Анализ следа является недорогой альтернативой оцифровке походки программ анализа для исследователей количественно движения аномалий у мышей. Из-за своей скорости, простоты и продольного потенциала, этот метод идеально подходит для поведенческого фенотипирования моделей мыши, включая модели нейродегенеративных заболеваний, нервно-мышечных заболеваний или инсульта. Демонстрацией процедуры будет Вирджиния Вертман, научный специалист из моей лаборатории.
Перед началом эксперимента, акклиматизироваться мышей, которые были полностью проснулся и оповещения, по крайней мере пять минут в комнату анализа в течение 30 минут. Распоить туннель над полосой бумаги, которая немного шире и длиннее, чем длина и ширина туннеля. Отметь бумагу идентификатором мыши и датой тестирования.
Добавить семена подсолнечника в камеру цели для мотивации по мере необходимости и твердо потертости первой мыши, которая будет проверена. Используя около 0,5 сантиметра диаметром конические кончики кисти, покрасить всю нижнюю часть всех пальцев ног и центр каждого отверстия с одним нетоксическим моющихся цвета краски на водной основе. Пальто задние лапы с контрастным нетоксическим мытья воды на основе краски цвета аналогичным образом.
Используйте чистую влажную ткань, чтобы удалить любую краску, которую мышь получает на другие части своего тела, чтобы предотвратить пятна, которые могут помешать сбору данных. Затем поместите мышь в начале туннеля. Позвольте мыши пройти весь путь в камеру цели, прежде чем получить животное, чтобы аккуратно очистить ноги с водой смоченной тканью.
Затем верните мышь в свою домашнюю клетку и протрите испытательный полигон и туннель дезинфицирующим средством перед тестированием следующего животного. Для точного скоринга, позвольте следы высохнуть полностью, прежде чем выбрать шаги, которые постоянно расхитяются с четкими неразмазаемые следы. Для получения достаточных данных скоринга, должно быть по крайней мере два последовательных шага от каждой ноги.
Не включать первый и последний следы на бумаге, поскольку они вряд ли представляют собой нормальную походку, потому что мышь менялась скорость ходьбы. Чтобы определить длину шага как расстояние между двумя последовательными следами, созданными одной и той же ногой, используйте карандаш, чтобы нарисовать два-четыре миллиметра круг вокруг области стопы обоих следов forelimb в одном шаге и использовать линейку, чтобы провести линию между кругами. Запечатлейте расстояние между двумя отпечатками от середины каждого круга в качестве правого передового одного или левого передового одного по мере необходимости и повторите измерение для каждого из шагов, которые могут быть забиты.
Затем в среднем все отдельные записанные расстояния шага для каждой конечности усреднения отдельных баллов в когорте вместе, как экспериментально целесообразно. Чтобы определить ширину шага как расстояние между левыми и правыми конечностями или задними конечностями, нарисуйте и измерьте линию из обведенной области стопы одной задней части, которая пересекается перпендикулярно линии для длины шага на контралатеральной задней части. Повторите это измерение для всех отпечатков задних конечностей, которые могут быть забиты и средние измерения.
Чтобы определить распространение пальца ноги как расстояние между первым и последними пальцами ног на одном следе или следе заднего лапы, используйте калиперы для измерения расстояния между кончиком первого пальца ноги и кончиком последнего отпечатка пальца ноги. Затем повторите измерение для всех отпечатков задних конечностей, которые могут быть забиты и средние измерения. При достаточном количестве животных, эта процедура способна обнаружить различия походки между генотипами мыши в пределах одного штамма с течением времени.
Например, здесь показаны репрезентативные следы следов изображений, собранных с помощью мышиной модели х-связанной спинальной и буллярной мышечной атрофии, нейродегенеративного расстройства, поражающего нижние моторные нейроны и скелетные мышцы. Gait анализ предварительно симптоматических и пост-симптоматических трансгенных и помет мат контроля мышей показывает, что до начала заболевания, трансгенных мышей дисплей аналогичной длины шага, ширина шага и ног распространения по сравнению с их помет мат не трансгенных контроля. После начала заболевания, однако, трансгенные животные проявляют значительно более короткие длины шага.
Аналогичный продольный анализ не выявил различий в ширине шага ни в одном из проверенных возрастов. Пост-симптоматические трансгенные мыши также имеют значительно более узкие задние ноги распространения, чем возраст соответствует помет мат контроля. Правильное применение краски к лапам даст наилучшие результаты.
Помните, что только шаги, которые постоянно расхитяются с четкими неразмазаемые следы должны быть забиты. Этот метод достаточно чувствителен, чтобы обнаружить незначительные изменения в шаге. И из-за своего неинвазивного подхода, он позволяет тестирование групп на протяжении всей их жизни фенотипические презентации и терапевтические вмешательства.
