Визуализация и монтаж легких листов для ранних эмбрионов данио-рерио

Несмотря на внутреннюю асимметрию вдоль лево-правой оси, у большинства высших организмов внешние структуры, такие как скелет и мышцы, развиваются симметрично. Используя эмбрионы рыбок данио, мы сочетаем визуализацию в реальном времени с высоким разрешением, количественный анализ и теоретическое моделирование для изучения принципов установления симметрии. Эта область в значительной степени зависит от различных методов микроскопии для визуализации развивающихся эмбрионов с высоким пространственно-временным разрешением с последующим количественным анализом полученных изображений.

Различные формы микроскопии обеспечивают уникальные преимущества. Тем не менее, в последнее время световая листовая микроскопия и живая микроскопия со сверхвысоким разрешением значительно продвинули наше представление о динамических процессах в эмбриональном развитии. Традиционная конфокальная и многофотонная микроскопия часто приводит к фотообесцвечиванию и фототоксичности, в дополнение к ограниченному полю зрения при визуализации живых эмбрионов.

Многоракурсный световой микроскоп решает эти проблемы, обеспечивая более длительное время наблюдения и вращение образца. Тем не менее, остаются проблемы с подготовкой образцов и монтажом для визуализации с использованием этого метода. Основным ограничением успешного сеанса визуализации является правильная установка и ориентация образца.

В этой статье мы описываем стратегии сбора ранних эмбрионов данио-рерио для визуализации в многоракурсном световом микроскопе, а также общую процедуру получения и реконструкции многоракурсных изображений.