499 inç nokta çözünürlüğü ile, 2 x 0,7489 inç bölgesi tarama.
   Not: Monitör tarama devam ederken. X-ışını tarama, örnek tarar olarak, kemik örneği tamamen karşılamak için yeterli su haznesi olduğunu sağlamak için monitör.
7. Analiz Seçim menüsü altında analiz girin. Bir yatırım getirisi olarak tüm femur vurgulamak için yönergeleri izleyin. Bir rapor sayfası hesaplanan BMC (gram) ve BMD (gr / cm ²⁾ ile gelecektir.
8. Kalan femur analiz etmek için bu adımları yineleyin.
9. Tüm verileri bir excel kağıda pekiştirmek ve istatistiksel analiz (t-testi).

6. Temsilcisi Sonuçlar:

Naif farelere göre, omurilik hasarı sonrası bir fare tibia ve femur bağıl kemik yoğunluğu kaybı yukarıdaki yöntemi kullanarak saptanabilir. , Kemik yoğunluğunda saptanabilir belirgin azalma sonra40 gün% 15 kadar kemik yoğunluğu kaybı (p <0.0005, Şekil 4) ile sadece 10 gün (% 12, p <0.0005). 40 gün yaralanma (% 7 azalma, p <0.05, Şekil 5) femur kemik yoğunluğu kaybı gözlendi. Bu sonuçlar, omurilik hasarı sonrası kemik yoğunluğu değişim uzunlamasına gözlem için non-invaziv x-ray görüntüleme kullanımı için kanıt.

Şu anda ne bu yöntemin etkinliğini karşılaştırmak amacıyla, 40 gün DXA görüntüleme kullanarak yaralanma sonra bu farelerin eksize femur analiz. Veri çıkışı temsili Şekil 6 görülebilir. Biz orada kemik mineral içeriği ile kıyaslandığında önemli bir kayıp SKY farelerde naif (% 12 azalma, p <0.05, Şekil 7). Kemik mineral yoğunluğu önemli bir değişiklik, ancak benzer bir eğilim (Şekil 8) takip etmedi. Bu sonuçlar literatürde bulunan benzer; Picard ve ark BMC% 13.5 'lik bir azalma (p <0,001) görülmektedir, ancak hiçbir önemli decrBMD (Picard 2008) kolaylığı.

Şekil 1. Deneysel Zaman Çizelgesi.

Şekil 2 sol arka ekstremite Temsilcisi yönelim: a) fotoğraf ve b), x-ray.

Şekil 3 proksimal femur ve tibia bölgeler içinde yatırım getirisi boyutları ve yönlendirme.

Şekil 4 SKY proksimal tibia 10, 20, 30 ve yaralanma sonrası 40 gün sonra kemik yoğunluğu kaybı (n = 5) yaş eşleştirilmiş Naifler göre (n = 5). Hata çubukları SEM temsil eder; ** p <0.005, *** p <0.0005.

Şekil proksimal femur SKY sonra 5. Kemik yoğunluğu kaybı, yaralanma sonrası 10, 20, 30 ve 40 gün (n = 5) yaş eşleştirilmiş Naifler (n = 5) ile karşılaştırıldığında . Hata çubukları SEM temsil eder; * p <0.05.

Şekil 6, 10, 20, 30 ve 40 gün yaralanma sonrası distal femur SKY sonrası kemik yoğunluğu kaybı (n = 5), yaş olarak eşleştirilmiş naif kontroller ile karşılaştırıldığında (n = 5 ). Hata çubukları SEM temsil eder; * p <0,01-0,05; ** p <,001-,01; *** p <0,0001-,001; **** p <0.0001.

Şekil 7, BMC ve BMD çıkış gösteren DXA veri Temsilcisi görüntü .

Şekil 8 DXA SKY farelerin femur kemik mineral içerik analizi (gram) 40 gün sonrası yaralanma (n = 5) vs yaş eşleştirilmiş Naifler (n = 5).Hata çubukları SEM temsil eder; * p <0.05.

Şekil 9 SKY farelerin femur kemik mineral yoğunluğu DXA analizi (mg / cm ²⁾ 40 gün yaralanma (n = 5) vs yaş eşleştirilmiş Naifler (n = 5). Hata çubukları SEM temsil eder; anlamlı bir fark.

Bu çalışmada, kaliper IVIS Lumina XR görüntüleme sistemi kullanarak, farelerin tek bir kohort içinde, boyuna bireysel kemiklerin içindeki yoğunluğu değişimleri (süresince tibialar ve femur) değerlendirilmesi için yeni bir, non-invazif yöntemi sunar. SKY yaştaki, yaralanmamış bir şekilde, kontrol fareleri ile karşılaştırıldığında 40 günlük analiz dönemi boyunca spinally transeksiyon fareler tek bir kohort içinde çalışılan, her iki femur ve süresince tibialar kemik yoğunluğunda azalma üretti. Femur Bizim sonuçları kaliper Instruments IVIS Lumina XR uygulama, kemik kaybı, SCI uzun süreli ve ilerleyici etkilerini değerlendirmek için hassas bir ölçme aracı olarak hizmet edeceği öne DXA kullanımı yoluyla, post-mortem, teyit edildi .

