Method Article
Метод обсуждается в котором В естественных условиях Механические свойства раздражителей аспекты материалов как функцию времени. Образцы испытывают Экс естественных условиях Использование microtensile тестер с экологическим контролем для имитации физиологической среде. Эта работа способствует дальнейшему пониманию В естественных условиях Поведение нашем материале.
Implantable microdevices are gaining significant attention for several biomedical applications1-4. Such devices have been made from a range of materials, each offering its own advantages and shortcomings5,6. Most prominently, due to the microscale device dimensions, a high modulus is required to facilitate implantation into living tissue. Conversely, the stiffness of the device should match the surrounding tissue to minimize induced local strain7-9. Therefore, we recently developed a new class of bio-inspired materials to meet these requirements by responding to environmental stimuli with a change in mechanical properties10-14. Specifically, our poly(vinyl acetate)-based nanocomposite (PVAc-NC) displays a reduction in stiffness when exposed to water and elevated temperatures (e.g. body temperature). Unfortunately, few methods exist to quantify the stiffness of materials in vivo15, and mechanical testing outside of the physiological environment often requires large samples inappropriate for implantation. Further, stimuli-responsive materials may quickly recover their initial stiffness after explantation. Therefore, we have developed a method by which the mechanical properties of implanted microsamples can be measured ex vivo, with simulated physiological conditions maintained using moisture and temperature control13,16,17.
To this end, a custom microtensile tester was designed to accommodate microscale samples13,17 with widely-varying Young's moduli (range of 10 MPa to 5 GPa). As our interests are in the application of PVAc-NC as a biologically-adaptable neural probe substrate, a tool capable of mechanical characterization of samples at the microscale was necessary. This tool was adapted to provide humidity and temperature control, which minimized sample drying and cooling17. As a result, the mechanical characteristics of the explanted sample closely reflect those of the sample just prior to explantation.
The overall goal of this method is to quantitatively assess the in vivo mechanical properties, specifically the Young's modulus, of stimuli-responsive, mechanically-adaptive polymer-based materials. This is accomplished by first establishing the environmental conditions that will minimize a change in sample mechanical properties after explantation without contributing to a reduction in stiffness independent of that resulting from implantation. Samples are then prepared for implantation, handling, and testing (Figure 1A). Each sample is implanted into the cerebral cortex of rats, which is represented here as an explanted rat brain, for a specified duration (Figure 1B). At this point, the sample is explanted and immediately loaded into the microtensile tester, and then subjected to tensile testing (Figure 1C). Subsequent data analysis provides insight into the mechanical behavior of these innovative materials in the environment of the cerebral cortex.
1. Подготовка образцов
2. Установить условия окружающей среды
3. Сравните экологический контроль с целью Номера для экологического контроля
4. Имплантация зонда и Эксплантация
5. Microtensile Тестирование образцов имплантатов
6. Анализ данных
Механические свойства практически всех полимерных материалов, в том числе наши ПВА-NC, зависят от воздействия окружающей среды. В частности, они включают воздействием тепла и влаги. Когда материал является пластифицированный благодаря поглощению влаги или претерпевает фазовый переход, он отображает снижение модуля Юнга. При подготовке влажности и температуры контролируемой среды для исключая виво образец механической характеристикой, важно обеспечить, чтобы было минимальное изменение содержания влаги в образце при загрузке образца в microtensile тестер, а также во время механических испытаний. Это оценивается с помощью контрольных экспериментах установки образца для того, чтобы образец не зависит от влажности порожденных кистью воздух, а также не быстро высушить во внешней среде. 5 показан пример демонстрирует график механические свойства сухой установки образца в процессе CYCLческих испытаний на растяжение для соответствующей настройки кисти влаги воздуха. Любое изменение модуля Юнга в то время как щетка воздуха включена минимальна. Это важно, поскольку внешняя среда не должна способствовать уменьшению или увеличению жесткости. Когда поток воздуха от кисти установлена слишком высокой, модуль Юнга образца, существенно снизит в течение примерно 60 сек.
Контроль за механическую среду тестирования можно также обеспечить, чтобы материалы не преждевременно высохнуть. Например, использование нашей влаги контролируемой среде увеличивает время, требуемое для эксплантированы образец сушат и восстановить его предимплантационной механическими свойствами. Рисунок 6 демонстрирует сушки поведение двух контрольных образцах настройки пропитанный к насыщению затем подвергают циклической тестирование растяжении под как контролируемых, так и неконтролируемых условиях окружающей среды. В не-контролируемой среде, образцы восстановить модуль Юнгапревышающий 400 МПа в 150 сек в течение которого образец был загружен в microtensile тестера. Это увеличение модуля Юнга в 20-40 раз больше, чем насыщенного образца в результате быстрой сушки образца 13. Под экологического контроля, заметного увеличения Модуль Юнга не измеряется до 240 секунд после удаления из погружной ванне. Этот период времени является достаточным для обоих нагрузки образца и выполнять достаточно механического тестированием, для извлечения модуля Юнга.
