Visualização em tempo real de molécula única do desenrolamento do DNA por CMG helicase

Em nosso laboratório, estamos estudando os mecanismos moleculares da replicação do DNA eucariótico. Queremos entender a dinâmica da duplicação do genoma no nível de uma única molécula. Visualizamos a replicação do DNA usando vários sistemas, incluindo proteínas purificadas e extratos derivados de ovos de Xenopus.

Muito do que sabemos sobre a replicação do DNA veio de experimentos em massa, imagens celulares e biologia estrutural. Esses métodos são realmente poderosos, mas geralmente são limitados no que podem nos dizer sobre a dinâmica ou comportamentos transitórios de proteínas individuais. É para isso que as técnicas de molécula única são realmente adequadas para estudar, e é por isso que seu uso está crescendo no campo.

Nosso protocolo para visualização ao vivo do desenrolamento do DNA descreve uma plataforma que pode ser construída e modificada para investigar diferentes aspectos da replicação do DNA. Pode fornecer uma melhor compreensão do mecanismo molecular da atividade do CMG na presença de componentes do ribossomo escolhidos e estresse replicativo. Para entender os sistemas complexos em jogo durante a replicação do DNA, isolamos proteínas-chave e visualizamos seu comportamento em tempo real in vitro.

Os insights que obtemos contribuem para uma imagem mais completa da replicação do DNA.