Монокулярная зрительная депривация является отличным экспериментальным протоколом, чтобы вызвать первичную пластичность зрительного кортикальной реакции. Как правило, нейроны в бинокулярном сегменте первичной зрительной коры у мыши реагируют примерно в два раза сильнее на стимуляцию контралатерального глаза, чем на ипсилатеральный глаз. Тем не менее, швы закрыли контралатеральный глаз в критический период для глазного доминирования пластичности привести к быстрой потере отзывчивости нейронов V1 к контралатеральной стимуляции глаз, а также последующее увеличение в ответ на ипсилатеральный глаз.
Здесь мы вводим экспериментальный протокол для монокулярных лишений и предлагаем широко используемый метод для анализа тенденции в глазное доминирование во время зрительных лишений. Положите хирургические инструменты в алюминиевую коробку и автоклав их под 120 градусов по Цельсию в течение получаса. Приготовьте раствор 2%agarose в чайнике для водяной ванны и держите его на уровне 75 градусов по Цельсию.
Нанесите тонкий слой глазной мази на оба глаза. Под анатомическим микроскопом с подсветкой швы век. Сделайте около четырех швов.
Сделайте два-три узла потока. Нанесите три микролитера мгновенного сушки клея 502 на голову узла, чтобы повысить устойчивость узла. Затем вырежьте нить как достаточно короткую.
Когда мышь полностью проснется, поместите их в отделенную клетку. Перед электрофизиологической записью используйте изофлюран для анестезии мыши. Снимите швы и выставить глазное яблоко.
Аккуратно обрежьте веко. Промыть глаза с контактными линзами решений и проверить глаза на ясность. Использовать можно только мышь с хорошим состоянием глазных яблок.
После анестезии мыши поместите мышь на стереотаксис. Используйте грелку для поддержания температуры тела на протяжении всей процедуры. Нанесите мазь глаза на поверхность глаз, чтобы держать его влажным.
Удалите волосы мыши, чтобы разоблачить ее кожу. Incise восемь миллиметров умножается на восемь миллиметров области кожи между обоими ушами, чтобы разоблачить череп и удалить ткани головы. Затем удалите чрезмерно соединительной ткани с перекисью водорода.
Просверлите отверстие в черепе над мозжечок. Зафиксните небольшой костной винт в отверстие в качестве эталона. Выполните небольшую краниотомию диаметром один миллиметр в бинокулярной области V1.
Аккуратно удалите фрагмент черепа, не повреев мозгу. Обложка подвергаются корковой поверхности с 2%agarose для предотвращения высыхания. Зафиксните электрод вольфрама на стереотаксисной раме.
Поместите электрод вольфрама вертикально на бинокулярную область V1, чтобы убедиться, что записанные клетки реагируют на оба глаза. Стимул разделен на 30 градусов в случайном блоке. В каждом измерении было представлено в общей сложности три-пять блоков.
Маска один глаз с непрозрачной пластиковой пластины. Настоящее LCD1 для положения в 23 сантиметрах от глаз мыши. Предварительный микроэлектрод медленно масляным гидравлическим микроманипулятором.
Остановить продвижение высокого сигнала шумоподавительных сигналов сигнала, когда электрод продвинулся до уровня четыре и начать измерение. Мы усиливаем активность шипов в 1000 раз и фильтруем ее от 300 до 10 килогерц, а затем пробуем на уровне 40 килогерц. Затем маскировать другой глаз и измерить реакцию контралатерального глаза.
Сигналы, измеряемые одними электродами, являются деятельностью популяции. Используйте программное обеспечение для отдельных шипов различных ячеек. Во-первых, отфильтруй сигнал от 500 до 5000 герц.
Установите два курсора, один для положительного отклонения и один для отрицательных шипов отклонения. Настройка шаблонов шипов. Установите область шаблонов, где она показывает наибольшую вариацию между различными классами шипов.
Используйте анализ основных компонентов, чтобы разделить их на кластеры. Классифицируем шипы границы с помощью алгоритма K-средств. Соотносите ориентацию с скоростью стрельбы шипа и навяжите кривые настройки ориентации для ипсилатеральных и контралатеральных глаз.
Затем вычислите индекс OD для одиночных ячеек, представляющий контралатеральный и ипсилатеральный ответ, назначьте оценку OD для каждой ячейки в соответствии с индексом OD. Рассчитайте индекс контралатерального смещения в соответствии с формулой. На этой диаграмме показано ориентационо-тюнинговые кривые ипсилатерального и контралатерального глаза в монокулярной лишенной и неописуемой мыши.
Этот протокол позволяет успешно монокулярной зрительной депривации и глазного измерения доминирования от обездоленных и неотделимых мыши в критический период. Мы только что показали вам, как выполнить этот эксперимент, и мы проанализировали изменения в глазного доминирования во время зрительных лишений. В ходе эксперимента важно избегать инфекции в процессе занасывания и взаимодействия при электрофизиологической записи.
Спасибо за просмотр нашего видео.
