Este método utiliza frutas de café verde para testar a toxicidade dos inseticidas contra o borer de café. A aplicação de inseticida é realizada antes ou depois da infestação de insetos para estudar a repelência de mortalidade de insetos e outros efeitos. O uso de café verde real com nutrientes adequados para o crescimento de insetos é a maneira mais adequada de avaliar a toxicidade de compostos para insetos em condições naturais simuladas.
O protocolo permite a avaliação dos efeitos tóxicos dos inseticidas químicos e em relação a patógenos como fungos ou substâncias repelentes. Esta infecção dos frutos e dos insetos é o passo crítico, pois a desinfecção inadequada pode causar a morte de insetos devido à contaminação. A qualidade dos insetos também é importante, pois insetos fracos superestimarão os resultados de um produto tóxico.
A demonstração visual permite identificar o estágio adequado dos frutos do processo de infestação de insetos, o momento apropriado para disseminar a substância tóxica. E a maneira de dissecar os frutos. Demonstrando o procedimento estará Claudia Martinez, assistente de pesquisa do laboratório.
Para começar, recolha as frutas verdes do café no início da manhã com a idade de desenvolvimento aproximada de 120 a 150 dias após a floração das plantações de café. Selecione cerca de 300 frutas uniformemente e saudáveis e retire os peduncles. Mergulhe as frutas verdes do café em uma solução de sabão de 2% e limpe bem esfregando-as.
Em seguida, enxágue as frutas três vezes com água limpa. Mergulhe-os em solução de hipoclorito de sódio de 0,5% e coloque-os no shaker por 10 minutos a 110 revoluções por minuto. Enxágüe as frutas com água limpa três vezes e seque-as com toalhas de papel estéreis.
Irradie os frutos colocando-os a 55 centímetros da fonte UV por 15 minutos, dentro de uma estação de fluxo de laminar horizontal habilitada para UV. Mova os frutos a cada cinco minutos para garantir a irradiação adequada de toda a fruta. Para configurar os bioensadias, mergulhe os borers de café que surgiram no mesmo dia em solução de hipoclorito de sódio de 0,5% e agitar-os lentamente com um pincel por 10 minutos.
Filtre esses insetos através de um pano de musselina e lave-os três vezes com água destilada estéril. Remova o excesso de água com toalhas de papel estéreis. Prepare um grupo de 30 frutas verdes por unidade experimental e coloque-as em uma caixa de plástico.
Aplique diferentes concentrações de um produto de teste para avaliação utilizando uma unidade de pulverização portátil, aqui, foram utilizadas emulsões de 5% e 6%. Como controle, pulverize um grupo de frutas verdes de café com água. Utilize pelo menos três unidades experimentais por tratamento, pulverizando uma após a outra.
Em um capô estéril, solte dois adultos de borer de café por fruta verde de café, e cubra as caixas após 30 minutos. Deixe as caixas de plástico com as frutas de café verde infestadas no escuro dentro de uma sala ou incubadora, tendo condições controladas. Após 1, 7, 15 e 21 dias, conte o número de frutas borer e insetos vivos e mortos fora das frutas em cada caixa.
Aos 20 dias após a infestação, disseca cada fruta de café verde sob um microscópio estéreo com ampliação de 10x e conte o número de sementes saudáveis ou sementes danificadas pelos insetos em cada fruta. Conte os diferentes estágios biológicos de borer de amora de café. Observe o número de insetos mortos em cada semente para determinar a mortalidade de insetos por unidade experimental.
Em um capô estéril, libere os adultos de borer de café para as frutas de café verdes anteriormente desinfetadas em uma proporção de dois para um e permita que a infestação prossiga por três horas a 21 graus Celsius. A maioria das frutas verdes de café deve estar infestada após três horas com o abdômen do borer de café ainda exposto. Selecione 46 frutas infestadas e coloque-as em um rack de plástico de 96 poços para que o tratamento possa ser pulverizado diretamente no borer de café perfurando a fruta.
Borrife três racks pelo menos três vezes para tratamento, um após o outro e cubra os racks após 30 minutos. Após 20 dias, disseca as frutas verdes do café sob um microscópio estéreo a 10 x ampliação e conte o número de sementes saudáveis ou sementes danificadas pelos insetos em cada fruta. Conte os diferentes estágios biológicos de borer de café e o número de insetos mortos em cada semente para determinar a mortalidade de insetos por unidade experimental.
Siga os passos iniciais para avaliar um produto com efeito protetor sobre as frutas e libere as frutas verdes de café adultos nas caixas plásticas. Em seguida, conte o número de borers de café que voam para longe das caixas e o número que infesta as frutas verdes do café. Após a incubação, em condições controladas, seguida de dissecção em 20 dias após a infestação e contagem das sementes e insetos mortos, seguem os passos traçados para avaliação do produto, após a infestação de borer de café.
Conte o número de aborrecimentos de café que saíram das frutas verdes do café, ou voaram para longe das frutas. Após pulverizar cada tratamento, siga os passos da incubação em condições controladas para determinar a mortalidade por unidade experimental. 5% e 6% de inseticida aplicados no borer de café, causaram alta mortalidade de insetos no dia 20, e apresentaram diferenças significativas em relação ao controle.
Veram-se que a aplicação de inseticida dois resultou em 94% de sementes saudáveis, e um inseticida resultou em 89% das sementes saudáveis. 37% das sementes não estavam infestadas no grupo controle. No caso da pós-infestação, os produtos penetraram na cutícula de insetos causando mortalidade de insetos.
A maior mortalidade ocorreu com inseticida dois. Os efeitos dos inseticidas foram refletidos no percentual de sementes saudáveis não infectadas, no dia 20 da avaliação. Uma população reduzida de insetos foi encontrada dentro das sementes de café em comparação com a população de insetos encontrada no grupo controle, pulverizada com água.
Ação combinada entomopatótica e repelente resultaram em danos mínimos de sementes e mortalidade máxima de insetos. Essa infecção dos frutos e a desinfecção dos insetos garantem o sucesso do protocolo. Essa metodologia também pode ser utilizada para avaliar a tolerância ou resistência das frutas de café ao borer de café.
Um efeito negativo também pode ser observado contra a população de insetos no caso de sementes de café resistentes a insetos. Essa metodologia pode ser utilizada não apenas na entomologia para avaliação de inseticidas com diferentes modos de ação, mas também na melhor formação vegetal para avaliação de variedades tolerantes e patologia vegetal para estudar a interação fruta/patógeno.
