Долгосрочные исследования и использование биоконтролирующего агента зависят от наличия эффективных и экономичных методов выращивания, и этот протокол доказал свою эффективность для выращивания этого паразитоида. В настоящее время существует огромный интерес к выращиванию этого паразитоида для исследований или полевого высвобождения, и протокол принесет пользу будущим долгосрочным исследованиям и использованию этого многообещающего агента биоконтроля. Первым пользователям может потребоваться понять некоторую базовую биологию вовлеченных насекомых, прочитав соответствующие ссылки, приведенные в статье, и некоторые практики методов.
Для составления диеты хозяина, во-первых, подготовьте жидкую часть диеты, как описано в рукописи. Затем добавьте от 25 до 30 граммов протертой черники в пустую 250-миллилитровую колбу. Затем налейте жидкость в колбу с жидкостью, просто покрывающей верхнюю часть протертой черники.
Далее, для выращивания хозяина Drosophila suzuki, сначала вырежьте кусок впитывающего бумажного полотенца и закрутите его в центре. Затем поместите скрученный средний участок бумажного полотенца в диетическую колбу. Для удержания влаги используйте дистиллированную воду, чтобы намочить бумажное полотенце и диету.
Затем, чтобы перенести половозрелых взрослых мух, осторожно снимите пробку колбы колонии мух и переверните ее в колбу диеты. После недели этого воздействия держите мух в экологической камере в течение трех недель для появления мух. Чтобы подвергнуть личинку хозяина воздействию паразитоидов, сначала удалите взрослых мух и бумажное полотенце из колбы, оставив яйца мух и личинки.
Чтобы служить подложкой для окукливания личинок, сложите новое впитывающее бумажное полотенце и вставьте его в колбу. Затем аспирируйте шесть женских и мужских пар паразитоида G3 Ganaspis brasiliensis в колбу и проведите тонким слоем меда на дне пенной пробки. Для сбора и хранения паразитоидов удаляют взрослых через пять дней.
Затем храните колбу в экологической камере в течение 35 дней в условиях, упомянутых ранее. При появлении взрослых ос аспирируют их три раза в неделю. Для удержания ос сначала поместите бумажное полотенце, смоченное, но не насыщенное дистиллированной водой, на дно флакона Drosophila размером 2,5 на 9,5 квадратных сантиметров.
Затем переложите во флакон около 60 ос и отметьте дату появления. Храните флакон в экологической камере. Два раза в неделю наносите тонкий слой меда на дно пенной пробки флаконов.
Во-первых, организуйте крупномасштабное выращивание Drosophila suzuki, поместив от 1 500 до 2000 половозрелых взрослых мух в соотношении полов 50:50 в большую, вязаную, покрытую сеткой клетку. Затем поместите в клетку тарелку с пропитанным водой хлопком и четыре-шесть чашек Петри со стандартной средой дрозофилы. Два раза в неделю заменяйте открытую посуду Петри на свежую.
Поместите каждую зараженную чашку Петри без крышки в 800-миллилитровый пластиковый стаканчик и накройте чашку мелкой сеткой. Затем высиживают чашки при 23 градусах Цельсия и относительной влажности 75% в течение 12-15 дней. После инкубации перенесите недавно вылупившуюся взрослую Drosophila suzuki в клетку для выращивания.
Далее начинают подготовку личинок хозяина с промывки черники в холодной воде на одну минуту и замачивают плоды в тазу, наполненном раствором отбеливателя, разбавленном до 5% в течение трех минут. Затем наполните девятисантиметровую посуду Петри вымытой черникой. В поздние послеобеденные часы положите чашки Петри в клетку для выращивания и оставьте их на ночь.
На следующее утро осторожно постучите по чашке Петри, чтобы выбить мух из плодов и удалить плоды из клетки для выращивания. Тем временем подготовьте клетку паразитизма и клетку появления ос для паразитоида G1 Ganaspis brasiliensis. Обе клетки должны иметь тонкую нить ниже потолка для подвешивания одного или нескольких кормушек.
В каждой клетке подвешивайте флакон Drosophila, содержащий воду, и герметизируйте с помощью ацетатной пробки целлюлозы вверх ногами от потолка каждые пять-семь дней, в зависимости от относительной влажности. Сразу после извлечения зараженной черники из клетки Drosophila suzuki поместите ее в клетку паразитизма с 1 500 до 2000 ос Ganaspis brasiliensis на два-три дня. Затем соберите плоды в 800-миллилитровый пластиковый стаканчик с абсорбирующей бумагой внизу.
Высиживать открытую чашку в клетке всходов или эклозии при 21 градусе Цельсия и относительной влажности 65% в течение не менее 28 дней. В течение второй и третьей недель инкубации еженедельно проверяйте клетку на раннюю эклозию хозяина. Чтобы облегчить последовательный сбор паразитоидов, удалите взрослых мух.
В конце четвертой недели инкубации обеспечьте в клетку кормушку и источник воды. Соберите от 10 до 15% взрослых ос и переведите их в клетку паразитизма, чтобы заменить старых и непродуктивных ос. Из оставшихся ос клетки эклозии храните до 700 взрослых особей в соотношении полов 50:50 с 800-миллилитровым пластиковым стаканчиком, содержащим двухмиллилитровую трубку, заполненную водой и запечатанную зубным ватным рулетом на дне чашки.
Храните чашку с выраженным всходовым состоянием в экологической камере до одного месяца. Для транспортировки паразитоидов поместите около 200 взрослых особей в коническую трубку объемом 50 миллилитров. Затем поместите все трубы в изолирующий транспортный контейнер вместе с пакетами со льдом.
Этот протокол привел к успешному мелкомасштабному выращиванию G3 Ganaspis brasiliensis, паразитоидного агента, против сельскохозяйственного вредителя Drosophila suzuki в лаборатории. На производство потомства не повлияли различия в плотности паразитоидов и времени воздействия. Крупномасштабное поколение G1 Ganaspis brasiliensis также может быть достигнуто, причем производство началось через пять недель после первоначального воздействия хозяина Drosophila suzuki.
С 8 по 22 неделю паразитоидная продукция стала пропорциональна количеству фруктов, подвергшихся их воздействию. Критически важно поддерживать подходящую температуру выращивания, контролировать влажность и всегда обеспечивать пищу для взрослых насекомых. Методы могут быть дополнительно улучшены путем оптимизации плотности выращивания хозяина и паразитоида для максимального размножения ос и изучения возможности выращивания этого паразитоида на альтернативных хозяевах.
