Наш протокол обеспечивает четкий процесс изучения нейробехавиоального воздействия веществ и загрязняющих веществ, представляющих интерес для личинок зебры, а также для выявления потенциальной нейротоксичности этих агентов. Техника может быть выполнена с использованием высокой пропускной способности тестирования нейробехавиоров в модели зебры. Этот метод может быть применен для оценки аллельно-нейробиоциального воздействия загрязняющих веществ, чтобы продемонстрировать потенциальную нейротоксичность на нас, людей, так как геном зебры имеет высокую гомологию с людьми, поэтому он может предоставить показания для химического управления и проблем общественного здравоохранения, вызванных загрязняющими веществами.
Поскольку зебрафиш имеет преимущество высокой пропускной способности скрининга, этот метод дает представление как о развитии психотропных препаратов и экологических токсикологических исследований. Не пугайтесь изучения первого эксперимента. Если вы будете следовать протоколу, вы будете иметь успешный результат.
По крайней мере за два часа до проведения эксперимента установите комнатную температуру до 28 градусов по Цельсию и добавьте 800 микролитров раствора экспозиции к каждой колодец микроплю на 48-колодец. Затем используйте одноми миллилитровую пипетку с измененным наконечником для переноса одной личинки в 200 микролитров раствора экспозиции на каждую колодец микроплюта в рамках подготовки к эксперименту с движением и углом пути. Чтобы подготовить микропластив из шести хорошо для экспериментов с социальным поведением, добавьте четыре миллилитров раствора воздействия к каждой колодец из шести микропластиров и перенесите две личинки в 200 микролитров раствора воздействия на каждую колодец.
Перед началом теста откройте программу мониторинга высокой пропускной способности и выберите модуль углов пути отслеживания вращения. Перенесите микроплюжь 48-ну на записывающую платформу и стяните вниз крышку. Нажмите файл и создать протокол, чтобы начать генерацию нового протокола и ввести 48 в положение подсчета местоположения.
Нажмите Параметры, Параметры протокола и Время, установите продолжительность эксперимента до одного часа и 10 минут, а период интеграции до 60 секунд. Используя инструмент эллиптической формы, нарисуйте круг вокруг верхней левой хорошо. Выберите круг и нажмите копировать, Top Right Mark, вставить и выбрать.
Используйте мышь, чтобы перетащить скопированный круг в правом верхнем направлении хорошо и нажмите Копия, Top Right Mark, вставить, и выберите еще раз. Затем перетащите скопированный круг в правый нижний и нажмите Build и Clear Marks. Система автоматически нарисует круг над любой другой колодец пластины.
Затем нажмите Draw Scale и нарисуйте линию калибровки на экране. Введите длину линии, установите устройство и нажмите Применить к группе. Установите цвет животного до черного и установите порог обнаружения до 16 до 18, чтобы позволить обнаружение животных, установить неактивные на небольшой скорости до 0,5 сантиметров в секунду и от мала до большой скорости до 2,5 сантиметров в секунду.
Установите классы угла пути от минус 180 до плюс 180, как указано. Чтобы установить условия освещения, нажмите Параметры, Легкое вождение, использует один из 3 методов запуска ниже, и Расширенные стимулы, чтобы установить условия освещения. Нажмите Edge и установите темный период в 10 минут, а затем три цикла чередующихся 10-минутных световых и темных периодов.
Затем сохраните протокол. Когда все параметры будут установлены, выключите освещение в испытательном зале и дайте личинкам акклиматизироваться в системе в течение 10 минут. В конце периода акклиматизации щелкните Experiment and Execute и создайте папку, в которой будут сохранены экспериментальные файлы.
Затем введите имя результата и нажмите Фон и Начните. В конце эксперимента нажмите Experiment и Stop. Затем верните микроплюжь 48-колодец обратно в световой инкубатор для последующих экспериментов.
Поскольку каждая группа может включать в себя 16 животных, система может быть использована для выполнения высоких пропускной способности испытаний передвижения и угла пути при различных условиях лечения в одной микроплюре 48-колодец. Социальную активность личинок можно проверить с помощью шести хорошо пластин. В этом репрезентативном эксперименте группа с самой высокой концентрацией БДЭ-47 продемонстрировала выраженную гипоактивность в темный период, в то время как никаких изменений в результате воздействия БДЭ-47 в периоды света не наблюдалось.
Кроме того, группа высокой концентрации 6-гидрокси-БДЭ-47 выполняла меньше рутинных и средних поворотов в течение пяти дней после оплодотворения. Тем не менее, более отзывчивые повороты были вызваны в 6-methoxy-BDE47 групп воздействия. Социальная активность зебры стимулировалась хлорированным парафином-70 и короткой цепью хлорированного парафина-52б, в то время как длинноко цепной хлорированный парафин-52а сокращал продолжительность контакта личинок.
Важно убедиться, что переданные личинки для теста должны иметь нормальную способность плавать и никаких пороков развития. Другие переменные, такие как цветовые предпочтения, светло-темные предпочтения, вся темнота, движения хвоста зебры, могут быть включены, чтобы ответить на дополнительные вопросы о нейровиоальной токсичности загрязнителей окружающей среды. Решения воздействия BDE-47 являются нейротоксическими и имеют потенциал эндокринных нарушений, поэтому не забудьте избежать прямого контакта с кожей.
