Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo de nutrição das abelhas, sobre a ligação entre a má nutrição e o crescimento e desenvolvimento da glândula hipofarngária. A principal vantagem desta técnica é que pode-se usá-la para manchar, visualizar e medir as glândulas hipofarngentais de abelhas. Geralmente, indivíduos novos nesse método lutarão porque as glândulas hipofarngentais podem ser difíceis de localizar e dissecar sem orientação visual.
Antes de iniciar o procedimento, despeje cera de ajuste fria derretida em uma placa de vidro Petri. Adicione 20 microlitros de mancha giemsa recém-preparada em um poço, e 50 a 100 microlitros de soro fisiológico em um poço adjacente de um slide de microscópio, por abelha enfermeira a ser processada. Quando a cera estiver definida, use uma tesoura de micro mola de 10 milímetros para remover a cabeça da primeira abelha e use fórceps, um microscópio dissecando e uma caneta de escultura de cera para incorporar a cabeça frontal na placa de dissecção de cera.
Insira pinos nos olhos e na boca para fixar a cabeça na placa, e use uma lâmina de barbear afiada e quebrável fixada em um pino para fazer uma incisão de dois a três milímetros entre os olhos e mandíbulas em cada lado da placa facial. Execute suavemente a micro tesoura sob a placa facial e corte o nervo antena que corre entre a antena e o cérebro. Usando fórceps finos, pegue a placa facial pela boca, e fixe o tecido de lado para baixo na cera com fórceps finos e um pino.
Em seguida, pipeta 20 microliters de PBS na seção aberta da cabeça. As glândulas hipofaringárias parecem uma série de pérolas e estão localizadas no topo do cérebro se intactas. Usando fórceps de ponto super fino, colhe suavemente uma das glândulas para imersão imediata na mancha de Giemsa no slide de microscopia.
Após uma incubação de cinco minutos, transfira a glândula para a piscina de soro fisiológico no mesmo slide, cortando a glândula em pedaços menores sob o microscópio com a micro tesoura conforme necessário. Para medir as glândulas, abra o programa de medição do microscópio de luz e selecione a ampliação de 10 vezes. Coloque o slide no estágio do microscópio e localize manualmente as glândulas através da peça ocular.
Aumente a ampliação para 60 a 80 vezes e ajuste manualmente o foco das glândulas na nova ampliação. Ajuste ainda mais o foco das glândulas na imagem ao vivo no monitor e digite o nome da imagem e a descrição da amostra na caixa de nome da imagem. Clique em Adquirir imagem para obter uma imagem das glândulas e na guia Análise, selecione a ferramenta Área e dese selecione Valor em guias Exibir.
A unidade também será não selecionada. Defina todas as outras configurações como padrão. Para medir o acini, clique ou segure continuamente o botão esquerdo do mouse enquanto traça um perímetro acinus de cada vez o mais cuidadosamente possível.
Uma vez que todos os acini de uma única imagem tenham sido medidos selecione 'Criar relatório', confirmando que as opções apropriadas estão selecionadas e clique em Exportar. Em seguida, salve o relatório em um formato adequado e limpe a área de trabalho e os materiais conforme apropriado. É difícil encontrar um contraste adequado e bordas definidas do acini em tecidos não manchados.
Nas glândulas hipofarínngas manchadas, as bordas do acini são afiadas devido ao contraste melhorado entre o tecido manchado e o fundo branco. As glândulas hipofaringárias crescem ao longo do tempo em abelhas que são alimentadas com mel misturado com pólen, em comparação com abelhas que são alimentadas com mel sozinhas. O tamanho da glândula hipofarngeal também é sensível ao tipo de pólen fornecido.
Por exemplo, as abelhas alimentadas com deserto ou pólen de amêndoas demonstram glândulas de tamanho equivalente, enquanto as abelhas alimentadas com dietas de pólen do sudeste exibem glândulas que são maiores que as abelhas alimentadas apenas com mel, mas menores do que as glândulas das abelhas alimentadas com amêndoas ou pólen do deserto. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar-se de dissecar cuidadosamente as glândulas e não manchá-las demais. Não se esqueça que trabalhar com a mancha de Giemsa pode ser perigoso e que precauções, como manter a mancha longe das chamas, usar o descarte adequado, e usar luvas e proteção ocular devem ser sempre tomadas durante a realização deste procedimento.
