Двухэтапная безметная изоляция митохондрий для улучшения обнаружения и количественного определения белка

Наша лаборатория изучает изменения в митохондриях и энергетическом обмене, а также то, как они влияют как на здоровые, так и на патологические процессы, такие как активация иммунитета, рак или нарушения обмена веществ. Наша цель состоит в том, чтобы помочь разработать новые методы лечения широкого спектра заболеваний, обеспечивая лучшее понимание функции митохондрий и энергетического обмена. Такие инструменты, как протеомика на основе масс-спектрометрии, метаболомика и генетические скрининги CRISPR-Cas9, становятся все более популярными для выявления молекулярных механизмов как в функции митохондрий, так и в энергетическом метаболизме в определенных типах клеток и средах.

В отличие от других методов, в нашем протоколе используются два этапа очистки: дифференциальное центрифугирование и иммунный захват для выделения митохондрий. Это дает несколько преимуществ, таких как улучшенное удаление загрязняющих веществ, а также является мощным инструментом для идентификации новых митохондриальных белков. Наш протокол дает представление о составе и, следовательно, о функции митохондрий в различных типах клеток и средах.

Это может помочь нам лучше понять нормальные процессы, такие как активация иммунитета, а также патологические процессы, такие как рак. Мы сосредоточимся на митохондриальных макрофагах. Мы проверим, как меняется состав митохондрий во время иммунного ответа, чтобы лучше понять их функцию.

Наши результаты могут привести к разработке лекарств, например, с противовоспалительным действием.