Bu sistemi kullanarak araştırmacılara potansiyel bir yararı boyuna SKY aşağıdaki hayvanların arka bacak kemikleri patolojik değişiklikler gelişimini takip etme yeteneğidir. Uzun süreler boyunca tek bir kohort değerlendirmek için yeteneği sağlar st1) hayvan alım ve uzun süreli bakım ile ilgili maliyetler: açısından araştırmacı Rong avantajları. Ek olarak, zamana bağlı değişiklikleri değerlendirmek amacıyla belirli zaman noktalarında kurban gerekir hayvanların çok sayıda gerektiren bir çalışma yerine, bu patolojik sonuçların değişkenliği, aynı zaman dilimi, 2 içinde aynı kohort) içinde takip edilebilir: kontrol kohortlarında ile karşılaştırılması, yaralı konuların tek bir kohort içinde oluşturulan sonuçlarının değerlendirilmekte ve çalışmanın kapsamı boyunca aynı hayvanlar için zaman noktaları arasında karşılaştırıldığında; bir kez daha, hem hayvan içi değişkenliğin yanı sıra, daha büyük için ihtiyacı azaltarak deneysel konularda kohortlarında.

1) Bu platform, bize yüksek çözünürlüklü X-ray dat oluşturmak için izin verdi: kaliper IVIS Lumina XR SCI-bağlı osteoporoz gelişimi ile ilgili önemli boyuna bilgileri bize olsa da, dikkate alınmalıdır sınırlamalar vardırSKY aşağıdaki farelerin arka bacak kemikleri, kendi programını, örneğin, fare gibi küçük kemirgenler ile sınırlı olabilir. Lumina XR içinde izin verilen maksimum konu yüksekliği 2,8 cm. O yüksekliğinin üstünde her şey başarıyla Lumina XR, X-ray bileşenini kullanarak görüntülü olamaz. Bizim elimizde, bu, 200-250 gram ağırlığında sıçanlarda çalışma yeteneği engellemediği. Görüntü sıçanlarda, bu ağırlık aralığı ya da diğer kemirgenler, hamster veya Gerbils altında mümkün olsa da, bu PI ek testler isteyecektir. 2) Ortak yönlendirme. Araştırmacı dikkatle görüntüleme oturumları arasında başarılı bir karşılaştırma izin kolayca tekrarlanabilir bir yönde bacaklarda düzenlediğiniz kritik öneme sahiptir. Uzuv yerleştirme Standardizasyon Araştırmacı standardize ROI kaydedilir ve hem konu ve zaman boyunca uygulanan olabilir üretmek ve uygulamak için izin verecektir.

Genel olarak, biz IVIS Lumina XR modeli ile mükemmel bir platform oluşturduğuna inanıyoruzFarelerde SCI-bağımlı osteoporoz gelişimi. Aynı fare kohort içinde uzunlamasına kemik kaybı çalışma yeteneği bize sağlayacaktır: 1) daha iyi keşfetmek) bu değişiklikler zaman, 3 üzerinden stabilize olup olmadığını belirlemek), SCI, 2 sonra temporal kemik kaybı ve demineralizasyon doğasını anlamak, durumu transgenik ve boş fare hatları, büyük olasılıkla en önemli avantajı, bu indirgemeci bir şekilde patolojik değişiklikler ve 4 altında yatan moleküler mekanizmaları) çalışma yeteneği, roman müdahaleler ya da erken dönemlerinde osteoporoz gelişimini önlemek için tasarlanmış test etmeye başlamalıyız yaralanma ya da osteoporoz zaten gelişmiş bir kez, bu tür değişiklikler tersine çevirmek için. Son olarak, Lumina XR, mükemmel bir X-ray görüntüleme potansiyelini sağlamanın yanı sıra, aynı zamanda yaşayan hayvanlar hem de bioluminescent ve floresan sinyalleri incelemek için kullanılan olabilir. Bir kolay bir mul bakmak için bu sistem içinde sunulan diğer yöntemleri içeren düşünebilirizSKY veya diğer herhangi bir hastalık sürecinin ardından mekanistik kemik dinamiklerini belirlemek faktörlerin lerin osteoporoz ile sonuçlanır.

Çıkar çatışması ilan etti.

Biz Misyon bağlayın ve Gillson Longenbaugh Vakfı bu proje için fon sağlamak için teşekkür etmek istiyorum. Biz de onu kritik tavsiye Dr. Catherine Ambrose teşekkür ediyor ve onu DXA ekipman kullanmak istiyorum. Son olarak, biz DXA femur kemik analizi Bütünleştirici Biyoloji ve Farmakoloji Anabilim Dalı, Dr. Kaori Ono, onun önerileri için teşekkür etmek istiyorum.