Дизайн для имплантата образцы для тестирования бывших естественных условиях (рис. 3) включает в себя рассмотрение ряда факторов. Во-первых, образцы должны быть имплантированы в интересующую ткань, которая является кора головного мозга в данном исследовании. В результате, образец должен иметь иглу стиле геометрия, которая представлена узкой ПВА-NC луча. Кроме того, образец должен быть разработан с учетом силы, необходимой для рenetrate интересующей ткани без потери устойчивости. Коробление формулы Эйлера учитывает модуль Юнга материала, а также от длины, ширины и толщины пучка, чтобы обеспечить критическую силу, при которой балочного типа зонда, как ожидается, пряжка 17. В этом исследовании, размеры пучка были выбраны таким образом, что зонд будет проникать через нервную ткань без риска деформации. Учитывая предыдущие исследования, показывающие, усилием менее 15 мН, выбранной длины зонда 4,5 мм, чтобы позволить 3 мм луч испытания и длиной 1,5 мм для захвата, и известный толщина пленки превышает 75 мкм, можно подсчитать, что зонд шириной должна превышать 107 мкм. Чтобы обеспечить максимальную стабильность при помощи инструмента лазерной микрообработки, шириной 300 мкм был выбран для образцов. Дополнительным предметом озабоченности является обработка микрозонд образца во время введения в ткань и удаление из ткани. В качестве простого луч может быть поврежден во время обработки с приложением BEAм до более существенной структурой (т.е. акриловый держатель) позволяет безопасно передачи имплантации и механических испытаний. Наконец, эта сборка должна быть оптимизирована для обеспечения загрузки в динамометре как можно быстрее.
Представитель график, показывающий кривые напряжение-деформация для сухого образца и мокрого образца, который был имплантирован в коры головного мозга крыс в течение 30 мин показано на рисунке 7. Модуль Юнга, что соответствует наклону напряжение-деформация участка в линейной упругой области, очевидно, значительно больше для сухого образца, чем для имплантированного образца. Оба образца были напряженными, чтобы сломаться. Тем не менее, модуль Юнга является производным от линейной упругой части участка, собранные в начале испытания на растяжение, перед входом пластической деформации и разрушения образца, как показано на рисунке 8. Рисунок 9 показывает, что примерно через 5 мин после имплантации образец расиграет небольшие изменения в модуль Юнга, предполагая, что образец достигает насыщения и минимальной жесткости в течение этого периода времени.
Рисунок 1. Схематический обзор экспериментального метода, чтобы охарактеризовать в естественных условиях механических свойств раздражителей аспекты, механически адаптивный микрозонд нанокомпозитного полимера. (А) Во-первых, образец получали путем структурирования ПВА-NC пленка в пучок и монтажа на акриловые держателя. (B) Зонд затем имплантировали в кору головного мозга в течение определенного периода времени. (C) Наконец, образец эксплантированы и подвергали microtensile тестирование с использованием заказных microtensile тестера.
Рисунок 2. Лазерный микромеханический ПВА-NC установки образца для установления необходимых экологических условий для сохранения в естественных условиях механического поведения ПВА-NC Имплантат образцов после эксплантации.
Рисунок 3. Фотографии имплантат образец, состоящий из лазерного узором ПВА-NC балка крепится к акриловый держатель.
Рисунок 4. Блок-схема microtensile тестера. Образец зажимают между фиксированным зажимом и подвижного зажима, который присоединен к приводному стержню линейной пьезодвигателя. Скорость деформации линейного пьезодвигателя контролируется и напряжение измеряется с помощью перемещение индикатора. Нагрузка, необходимая напрягать меня образецasured от тензодатчика. Условий окружающей среды в непосредственной близости от образца контролируется щетка воздуха и тепла лампы.
Рисунок 5. Модуль Юнга (Е), как функцию времени, измеренный во время циклических испытаний на растяжение для определения правильной настройки щетка воздуха для регулирования влажности в испытательной среде. Заштрихованная область представляет время, в течение которого воздух щетка была включена. В аэрограф используют, модуль Юнга существенно не изменяется с течением времени, предполагая, что количество воды, поглощенной образцом установки с воздуха кисть не достаточно, чтобы внести свой вклад в снижение жесткости.
Рисунок 6. Модуль Юнга (E) в зависимости от времени для водо-насыщающейред образцов как влага контролируемых и не контролируемых условиях испытания на растяжение. восстановление начальной модуль Юнга гораздо медленнее в контролируемой среде.
