В этом видео, мы представляем, как использовать цилиндр и открытое поле тест для сужения двигательной функции в модели MPTP болезни Паркинсона. Основным преимуществом является то, что мыши не должны быть обучены до поведенческого теста. Кроме того, этот метод эффективен, а стоимость оборудования низкая.
Лица, которые являются новыми для поведенческих тестов может недооценивать эффект вмешательства в окружающую среду. Молчание и избежать изменений в подкладке поможет. Здесь поведенческое тестирование проводится через 24 часа после окончательной инъекции семидневного режима MPTP или солевые инъекции и через 40 минут после внутрижелудочественного введения L-DOPA в подмножество животных.
Если поведенческое тестирование не проводится в той же комнате, где содержатся животные, акклиматизируем мышей в новую комнату за 30-60 минут до теста. Начните с размещения прозрачного стеклянного цилиндра в центре стола. Окружите цилиндр с трех сторон черным картоном, расположенным на четыре-восемь сантиметров от цилиндра, чтобы уменьшить воздействие экологического освещения.
Оставьте одну сторону цилиндра лицом к камере для видеозаписи. Прикрепите камеру с разрешением не менее одного миллиона пикселей на 40-60 сантиметров от цилиндра, чтобы убедиться, что весь цилиндр содержится в поле зрения. Поместите одну мышь в цилиндр за один раз и начать съемку сразу.
Во время этого процесса старайтесь избегать шумовых или световых изменений, чтобы не влиять на поведение мыши. Лапы лифты происходят, когда мышь поднимает на его задние конечности, поднимает обе передние конечности выше уровня плеча, и земли. Прекратите съемку через три минуты и поместите мышь обратно в домашнюю клетку.
Очистите цилиндр водой, а затем распылите 70%ethnol над внутренней стеной, чтобы дезинфицировать его и удалить запахи мыши. Протрите цилиндр сухим перед тестированием следующей мыши. Как только тестирование завершено, воспроизведение видео со скоростью в 0,5 раза обычной скорости и подсчитать количество лап подъемников к стене каждой мыши.
Если мышь поднимает свои конечности выше уровня плеча несколько раз непрерывно без посадки, она должна быть подсчитана только один раз. Выполните открытое тестирование поля во время той же сессии, что и тест цилиндра. Подготовь прозрачную открытую поле реакционной коробки с деревянной пластиной, покрытой контрастной черной или белой тканью в зависимости от цвета мыши.
Зафиксив камеру над полем на высоте одного метра. Отрегулируйте камеру, чтобы убедиться, что поле реакции открытого поля находится прямо в центре видео. Положите одну тестовую мышь в коробку и позвольте мыши ознакомиться с окружающей средой в течение примерно одной минуты.
Завехайте пятиминутное видео с помощью камеры, подключенной к компьютеру. Наконец, очистить любые фекалии в открытом поле реакции поле поле, спрей 70% этанола на коробку, и протрите его. В испытании цилиндра, уменьшение числа задних к стене наблюдалось у мышей обработанных с MPTP сравненным с солевыми обработанными мышами.
Увеличенные задние части наблюдались в MTPT обработанных мышах, данных L-допамина в день тестирования по сравнению с MPTP лечение мышей, получающих солевой раствор. На этом изображении по-настоящему видно репрезентативный след движения и распределение статического времени, времени ходьбы и времени работы у контрольных мышей, не обработанных MPTP. Мыши, обработанные MTPT, продемонстрировали более низкую скорость движения, более короткое расстояние движения, более длительное статическое время и более короткое время работы, а затем солевые обработанные мыши, демонстрируя двигательный дефицит, вызванный MTPT.
MPTP лечение мышей, получающих L-допамин показал более высокую скорость движения, большее расстояние движения, короче статическое время, и больше времени работы, чем мышей, обработанных только MPTP, указывая, что L-допамин смягчает MPTP-индуцированного дефицита двигателя. При изменении мышей тестируют очистить область полностью и спрей этанола для устранения эффекта запах бывших мышей. После этой процедуры, другие меры, такие как луч ходьбе тест, полюс тест может быть выполнена.
Данные, связанные с балансовой способностью и способностью двигателя, могут быть получены с помощью этих методов. MPTP является нейротоксическим для мышей и людей, и поэтому строгие меры предосторожности должны быть приняты, чтобы избежать воздействия. Дополнительные PPE, такие как маска или респиратор следует носить.
