Тромбоэластография и мутность анализы два простых и отличительных методов для характеристики сгустка. Эти методы вместе предлагают более полное понимание того, как переменные свертывания влияют на особенности сгустка. Оба этого анализа, не только предлагают анализ сгустка конечной точки, но и привлечь образование сгустка фибрина с течением времени, в отличие от многих других инструментов характеристики сгустка Эти методы могут помочь разработать физиологически релевантную синтетическую платформу сгустка, которая может обеспечить надежную диагностику фибринолитического состояния тромбоза пациентов для мониторинга мутности сгустка с течением времени, использовать любой коммерчески доступный спектрометр, который имеет диапазон абсорбции от 350 до 700 нанометров.
Включите спектрометр и откройте соответствующее программное обеспечение анализа. Затем выберите номер один и откройте вкладку настройки пластины. Нажмите ABS и кинетической для мониторинга динамического поглощения с течением времени.
Выберите 550 нанометров в вкладке длины волны, затем переключитесь на вкладку синхронизации и отрегулируйте общее время выполнения до 60 минут с интервалом в 30 секунд, выберите колодцы, представляющие интерес, подчеркнув их. Pipette 140 микролитров PBS в одну колодец УФ прозрачной пластины 96 хорошо. Затем добавьте 10 микролитров тромбина и перемешайте, немедленно инициировате свертывание, добавив 50 микролитров фибриногена в колодец и пипетки вверх и вниз пять раз, используя только первую остановку пипетки, заботясь, чтобы избежать создания пузырьков.
Поместите пластину в держатель пластины и нажмите прочитать в программном обеспечении, чтобы начать чтение мутности. Когда чтение закончило получение данных мутности и получить кривую отслеживания мутности, замышляя изменение абсорбентов с течением времени, получить максимальную мутность, взяв максимальное значение поглощения кривой с течением времени, а затем вычислить 90%максимальную мутность путем умножения максимальной мутности на 0,9. Получите время для максимальной мутности, вычисляя время от инициации сгустка до 90%максимальной мутности.
Включите тромбоэластографию или анализатор TEG и подождите, пока температура стабилизируется на уровне 37 градусов по Цельсию, затем откройте программное обеспечение TEG и создайте название эксперимента под разделом ID. Нажмите на вкладку TEG и следуйте подсказкам на экране, чтобы провести тест eTest для всех каналов. Затем поместите рычаг обратно в положение нагрузки, как только все проверки будут завершены.
Нажмите на информационную страницу и вввените образец информации для каналов, которые будут использоваться. Поместите четкую чашку TEG без покрытия в соответствующий канал. Сдвиньте перевозчика до верхней и нажмите чашку дно пять раз, чтобы исправить контактный к торсион стержень затем снизить перевозчика и нажмите чашку вниз в базу, пока он не нажмет.
Pipette 20 микролитров раствора тромбина в чашку TEG, а затем инициировать свертывание, добавив 340 микролитров фибриногена в чашку, чтобы получить 360 микролитр свертывания раствора. Смешайте содержимое чашки, трубя вверх и вниз пять раз. Сдвиньте чашку загружен перевозчика вверх переместить рычаг в положение чтения и нажмите кнопку начала в программном обеспечении, чтобы инициировать чтение TEG.
После завершения чтения извлечения параметров и получения кривой трассировки TEG путем построения амплитуды с течением времени. Избрать MA как максимальную амплитуду, что свидетельствует о штамме сгустка и TMA как время для максимальной амплитуды от программного обеспечения. Здесь показаны репрезентативная мутность и кривые отслеживания TEG человеческих и бычьих сгустков фибрина на разных уровнях фибриногена.
Кривые трассировки показывают, что после периода задержки после начала образования сгустка, мутность сгустка или амплитуда сгустка увеличивается с течением времени и выравнивается в конце образования сгустка. Максимальная мутность и время до максимальной мутности являются двумя параметрами, полученными из мутности, в то время как максимальная амплитуда и время до максимальной амплитуды являются производными от TEG. При более высоком уровне фибриногена в растворе свертывания все четыре значения увеличиваются.
Максимальная мутность является оптической мерой структуры сгустка, что свидетельствует о толщине фибринового волокна и плотности фибриновой сети. В то время как максимальная амплитуда является механической мерой, которая отражает абсолютное напряжение сгустка, вместе взятые два значения обеспечивают бесплатное представление о микро-структурах сгустка. Эта процедура демонстрирует упрощенную модель свертывания крови для изучения переменных, которые в основном влияют на полимеризацию фибрина.
Эта модель может быть настроена путем включения дополнительных факторов свертывания для изучения других параметров. Модель свертывания крови может быть легко изменена с помощью клинических образцов плазмы для мониторинга образования тромбов и разочарования в присутствии антитромботических препаратов. Результаты могут направлять терапевтическое управление у пациентов.