Рисунок 7. Пример напряженно-деформированного участков для ПВА-NC образцы, которые были сухими (не имплантированных) и влажный (экс естественных условиях, эксплантированы из ткани через 30 мин в естественных условиях).
Рисунок 8. Дополнительный комплект напряженно-деформированного участка, чтобы продемонстрировать, что линейная упругая часть сюжета изолирован от общего напряженно-деформированного участка (слева) и экстрагировали и подходят к линии (справа). Для этого конкретного измерения, Юнгамодуля составляет 16,8 МПа. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .
Рисунок 9. Модуль Юнга Е, в сравнении с имплантатом время для ПВА-NC образцы имплантирован в коре головного мозга. Столбики ошибок обозначают стандартную ошибку с п = 4, за исключением 5 мин имплантата, при п = 2.
Продвижение имплантируемых биомедицинских микроэлектромеханических систем (BioMEMS) для взаимодействия с биологическими системами мотивирует развитие новых материалов с высокой заданными свойствами. Некоторые из этих материалов предназначены для демонстрируют изменение свойств материала в ответ на стимул найти в физиологической среде. Один недавно разработанные класс материалов реагирует на присутствие водородной связи образующие жидкости (например, воды) и при повышенных температурах, чтобы уменьшить модуль Юнга, мера жесткости материала, на три порядка 10,11,18. Эти материалы нанокомпозитных полимерных мягкой полимерной матрицы (то есть поли (винилацетата)) с целлюлозой нановолокон как нанонаполнителя фазу. Взаимодействие между целлюлозой нановолокон определяют механические свойства материала в целом, а также включены "вкл" при сухой и "выключено", когда влажный. Кроме того, вода пластифицируют полимер, паnocomposite, тем самым снижая температуру стеклования до температуры ниже температуры тела (37 ° С), что приводит к дальнейшему снижению модуля упругости. Одним из применений для этого класса материалов в качестве био-адаптивного субстрата для интракортикальных зондов для взаимодействия с отдельных нейронов 13,17. Однако преимущества механически адаптивный материал не ограничивается взаимодействие с нервной системы.
Представленные здесь метод, посредством которого механическое поведение ПВА-NC на основе микрозонды может быть оценена после имплантации в нервной ткани в течение заданного периода времени. Используя этот метод, экс естественных условиях механических данные могут быть собраны для сравнения с настольной исследований. Кроме того, в шкале времени изменения механические свойства могут быть оценены. Экологический контроль включен по тонкой настройке аэрографом и сияющей температурных режима обеспечивает механизм, посредством которого имплантированных образцов может быть проверена бывших естественных условиях с мини-Mal Изменение механических свойств в результате изменения в окружающей среде. Таким образом, в естественных условиях поведение материала можно сделать вывод, что обеспечивает превосходную информации по сравнению с настольной эксперименты с образцами полностью погружен в искусственную спинномозговую жидкость (ACSF). Сложный физиологический среда требует наличия таких методов, но экспериментальные методы оценки этого ограничены.
Есть несколько преимуществ для нашего метода для механической характеристике имплантированы, механически-адаптивных полимерных образцов нанокомпозита. Пользовательских тестер microtensile подходит для тестирования образцов с размерами, сравнимыми с типичным нейронных зонд (1,5-8 мм длиной, 50-500 мкм шириной, 15-100 мкм толщиной 3,19-21). Другие механические методы характеристику подходят как для больших, объемных образцов или наноразмерных образцов. Используя механический инструмент тестирования соответствующего масштаба удаляет неизвестные имущества масштабируемость. Кроме того, microtensile тестер имеет открытый доступ к тестируемого образца, что позволяет влажности и температуры среды тестирования. Кроме того, даже с контроля окружающей среды, необходимо, чтобы начать испытание на растяжение быстро после извлечения образца из нервной ткани. Ex сушки образец живом организме, и, следовательно, жесткости, было сведено к минимуму здесь использованием испытательного образца и конструкции microtensile тестер, которые способствуют быстрому (обычно в течение 120 секунд) загрузка и начало механических испытаний. Наконец, в этом microtensile тестер вмещает образцы, которые не имеют площадки на обоих концах, что облегчает использование зонда как образцы для механических испытаний, которые могут быть имплантированы в животных в идентичным образом, как для биологической оценки.
