In diesem Video stellen wir vor, wie man einen Zylinder- und Open-Field-Test verwendet, um die Motorfunktion im MPTP-Modell der Parkinson-Krankheit zu verengen. Der Hauptvorteil ist, dass die Mäuse nicht vor dem Verhaltenstest trainiert werden müssen. Darüber hinaus ist diese Methode effizient und die Kosten für die Ausrüstung sind niedrig.
Personen, die mit Verhaltenstests noch nicht in der Lage sind, die Auswirkungen von Umwelteinflüssen zu unterschätzen. Ruhig zu bleiben und Änderungen im Futter zu vermeiden, wird helfen. Hier wird eine Verhaltensuntersuchung 24 Stunden nach der endgültigen Injektion eines siebentägigen Therapieschemas von MPTP oder Salineninjektionen und 40 Minuten nach intragastrischer Verabreichung von L-DOPA an eine Teilmenge der Tiere durchgeführt.
Wenn Verhaltenstests nicht im selben Raum durchgeführt werden, in dem die Tiere untergebracht sind, akklimatieren Sie die Mäuse 30 bis 60 Minuten vor dem Test in den neuen Raum. Beginnen Sie, indem Sie einen transparenten Glaszylinder in der Mitte eines Tisches platzieren. Umgeben Sie den Zylinder auf drei Seiten mit schwarzem Karton, vier bis acht Zentimeter vom Zylinder entfernt, um die Wirkung der Umgebungsbeleuchtung zu reduzieren.
Lassen Sie eine Seite des Zylinders zur Videoaufnahme zur Kamera. Befestigen Sie eine Kamera, die eine Pixelauflösung von mindestens einer Million Pixel n. Chr. 40 bis 60 Zentimeter vom Zylinder entfernt hat, um sicherzustellen, dass der gesamte Zylinder im Sichtfeld enthalten ist. Legen Sie eine Maus gleichzeitig in den Zylinder und beginnen Sie sofort mit dem Filmen.
Versuchen Sie dabei, Lärm- oder Lichtänderungen zu vermeiden, um das Verhalten der Maus nicht zu beeinflussen. Pfotenaufzüge treten auf, wenn die Maus auf ihren Hinterbeinen nach oben hebt, beide Vorderbeine über Schulterhöhe hebt und landet. Beenden Sie die Dreharbeiten nach drei Minuten und legen Sie die Maus wieder in den heimischen Käfig.
Reinigen Sie den Zylinder mit Wasser und sprühen Sie dann 70% Ethnol über die Innenwand, um ihn zu reinigen und Mausdüfte zu entfernen. Wischen Sie den Zylinder trocken, bevor Sie die nächste Maus testen. Sobald das Testen abgeschlossen ist, spielen Sie das Video mit einer Rate von 0,5 mal der regulären Geschwindigkeit ab und zählen Sie die Anzahl der Pfotenaufzüge gegen die Wand jeder Maus.
Wenn die Maus ihre Vorderbeine mehrmals ununterbrochen ohne Landung über schulterniveau hebt, sollte sie nur einmal gezählt werden. Führen Sie offene Feldtests während derselben Sitzung wie der Zylindertest durch. Bereiten Sie eine transparente offene FeldReaktionsbox mit einer Holzplatte vor, die je nach Farbe der Maus von einem kontrastierenden schwarzen oder weißen Tuch bedeckt ist.
Befestigen Sie eine Kamera über dem Feld in einer Höhe von einem Meter. Passen Sie die Kamera an, um sicherzustellen, dass sich die reaktionsfreie Feldbox direkt in der Mitte des Videos befindet. Legen Sie eine Testmaus in die Box und lassen Sie die Maus sich für etwa eine Minute mit der Umgebung vertraut machen.
Zeichnen Sie ein fünfminütiges Video mit der mit dem Computer verbundenen Kamera auf. Reinigen Sie schließlich alle Fäkalien in der offenen Feldreaktionsbox, sprühen Sie 70% Ethanol auf die Box und wischen Sie sie ab. Im Zylindertest wurde bei Mäusen, die mit MPTP behandelt wurden, im Vergleich zu mit saline behandelten Mäusen eine Abnahme der Anzahl der Hintern an der Wand beobachtet.
Erhöhte Rückenuntersuchungen wurden bei den MTPT behandelten Mäusen beobachtet, die l-Dopamin am Tag der Prüfung erhielten, verglichen mit den MPTP-behandelten Mäusen, die Saline erhielten. Dieses Bild zeigt die repräsentative Bewegungsablaufverfolgung und die Verteilung von statischer Zeit, Gehzeit und Laufzeit bei Kontrollmäusen, die nicht mit MPTP behandelt wurden. Mäuse, die mit MTPT behandelt wurden, zeigten eine geringere Bewegungsgeschwindigkeit, einen kürzeren Bewegungsabstand, eine längere statische Zeit und eine kürzere Laufzeit als mit Saline behandelte Mäuse, was ein durch MTPT induziertes motorischinduziertes Defizit zeigte.
MPTP behandelte Mäuse, die L-Dopamin erhielten, zeigten eine höhere Bewegungsgeschwindigkeit, einen längeren Bewegungsabstand, eine kürzere statische Zeit und eine längere Laufzeit als die Mäuse, die mit nur MPTP behandelt wurden, was darauf hindeutet, dass L-Dopamin das MPTP-induzierte motorische Defizit verringert. Beim Wechsel der getesteten Mäuse räumen Sie den Bereich vollständig aus und sprühen Ethanol, um die Wirkung des Geruchs der ehemaligen Mäuse zu eliminieren. Nach diesem Verfahren können andere Maßnahmen wie der Strahl-Walking-Test, Pole-Test durchgeführt werden.
Mit diesen Methoden können Daten in Bezug auf Gleichgewichtskapazität und Motorfähigkeit gewonnen werden. MPTP ist neurotoxisch für Mäuse und Menschen und daher müssen strenge Vorsichtsmaßnahmen getroffen werden, um eine Exposition zu vermeiden. Zusätzliche PSA, wie eine Maske oder ein Beatmungsgerät, sollten getragen werden.
