Esta pesquisa foi apoiada pelo bem-estar público &#38; programa de pesquisa de segurança através da nacional Research Foundation de Coreia (NRF) financiado pelo Ministério da educação, ciência e tecnologia (NRF-2014M3C8A5030612) e apoiado por The Chung Yang, Cha Young Sol, M.D. e Jang Oi Joo Yeu Sa Memorial fundo.

todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo cuidado do Animal Internacional e Comité de uso (IACUC) de Coreia Universidade faculdade de medicina. 6 semanas após o nascimento, experimentadores podem induzir enthansasia e recolher vários exemplos como a pele e soro de ratos.
 1. indução da AD por tratamento Neonatal de capsaicina <ol><li>para preparar a 5 mg/mL solução de capsaicina, adicionar 50 mg de capsaicina a 1 mL de Tween 80 e 1 mL de etanol 100% em um tubo cônico de 15 mL.</li>
	<li>Adicionar 8 mL de solução salina ao tubo cónico. Agite o tubo vigorosamente até sem camadas separadas são visíveis</li> <li>injecte a solução de capsaicina (10 µ l/g) no tecido subcutâneo, na linha média e posterior do pescoço de um rato Sprague-Dawley neonatal.
	<ol><li>Entregar a capsaicina entre 12 h a 48 h após o nascimento (crítica). 
		Nota: Se a injeção é adiada por mais de alguns dias, dermatite não irá desenvolver ou serão mantidas apenas por algumas semanas. Se a injeção é muito cedo, dificuldade respiratória pode ocorrer devido à dor severa.</li>
		<li>Para evitar ratos neonatais de parada respiratória devido a injeção de capsaicina, empurrar o peito dos neonatos para estimular a respiração ou manter os recém-nascidos em uma câmara de oxigênio, até que a respiração se torna normal... desde que a dor induzida por capsaicina pode desencorajar a respiração, adicionar anestesia geral possivelmente poderia agravar a dificuldade para respirar. Assim, os experimentadores devem não usar anestésico para aumentar a sobrevida de ratos.</li>
	</ol></li></ol> 2. Avaliação de prurido e dermatite em um modelo do rato de AD <ol><li>medição do prurido contando espontâneo arranhando comportamento <ol><li>preparar plástico câmaras (20 x 30 cm x 20 cm) equipado com um espelho, para permitir a cobertura total para visualização e furos para permitir que os ratos respirar.</li>
		<li>Conjunto para cima e ajustar a câmera de vídeo digital corretamente para gravar o espelho vistas e vistas frontais dos ratos simultaneamente.</li>
		<li>Lugar ratos no plástico de câmara e cobrir o teto da câmara com um objeto pesado para impedir abertura.</li>
		<li>Gravar os comportamentos espontâneos de ratos por 1h, reproduza os clipes de vídeo e contar o número de comportamentos de risco.</li>
	</ol></li> <li>Avaliação da lesão de pele usando um sistema de Pontuação <ol><li>colocar o rato na câmara de indução.</li>
		<li>Ativar o medidor de fluxo de oxigênio de 2 L/min vazão e ajustar o vaporizador de isoflurano para 3% para anestesia.</li>
		<li>Identificar a extensão e gravidade da Dermatite das orelhas e outras partes de um rato.</li>
		<li>Define o tamanho da unidade para a extensão das lesões de pele como 0,25 cm 2 e a gravidade das lesões de pele pela seguinte tabela 1: índice de gravidade; grau de Pontuação de dermatite, multiplicando-se a extensão e gravidade (ver Pontuação de dermatite em < classe forte = "xfig" > figura 1B).</li>
	</ol></li></ol> 3. Exposição de FA gasoso para animais <ol><li>preparação da câmara de inalação <ol><li>preparar uma caixa de vidro acrílico (55 cm x 40 cm x 35 cm) que tem duas saídas em lados opostos.</li>
		<li>Cuidado. Para circulação do gás FA, coloque a tomada mais elevada do que a entrada e fazer o tamanho da saída do maior que o de entrada de.</li>
		<li>Cuidado. Para a medição da concentração de gás interno, do outro lado das saídas, perfurar três pequenas passagens, que podem ser fechadas.</li>
		<li>Connect tubos para ambas as saídas. Colocar um tubo de saída para capa de circulação ou fora do prédio para a emissão do gás e conectar o outro tubo de saída de um regulador de oxigênio médico.</li>
		<li>Colocar uma gaiola do rato convencional dentro da caixa de vidro acrílico.</li>
		<li>Colocar ratos na gaiola de uma semana após o nascimento por 5 semanas (2 h/dia e 5 dias/semana).</li>
		<li>Fechar a caixa de vidro acrílico tão firmemente quanto possível para evitar o vazamento de gás. 
		Nota: Para a vedação, a tampa da câmara deve conter de borracha. Aplicar a película aderente para embrulhar a câmara para vedação.</li>
	</ol></li> <li>Geração de FA gasosa usando um regulador de oxigênio médico <ol><li>dissolver 5 g de FA em 1 L de água.</li>
		<li>Colocar a solução de FA de 0,5% na garrafa do umidificador de regulador de oxigênio médico.</li>
		<li>Depois de ligar o tubo de entrada para o regulador, gire o regulador e definir a taxa de fluxo de 5 L/min.</li>
		<li>Ajustar a concentração da solução e a taxa de fluxo para determinar a concentração do gás na câmara.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergy+and+hypersensitivity.+Nature+versus+nurture+in+allergy+and+hypersensitivity.">Allergy and hypersensitivity. Nature versus nurture in allergy and hypersensitivity.</a> Curr Opin Immunol. 15 (6), 603-608 (2003).</li><li>Novak, N., Bieber, T., Leung, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+mechanisms+leading+to+atopic+dermatitis.">Immune mechanisms leading to atopic dermatitis.</a> The J Allergy Clin Immunol. 112 (Suppl 6), S128-S139 (2003).</li><li>Back, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronically+relapsing+pruritic+dermatitis+in+the+rats+treated+as+neonate+with+capsaicin;+a+potential+rat+model+of+human+atopic+dermatitis.">Chronically relapsing pruritic dermatitis in the rats treated as neonate with capsaicin; a potential rat model of human atopic dermatitis.</a> J Dermatol Sci. 67 (2), 111-119 (2012).</li><li>Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+atopic+dermatitis.">Animal models of atopic dermatitis.</a> J Invest Dermatol. 129 (1), 31-40 (2009).</li><li>Han, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde-Induced+Aggravation+of+Pruritus+and+Dermatitis+Is+Associated+with+the+Elevated+Expression+of+Th1+Cytokines+in+a+Rat+Model+of+Atopic+Dermatitis.">Formaldehyde-Induced Aggravation of Pruritus and Dermatitis Is Associated with the Elevated Expression of Th1 Cytokines in a Rat Model of Atopic Dermatitis.</a> PLOS ONE. 11 (12), e0168466 (2016).</li><li>Xu, B., Aoyama, K., Takeuchi, M., Matsushita, T., Takeuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+cytokine+mRNAs+in+mice+cutaneously+exposed+to+formaldehyde.">Expression of cytokine mRNAs in mice cutaneously exposed to formaldehyde.</a> Immunol Lett. 84 (1), 49-55 (2002).</li><li>Kim, J. Y., Jeong, M. S., Park, K. Y., Seo, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggravation+of+atopic+dermatitis-like+symptoms+by+consecutive+low+concentration+of+formaldehyde+exposure+in+NC/Nga+mice.">Aggravation of atopic dermatitis-like symptoms by consecutive low concentration of formaldehyde exposure in NC/Nga mice.</a> Exp Dermatol. 22 (3), 219-221 (2013).</li><li>Laske, N., Niggemann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+the+severity+of+atopic+dermatitis+correlate+with+serum+IgE+levels?.">Does the severity of atopic dermatitis correlate with serum IgE levels?.</a> Pediatr Allergy Immunol. 15 (1), 86-88 (2004).</li><li>Fujii, Y., Takeuchi, H., Sakuma, S., Sengoku, T., Takakura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+2,4-dinitrochlorobenzene-induced+chronic+dermatitis+model+in+rats.">Characterization of a 2,4-dinitrochlorobenzene-induced chronic dermatitis model in rats.</a> Skin Pharmacol Physiol. 22 (5), 240-247 (2009).</li><li>Sugimoto, T., Xiao, C., Ichikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+primary+neuronal+death+induced+by+capsaicin+and+axotomy+involves+an+apoptotic+mechanism.">Neonatal primary neuronal death induced by capsaicin and axotomy involves an apoptotic mechanism.</a> Brain Res. 807 (1-2), 147-154 (1998).</li><li>Saito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+skin+inflammation+induced+by+repeated+exposure+of+toluene,+xylene,+and+formaldehyde+in+mice.">Characterization of skin inflammation induced by repeated exposure of toluene, xylene, and formaldehyde in mice.</a> Environ Toxicol. 26 (3), 224-232 (2011).</li><li>Jung, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde+exposure+induces+airway+inflammation+by+increasing+eosinophil+infiltrations+through+the+regulation+of+reactive+oxygen+species+production.">Formaldehyde exposure induces airway inflammation by increasing eosinophil infiltrations through the regulation of reactive oxygen species production.</a> Environ Toixcol Pharmacol. 24 (2), 174-182 (2007).</li></ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

O protocolo descrito aqui para a indução de sintomas de AD em ratos pode ser adaptado para estudar a fisiopatologia do AD e usado como uma ferramenta de triagem para teste de drogas. O instrumento para a exposição de FA gasoso de ratos tratados com capsaicina pode ser aplicado para avaliar os efeitos da exposição a diversos gases em diversos modelos animais.
O modelo de AD tratados com capsaicina neonatal depende de um procedimento mais simples do que outros modelos atópicas como o DNCB tratamento modelo9 e epidérmica sensibilização modelo4e é mais acessível do que o NC/Nga rato4. A manifestação de sintomas de AD no modelo AD é consistente. Além disso, em alguns casos, este protocolo provoca lesões na pele de AD-como Policondrite espontânea nos ratos afetados sem qualquer tratamento adicional3. Injeção de capsaicina sobredosagem evocou célula neuronal morte e neurocutâneas inflamação10 e causou dor severa nos ratos. Alguns deles possivelmente sofriam de parada respiratória devido à dor. É de importância para impedi-los de parada respiratória. Assim, após a injeção de capsaicina, os filhotes devem ser colocados em uma câmara de oxigênio e alguns filhotes podem exigir a compressão do peito. Tratamento neonatal capsaicina não induz a sintomas de AD em ratos, e o motivo para isso ainda é desconhecido. Assim, a intervenção genética é dificilmente aplicável a este modelo de AD usando uma estirpe de mata-mata, mas outras abordagens genéticas como siRNA plausivelmente compensar esta lacuna. Além disso, a manifestação consistente de AD-como sintomas do modelo rato é benéfica para estudar a patogênese de doenças AD, bem como aplicá-la a uma ferramenta de rastreio de drogas.
O estabelecimento da câmara circulatório para exposição FA requer apenas equipamentos convencionais de laboratório, incluindo uma caixa de acrílico e um regulador de oxigênio médico. Além disso, alterando-se a solução na garrafa do umidificador de regulador de oxigênio, diversos tipos de gases podem ser aplicados no experimento. Concentração do gás na câmara pode ser mantida facilmente ajustando a taxa de fluxo do regulador e a concentração da solução. É fundamental para garantir uma selagem apertada na instalação do sistema circulatório para a exposição de FA para o tratados com capsaicina AD rato modelo usando uma câmara de acrílico e um regulador de oxigênio médico. Não só porque a concentração do gás na câmara pode diferir cada vez devido a fugas, mas também o gás está vazando pode prejudicar os experimentadores. Vaporização de alguns compostos orgânicos voláteis (COV) muitas vezes bloqueia o tubo pela cristalização. Assim, é relevante para evitar entupimentos por meio do gerenciamento de tubo contínuo para uso a longo prazo, regularmente, substituindo os tubos. Este sistema de vaporização reflete mais precisamente a progressão da doença em pacientes do que os métodos de aplicação tópica11. Este método revelou características distintas dos efeitos da inalação de FA em um modelo do rato do anúncio em comparação com os estudos anteriores que exposto FA a ingênua animais7,12.

Para interrogar os efeitos da inalação de formaldeído (FA) na progressão da dermatite atópica (AD), temos estabelecido um protocolo para indução de AD e desenvolveu uma câmara de circulação convencional para exposição crônica de FA.
AD é uma doença de pele inflamatória crônica atribuída para as interações complexas entre a predisposição genética e gatilhos ambientais1,2. Um modelo animal adequado é necessário estudar a AD no estado pré-clínicos. Isso é mais importante quando a elucidação da patogenia da AD sob a influência de fatores ambientais. Além disso, para melhor investigar os efeitos dos gatilhos ambientais sobre a progressão de AD, é essencial para separar os fatores ambientais individuais e quantificar o grau de exposição.
Demonstrámos um modelo do rato de romance de AD induzida pelo tratamento neonatal capsaicina. Este modelo de AD3 tem alguns méritos sobre outros modelos de AD, como os modelos AD induzidos pela sensibilização epidérmica, os modelos AD geneticamente modificadas e os modelos de rato espontânea de AD4. Em primeiro lugar, este modelo desenvolve sintomas de AD na idade de 3 semanas, que corresponde ao Infante AD e é mais cedo do que outros modelos de rato espontânea de AD, tais como o rato NC/Nga. Em alguns casos, ao contrário dos modelos AD geneticamente modificadas, os sintomas dos modelos AD subside em recaída espontaneamente durante um período de 20 semanas. Além disso, o processo de indução de sintomas de AD no modelo é mais fácil do que o modelo de sensibilização epidérmica, que é mais parecido com a dermatite de contato alérgica, na perspectiva do processo de indução.
Nós introduzimos o romance protocolo para exposição de FA a um modelo animal por meio de uma câmara de vidro acrílico e um regulador de oxigênio médico convencional5 para estudar os efeitos da inalação de FA no desenvolvimento da AD em períodos infantis e adolescentes. O regulador nos permitiu expor os animais para uma concentração constante de gás, ajustando as taxas de fluxo e a concentração da solução. Estudos anteriores relataram várias maneiras de exposição de FA de modelos animais. Xu et al descreveram o método de exposição no qual FA solução foi diretamente aplicada a pele6. Outro estudo recente dirigida o protocolo de exposição de gás FA usando um gerador de solventes voláteis especializados, modelo 49127. Em comparação com métodos de estudos anteriores, o novo método está equipado mais facilmente e pode ser aplicado para outras soluções além de FA.

<table><tbody><tr><td>Medical Oxygen Regulator</td><td>Yuyao Jiahua Medical</td><td></td><td>manufacturer will not affect results</td></tr><tr><td>Tube</td><td></td><td></td><td>manufacturer will not affect results</td></tr><tr><td>Acrylic Chamber</td><td>Taejin Acryl</td><td></td><td>manufacturer will not affect results</td></tr><tr><td>Plastic Chamber</td><td>Taejin Acryl</td><td></td><td>manufacturer will not affect results</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde, powder</td><td>Sigma</td><td>158127</td><td>manufacturer will not affect results</td></tr><tr><td>Wrap filme</td><td>Uniwrap</td><td></td><td>manufacturer will not affect results</td></tr><tr><td>Capsaicin</td><td>Sigma</td><td>M2028</td><td>manufacturer will not affect results</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma</td><td>P4780</td><td>manufacturer will not affect results</td></tr><tr><td>Digital Video Camera</td><td>Sony</td><td>HDR-CX380y</td><td>manufacturer will not affect results</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>JW pharmaceutical</td><td></td><td>manufacturer will not affect results</td></tr></tbody></table>

effects of exposure of formaldehyde to a rat model of atopic dermatitis induced by neonatal capsaicin treatment

Dermatite atópica é cronicamente Policondrite eczema pruriginosa e prevalece em todo o mundo, especialmente nos países desenvolvidos. Interações complexas entre fatores genéticos e ambientais são conhecidas por desempenhar um papel importante na fisiopatologia da dermatite atópica. No entanto, ainda falta um quadro detalhado da patogênese desta doença. Assim, é de importância para desenvolver modelos animais apropriados para elucidar a progressão da dermatite atópica. Além disso, investigar o efeito de fatores ambientais, tais como poluentes atmosféricos na dermatite atópica amplia a compreensão da doença. Aqui, descrevemos um método para indução de dermatite atópica em ratos com tratamento neonatal capsaicina e um protocolo para a exposição de uma constante concentração de formaldeído para ratos para revelar os efeitos sobre o desenvolvimento da dermatite atópica em infantil e adolescente períodos. Estes protocolos foram aplicados com sucesso a vários experimentos e podem ser usados para outras substâncias.

A inflamação da pele AD-como o modelo de rato AD tratados com capsaicina em 7 semanas de idade é apresentada na figura 1A. Comportamentos arranhando robustos do modelo de ratos tratados com capsaicina AD é mostrado no vídeo 1. Tratamento neonatal capsaicina suscitou dermatite e agravada coçando comportamentos em ratos 3 semanas de idade, e AD-como os sintomas persistiram durante várias semanas (figura 1B, C). Embora o grau foi menos severo, alguns ratos sofriam de dermatite recidivante em 16 semanas de idade, após a resolução do AD, como os sintomas iniciais (Figura 1). Além disso, o soro IgE nível, que é um marcador biológico para AD gravidade8, foi elevado no modelo tratados com capsaicina AD rato (Figura 1E). As expressões de mRNA de IL-4 e IL-13 também aumentaram o modelo de rato de AD tratados com capsaicina (Figura 1F, G).
Fotografias de representante mostraram que FA induzidos o agravamento da dermatite no modelo de ratos tratados com capsaicina AD em 5 semanas de idade (Figura 2A). Exposição de 1,2 ppm FA agravou os comportamentos de coçar e dermatite em modelo de rato AD tratados com capsaicina por mais de 2 semanas. No entanto, exposição de 0,8 ppm FA não exacerbar arranhando comportamentos e dermatite no tratados com capsaicina AD rato modelo (Figura 2B, C). Além disso, exposição de 1,2 ppm FA elevou o nível de IgE no tratados com capsaicina AD rato modelo (Figura 2D) de soro.
A exposição do FA gasoso, a câmara de ventilação foi criada conforme descrito no protocolo (Figura 3A). Antes da exposição, a concentração de FA na câmara repetidamente foi medida para a garantia de concentração consistente. Ao alterar a concentração da solução de FA, foi medida a concentração de FA gasoso na câmara. Aumento da concentração da solução, a concentração do gás na câmara lentamente aumentada e a concentração do gás na câmara a partir da mesma solução não variou significativamente em repetidas medições (Figura 3B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55987/55987fig1.jpg"> 
Figura 1: tratamento Neonatal capsaicina induziu recidivante AD-como pele inflamação e prurido em ratos. Fotografias representativas de inflamação da pele em ratos tratados com capsaicina (A). Características cronológicos de dermatite (B) e comportamentos de risco (C) dos ratos tratados com capsaicina. Imagem representativa de lesões de pele recidivante de 16 semanas de idade tratados com capsaicina ratos (D). (E) elevação significativa dos níveis séricos de IgE nos animais tratados com capsaicina. (F) significativa elevação da expressão de RNAm de IL-4 em animais tratados com capsaicina. (G) significativa elevação da expressão de RNAm de IL-3 em animais tratados com capsaicina. Todos os resultados foram expressos como média ± SEM e analisaram utilizando o teste t de Student. *p &#60; 0,05, * * p &#60; 0.005, * * *p &#60; 0.001. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55987/55987fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55987/55987fig2.jpg"> 
Figura 2: FA exposição agravada prurido e dermatite no modelo de ratos tratados com capsaicina de AD. Fotografias representativas da semana 5th do tratamento usando 1,2 ppm e 0,8 ppm FA (A). Exposição de 1,2 ppm FA, mas não exposição de 0,8 ppm FA, agravado significativamente prurido (B) e dermatite (C) no modelo AD tratados com capsaicina. Nível de IgE sérico aumentado no modelo de ratos tratados com capsaicina AD tratados com exposição 1,2 ppm FA (D). Os resultados foram expressos como significa SEM ± e analisados usando uma One-Way ANOVA seguida pelo teste de Tukey ou teste t de Student. *p &#60; 0,05, * * *p &#60; 0.001 (vs ratos expostos ao ar fresco). 1.2. o FA-AD: modelo de ratos tratados com capsaicina AD exposto a 1,2 ppm FA; 0.8 FA-AD: modelo de ratos tratados com capsaicina AD expostos a 0,8 ppm FA; e ar-AD: modelo de rato AD tratados com capsaicina exposta ao ar fresco. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55987/55987fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55987/55987fig3.jpg"> 
Figura 3: tratamento FA. Ilustração esquemática do regulador e a câmara de gás (A). A concentração de FA gasoso na câmara foi proporcional à concentração da solução de FA (B). Os resultados foram expressos como média ± SEM. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55987/55987fig3large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Video" src="/files/ftp_upload/55987/55987video1.jpg"> 
Video 1: ataques de ratos tratados riscar comportamentos de capsaicina foram gravadas para medição de prurido. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55987/Video_Figure.mp4" target="_blank">Por favor clique aqui para ver este vídeo. (Botão direito do mouse para fazer o download.)</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Região</td>
			<td>Pontuação</td>
			<td>Descrição</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Exceto as orelhas</td>
			<td>0</td>
			<td>Normal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>Pele fina</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>Alopecia ou flare</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>Sangramento ou fura-greve</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Orelhas</td>
			<td>0</td>
			<td>Normal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>FLARE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>Sangramento ou fura-greve</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>Perda do tecido</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Índice de severidade.

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Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

Descrevemos aqui métodos para tratamento neonatal capsaicina induzir a dermatite atópica em ratos e exposição de formaldeído vaporizado para investigar os efeitos da inalação do formol na dermatite atópica.

Efeitos da exposição de formol para um modelo do rato da dermatite atópica, induzido pela capsaicina Neonatal tratamento

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between ...

effects-exposure-formaldehyde-to-rat-model-atopic-dermatitis-induced

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.5K visualizações.  Korea University. Descrevemos aqui métodos para tratamento neonatal capsaicina induzir a dermatite atópica em ratos e exposição de formaldeído vaporizado para investigar os efeitos da inalação do formol na dermatite atópica.

Vídeo: Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

Induction and Monitoring of Adoptive Delayed-Type Hypersensitivity in Rats

Delayed type hypersensitivity (DTH) is an inflammatory reaction mediated by CCR7- effector memory T lymphocytes that infiltrate the site of injection of an antigen against which the immune system has been primed. The inflammatory reaction is characterized by redness and swelling of the site of antigenic challenge. It is a convenient model to determine the in vivo efficacy of immunosuppressants. Cutaneous DTH can be induced either by adoptive transfer of antigen-specific T lymphocytes or by active immunization with an antigen, and subsequent intradermal challenge with the antigen to induce the inflammatory reaction in a given skin area. DTH responses can be induced to various antigens, for example ovalbumin, tuberculin, tetanus toxoid, or keyhole limpet hemocyanin. Such reactions can also be induced against autoantigen, for example to myelin basic protein (MBP) in rats with experimental autoimmune encephalomyelitis induced with MBP, an animal model for multiple sclerosis (1).
Here we demonstrate how to induce an adoptive DTH reaction in Lewis rats. We will first stimulate ovalbumin-specific T cells in vitro and inject these activated cells intraperitoneally to naive rats. After allowing the cells to equilibrate in vivo for 2 days, we will challenge the rats with ovalbumin in the pinna of one ear, while the other ear wil receive saline. The inflammatory reaction will be visible 3-72 hours later and ear thickness will be measured as an indication of DTH severity.

Delayed type hypersensitivity (DTH) is an inflammatory reaction mediated by CCR7- effector memory T (TEM) lymphocytes. Here we demonstrate how to activate antigen-specific TEM cells, induce adoptive DTH in Lewis rats and monitor the inflammatory response.

Indução e Monitoramento de hipersensibilidade tardia-Type Adoptive em Ratos

Delayed type hypersensitivity (DTH) is an inflammatory reaction mediated by CCR7- effector memory T lymphocytes that infiltrate the site of injection of ...

Biologia

Chronic Post-Ischemia Pain Model for Complex Regional Pain Syndrome Type-I in Rats

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical condition. However, the underlying mechanisms of CRPS-I have yet to be revealed. It is known that ischemia/reperfusion is one of the leading factors that causes CRPS-I. By means of prolonged ischemia and reperfusion of the hind limb, the rat chronic post-ischemia pain (CPIP) model has been established to mimic CRPS-I. The CPIP model has become a well-recognized animal model for studying the mechanisms of CRPS-I. This protocol describes the detailed procedures involved in the establishment of the rat model of CPIP, including anesthesia, followed by ischemia/reperfusion of the hind limb. Characteristics of the rat CPIP model are further evaluated by measuring the mechanical and thermal hypersensitivities of the hind limb as well as the nocifensive responses to acute capsaicin injection. The rat CPIP model exhibits several CRPS-I-like manifestations, including hind limb edema and hyperemia in the early stage after establishment, persistent thermal and mechanical hypersensitivities, and increased nocifensive responses to acute capsaicin injection. These characteristics render it a suitable animal model for further investigation of the mechanisms involved in CRPS-I.

Provided here is a protocol that details steps to establish an animal model of chronic post-ischemia pain (CPIP). This is a well-recognized model mimicking human complex regional pain syndrome type-I. Mechanical and thermal hypersensitivities are further evaluated, as well as capsaicin-induced nocifensive behaviors observed in the CPIP rat model.

Modelo crônico da dor da Borne-Isquemia para a síndrome regional complexa da dor tipo-I nos ratos

Complex regional pain syndrome type-I (CRPS-I) is a neurological disease that causes severe pain among patients and remains an unresolved medical ...

Comportamento

Separation of Rat Epidermis and Dermis with Thermolysin to Detect Site-Specific Inflammatory mRNA and Protein

Easy-to-use and inexpensive techniques are needed to determine the site-specific production of inflammatory mediators and neurotrophins during skin injury, inflammation, and/or sensitization. The goal of this study is to describe an epidermal-dermal separation protocol using thermolysin, a proteinase that is active at 4 &deg;C. To illustrate this procedure, Sprague Dawley rats are anesthetized, and right hind paws are injected with carrageenan. Six and twelve hours after injection, rats with inflammation and na&iuml;ve rats are euthanized, and a piece of hind paw, glabrous skin is placed in cold Dulbecco's Modified Eagle Medium. The epidermis is then separated at the basement membrane from the dermis by thermolysin in PBS with calcium chloride. Next, the dermis is secured by microdissection forceps, and the epidermis is gently teased away. Toluidine blue staining of tissue sections show that the epidermis is separated cleanly from the dermis at the basement membrane. All keratinocyte cell layers remain intact, and the epidermal rete ridges along with indentations from dermal papillae are clearly observed. Qualitative and real-time RT-PCR is used to determine nerve growth factor and interleukin-6 expression levels. Western blotting and immunohistochemistry are finally performed to detect amounts of nerve growth factor. This report illustrates that cold thermolysin digestion is an effective method to separate epidermis from dermis for evaluation of mRNA and protein alterations during inflammation.

Presented here is a protocol for the separation of epidermis from dermis to evaluate inflammatory mediator production. Following inflammation, rat hind paw epidermis is separated from the dermis by thermolysin at 4 &#176;C. The epidermis is then used for mRNA analysis by RT-PCR and protein evaluation by western blot and immunohistochemistry.

Separação de Epiderme de Rato e Derme com Termolise para Detectar mRNA inflamatório específico do local e proteína

Easy-to-use and inexpensive techniques are needed to determine the site-specific production of inflammatory mediators and neurotrophins during skin ...

Imunologia e Infecção

Contact Hypersensitivity as a Murine Model of Allergic Contact Dermatitis

Contact hypersensitivity (CHS) is an experimental model of allergic contact dermatitis (ACD) that can be studied in mice. This study aims to present an objective laboratory method that may help to study the CHS reaction in mice, which can be measured and quantified by various tests. To induce CHS, on day "0", mice were sensitized on a previously shaved spot by abdominal skin painting with the hapten 2,4,6-trinitrochlorobenzene (TNCB) in an acetone-ethanol mixture, whereas negative control mice were sham sensitized with vehicle alone-acetone-ethanol mixture. On day "4", the baseline ear thickness was measured with a micrometer prior to the elicitation of CHS (challenge) by painting both ears with diluted TNCB both in the test and control groups. After 24 h, the ear swelling was measured with a micrometer. CHS is an example of a T cell-mediated immune response that causes swelling in inflamed tissue, peaking 24 h after the skin challenge with the same hapten. An increase in ear edema correlated with augmented ear weight, myeloperoxidase (MPO) activity, pro-inflammatory cytokine concentration in the ear extracts, increased thickening of the edematous dermis in the histological examination, and ear vascular permeability. There was also an increase in the concentration of TNP-specific IgG1 antibodies in the sera of the test group when compared with the control mice. Additionally, CHS can be successfully transferred with the CHS-effector cells obtained from donors previously sensitized with TNCB. The CHS-effector cells were administered intravenously into na&#239;ve recipient mice, which were subsequently challenged with the same diluted hapten. Ear swelling was measured with a micrometer 24 h later.

Contact hypersensitivity (CHS) is a murine experimental model of allergic contact dermatitis (ACD). CHS is based on sensitization with reactive hapten by painting the shaved skin of the chest and abdomen, with a subsequent ear skin challenge with a diluted hapten, causing a swelling reaction that is assessed in various ways.

Entrar em contato com a Hipersensibilidade como modelo murino de dermatite de contato alérgico

Contact hypersensitivity (CHS) is an experimental model of allergic contact dermatitis (ACD) that can be studied in mice. This study aims to present an ...

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a common skin disease that manifests as a local rash, redness, and skin lesions. The occurrence and development of ACD are influenced by both genetic and environmental factors. Although many scholars have constructed a series of models of ACD in recent years, the experimental protocols of these models are all different, which makes it difficult for readers to establish them well. Therefore, a stable and efficient animal model is of great significance to further study the pathogenesis of atopic dermatitis. In this study, we detail a modeling method using 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) to induce ACD-like symptoms in the ears of mice and describe several methods for assessing the severity of dermatitis during modeling. This experimental protocol has been successfully applied in some experiments and has a certain promotional role in the field of ACD research.

Here, we describe the methods for inducing allergic contact dermatitis in mouse ears by 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) and how to evaluate the severity of allergic contact dermatitis.

Um modelo de orelha de camundongo para avaliação de dermatite alérgica de contato

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes methods for the fabrication of the high platform, establishes a rat model of asthma and measures changes in respiratory function using a noninvasive and real-time whole-body plethysmography (WBP) system.

Acupuntura em um modelo de rato de asma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

Medicina

Ex Vivo Release of Calcitonin Gene-Related Peptide from the Trigeminovascular System in Rodents

Calcitonin gene-related peptide (CGRP) was first discovered in the 1980s as a splice variant from the calcitonin gene. Since its discovery, its role in migraine pathophysiology has been well established, first by its potent vasodilator properties and subsequently by its presence and function as a neurotransmitter in the sensory trigeminovascular system. The migraine-provoking ability of CGRP gave support to the pharma industry to develop monoclonal antibodies and antagonists inhibiting the effect of CGRP. A new treatment paradigm has proven effective in the prophylactic treatment of migraine. One of the useful tools to further understand migraine mechanisms is the ex vivo model of CGRP release from the trigeminovascular system. It is a relatively simple method that can be used with various pharmacological tools to achieve know-how to further develop new effective migraine treatments. The present protocol describes a CGRP release model and the technique to quantify the effect of pharmacological agents on the amount of CGRP released from the trigeminovascular system in rodents. A procedure describing the experimental approach from euthanasia to the measurement of protein levels is provided. The essential isolation of the trigeminal ganglion and the trigeminal nucleus caudalis from both mice and rats and the preparation of rat dura mater are described in detail. Furthermore, representative results from both species (rats and mice) are presented. The technique is a key tool to investigate the molecular mechanisms involved in migraine pathophysiology by using various pharmacological compounds and genetically modified animals.

Ex Vivo Release of Calcitonin Gene-Related Peptide from the Trigeminovascular System in Rodents

The present protocol describes the ex vivo calcitonin gene-related peptide (CGRP) release model and the strategy to quantify the effect of pharmacological agents on the amount of CGRP released from the trigeminovascular system in rodents.

Ex Vivo Liberação de peptídeo relacionado ao gene da calcitonina do sistema trigeminovascular em roedores

Calcitonin gene-related peptide (CGRP) was first discovered in the 1980s as a splice variant from the calcitonin gene. Since its discovery, its role in ...

Neurociência

<meta charset="utf8"></head><body>Criando um modelo de rato prematuro para pesquisa de dor pós-parto precoce

A Preterm Rat Model for Pain Studies

This research delves into the consequences of consistent pinprick stimulation on preterm offspring to ascertain its long-term implications for pain sensitivity. The primary objective of this protocol was to investigate the impact of neonatal pinprick stimuli on the pain threshold in the later stages of life using a preterm rat model. By establishing this model, we aim to advance the research on understanding and managing early postnatal pain associated with prematurity. The findings of this study indicate that while the baseline thresholds to mechanical stimuli remained unaffected, there was a notable increase in mechanical hypersensitivity following complete Freund's adjuvant (CFA) injection in adult rats. Interestingly, compared with male rats, female rats demonstrated heightened inflammatory hypersensitivity. Notably, maternal behavior, the weight of the litters, and the growth trajectory of the offspring remained unchanged by the stimulation. The manifestation of altered nociceptive responses in adulthood after neonatal painful stimuli could be indicative of changes in sensory processing and the functioning of glucocorticoid receptors. However, further research is needed to understand the underlying mechanisms involved and to develop interventions for the consequences of prematurity and neonatal pain in adults.

<meta charset="utf8"></head><body>Um modelo de rato prematuro para estudos da dor

Here, we present a concise protocol for creating a preterm rat model, facilitating research on early postnatal pain management. The method involves performing a cesarean section three days before the expected birth, extracting preterm rat pups via hysterectomy, and integrating them with the biological offspring of a surrogate dam.

Um modelo de rato prematuro para estudos da dor

This research delves into the consequences of consistent pinprick stimulation on preterm offspring to ascertain its long-term implications for pain ...

Efeitos da exposição de formol para um modelo do rato da dermatite atópica, induzido pela capsaicina Neonatal tratamento

Resumo

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Indução e Monitoramento de hipersensibilidade tardia-Type Adoptive em Ratos

Modelo crônico da dor da Borne-Isquemia para a síndrome regional complexa da dor tipo-I nos ratos

Separação de Epiderme de Rato e Derme com Termolise para Detectar mRNA inflamatório específico do local e proteína

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Um modelo de rato prematuro para estudos da dor

Um modelo de rato prematuro para estudos da dor

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