Лучевая терапия чаще всего доставляется с использованием линейных ускорителей. Этот протокол позволяет исследователям оценить биологическое воздействие излучения на клетки с помощью линейного ускорителя. Преимущество этого метода заключается в том, что с помощью линейного ускорителя, исследователи могут изучать широкий спектр клинически значимых доз и доз.
Кроме того, этот протокол может быть использован для всех типов раковых клеток. Этот метод может быть выполнен с использованием аналогичного оборудования, показанного здесь. Например, линейные ускорители, изготовленные другими поставщиками.
Лица, не опытные в выполнении дозиметрических расчетов с помощью линейного ускорителя, могут бороться за расчет правильного количества блоков монитора, необходимых для доставки желаемой дозы в образец. Они выиграют, посоветовав опыт медицинского физика или дозиметриста. Доставка дозы в образец точно с помощью линейного ускорителя требует тщательного размещения.
За два дня до запланированного облучения, работая в культуре капюшон, использовать стерильные пять миллилитров пипетки для сбора глиомы стволовых клеток из культуры пластины в 15 миллилитров центрифуги трубки. Центрифуга клетки при 200 раз г в течение трех минут в центрифуге столешницы. Откажитесь от супернатанта и повторно посовелите клеточные гранулы одним миллилитром трипсина-ЭДТА.
Инкубировать при комнатной температуре в течение пяти минут, чтобы переварить гранулы и сделать одну подвеску клетки в трипсин-ЭДТА. Каждые две минуты во время пищеварения, осторожно встряхните дно центрифуги трубки, чтобы убедиться, что клетки тщательно усваивается. Затем добавьте три миллилитров средств культуры стволовых клеток, чтобы утолить трипсин, аккуратно перемешать и центрифугу при 200 раз г в течение трех минут в центрифуге столешницы.
После отбрасывания супернатанта, повторное производство клеточной гранулы с пятью миллилитров клеточной культуры средств массовой информации и рассчитывать клетки с гемоцитометром. Плита пять миллионов клеток, разделенных на две 10 сантиметров пластин, содержащих 10 миллилитров клеточной культуры средств массовой информации и инкубировать 48 часов при 37 градусов по Цельсию. Прямо перед запланированным облучением собирайте клетки и центрифугу, как это было раньше.
Откажитесь от супернатанта и повторно посовелите клеточные гранулы пятью миллилитров средств массовой информации клеточной культуры. Перенесите один миллилитр клеточной суспензии в 35-миллиметровую пластину, содержащую два миллилитра клеточной культуры среды, убедившись, что среда достигает высоты одного сантиметра. Перенесите потрохавые клетки во вторичный контейнер, чтобы снизить риск заражения и принести клетки в контейнер на утилите корзину на облучение объекта для облучения клеток.
За день до облучения, работая в капюшоне клеточной культуры, используйте пипетки Pasteur, подключенные к вакууму, чтобы удалить DMEM-среду из пластины клеточной культуры к прикрепленной клеточной линии. Затем промыть клетки пятью миллилитров стерильных PBS, чтобы смыть остаточную среду. Добавьте один миллилитр трипсина-ЭДТА в блюдо культуры и аккуратно наклоните культурную тарелку, чтобы убедиться, что все блюдо покрыто.
После инкубации при комнатной температуре в течение пяти минут, утолить трипсин-ЭДТА реакции с тремя миллилитров DMEM средств массовой информации. Используйте пятими миллилитровую пипетку, чтобы собрать клетки в 15-миллилитровую центрифугу, центрифугу, а затем культурировать клетки, как описано в рукописи. Чтобы облучить эти ранее подготовленные ячейки с помощью программного обеспечения консоли LINAC, установите ускоритель gantry и коллиматор до нуля градусов, откройте х и у челюстей до симметричных пять на пять квадратных сантиметров размер поля, и втягивать многолифовых коллиматоров.
Добавьте не менее пяти сантиметров водного эквивалента материала на диване и поместите клеточное блюдо для облучения на него в центре перекрестия LINAC. Поместите клетки на глубину максимальной дозы в шестимилометровый рентгеновский луч размером около 1,5 сантиметра и добавьте еще один сантиметр водного эквивалентного материала поверх блюда. Прикрепите передний указатель к голове LINAC и продлите его до тех пор, пока он не коснется поверхности материала накопления.
Отрегулируйте высоту стола до тех пор, пока расстояние от источника до поверхности накопления не будет 100 сантиметров. Оставьте хранилище лечения, убедившись, что все остальные люди ушли. Убедитесь, что в комнате нет других камер, а затем закройте дверь хранилища.
Подтвердите размер поля, блоки монитора и блоки монитора в минуту на консоли, а затем включите луч для ячейки излучения. Три образца стволовых клеток глиомы были подготовлены с помощью этого протокола и собраны через 24 часа после облучения. Там профили клеточного цикла были рассчитаны и показаны с процентами клеток в различных фазах клеточного цикла.
Арест клеточного цикла G2 наблюдался после облучения стволовых клеток глиомы либо со стандартной дозой, либо с дополнительной высокой дозой, по сравнению с необлученными контрольными клетками. Для того, чтобы иметь правильную дозу доставлены, это наиболее важно для измерения высоты средств массовой информации в культуре блюдо, чтобы убедиться, что она достигает одного сантиметра. После этой процедуры могут быть проведены другие биологические анализы, такие как иммуностеинирование, западная помарка и анализ клеточного цикла.
Так как эта процедура обеспечивает исследователям клинически соответствующие дозы и параметры скорости дозы, она может быть использована для оценки радиационного воздействия на многие модели, основанные на клеточной культуре.
