11.24 : Аффинная хроматография

Аффинная хроматография — это мощный метод, широко используемый для разделения и очистки определенных биомолекул из сложных смесей. Он использует принцип высокоселективного связывания между аналитом и его аналогом (связывающим компонентом), например, взаимодействие антитела с антигеном. Аналог иммобилизуется на неподвижной фазе, образуя аффинную колонку. Неподвижная фаза обычно состоит из твердого носителя, например, агарозы или пористых стеклянных шариков, иммобилизующих (фиксирующих) аффинный лиганд. Подвижная фаза выполняет двойную функцию — поддерживает прочное связывание между аналитом и лигандом и впоследствии ослабляет взаимодействие для элюирования аналита. Только аналит связывается, когда смесь, содержащая желаемый аналит, проходит через колонку, в то время как другие вещества вымываются. Связанный аналит затем может быть элюирован путем изменения условий, таких как pH или ионная сила, что ослабляет его связывание.

Этот метод особенно ценен в биохимии из-за своей специфичности и применения для выделения белков, ферментов, субстратов, антител, антигенов, рецепторов и гормонов. Аффинная хроматография также может использоваться для выделения отдельных оптических изомеров лекарственных средств, которые могут проявлять различные терапевтические эффекты. Этот процесс включает использование моноклональных антител, специфичных для каждого стереоизомера.

Основным преимуществом аффинной хроматографии является ее исключительная специфичность, что делает ее идеальной для быстрого выделения биомолекул в препаративной работе.