Установка капиллярной электрофорезной индуктивно соединенной плазменной масс-спектрометрии (CE-ICP-MS) для количественной оценки видов железного редокса (Fe (II), Fe (III))

Чрезмерное железо приводит к свободному редокс-активного железа два с лишним, которые могут вызвать разрушительные последствия в клетке, такие как окислительный стресс и гибель клеток от перекисного окисления липидов известный как ферроптоз. Количественные измерения железа ферросуса и железа являются ключом к более внимательному пониманию этих пагубных процессов. Этот метод CE-ICP-Ms обеспечивает как быстрый анализ, так и низкие пределы количественной оценки, которые необходимы для количественной оценки видов железо-редокса.

Начните с выбора небулайзера с низким объемом самооспирации и подготовки соответствующих частей для установки домашнего интерфейса. Подключите два трехмерных женских сочных разъема с мужским конусом, подключив левый конец нижней полосы люэра к мужскому разъему и мужской разъем к среднему соединению верхнего трехголевого люэра. Затем поместите одну сантиметровую трубку над платиновой проволокой и используйте одну сантиметровую силиконовую трубку для подключения первой трубки и сопла мужского более люэрного разъема.

Зафиксив сборку к среднему соединению нижнего трехоборотного люэр-разъема путем вращения винта. Нажмите одну сантиметровую трубку над выходом капилляра CE и положение на восемь-девять сантиметров от конца, а затем подключить его к сопла мужской соляной разъем с силиконовой трубки. Положите всю сборку через бар верхнего трехоборотного разъема T и исправить мужской разъем люэра и левый конец женского трехоборотного люэра разъем винт вращения.

Затем зафиксировать 25-сантиметровую силиконовую трубку на сопле мужского люэра и зафиксировать всю сборку в нижней части бара от нижнего трехмерного разъема приманки. Плотно нажмите один сантиметр силиконовой трубки, пять миллиметров над концом небулайзера. В то время как второй мужской конус конус разъем подключен к выступающей части трубки.

Переместите часть интерфейса с выступающим ce капилляром к мужскому конусу на небулайзере, затем аккуратно вставьте капилляр через мужской конус и более широкую часть капилляра небулайзера. При необходимости отрегулируйте длину выступающего капилляра, отвинтив левую мужскую люэр, переверев люер с прикрепленными трубками в нужное положение и переустановив его. Верхние женские трехмерные сочные разъемы должны плотно прилегать к мужскому конусу.

По его завершения с установкой приступить к МСП-г-жа Кривые калибровки были созданы для железа три и железа двух видов redox. Пределы обнаружения составили 3,1 микрограмма на литр железа 2 и 3,2 микрограмма на литр для железа три и линейность была продемонстрирована до 150 микрограмм на литр.

Анализ SH-SY5Y Cell Lysate показал несколько более медленный миграцию видов редокса железа из-за несколько более высокой проводимости. Измеренные концентрации железа 3 и железа два составили 330 микрограмм на литр и 84 микрограмма на литр, соответственно. В результате железа два к трем соотношение 0,25.

Наиболее важным шагом этого протокола является тщательная вставка выступающей капиллярной CE через установленный интерфейс и его подходящее позиционирование, связанное с капилляром небулайзера. Представленные здесь методы могут стать перспективным инструментом углубления понимания железозависимых молекулярных процессов. Тщательно разработанные исследования необходимы для проверки, если железо два с лишним, железо три с лишним количественной оценки может служить в качестве потенциального биомаркера для выявления тканей, риску железа опосредованного смертельного повреждения в контексте нейродегенеративных и онкологических заболеваний.