Удаление испытуемого образца из нервной ткани представляет новую среду, которая может привести к изменениям в поведении после механической эксплантации потому что стимулы аспекты поведения материала обратимой потенциально быстродействующие. При использовании этого экологически контролируемые испытания на растяжение метод оценки изменения механических свойств образцов после имплантации в мозг в течение заданного периода времени, потенциал ошибок относительно что фактический модуль Юнга в естественных условиях должны быть рассмотрены. Во-первых, путем тестирования образцов естественных бывший, они, по определению, удаляется из физиологической среде и подвергали альтернативный среды. Для образца с механические свойства в зависимости от условий окружающей среды, отбирают образец из окружающей среды изменит его механические свойства. Временная шкала, с которой это изменение происходит, зависит от свойствам материала, а также степень, до которой во внешнюю среду контролируется.
Такой подход к характеристике и количественной оценки стимулов проблематику механическое поведение лучше всего подходит для образцов с игольчатой геометрии, с длиной много большихт, чем ширина или толщина устройства. Кроме того, жесткость материала и конкретного двигателя и его максимальное усилие следует учитывать при выборе габаритов устройства. Учитывая набор размеров образца, более жесткий материал потребует большего выдвижной сила применить те же величины деформации в качестве материала с меньшим модулем упругости. Уменьшение ширины и / или толщины, или увеличение длины образца, позволит уменьшить усилие, необходимое для удлинения образца на заданную величину. Для пользовательские настройки тестирование растяжении, линейный пьезодвигателя имеет максимальную силу тяги N 6, который позволяет для образцов с модулем Юнга 5 ГПа и площадь поперечного сечения до 24000 мкм 2 напряженными 5%, не достигая максимального напряжение заставить электродвигателя. Датчик для измерения силы в microtensile тестер имеет разрешение менее 1 мН, так что наименьший модуль Юнга, которые могут быть измерены в образцах, используемых в нашем исследовании (ширина 300мкм, толщина 100 мкм) примерно 1 МПа. Этот нижний предел может быть дополнительно уменьшено с использованием образцов с большей площадью поперечного сечения, однако. Смещение индикатора имеет разрешение 0,5 мкм, что является достаточным для материалов с эластичными свойствами не более 0,2% деформации (при начальной длиной 3 мм), который является по порядку величины меньше, чем упругой области для ПВА- NC даже в сухом состоянии.
Один из недостатков этого метода бывших характеристика естественных условиях, что он не может быть эффективным для очень жесткие или хрупкие материалы. Практически говоря, в качестве образца должно быть быстро установлен в microtensile тестер, хрупкий материал находится под угрозой нарушения во время процедуры установки. Кроме того, пучкового типа образцов (с размерами, соответствующие этим наших экспериментов), один конец которого приклеен к акриловый держатель, а другой конец свободный не может быть использована для материалов, превышающей примерно 2,5 ГПа, в качестве силы, необходимой для страв пробе превышает силу зажима проведение образца в месте, в результате проскальзывание образца через зажимы и неточные результаты. Эта проблема была решена с использованием Догбон-образного образца с прокладками, на каждом конце. Это использование этого метода для измерения и анализа в естественных механических свойств микрозонды не ограничивается ПВА-NC класс материалов. Дополнительные возможности применения включают мониторинг скорости разложения биоразлагаемых материалов 22 и характеризующие механические свойства биологических тканей 23,24, а также характеристика микромасштабных структуры для небиологических приложений. Кроме того, дополнительные средства управления средой могут быть добавлены (например, рН, длина волны рассеянного света, электрическое поле, магнитное поле) для материалов, которые реагируют на различные стимулы 25,26. Одним из основных преимуществ этого способа является его универсальность и применимость к различным материилс и приложений.
Нам нечего раскрывать.
Эта работа была поддержана Департаментом биомедицинской инженерии в Case Western Reserve University через обе лаборатории запуска средства (J. Capadona) и Medtronic стипендий (К. Поттер). Дополнительное финансирование на этом исследовании была частично поддержана грантом NSF ECS-0621984 (С. Zorman), Case Ассоциации выпускников (С. Zorman), Департамент по делам ветеранов через Премия заслуги обзора (B7122R), а также Advanced Платформа технический центр (C3819C).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Silicon wafer | University Wafer | Mechanical grade | |
Extruded acrylic sheet | Professional Plastics | SACR 062EF | Thickness 0.062" |
Razor blade | McMaster-Carr | 3962A3 | |
Tweezers | McMaster-Carr | 8384A47 | #5 tip |
Super Glue Gel | Loctite | 130380 | |
Air Brush | Snap-on Industrial | BF175TA | |
Air Compressor | Paasche | B002YKN8YO | D500 |
Thermocouple | Omega | HH12A | |
Hot plate | Cimarec | SP131325Q | |
CO2 direct-write laser | VersaLaser | 3.5 | |
Dessicator | Fisher Scientific | 08-595 | |
Lamp | custom-built | ||
Microtensile tester | custom-built |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены