Модели пересадки гортани были описаны у мышей и крыс. Предыдущая работа Старшего альтера была сосредоточена на разработке более эффективного метода с использованием донорских сонных артерий для анастомоза, устраняя необходимость рассечения верхних артерий щитовидной железы. В этом видео мы описали эту процедуру на мышах.
Эта модель трансплантации гортани мыши позволяет проводить иммунологические исследования с легкостью и по низкой цене. Хотя технически эта процедура более сложна из-за меньшего размера сосудов по сравнению с моделью крысы, она может быть выполнена примерно за три часа, если получено знакомство с хирургическими шагами. После того, как животное будет полностью обезболено, перенесите мышь в зону бритья, где 1,5% изофлурана с одним литром в минуту потока кислорода будет доставлено через маску для лица для поддержания анестезии.
Подтвердите глубину анестезии ущемлением пальца ноги. Побрейте грудь и шею мыши до линии челюсти и нанесите крем для удаления волос. А через 30 секунд протрите крем и перенесите мышь в хирургическую область.
Обездвижьте мышь и трижды подготовьте хирургическую область повидоном-йодом и спиртом, затем задрапируйте мышь. Сделайте небольшой горизонтальный разрез, чуть превосходящий надгрудничную выемку. Используя тонкие ножницы, поднимите кожу двусторонне через этот разрез до нижней челюсти и иссечь трапециевидный сегмент кожи.
Иссечение двусторонних слюнных желез с помощью прижигания в верхней части, где визуализируется небольшая вена, проходящая через железу. Рассекают двусторонние грудино-ключично-сосцевидные мышцы из окружающих тканей и втягивают их латерально. Сделайте разрез средней линии на мышцах ремешка и двусторонне иссекните их, чтобы не повредить подлежащую щитовидную железу и оставив ее на ларинготрахеальном пищеводном или LTE-комплексе.
После этого шага видны двусторонние сонные артерии. По окружности рассекают общие сонные артерии до уровня ключицы ниже и до уровня бифуркации сонной артерии выше. Блуждающий нерв и внутренняя яремная вена рассечены свободно от сонных артерий и не включены в приобретенный трансплантат.
Рассекайте внутренние и наружные сонные артерии достаточно далеко, чтобы иметь возможность связывать и разделять. Используя 10-0 нейлоновых швов, сажают внутренние сонные артерии на два-три миллиметра выше, чем бифуркация сонной артерии. Лигировать наружные сонные артерии не менее чем на три миллиметра выше точки ветвления верхней щитовидной артерии и связывать общие сонные артерии на уровне грудины.
Отрежьте все сосуды для лигата на двусторонней основе. Держите сосудистые ножки поверх комплекса LTE, чтобы избежать случайного повреждения во время дальнейшего рассечения. Чтобы предотвратить утечку газа или непреднамеренную потерю анестезии, убедитесь, что срок годности животного истек, прежде чем делать какие-либо порезы дыхательных путей.
Трансектируйте трахею ниже пятого трахеального кольца и проведите разрез через пищевод вниз к превертебральной фасции, чтобы освободить комплекс LTE ниже. Освободите трахею и пищевод от нижележащей превертебральной фасции от нижней до верхней. Создают переднюю глоточную эктомию, как раз уступающую подъязычной.
Проведите разрез вниз к превертебральной фасции, чтобы лучше освободить комплекс LTE. Разделите все оставшиеся лимфоидные или соединительнотканные соединения между комплексом LTE и окружающими тканями. И, наконец, удалите трансплантат.
Поместите полученный трансплантат в стерильную чашку Петри и вымойте обычным физиологическим раствором, чтобы избавиться от любых сгустков крови. Расширьте двусторонние сонные артерии с помощью одного миллиметра микроразрывников. Используя иглу с тупым наконечником 30-го калибра, введите примерно два миллилитра гепаринизированного физиологического раствора в каждую сонную артерию, чтобы промыть трансплантат.
Кровь и физиологический раствор будут вымываться из контралатеральной сонной артерии и небольших свободных окончаний сосудов, что подтверждает неповрежденные верхние артерии щитовидной железы. Трансплантат можно оставить в гепаринизированном физиологическом растворе и сделать небольшой перерыв на срок до трех часов, прежде чем пересаживать его реципиенту. Подготовьте мышь-реципиент точно так же, как описано для донора после индукции анестезии, бритья и хирургической подготовки.
