Выделение, культивирование и характеристика стволовых клеток пульпы зуба из молочных и постоянных зубов человека

Начните с фиксации удаленного зуба на месте с помощью зубных щипцов. Затем вырежьте зуб с помощью алмазного диска, соединенного со стоматологическим наконечником и водяной охлаждающей жидкостью. С помощью стоматологического экскаватора удалите ткань пульпы зуба.

Далее с помощью стерильного хирургического лезвия аккуратно измельчите ткань пульпы на мелкие фрагменты. Затем поместите эти фрагменты в мини-измельчитель для тканей с PBS, чтобы образовалась однородная смесь. Переложите фрагменты измельченной ткани в пробирку объемом 15 миллилитров и переварите их с помощью смеси коллагеназы первого типа и диспарируйте.

Инкубируйте ткань в ферментной смеси при температуре 37 градусов Цельсия в течение двух часов. После инкубации нейтрализуйте ферменты. Затем переложите переваренную ткань в 15-миллилитровую пробирку и крутите при 300 G в течение пяти минут при комнатной температуре.

Затем осторожно выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу в свежем DMEM, дополненном 10-20% FBS. Для культивирования клеток осторожно переложите клеточную суспензию в культуральную колбу площадью 25 квадратных сантиметров. Инкубируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия в 5% углекислом газе.

Через два-три дня с помощью стерильной серологической пипетки осторожно отсадите среду и замените ее свежей средой. Затем для характеристики DPSC включите проточный цитометр и подтвердите природу мезенхимальных стволовых клеток выделенных клеток. Успешная дифференцировка DPSC в остеобласты, адипоциты и хондроциты подтверждает мультипотентную природу DPSC.

Время удвоения DPSC соответствовало таковому, о котором сообщалось для мезенхимальных стволовых клеток, что свидетельствует о здоровой и пролиферативной популяции клеток. Анализ проточной цитометрии показал, что большинство DPSC были положительными на CD-90, CD-73 и CD-105, подтверждая их идентичность как мезенхимальных стволовых клеток. Более того, менее 2% клеток были положительными на CD-34, CD-45 и HLADR, что подтверждает отсутствие значительной контаминации гемопоэтических или эндотелиальных клеток.