Nosso protocolo demonstra como manter o dispositivo LFPI corretamente. Ressalta-se a importância da rotina de limpeza e monitoramento para evitar o mau funcionamento do dispositivo em lesões inconsistentes. Portanto, o LFPI é um modelo de lesão utilizado para avaliar o TCE in vivo.
Reproduz de perto patologias associadas ao TCE humano, tornando-se um dos métodos mais bem definidos de TCE experimental. Dado que o LFPI é usado para reproduzir sintomas de TCE humano, ele nos permite montar experimentos que investigam diferentes aspectos do traumatismo cranioencefálico na esperança de encontrar medidas terapêuticas. Bolhas de ar na porta de enchimento ou transdutor são particularmente difíceis de remover devido à visibilidade limitada nessas áreas.
Ao preencher essas áreas, seja paciente, lento e cuidado para não introduzir ar. Para começar, retire cuidadosamente as seringas conectadas à carcaça do transdutor e à porta de enchimento e o cabo conectado ao transdutor de pressão. Desparafuse os botões de mão na parte de trás do dispositivo das abraçadeiras do cilindro para liberar o cilindro.
Remova o pistão na extremidade do cilindro, do transdutor, da carcaça do transdutor e dos anéis O do êmbolo. Escorra o líquido para fora do cilindro, adicione um detergente neutro, como detergente para lavar louça, ao cilindro e esfregue levemente usando um prato ou escova de garrafa. Para garantir que todo o detergente seja completamente enxaguado, encha o cilindro com água e enxágue completamente.
Aplique uma fina camada de vaselina no êmbolo do pistão e prenda o êmbolo do pistão com o êmbolo saliente aproximadamente 32 milímetros do cilindro. Aplique também uma fina camada de vaselina nos outros O-rings e fixe-os ao cilindro, exceto no O-ring na porta de enchimento. Enrole a fita de teflon duas vezes ao redor dos fios do transdutor.
Conecte uma seringa de 10 mililitros cheia de fluido desgaseificado e livre de bolhas de ar ao cubo de bloqueio Luer na carcaça do transdutor. Segure o transdutor com a extremidade rosqueada apontada para cima e preencha completamente o poço dentro da região rosqueada do transdutor com o fluido desgaseificado. O objetivo aqui é encher bem o transdutor sem introduzir bolhas de ar.
Tenha cuidado para não danificar a membrana delicada no fundo do poço. Com o cilindro colocado em um ângulo para evitar que o ar volte a entrar na carcaça do transdutor, conecte a carcaça do transdutor ao cilindro e use uma chave inglesa para apertá-lo confortavelmente. Remova a tampa da porta de enchimento e do cilindro quando o fluido desgaseificado atingir aproximadamente dois terços da capacidade do cilindro.
Coloque o cilindro horizontalmente e termine de enchê-lo com fluido desgaseificado. Substitua a tampa na porta de enchimento e feche todas as torneiras. Manipule o cilindro para trabalhar quaisquer bolhas de ar para a porta de enchimento.
Abra a torneira na porta de enchimento e injete fluido usando a seringa na carcaça do transdutor para forçar quaisquer bolhas de ar para fora da porta. Inspecione todo o dispositivo e certifique-se de que não há bolhas de ar. Adicione uma seringa de 10 mililitros cheia de líquido desgaseificado ao cubo Luer lock na tampa de enchimento e reconecte o cilindro à base usando os parafusos manuais.
Certifique-se de que o cilindro esteja horizontal e alinhado com o centro do martelo pesado no pêndulo. A imagem da forma de onda de pressão produzida por um dispositivo LFPI devidamente limpo e funcionando é mostrada nesta figura. Ao realizar uma lesão ou testar o dispositivo LFPI, a forma de onda de pressão deve mostrar um único pico agudo.
A presença de bolhas de ar no dispositivo resultará em uma forma de onda com vários picos curtos. As saídas do osciloscópio para os não contaminados, 5 mililitros de injeção de ar, 10 mililitros de injeção de ar e 15 mililitros de injeção de ar são mostrados aqui. As técnicas mostradas neste vídeo reduzem a probabilidade de gases serem introduzidos no dispositivo e ajudam a remover quaisquer pequenos bolsões de gás que possam estar contaminando o fluido.
Portanto, remover bolhas de ar é o passo mais crucial a ser lembrado ao usar o dispositivo LFPI. Então, após esse procedimento, nosso laboratório é capaz de induzir lesões em camundongos e usar fatias cerebrais vivas para registrar a atividade neuronal. Você pode encontrar um de nossos vídeos sobre isso no site da JoVE.
Este dispositivo tem sido um divisor de águas no mundo do TCE. Atualmente, é o método mais utilizado para induzir lesões em modelos animais e abriu caminho para encontrar melhores terapêuticas para o TCE humano.