Вводите мышке-реципиенту анальгетик пролонгированного высвобождения подкожно за 30 минут до начала операции. Используя скальпель, сделайте разрез средней линии шеи, простирающийся от линии челюсти выше грудины ниже. Приподнимите кожу с левой стороны и втяните ее сбоку.
Иссекайте левую слюнную железу, прижигая высшие сосуды, как описано ранее. Иссекайте жировую и лимфоидную ткань, разделяя любые видимые сосуды с помощью низкотемпературного прижигания. Забота о том, чтобы не повредить подстилающую наружную яремную вену.
Рассекните наружную яремную вену по окружности. Используйте не менее пяти миллиметров прозрачной длины сосуда для анастомоза. Рассекните грудиномастоидную мышцу и втяните ее латерально.
По окружности рассекают общую сонную артерию от ключицы ниже до бифуркации сонной артерии. Пропустите фоновый материал под наружную яремную вену и нанесите двойные приближающиеся зажимы сосуда B-3. Поместите нейлоновый шов 10-0 через переднюю стенку наружной яремной вены в месте желаемой монотомии и используйте шов для вытягивания переднего отверстия сосуда.
Нарежьте только глубоко до шва микроножными ножницами, чтобы облегчить создание венотомии правильного размера с одной щелью и обеспечить, чтобы разрез полностью проходил через венозную стенку. Используя иглу с тупым наконечником 30-го калибра, промойте внутреннюю часть вены гепаринизированным физиологическим раствором. Поместите донорский комплекс LTE между левой сонной артерией реципиента и левой наружной яремной веной.
Выровняйте свободный конец донорской левой сонной артерии по направлению к левой наружной яремной вене реципиента и скосите конец с помощью острых ножниц. Используя четыре 10-0 нейлоновых прерванных швов, анастомоз донора левой сонной артерии и реципиента оставила наружную яремную вену сквозным способом. Сдвиньте фоновый материал под общую сонную артерию реципиента и нанесите двойные приближающиеся зажимы сосуда А-3.
Создайте артериотомию таким же образом, как и венотомию. Анастомоз донорской правой сонной артерии к левой сонной артерии реципиента сквозным способом. Использование шести прерывистых швов с 10-0 нейлоном идеально подходит для артериального анастомоза.
Снимите зажимы на венозной стороне. При возникновении кровотечения прикладывайте мягкое давление ватными наконечниками. Снимите зажимы на артерии и сразу же приложите мягкое давление ватными наконечниками.
Некоторое кровотечение ожидается на шаге, которое обычно останавливается через одну минуту при мягком давлении. Проверьте целостность кровотока в артерии в вене. При интактном артериальном потоке обычно наблюдается пульсация донорской сонной артерии, и донорская щитовидная железа изменится от своего покрасневшего прозрачного цвета обратно к своему первоначальному красноватому цвету.
Также может наблюдаться красная окраска малых судов на комплексе LTE. Закройте разрез кожи 5-0 монофиламентным швом в беговой манере. Нанесите на разрез клей для кожи.
Введите один миллилитр теплого физиологического раствора подкожно, чтобы учесть потерю жидкости во время операции. Прекратите анестезию и переведите мышь в клетку восстановления. Наблюдайте за мышью на грелке до тех пор, пока она полностью не проснется, чтобы избежать переохлаждения.
Хирургический успех можно оценить сразу после снятия зажимов сосудов. Рисунок А является репрезентативным для успешной операции, потому что кровоток может быть визуализирован в сонных артериях донорской гортани, а щитовидная железа становится красной. Рисунок B является репрезентативным для неудачной операции, потому что кровоток не может быть визуализирован в сонных артериях донорской гортани, а щитовидная железа осталась бледной.
Через 15 дней при отсутствии иммуносупрессии у большинства реципиентов нет притока крови к трансплантату. Проходимость артерии может быть оценена макроскопически путем рассечения ларинготрахеального комплекса, свободного от окружающих тканей реципиента, и визуализации сквозного анастомоза. Спасибо. Посмотрев это видео, вы должны понять, как гетеротопно пересадить гортанный трахеэзофагеальный комплекс от одной мыши к другой примерно за три часа.
Эта осуществимая и относительно недорогая модель предлагает значительный потенциал в изучении роли иммунной системы в отторжении ларинготрахеального комплекса, тем самым предлагая потенциал для новых методов лечения в трансплантации органов.
