O TGFR oferece uma avaliação em tempo real das funções renais. Em comparação com os marcadores tradicionais, o TGFR pode monitorar alterações na função renal nos mesmos animais várias vezes. Além disso, a técnica não requer nenhuma coleta de sangue ou urina.
Com os recentes avanços no xenotransplante, mais pesquisas serão conduzidas usando o modelo suíno. Portanto, acreditamos que essa ferramenta será essencial para a pesquisa translacional e é mais provável que seja utilizada clinicamente nos próximos anos. O experimento é conduzido em leitões de três a sete dias de idade.
Os animais são propensos a hipotermia, hipovolemia e outras complicações decorrentes da cirurgia. Portanto, é necessário um monitoramento rigoroso durante todo o procedimento. Além disso, a metodologia requer prática, pois envolve traqueostomia e cannulações de vasos.
Depois de preparar o animal para o procedimento, use uma lâmina cirúrgica para criar uma incisão vertical paramediana esquerda de cinco a seis centímetros, pois o ceco em porcos fica na fossa paralombar esquerda. Dissecar as camadas da parede abdominal, evitando lesão dos vasos epigástricos superficiais. Uma vez que a camada peritoneal é incisada, use um afastador para melhorar o acesso às estruturas intra-abdominais e identificar o cólon espiral no quadrante superior esquerdo do abdômen.
Para localizar o ceco, trace o cólon espiral caudal e dorsalmente. O cólon espiral na base do ceco é unido ao ílio. Ligue o ceco apenas distal à junção ileocecal.
Usando uma agulha de calibre 18, faça sete punções no ceco e extrudir fezes para a área peritoneal. Feche as camadas abdominais com uma sutura de seda 3/0, usando pontos simples interrompidos ou contínuos. Um grampeador também pode ser usado para fechar a camada da pele, se disponível.
Após oito horas de ligadura cecal, inicie a medição da TFG transdérmica. Use o software MB Service versão 3.0 para ajustar a taxa de amostragem no dispositivo GFR. Usando o conector USB, conecte o dispositivo GFR transdérmico ao computador.
Abra o software MB Service. Clique em conectar e ajuste o tempo para 4.000 milissegundos. Clique em gravar para salvar as configurações e, em seguida, clique em desconectar.
Fixe os adesivos de dupla face com uma janela transparente a um lado do dispositivo. Conecte a bateria ao dispositivo, garantindo que o diodo emissor de luz sobreponha a janela transparente para permitir a detecção do rastreador. Uma vez que a bateria esteja conectada, cole imediatamente o adesivo com o dispositivo no lugar.
Certifique-se de que está bem seguro. Como os leitões estão profundamente anestesiados, a fita pode ser desnecessária para manter o dispositivo no lugar. Prepare 50 miligramas por mililitro de solução de FITC-sinitrina com solução salina e extraia a dosagem apropriada em uma seringa.
Ligue a seringa com medicação a um lado de uma torneira de três vias e a uma descarga salina do outro lado da torneira. Empurre o FITC-sinistrina, imediatamente seguido por um bolo salino de cinco mililitros antes de fechar a torneira de três vias para a veia do leitão. Mantenha o dispositivo ligado ao leitão durante quatro horas.
Para evitar artefatos de movimento durante esse período, mantenha o leitão sob anestesia, conforme descrito no manuscrito. No final das quatro horas, remova o dispositivo e desconecte imediatamente a bateria. Conecte o dispositivo de TFG transdérmico ao computador usando o conector USB fornecido pelo fornecedor.
Abra o software de laboratório MB para recuperar dados do dispositivo. Para salvar os dados brutos, clique em conectar e selecione ler. Em seguida, aguarde até que o dispositivo termine a leitura.
Clique em renomear e, finalmente, clique em salvar. Processar e avaliar os dados salvos no software de análise de acordo com as instruções do manual. Resumidamente, abra o estúdio MB e clique em carregar para importar os dados salvos.
Ajuste as posições de deslocamento, início e parada usando os marcadores automatizados. Remova os artefatos, se necessário. Selecione o modelo de três compartimentos e clique em ajustar para obter uma leitura mostrando a depuração FITC-sinitrina em minutos e calcule o TGFR usando esta equação.
Tanto os animais simulados quanto os de sepse tinham pesos comparáveis. Após 12 horas de sepse, foram observados níveis séricos aumentados de proteína C-reativa, um marcador de sepse, no grupo sepse. Curvas de clearance de FITC-sinitrina foram mostradas para leitões simulados e sépticos 12 horas após a cirurgia.
Suínos sépticos com função renal prejudicada demonstraram um aumento da área sob a curva. Os leitões com sepse apresentaram depuração prejudicada da FITC-sinistrina, indicando lesão renal aguda. A meia-vida média para FITC-siniestrina nos grupos sham e sepse foi de 114 e 537 minutos, respectivamente.
A TFG média no grupo simulado foi significativamente maior do que no grupo sepse. O nível de creatinina sérica em zero e 12 horas foi semelhante no grupo simulado. No entanto, observou-se um aumento significativo no nível de creatinina nos suínos sépticos após 12 horas.
Certifique-se de que a bateria está conectada corretamente aos leitões. Se as baterias forem desalojadas, o dispositivo não funcionará. Tente injetar o FITC-sinistro em um bolo de fluido para evitar múltiplos picos.
Além disso, certifique-se de que o dispositivo esteja conectado corretamente aos leitões para evitar artefatos de movimento. Com uma medição em tempo real da TFG, podemos avaliar adequadamente a função renal para detectar LRA em estágio inicial e, possivelmente, avaliar agentes terapêuticos sob investigação.
