Наш протокол описывает хирургическую процедуру по удалению восходящей полосы аорты в крысиной модели легочной гипертензии из-за болезни левого сердца, которая приводит к обращению вспять легочной гипертензии. Данная методика представляет собой ценный инструмент для изучения механизмов физиологического обратного ремоделирования в легочном кровообращении и правом желудочке. Это может помочь в разработке стратегий лечения легочной гипертензии.
После того, как хирургические инструменты подготовлены, поместите анестезированную крысу в положение лежа на спине на стерилизованном хирургическом столе. Затем зафиксируйте живот и конечности животного клейкой лентой и продезинфицируйте кожу животного раствором повидон-йода/йодофора. Обратите внимание на шрамы и швы от первичной хирургической перевязки аорты, или AoB, хирургии.
После обеспечения достаточной глубины анестезии с защемлением пальцев ног, снимите швы с первичной операции AoB. Затем выполните трахеотомию, сделав разрез средней линии шейки матки длиной от 7 до 10 миллиметров тонкими ножницами. С помощью пары тупых щипцов рассекают мягкие ткани шейки матки, чтобы обнажить инфрагиоидные мышцы.
Затем, расщепляя мышцы в средней линии, визуализируйте трахею. Когда это будет сделано, сделайте двухмиллиметровый разрез трахеи между двумя хрящевыми кольцами, используя угловые пружинные ножницы Noyes, чтобы вставить канюлю трахеи наружного диаметра два миллиметра в трахею. Затем закрепите канюлю шелковым швом 4-0.
Подключите другой конец трахеальной канюли к аппарату искусственной вентиляции легких, сохраняя при этом минимальное мертвое пространство. Держите периоперационную вентиляцию легких с частотой дыхания 90 вдохов в минуту при приливном объеме 8,5 миллилитра на килограмм массы тела. Для распутывания аорты сделайте 20-миллиметровый разрез кожи между вторым и третьим ребрами с помощью мелких ножниц.
С помощью небольших хирургических ножниц распределите и разрезайте мышцы слой за слоем, с последующим выполнением 10-миллиметрового бокового разреза вдоль межреберного пространства между вторым и третьим ребром. Используйте реберный распределитель, чтобы расширить межреберное пространство между вторым и третьим ребром, чтобы создать хирургическое окно. С помощью тупых щипцов отделите тимус от сердца и проведите артерии, чтобы визуализировать аорту с помощью клипсы.
Удерживайте зажим с помощью щипцов с последующим удалением соединительной ткани вокруг зажима, чтобы обнажить аорту. Откройте зажим держателем иглы и извлеките зажим из грудной полости. Перед закрытием грудной клетки вскройте ателектаз легких и обеспечьте адекватный набор легких без чрезмерного растяжения с помощью механической вентиляции, с приливным объемом 9,5 миллилитра на килограмм массы тела в течение 10 минут, и вернитесь к приливному объему 8,5 миллилитра на килограмм массы тела.
Позже закройте глубокие мышцы простым прерванным швом с использованием шелка 4-0, и соедините верхние мышцы простым непрерывным швом. Затем закройте кожу простым непрерывным швом. Отсоедините канюлю трахеи от вентиляционной машины, наблюдая за крысой для спонтанного дыхания.
Если животное не может дышать спонтанно при отключении, снова подключите вентилятор и продолжайте вентиляцию в течение дополнительных пяти минут, прежде чем повторить процедуру. После восстановления спонтанного дыхания удалите канюлю из трахеи и очистите жидкость вокруг трахеи губчатыми точками. Закройте трахею простым швом, используя 6-0 Пролена, и закройте инфрагиоидные мышцы простым прерванным швом с использованием шелка 4-0.
Соедините кожу простым непрерывным швом с последующей очисткой и дезинфекцией мышц и кожи в процессе раствором повидон-йод/йодофор. После завершения хирургической процедуры переместите одно животное в клетку восстановления с дополнительным кислородом и инфракрасной лампой и поместите кислородную маску близко к морде крысы. В исследовании было визуализировано положение клипсы на восходящей аорте у животных AoB и ее отсутствие после дебандирующей, или Deb, операции.
Кроме того, аортальный кровоток оценивали с помощью импульсно-волновой допплерографии до и после клипа у животных AoB до де-полосации и в соответствующих сегментах аорты после операции Deb. Результаты показали выраженное ослабление градиента кровотока в соответствии с функциональным деформированием. На пятой неделе крысы Deb экспрессировали мозговой натрийуретический пептид, или BNP, на уровнях, сопоставимых с фиктивными животными, что указывает на изменение левого желудочка, или LV, недостаточность аорты.
Оценка функции ЛЖ с помощью трансторакальной эхокардиографии выявила увеличение фракции выброса ЛЖ и объема ЛЖ у животных Deb по сравнению с крысами AoB. Операция по дебандированию, выполненная на третьей неделе после AoB, привела к значительному снижению систолического давления левого желудочка и гипертрофии ЛЖ по сравнению с животными AoB. По сравнению с крысами AoB на третьей и пятой неделе, животные Deb также показали значительное снижение систолического давления правого желудочка и гипертрофию правого желудочка, продемонстрировав успешное обращение вспять легочной гипертензии из-за болезни левого сердца.
Наиболее важными шагами в этой процедуре являются удаление клипсы и рекрутирование легкого после деформирования аорты. Эти шаги, при правильном выполнении, увеличивают выживаемость животных.
