Несмотря на значительные улучшения в терапии, число пациентов, которые развиваются сердечной недостаточности после острого инфаркта миокарда по-прежнему растет. Чтобы наблюдать переход от острого МИ к сердечной недостаточности, нам нужны воспроизводимые модели животных. Мы демонстрируем модель MI, которая относительно проста, воспроизводима и вызывает минимальный дискомфорт для животных.
Кроме того, изолированный сердечный аппарат обеспечивает высоко воспроизводимую подготовку, которую можно изучить в срок и экономически эффективным образом. В сотрудничестве с другими исследовательскими группами по всему миру, мы используем этот метод для уточнения безопасности и эффективности новых препаратов и терапевтических подходов, которые улучшают ремонт миокарда и функции после ДЕМОНСТРАЦИи MI.Visual наиболее важных шагов этого протокола, таких как инотубация или уровень окклюзии LAD может помочь предотвратить общие ловушки. Пошаговое описание позволяет воспроизводить результаты, даже если они выполняются неподготовленными исследователями.
Милат Ичи, лаборант, выполняет измерения рабочего сердца, а Майкл Кох, математик и инженер-электроник, вносит свой вклад в вычислительный анализ. После анестезии крысы, инфубировать его с 14 калибровочных трубки и объем контролируемой вентиляции со смесью кислорода, воздуха и изофлюрана. Поместите крысу на нагретый операционный стол в положении на спине и зафиксировать конечности лентой.
Затем поместите ЭКГ зонды подкожно в конечностях животного. Используйте скальпель, чтобы сделать разрез, начиная два миллиметра парастернал на левой грудной клетке на уровне третьего межреберного пространства и продолжая переднюю подмышную линию на уровне пятого межреберного пространства. Аккуратно переместите поверхностные мышцы так, чтобы можно было увидеть ребра.
Выполните торакотомию на уровне четвертого межреберного пространства и вставьте ретрактор, чтобы получить видимость сердца и легких. Затем осторожно откройте перикард, чтобы избежать кровотечения. Чтобы вызвать ишемию reperfusion в течение определенного времени, окклюдировать левую переднюю нисходящую артерию с турникетом.
После разрыва миокарда определите левую артерию и поместите шов на два-три миллиметра под его границу на брюшной предел сердца. Вновь открыть артерию, удалив турникет через 30 минут. Кроме того, артерия может быть постоянно occluded, сделав шесть-семь узлов с 6-0 шва, чтобы закрыть перевязку.
Используйте 4-0 одного монофиламента шов, чтобы закрыть грудную клетку с тремя одной кнопки швов. Перед тем, как подтягивать последний шов, удалите остаточный воздух из грудной клетки с помощью 10-миллиметрового шприца, чтобы предотвратить пневмоторакс. Замените мышцы и выключите летучие анестезии.
Затем шов кожи с непрерывным 4-0 шва. Администрирование антисептического спрея для защиты от инфекции и укусов шва. Для глубокой анестезии, управлять смесью ксилазина четыре миллиграмма на килограмм массы тела и кетамин 100 миллиграммов на килограмм массы тела intraperitoneally до эхокардиографии или рабочих измерений сердца.
Для эхокардиографии поместите крысу в положение на спине на нагревательном подносе и получите парастернальные короткие виды оси левой желудочковой полости на уровне папиллярной мышцы. Затем выполните эхокардиографию M-режима для измерения фракции выброса левого желудочка и морфологии. Для сбора органов проводится внутривенная инъекция гепарина.
Затем используйте скальпель, чтобы сделать разрез кожи под ксифоидом и протянутой параллельно ребрам с обеих сторон ножницами. Вырезать ребра в передней подмышки линии и захватить xiphoid поднять грудь. Удалите анатомические или фиброзные спайки тканей, тщательно разоротив ткань двумя парами типсов.
Возьмите образцы крови из вены с пятимиллилитровый шприц. Затем выполните иссечение всего сердца на уровне входной и розетки. Погрузите сердце в ледяной буфер Кребс-Хенселейт и смонтировать его на эритроцитов пролитой изолированной сердечной системы путем cannulating аорты.
Начните с режима Лангендорфа. А через 15 минут переключитесь на режим работы сердца. Каннулировать левый атриум через легочную вену.
Затем измените направление потока, открыв клип, который затмевает канюлю предсердий, что приводит к перфузии левого предсердия и физиологическому кровотоку в левом сердце. Запись гемодинамических измерений в течение 20 минут в рабочем режиме сердца, собирая капли крови коронарных с двух миллилитров шприц для измерения коронарного потока каждые пять минут. Выполняем непрерывные измерения левого предсердий и аортального потока с помощью зонда.
При необходимости вставьте катетер высокой точности ретроградно через аортальный клапан в левый желудочек и измерьте систолическое давление левого желудочка. Завершите анализ, вычислив объем инсульта и внешнюю работу сердца, описанную в рукописи текста. Гистологические порезы и пятна были выполнены, чтобы доказать воспроизводимость процедуры.
Фиброзный шрам в МИР и обработанных животных был сопоставим с образованием шрамов фиктивных животных, в то время как разница в фиброзе между фиктивными и МИР групп была значительной. Кроме того, МИР и удаленной ишемической на кондиционирования обработанных животных показали значительное снижение фиброза по сравнению с МИР обработанных животных. В виво эхография была использована для измерения выброса фракции, LV конца диастолического и конца систолического диаметра.
Анализ показал значительное снижение сердечной функции благодаря лечению МИР, но гемодинамические параметры были сохранены RIPerc. Экс-виво гемодинамические данные продемонстрировали эффективность процедуры, так как группа MIR показала значительное снижение систолического давления LV, сердечного выброса, объема инсульта и внешней работы сердца. При попытке этой процедуры важно помнить, что правильное позиционирование окклюдяного шва и монтаж сердца к изолированному сердечному аппарату значительно повышают шансы на получение воспроизводимых результатов.
Есть много способов оценки сердечной функции у нетронутого животного через острые или хронические приборы или даже неинвазивно эхокардиографии или МРТ. Тем не менее, изолированные reperfused сердце остается видным инструментом расследования и предлагает целый ряд уникальных преимуществ.
