Esta técnica pode ser usada para rever algumas propriedades básicas da eletrofisiologia inter-regional para a lateralização do hemisfério, bem como a conectividade, direcionalidade e acoplamento. A medição eletrofisiológica é um método sensível e eficaz de avaliação nos animais, atividades neuronais. Este protocolo fornece uma melhor maneira de se sustentar na sincronização de sinais elétricos.
A compreensão do mecanismo subjacente de uma possível lateralização cerebral alterada na patogênese da doença de Alzheimer, pode fornecer novas percepções sobre potenciais biomarcadores para o tratamento de Alzheimer. Antes da cirurgia, confirme a profundidade da anestesia do camundongo, realizando uma pinça traseira ou dedo do pé com fórceps. Em seguida, posicione o mouse no aparelho estereotax e conserte a cabeça.
Aplique pomada em ambos os olhos para mantê-los úmidos. Em seguida, raspe a cabeça e esterilize a área. Faça uma pequena incisão de 12 a 15 milímetros, no meio da área raspada.
Usando fórceps, puxe suavemente o couro cabeludo para longe da linha média. Depois, separe a pele suavemente e remova o tecido residual. Limpe o crânio, usando brotos de algodão revestidos de peróxido de hidrogênio.
Sob um microscópio estéreo, faça dois pequenos furos, de um a 1,5 milímetros de raios, tanto nos lados esquerdo quanto direito do crânio, para permitir a inserção dos microeletrodos de gravação nas regiões M2. Remova cuidadosamente a dura-segra com uma agulha de tungstênio. Em seguida, insira dois microeletrodos de gravação separados, preenchidos com cloreto de sódio molar 0,5, nos orifícios, em um ângulo de 60 graus, utilizando micromanipuladores mecânicos.
Para gravação de LFP, baixe lentamente os eletrodos de vidro esquerdo e direito para as coordenadas M2. Para controle de qualidade, teste a resistência de cada eletrodo, utilizando o amplificador diferencial. Em seguida, defina o processo de gravação em 0,1 hertz high pass, e 1000 hertz low pass, com 1000 vezes amplificação.
Colete os dados de LFP bruto digitalizados em estado estável, por pelo menos 60 segundos, com o rato respirando uniformemente a duas respirações por segundo, sob anestesia. Depois de gravar, levante lentamente os eletrodos do cérebro. Salve os dados e analise offline, com o software de análise.
Para realizar a análise de correlação cruzada, no software de análise, análise de cliques, em seguida, correlação de forma de onda e importação dos dados. Em seguida, atribua um sinal de canal de forma de onda para ser o primeiro canal e o outro como referência. Defina a largura como dois, e offset como um.
Posteriormente, defina a duração de ambos os LFPs para 100 segundos, selecionando o tempo de início e o tempo final. Em seguida, pressione o botão de processo para realizar a análise de correlação cruzada. Clique no arquivo, exporte como, e salve os resultados de correlação cruzada correspondentes ao gráfico pop-up resultante no formato de texto.
Depois, remova os valores de correlação nos atrasos de tempo variando em zero mais e menos 01 segundo, em seguida, lidar com o resto dos dados de correlação cruzada. Para realizar a análise de coerência, execute os dados no software de análise. Em seguida, organize os dois sinais LFP como os canais de forma de onda primeiro e segundo e, em seguida, defina o valor do tamanho do bloco como 4096.
O tamanho do bloco significa o número de pontos de dados usados no primeiro para transformação real. Quanto maior o tamanho do bloco, melhor a resolução de frequência. Mova as linhas pontilhadas manualmente, para garantir que a precisão de tempo para sinais em ambos os canais esteja sendo definida como o mesmo período.
Pressione o botão de adicionar área para carregar a área e realize a análise de coerência. Em seguida, clique em arquivo e salve como, para salvar os resultados de coerência correspondentes ao gráfico pop-up resultante no formato de texto. Para ver se a patologia precoce da doença de Alzheimer prejudica a capacidade de lateralização do hemisfério, foram registrados LFPs extracelulares no M2 esquerdo e direito de camundongos APP/PS1 e controles do tipo selvagem, e sua correlação cruzada foi analisada.
Em camundongos do tipo selvagem, os resultados demonstraram que a correlação média entre os LFPs esquerdo e direito em atrasos de tempo positivos diferia significativamente daquele em atrasos de tempo negativos, implicando a existência de assimemetrias hemisféricas nas áreas M2 dos controles do tipo selvagem. Em comparação, os LFPs esquerdo e direito dos camundongos APP/PS1 apresentaram maior sincronização no domínio do tempo, sugerindo uma redução da assimetria entre o M2 esquerdo e direito. As oscilações gama foram então filtradas a partir dos LFPs e foi realizada uma análise de coerência para medir a semelhança dos sinais elétricos na faixa de frequência gama. O resultado mostrou que a coerência gama entre o M2 esquerdo e direito em camundongos APP/PS1 foi significativamente maior do que nos camundongos do tipo selvagem, indicando uma maior sincronização e, consequentemente, redução da lateralização entre o M2 esquerdo e direito em camundongos APP/PS1.
Ouretano é tóxico e cancerígeno, por isso, por favor, tenha sempre cuidado, e siga as normas de segurança ao manuseá-lo. É muito importante testar a profundidade da anestesia de hora em hora, a fim de garantir que LFPs estáveis sejam registrados. O processo de gravação e análise pode ser aplicado a outras vias cerebrais, especialmente para laboratórios que não possuem sistemas para gravação multicanal em animais em movimento livre.
