Используя нашу технику, мы можем проверить потенциальные противоэпилептические вещества в образцах человеческого мозга, чтобы помочь в разработке препарата для височной эпилепсии доли. Ткань мозга человека имеет преимущество нарушения трансляционной крышки между фундаментальными исследованиями и клиническими приложениями. В день процедуры или как можно позже накануне, оттепель 50 миллилитров 10x холина aCSF раствора в 37 градусов по Цельсию водяной бане и добавить талый раствор и 50 миллилитров 10x раствора от двух до примерно 300 миллилитров двойной дистиллированной воды.
Добавьте в смесь окончательные концентрации глюкозы и хлорида кальция и перемешайте до растворения. Затем добавьте двойную дистиллированную воду к окончательному объему в 500 миллилитров. Измерьте осмолярность.
И заполнить бутылку с примерно 100 миллилитров 1x холина aCSF. В день процедуры охладите 1x холин aCSF на льду и используйте стеклянный газоотвод, подключенный к карбогеновому газу, чтобы карбогенатировать раствор в течение не менее 10-15 минут. По крайней мере, за 10-15 минут до процедуры, до начала хранения aCSF, высокий калий плюс 4-аминопиридин aCSF, и низкий магний плюс бикукуллин до 35 градусов по Цельсию с карбогенацией.
Чтобы подготовить камеру интерфейса, вырезать два четыре на два сантиметра кусочки фильтровальной бумаги для каждого ломтика удерживаваемого отсека и укладывать куски друг на друга. Затем поместите тонкие хлопчатобумажные струны вокруг кусочков фильтровальной бумаги внутри отсеков, чтобы снять напряжение раствора и обеспечить равномерное течение. И поместите три-четыре 1,5 на один сантиметр кусочки фильтровальной бумаги поверх большего куска фильтровальной бумаги в каждом отсеке.
Прежде чем приобрести ломтики ткани, используйте 70% этанола, чтобы протереть область подготовки и поместить крышку над областью. Поместите супер клей, два острых пинцета, шпатель, скальпель с лезвиями, и лезвие для грубой резки ткани мозга вблизи вибромы. Протрите буферный лоток и образец пластины вибромы с 70%этанола.
Когда буферный лоток полностью высохнет, накройте его алюминиевой фольгой и поместите лоток в ледяную ванну. Заполните ледяную ванну дробленым льдом и поддерживать ванну при температуре минус 20 градусов по Цельсию до подготовки. Затем протрите вибром и лезвие бритвы 70%этанолом и откалибровать вибром, чтобы свести к минимуму любые вертикальные вибрации и повреждения тканей во время процедуры нарезки.
Сразу же после приобретения образца ткани, удалить ткани из транспорта холина aCSF и отрезать любые сожженные части ткани. Вырезать ровную поверхность, чтобы облегчить склеивания ткани кусок на пластину образца и использовать вибром нарезать ткани мозга на 400-микрометров толщиной ломтиками, регулируя амплитуду и скорость вибромы по мере необходимости во время резки. Некоторые части человеческого гиппокампа могут быть более устойчивыми к резке, чем другие.
Принимая дополнительную осторожность и время может значительно улучшить качество выборки. Используйте скальпель, чтобы обрезать ломтики мозга, чтобы вписаться в камеру записи и использовать шпатель и небольшие типсы, чтобы тщательно поместить ломтики на маленькие кусочки фильтровальной бумаги в камеру интерфейса, по крайней мере один час. Для записи эпилептиформной активности поместите полупрозрачную мембрану, приклеенную к пластиковому кольцу, в камеру и соедините трубки притока и оттока камеры с перистальным насосом.
Заполните трубки и камеру предварительно разогретым карбогенированным aCSF. Для подготовки записи электродов, заполнить вытащил один-два мега-hm стеклянные пипетки с 154 миллимолярского раствора хлорида натрия. Поместите пипетки в держатель электрода и используйте пинцет и шпатель для переноса ломтика гиппокампа из камеры интерфейса в чашку Петри, наполненную карбогенированным aCSF.
Удалите фильтровальную бумагу, не переворачивая ломтик и поместите ломтик в камеру записи. Держите ломтик на месте с ломтиком сетки и поместите электроды в области интереса. Начните запись.
Взрыв активности, вызванной высоким калием плюс 4-аминопиридин должны быть видны через две-пять минут после мытья, в то время как индукция захвата, как события с низким содержанием магния плюс бикукуллин может занять до 30 минут. Применение высокого калия плюс 4-аминопиридин вызывает эпилептиформную активность в виде взрывных явлений в течение нескольких минут. Захват, как события с продолжительностью более 10 секунд может быть вызвано с применением низкого магния плюс бикукулин.
Количество взрывных явлений уменьшается как при применении лакосамида, так и при применении диметилетханоламина, хотя амплитуды в основном не затрагиваются. Качество ткани мозга также может быть улучшено за счет уменьшения загрязнения и повреждения во время подготовки. Человеческий мозг ломтики подготовлены с нашими методами также могут быть использованы для исследования основных физиологических функций нейронов с помощью патча зажима или исследовать экспрессию генов с использованием различных методов.
Лаборатории по всему миру начали изучать основные механизмы в человеческом мозге, и эти идеи могут быть использованы для оказания помощи в разработке лекарств и могут быть протестированы с помощью наших предлагаемых методов.
