The authors thank the three anonymous reviewers for their helpful comments on the manuscript. This work was partly supported by Grant-in-Aid for JSPS Fellows (26.11613).

NOTA: Este artigo é baseado em nosso trabalho anterior 30. Algumas partes são reimpressas com permissão da Sociedade Botânica do Japão e Springer Japão. 1. Observação de flores Visitantes <ol><li> Seleção dos Campos de observação <ol><li> Pesquisar as áreas onde os materiais vegetais são distribuídos, e selecionar os locais de estudo candidato usando recursos confiáveis, tais como livros ilustrados, revistas acadêmicas, etc. Ajuste o número de locais de estudo para atender os objetivos da pesquisa (por exemplo, uma grande variedade de locais para a comparação dos visitantes florais em todo o Japão). </li><li> Confira os locais das populações candidatos selecionados e as distâncias de pontos de partida relevantes, tais como institutos de pesquisa e acomodações, se for necessária investigação a longo prazo. </li><li> Estimar grosseiramente cada tamanho da população por contagem do número de indivíduos de plantas numa área de unidade. Escolha grandes populações para a experiência manipuladas usando muitos indivíduos de plantas. </li><li> Pré-observação dos visitantes florais <ol><li> Decidir que têm como alvo indivíduos em cada área será observado durante o mesmo intervalo de tempo, dependendo das densidades populacionais. Escolha 5-10 flores recém-abertas ou quebrando botões como flores-alvo, e rejeitar aqueles degradadas que já abriram. </li><li> Comece a observação visual para o período de um dia inteiro, porque as flores pode ser visitado por vários polinizadores em tempo diferentes gamas 31,32. </li><li> Nas folhas de registo, gravar o nome da espécie dos visitantes florais eo tempo de cada visita por hora por flor. </li><li> Observar atentamente se os visitantes florais tocar as anteras e / ou estigmas; se o fizerem, gravar os visitantes como polinizadores. Se os visitantes florais só visitar as flores e não toque os órgãos reprodutivos, gravá-los como visitantes. </li><li> Usando uma rede de insetos ou aspirador feitos à mão, capturar os visitantes florais para identificar epreservá-los como espécimes (Figura 1F). Mate os visitantes presas rapidamente com acetato de etilo ou a pressão dos dedos no tórax, e preservá-los em um saco macio ou em um tubo de plástico ou caso com 100% de etanol. </li><li> Após a observação, identificar os nomes específicos de amostras utilizando características morfológicas ou, em caso de dificuldades na identificação, solicitar a ajuda de especialistas para cada grupo taxonômico. </li></ol></li></ol></li><li> Observação no Campo <ol><li> Escolha sites de pesquisa com base na sua acessibilidade, o tamanho da população e número de visitantes florais. Escolha períodos de tempo que incluem uma amostra representativa dos visitantes florais na época de floração, e determinar os períodos de observação com base em objectivos de investigação (por exemplo, para a pesquisa sobre flutuações visitação frequência de visitantes florais, longos períodos de tempo deve ser definido). </li><li> Prepare o equipamento de gravação adequado, tais como câmeras de vídeo digitais (por exemplo, para a gravação noite, câmeras de vídeo com uma função de infravermelho devem ser usados). </li><li> Seleccionar as flores alvo da mesma maneira como para 1.1.4. </li><li> Fixar as câmeras de vídeo para tripés de alumínio. Defina as câmeras com tripés na frente dos indivíduos visados, aproximadamente 50 cm de distância. </li><li> Verificar e modificar a quantidade de luz eo foco dos materiais a tela mostra das câmeras antes de filmar. </li><li> Comece a observação visual e filmagens de vídeo ao mesmo tempo para os fusos horários apropriados estimados pelo pré-observações (no caso em apreço, com períodos de observação por mais de seis horas, em média, de aproximadamente 5:00-13:00 pm ). </li><li> Identificar os nomes das espécies dos visitantes e polinizadores, e gravar os seus nomes e os tempos de suas visitas nas folhas de registo. </li><li> Capturar e identificar os visitantes e polinizadores da mesma maneira como em 1.1.4.5. </li><li> Repita os passos 1.2.1 a 1.2.7 para cada observatioperíodo n. Defina os períodos de observação com base nos objetivos da pesquisa e os dados pré-observação. </li></ol></li><li> Análise de Dados Depois de Observação <ol><li> Identificar os nomes de espécies de espécimes capturados após a observação de polinizadores, da mesma forma como em 1.1.4.6. </li><li> Verifique os clipes de vídeo e anote os nomes de espécies e seus tempos visita da mesma forma como para a observação visual. </li><li> Calcular as frequências de visitação por flor por hora de cada visitante floral a partir dos dados de observação e gravação de vídeo visuais. Compare estas freqüências estatisticamente entre os locais e anos de cada visitante utilizando métodos estatísticos adequados com base em estatísticas fundamentais e usando o software adequado, tais como R, SPSS, e / ou SAS 33-35 (por exemplo, uma análise de duas vias de variância (ANOVA ) com o teste de Tukey honesto diferença significativa (HSD) em software R). </li></ol></li></ol> 2. Ensacamento e Cage Experimentos<ol><li> Os preparativos para o ensacamento e Experiências gaiola <ol><li> Para os experimentos de ensacamento, preparar sacos que têm tamanhos de malha pequenas (~ 0,5-1 mm) e usá-los para evitar completamente flor visitação (por exemplo, não-tecidos sacos de tecido foram utilizados para os experimentos de ensacamento em 2011 e 2012). </li><li> Para os experimentos de gaiola, prepare fio ou malha de plástico placas com um diâmetro que permite aos visitantes o alvo mais pequenos para passar através mas exclui os maiores, e conectar-se estas placas de malha para formar uma gaiola. Assegure-se que não existem lacunas maiores do que o diâmetro da malha. Ajustar o tamanho e a forma de gaiolas com base nas espécies de plantas alvo e números individuais. </li></ol></li><li> Experimentos de ensacamento <ol><li> Selecione 30 indivíduos por tratamento que não têm danos causados ​​por herbívoros ou de um ambiente severo. Para o tratamento, escolher uma única flor de cada planta individual ou usar flores individuais em uma única planta. </li><li> saco tele alvo flores no campo após rotulando-os com fita adesiva (número de série e do alfabeto; Figura 1 g). Tenha cuidado para não tocar as anteras ou os estigmas dentro dos sacos para evitar a possibilidade de auto-polinização. </li><li> Cuidadosamente corrigir sacos para as flores usando uma corda suave ou fio (Figura 1d). </li><li> definir com cuidado flores individuais na posição vertical com suportes usando a corda suave ou fio para apoiar os indivíduos contra inclinação ou o colapso sob o peso dos sacos ou o vento, se necessário. Torcer ou enrolar um fio ou arame suavemente em torno da haste de uma pessoa alvo, de modo a não criar danos. </li><li> Tratamentos em experimentos de ensacamento <ol><li> Para o tratamento &quot;Control&quot;, anexar os rótulos para as flores alvo e realizar nenhum tratamento. Permitir que os visitantes florais de visitar livremente. </li><li> Para o tratamento &quot;de cruzamento&quot;, cobrem os seus botões até que eles flor, e em seguida, remover as anteras das flores ensacadas. Ponha um pouco de Pollen grãos de vários indivíduos sobre os estigmas. </li><li> Para o tratamento &quot;Selfing&quot;, cobrem os seus botões até que as flores abertas, e colocar pólen das mesmas flores em sua estigmas. Cobrir estas flores tratados novamente. </li><li> Para o tratamento &quot;Auto-auto&quot;, cobrir os botões com os sacos até o final do período de floração. </li><li> Para o tratamento &quot;bud Partir&quot;, identificar os botões de quebra que foram visitados e observar a entrada ou saída de pequenas abelhas (Figuras 1b, c). Retirar as anteras dos botões quebrando para evitar deposições de pólen repetida na mesma flor depois de visitação por pequenas abelhas, e saco estes botões rapidamente para evitar mais visitas. </li><li> Para o tratamento &quot;floração&quot;, saco dos botões até a etapa de abertura para evitar visitações na fase de quebra-bud. Depois disso, retire os sacos e permitir que os visitantes para coletar néctar e pólen. </li><li> Para o tratamento &quot;Bud&quot;,remover as anteras de botões fechados e outcross-los artificialmente. Saco estes botões rapidamente para evitar visitas de flores. </li></ol></li></ol></li><li> Experimentos gaiola <ol><li> Cobrir os indivíduos planta alvo com gaiolas preparadas. Ajustar as posições de flores enjaulados à mão para evitar deposições de contato e de pólen entre estigmas diferente (Figura 1e). </li><li> Para o tratamento &quot;Cage&quot;, selecionar os indivíduos com botões fechados e colocar rótulos sobre eles para a identificação de flores selecionadas. Gaiola os indivíduos com botões marcados para rejeitar as influências desde antes da criação de gaiolas (ou seja, insectos florais não pode visitar botões fechados, e apenas os efeitos de insetos que visitam após a colocação de gaiolas pode ser estimado). </li><li> Prenda as gaiolas firmemente no chão usando postes de ferro para impedir a entrada de visitantes entre a base gaiola e no chão. </li></ol></li><li> Análise de Dados After o ensacamento e Experiências gaiola <ol><li> Recolha todas as flores marcados no final do período de floração (Figura 1 g) por corte e separando-os dos indivíduos maternos. Preservar cada amostra marcada separadamente para evitar a sua contaminação. </li><li> Verificar a presença ou ausência de frutificação em cada rotulados flower.Record os números de sementes de cada fruta em caso de configuração de frutas. </li><li> Calcular a proporção de número de frutos por flor (proporção definida de frutos, definida como o número de frutas, dividido pelo número de flores) e do número de sementes por fruto maduro (razão de semente-conjunto, definido como o número de sementes dividido pelo número de óvulos) usando todos os números gravados. </li><li> Estatisticamente comparar os rácios de fruto e semente-estabelecidas entre os tratamentos, utilizando métodos adequados e software, tais como os enumerados no 1.3.3 (por exemplo, one-way ANOVA com HSD de Tukey ou teste exato de Fisher no software R 33). </li><li> As investigações sobre os materiais, utilizando os resultados das experiências de ensacamento <ol><li> Para testar a necessidade de animais polinizadores, estatisticamente comparar os resultados entre &quot;Control&quot; e &quot;Auto-auto&quot; tratamentos. </li><li> Para estimar o grau de limitação de pólen, compare o &quot;Control&quot; e &quot;tratamentos de fecundação cruzada&quot;. </li><li> Para testar a auto-compatibilidade, compare o &quot;Outcrossing&quot; e tratamentos &quot;autofecundação&quot;. </li></ol></li><li> As avaliações das influências do quebra-bud polinização <ol><li> Compare o &quot;controle&quot; e tratamentos &quot;botão&quot; para determinar se os estigmas das gemas quebrando são reprodutivamente maduros e se o valor do tratamento &quot;Control&quot; pode ser usado para o controle na fase de quebra-bud. </li><li> Compare o &quot;Auto-auto&quot; e tratamentos &quot;Quebrando Bud&quot; para determinar se o sucesso reprodutivo de flores polinizadas com pequenas abelhas na quebrafase -bud é estatisticamente maior do que o das plantas que executam autogamia (isto é, para testar a existência de polinização quebrar broto-). Depois disso, comparar esses dois tratamentos com o &quot;Control&quot; para estimar as eficiências de polinização de polinização quebra-bud. </li><li> Compare o &quot;Breaking bud&quot;, &quot;Gaiola&quot;, e &quot;&quot; tratamentos de floração para estimar as influências reprodutivas de polinização quebra-bud. </li></ol></li></ol></li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

observações de flores e experimentos ensacamento foram empregados neste estudo para revelar as frequências de visitação e o sucesso reprodutivo feminino de plantas, respectivamente. Em Dafni (1992) 38, o método videotape foi eficaz porque poderia gravar o momento ea duração de visitantes para análise e evitar viés do observador. No entanto, no momento, este método necessário equipamento caro, e os tempos de observação foram limitados pela vida útil da bateria. Recentemente, o custo do equipamento para produção de registos de vídeo tem vindo a diminuir, e este método tecnológico pode ser empregue em outras pesquisas de polinizadores. Neste estudo, as frequências de visitação foram significativamente diferentes entre as observações visuais e vídeo no Site 3 (Tabela 2). Isso pode ter sido causado por um excesso de observação dos visitantes florais, e erros humanos como este pode ser rejeitada. Dafni (1992) também mencionou ensacamento ou experimentos líquidas para estudar sistemas de criação 38. Não woven foram utilizados sacos de tecido, que não foram pollen- ou impermeável. L. sanguinea var. sanguinea não é uma espécie polinizada pelo vento, mas a água da chuva pode influenciar o sucesso reprodutivo de flores ensacadas. estacas de ferro foram utilizados para apoiar indivíduos com flores ensacadas do peso dos sacos molhados, mas estes fatores podem ter afetado a capacidade reprodutiva das flores. Cobrindo toda a planta por redes de insetos-exclusivo com apoiantes pode ser a melhor opção para remover esses problemas metodológicos. Além disso, as gaiolas foram usadas para a separação de espécies de abelhas, que foi o primeiro exemplo de um estudo enjaulado-planta. Este estudo demonstrou a eficácia deste método, e podemos aplicá-la a outros estudos cujos objetivos exigem a determinação da eficácia da polinização de diferentes grupos funcionais, tais como pequenas e grandes abelhas. Estas observações polinizadores revelou que a maioria dos visitantes florais de Lycoris sanguinea </em&gt; var. sanguinea ao longo de todo o período de floração foram japonicum Lasioglossum. Para fazer observações bem sucedidos, pré-observações de materiais-alvo, em alguns locais de estudo candidatos deve ser feita, o que é descrito no Passo 1.1 na secção protocolo. Por exemplo, as identificações de alguns visitantes florais são feitas com base em observações ou fotos da câmera em um campo. Alguns visitantes florais pertenciam a grupos taxonômicos que eram difíceis de identificar em primeiro lugar, devido às suas características morfológicas indistinguíveis ou atividades que visitam rápidas, como as abelhas halictid ou esfingídeos noturnos, respectivamente. Portanto, a pesquisa preliminar sobre visitas florais podem ajudar a identificar e registrar cada visita. Para compreender totalmente a influência das condições ambientais, é importante para seleccionar locais de estudo adequado para as observações. Por exemplo, condições de chuva não são adequados para observações polinizadores porque a aparência e padrões de polinização pode mudar. E seos sites selecionados tinha flutuado em condições ambientais, não poderia ter sido dados de observação suficientes recolhidos para analisar os objetivos do estudo. Alternativamente, os resultados podem ter sido mal interpretados, devido a diferenças nas condições climatéricas que afectam a composição da comunidade polinizador 39. Neste estudo, os visitantes florais foram examinadas por meio de observações visuais e registos vídeo (Tabela 1). Estes dois métodos têm vantagens e desvantagens. Em observações visuais, os objetos podem ser vistos de vários ângulos e pode ser observado mais especificamente. No entanto, a informação disponível sobre os objectivos é limitado porque o registro permanece apenas como notas de campo ou fotografias digitais. Em contraste, os visitantes florais podem ser repetidamente verificado usando vídeos gravados. Infelizmente, este método tende a produzir registros inadequados para análise, tais como out-of-focus e imagens insuficientemente iluminados. Em adição a estes métodos, Somtécnicas e de gravação específica têm sido desenvolvidos nos últimos anos. Por exemplo, em plantas com flores com polinizadores raras, como algumas plantas de orquídeas, fotografia intervalo usando câmeras digitais é uma abordagem eficaz para a identificação de polinizadores 40. Uma câmera de vídeo digital com um sensor de detecção de movimento de vídeo pode gravar imagens nítidas do movimento de polinizadores em flores, mesmo polinizadores rapidamente em movimento durante a noite 41. Além disso, uma câmara de alta velocidade também foi usado para observar os movimentos lentos de polinizadores, tais como o contacto de cada polinizador ao estigma 42. A gravação de vídeo e fotografia digital são métodos comuns para observações de campo, e é importante para entender as características de cada método e para selecionar o mais adequado. Os experimentos ensacamento sugeriu os graus de dependência polinizador de L. sanguinea var. sanguinea (Tabela 2). Nestes métodos, o passo críticos são a preparação dos sacos e gaiolas. Neste caso, os sacos utilizados tinham um tamanho apropriado para as flores (Figura 1D); No entanto, pode ser necessário para preparar tamanhos maiores ou redes-excluindo insectos, que pode cobrir indivíduos de plantas inteiras. O tratamento &quot;Auto-auto&quot; teve alguns frutos, mas uma relação de set-semente maior, e isso pode ter sido causado pelo contato entre o estigma e os sacos anexado-pólen. Tais erros podem ser evitados através de métodos apropriados para os objectivos de cada experimento. Ensacamento para as papilas quebrando mostrou a polinização por abelhas pequenas na fase de quebra-bud (Tabela 2). Pequenas abelhas tendem a lidar com os gomos de quebra para recolher o pólen mais tempo do que os outros insetos que visitaram flores de abertura. Estas diferenças de comportamento poderia sugerir que quebrando-bud polinização não tem eficiência de polinização mais elevados do que os outros processos de polinização. Para revelar estas diferenças comportamentais, o sucesso da polinização porúnica visita ou polinização eficiência de cada polinizador deve ser avaliado 43,44. Ao preparar as fechadas, botões ensacados, foi possível estimar os efeitos single-visita sobre os aspectos reprodutivos de polinização quebra-bud. Além disso, na experiência de gaiola, os botões fechados foram mantidas. Este método não pode ser utilizado para avaliar a eficácia de polinização por pequenas abelhas no apenas a fase de floração. Um método alternativo seria a de cobrir a gaiola com um pano que tem aberturas menores do que o tamanho de todos os visitantes florais até que as flores em gaiolas totalmente aberta. Embora as experiências atuais proporcionado bons resultados, experimentos de campo revelou apenas informações limitadas sobre as interações planta-polinizador. Por exemplo, se a hipótese de que a quebra-bud polinização por abelhas pequenas poderia promover autofecundação ou polinização geitonogamous. Este processo de polinização ocorre quando pequenas abelhas se mover nos brotos quebrando. Alguns grãos de pólen puderser facilmente transportado da mesma flor para o estigma. Além disso, os intervalos de forrageamento de abelhas pequenas estimados por seus tamanhos corporais eram curtos, promovendo a intervalos curtos de dispersão do pólen 45,46. Estas previsões são difíceis de investigar usando apenas experimentos de campo, embora os movimentos de pólen entre os indivíduos podem ser rastreados usando pólen marcadas com um corante fluorescente 47,48. Por exemplo, polimorfismos ou microssatélites marcadores de tamanho de fragmentos amplificados podem ser usados para estimar se os doadores de pólen de cada semente são derivados a partir de diferentes indivíduos ou mesmos 49,50. Nos últimos anos, os movimentos de pólen entre plantas da mesma espécie foram seguidos utilizando técnicas de genotipagem de pólen único 35. Este método molecular foi utilizado para mostrar os significados para as avaliações das eficiências de polinização 36. No caso em apreço, esta técnica molecular poderia revelar as posições de chegada dos grãos de pólen de botões quebra, que MIluta indicam os graus de fluxo gênico entre quebrando botões e as flores totalmente abertas. Portanto, um plano de investigação abrangente, com base em ambos os trabalhos de campo e análises moleculares, é necessário revelar os efeitos dos polinizadores.

interações planta-polinizador são exemplos para o estudo da biologia evolutiva e ecologia. As relações mutualistas entre flores e polinizadores são pensados para ter promovido a diversificação das angiospermas 1,2 como resultado da seleção natural, embora outros fatores bióticos e abióticos também exerceram influência 3,4,5. Pensa-se também que os traços florais foram alterados para se adaptar aos polinizadores mais eficazes e para produzir mais frutos e sementes 6. Estas crenças foram construídos embora grandes estudos com base em diferentes índices, como a eficácia da polinização, que envolvem várias interpretações 7. Plantas com flores que têm generalizadas sistemas de polinização são visitados por vários tipos de polinizadores 8. Aqui, um visitante flor foi definida como uma espécie animal que visitaram para obter uma recompensa floral e polinizadores foram definidos como visitantes florais que polinizam.Alguns desses visitantes transportar grãos de pólen da mesma espécie para os estigmas das flores visitadas e podem ser classificadas como polinizadores. Outros visitantes também podem ter algum pólen intra-específica; eles podem conduzir a menos de polinização devido a desajustes comportamentais ou morfológicas entre os polinizadores e as flores. Estas diferenças comparáveis na contribuição para a reprodução da planta poderia produzir diferentes graus de pressão seletiva sobre características florais 9 e pode causar a divergência adaptativa das plantas com flores. Portanto, embora a composição da comunidade de polinizadores ea abundância das espécies relativa são importantes 10, a avaliação precisa da eficácia de cada visitante também é fundamental para determinar a adaptação e / ou processos evolutivos das plantas. Neste estudo, as estimativas quantitativas da eficiência dos polinizadores, definida como a produção de frutas e sementes por freqüência de visitas, foram determinados 11. a especificaçãoForam observadas ies e frequência de cada visitante floral, e foram estimados os efeitos reprodutivos nas flores visitadas. A gravação de visitas florais através de observações humanos é um método clássico em ecologia da polinização. No entanto, este método aplica uma grande carga sobre os observadores, que são obrigados a permanecer em frente das plantas e para tomar medições cuidadosas, a longo prazo. Recentemente, as tecnologias de filmagem e gravação têm se desenvolvido rapidamente, e câmeras de vídeo digital de baixo custo permitiram a introdução de gravação de vídeo para observações polinizadores 12,13. Estes métodos podem facilitar a recolha de informações básicas sobre os visitantes florais e poderia ajudar a desenvolver uma compreensão da ecologia da polinização de uma espécie de planta alvo. No entanto, as frequências de visita dos polinizadores não estão necessariamente correlacionados com a sua eficácia polinização 7,14, e é importante para avaliar os efeitos qualitativos de cada polinizadorsobre a aptidão flor. Efetividade da polinização foi estimado através do número de grãos de pólen sobre os estigmas 15,16, 17,18 crescimento do tubo polínico e frutas e / ou produção de sementes 19,20. Ensacamento experimentos, conduzidos utilizando sacos de visitante exclusivo, são os métodos típicos para testar auto-compatibilidade, autogamia 21,22, ea presença de apomixia 23. Além disso, a avaliação da eficácia da polinização por um determinado polinizador na assemblage visitante tem sido frequentemente realizado em ambientes onde outros visitantes florais foram limitados (ou seja, uma gaiola de arame, rede, ou um saco com uma malha pequena o suficiente para excluir polinizadores maiores, que é set em plantas com flores). Por exemplo, experiências de ensacamento com pequenos sacos de malha foram conduzidos para revelar a capacidade polinização das formigas ou tripes 24,25. Além disso, as experiências de exclusão pássaro usando uma gaiola de arame ou rede têm mostrado os polinizadores efetivos da taxa Aloe26-28. Os objetivos deste estudo foram: 1) para introduzir os métodos utilizados em trabalho anterior e 2) para melhorar estes métodos para o uso geral em outros estudos sobre os visitantes florais, as suas frequências de visita, e seus efeitos sobre a aptidão da planta Lycoris sanguinea var.. sanguinea é uma das espécies incluídas no gênero Lycoris, que é distribuído amplamente em todo o Japão e por pouco na Coreia 29 e tem em forma de funil laranja-avermelhado flores (Figura 1a). Um estudo anterior revelou que L. sanguinea var. sanguinea foi visitada por várias espécies de insetos, incluindo um não identificadas espécies de abelhas pequenas e as espécies maiores Amegilla florea 29. No entanto, não foram identificados a frequências de visitação e polinização eficácia destes visitantes. observações de polinizadores para a identificação de visitantes florais foram realizadas em primeiro lugar. Visitação por pequenas abelhas foi OBSErved em flores que não tinha ainda completamente abertos (quebrar gomos; Figuras 1b, c). Pequenas abelhas mudou rapidamente em torno das anteras undehisced nos botões da quebra e recolhido pólen usando suas mandíbulas. A hipótese foi de que as abelhas pequenas poderia ser polinizadores na fase de quebra-bud porque os intervalos entre as anteras e o estigma nas flores foram menores do que o comprimento do corpo das abelhas. Portanto, as experiências foram conduzidas de ensacamento para testar a capacidade de polinização das abelhas pequenas na fase de quebra-gema, e, adicionalmente, para examinar as estratégias de reprodução de L. sanguinea var. sanguinea. Estes botões foram ensacados após as pequenas abelhas visitados, o que permitiu uma estimativa da capacidade de polinização das abelhas. Os indivíduos foram enjaulado com botões fechados. Uma pequena gaiola de malha foi usada, através do qual apenas pequenas abelhas poderia passar, permitindo uma estimativa da eficiência de polinização de abelhas pequenas ao longo de todo o floestágio anel.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="535">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:200px;">recording sheet</td>
			<td style="width:159px;">any</td>
			<td style="width:112px;">NA</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">insect net</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">pooter</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ethyl acetate</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">100% Ethanol</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">plastic tube</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">plastic case</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">soft bag</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">digital video camera(s)</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">tripod(s)</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">bags</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">wire or plastic mesh boards</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">iron wires</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">labeling tape</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">stick supporters</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">soft strings or wire</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">pincette(s)</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

field experiments of pollination ecology: the case of lycoris sanguinea var. sanguinea

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify the pollination effectiveness of each pollinator for visited flowers. Pollinator observations have been one of the most common methods to identify pollinators, and bagging and cage experiments have been conducted to show the effectiveness of specific pollinators. In a previous study of Lycoris sanguinea var. sanguinea, its effective pollinators, the visitation frequencies of each floral visitor, and its reproductive strategies were not identified. This study reports the observation that small bees visited flowers that were partially opened (breaking buds). To the best of our knowledge, this phenomenon has not been reported previously. Further, this study investigates the hypothesis that small bees can pollinate at that flowering stage. This study demonstrates the basic methods of field experiments in pollination ecology using L. sanguinea var. sanguinea. Pollinator observations and digital video showed the visitation frequencies of each floral visitor. Bagging and cage experiments revealed that these flowers could be pollinated fully and that breaking-bud pollination could be important for the pollination of this plant species. The advantages and disadvantages of each method are discussed, and recent developments, including laboratory experiments, are described.

Cinco populações foram selecionados para observações polinizadores. Na fase de pré-observação, visitas de várias espécies de insetos a flores de abertura e pequenas abelhas ao gomos quebrando foram confirmados. Observações florais visitante revelou que a maioria dos visitantes para todos os cinco locais de estudo eram indivíduos de pequenas espécies de abelhas japonicum Lasioglossum. O registo total de visita mostrou que os rácios de visita desta espécie foram mais do que 90% em três locais (Figura 2). Em contraste, as razões de o segundo mais frequente visitante, Amegilla florea, foram inferiores a 10% nestes domínios. Estas espécies de abelhas também tocou os estigmas de flores visitadas, e eles foram registrados como polinizadores. Outros visitantes florais frequente, tais como Episyrphus balteatus, recolhido pólen sem contato com os estigmas, e eles foram identificados como visitantes. Em um local, as análises dos dados mostraram que a visitaçãofrequências de pequenas abelhas registrados por observações visuais foram significativamente maiores do que as registradas por vídeo (Tabela 1: one-way ANOVA: Site 2: df = 1, F = 0,471, P = 0,50; Site 3: df = 1, F = 12,12 , P &lt;0,001; site 4: df = 1, f = 1,019, P = 0,33; local a 5: df = 1, f = 1,605, P = 0,22, respectivamente). Ensacamento de gaiola e experimentos foram conduzidos no Local 1 em 2011 e 2012. Não-tecidos sacos de tecido, com uma malhagem menor do que os tamanhos de corpo dos visitantes florais e gaiolas de arame, com uma malha maior do que as abelhas pequenas, mas menores que outros visitantes, estavam preparados. Foram observadas as visitas frequentes de pequenas abelhas às flores criadas em gaiolas, e gaiolas foram aplicadas. O resultado do tratamento &quot;bud Partir&quot; mostrou a capacidade de polinização das abelhas pequenas que visitam botões quebrando. Comparações de frutase conjuntos de sementes entre os tratamentos indicados no 2.4.5 revelou as características reprodutivas de Lycoris sanguinea var sanguinea, que é predominantemente polinizada animal ( &quot;Control&quot; versus &quot;Auto-auto&quot;:. O teste exato de Fisher para a frutificação; P &lt;0,001 ) com condições parcialmente limitada-pólen ( &quot;Control&quot; versus &quot;Outcrossing&quot;: o teste exato de Fisher para a frutificação; P = 0,16, teste exato de Fisher para produção de sementes: P = 0,37). As comparações também sugeriu que esta planta tem auto-compatibilidade ( &quot;Outcrossing&quot; versus &quot;Selfing&quot;: o teste exato de Fisher para a frutificação; P = 0,48, teste exato de Fisher para produção de sementes: P = 0,32), que era consistente com relatórios anteriores 36,37. Além disso, as comparações dos outros tratamentos sugeriu as capacidades de polinização de polinização quebra-bud em L. sanguinea var. sanguinea. O estigma desta planta é madura na fase de botão (&amp;# 34; Controle &quot;versus&quot; Bud &quot;: o teste exato de Fisher para a frutificação; P = 0,80; teste exato de Fisher para a produção de sementes: P = 0,41), e o valor de&quot; Control &quot;foi utilizado para as comparações no breaking- . bud estágio o tratamento &quot;Breaking bud&quot; mostrou um conjunto maior de frutas do que o &quot;auto-auto&quot; (teste exato de Fisher para a frutificação; P = 0,02), indicando a presença de deposição de pólen por pequenas abelhas para estigmas com a dissolução bud palco. no entanto, não foi possível demonstrar os avanços deste processo de polinização. os três tratamentos detalhados no 2.4.6.2 ( &quot;Control&quot;, &quot;auto-auto&quot; e &quot;Breaking bud&quot;) mostraram diferenças significativas (one-way ANOVA para a frutificação; df = 2, F = 18,46, P &lt;0,001; one-way ANOVA para produção de sementes: df = 2, F = 3,6593, P = 0,03), mas HSD de Tukey sugeriu que quebrando-bud polinização não é muito eficaz ( &quot;bud Partir&quot;; vs. &quot;Auto-auto&quot;: a frutificação: P = 0,10; produção de sementes: P = 0,03). Além disso, as comparações entre os três tratamentos em 2.4.6.3 não apresentaram diferenças significativas (ANOVA de duas vias: df = 2, F = 0,6881, p = 0,50; ANOVA de duas vias para produção de sementes: df = 2, F = 1,2376, P = 0,30). <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/54728/54728fig1.jpg" /> Figura 1:.. Materiais de plantas e equipamentos experimental (a) Uma flor das espécies de plantas alvo, Lycoris sanguinea var sanguinea. (B) Um broto de ruptura. (C) Uma pequena abelha visitar os botões de quebra para recolher os grãos de pólen. (D) Um exemplo da experiência ensacamento. (E) Uma gaiola de arame cobrindo alguns botões fechados. (F) Um aspirador que foi usado principalmente para a captura de pequenas abelhas. (g </stRong&gt;) Um exemplo do sistema de rotulagem. &quot;C&quot; significa que esta flor foi utilizada para o experimento ensacamento para quebrar gemas. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54728/54728fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/54728/54728fig2.jpg" /> Figura 2: Taxas de Visitação de Lasioglossum japonicum para flores e botões da quebra e da Amegilla florea totalmente aberta para flores abriu a relação entre esse número é baseado no trabalho anterior 25.. O visitante mais frequente foi a pequena abelha L. japonicum, ea próxima era a maior abelha A. florea. As informações para os sítios estudados é a seguinte: Site 1 = Izumi Nature Park, Chiba Pref .; Site 2 = Sonnou no Mori, Chiba Pref .; Site 3 = Sugawara Shrine, Kanagawa Pref .; Site 4 = Mannyou Nature Park, Tochigi Pref .; eSítio 5 = Kogushi Katakuri no Sato, Gunma Pref. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54728/54728fig2large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="tabela 1" src="/files/ftp_upload/54728/54728table1.jpg" /> Tabela 1: Comparações entre as observações visuais e gravadas em vídeo de visitantes florais em 2013. Esta tabela mostra o tempo de observação, observado o número de flores, e os números de visitação de pequenas e grandes abelhas em cada local. &quot;Visual&quot; e &quot;Video&quot; são os valores a partir de observações visuais e gravações de vídeo, respectivamente. frequências de visitação com desvios-padrão estão entre parênteses. O valor com um asterisco é significativamente diferente em comparação com o outro método de observação por ANOVA de uma via (isto é, a relação de visita de pequenas abelhas na observação visual foi significativamente maior do que a do vídeo recabos no Site 3). <img alt="mesa 2" src="/files/ftp_upload/54728/54728table2.jpg" /> Tabela 2: Os resultados do ensacamento e as experiências de gaiola em 2011 e 2012. As abreviaturas são como se segue: n = número de flores utilizados em cada tratamento; não. de frutas = número definido de frutas; não. de sementes = número set-semente; frutificação = relação definida de frutas; e sementes = relação set-semente. rácios de produção de sementes são dadas com desvios-padrão. Traços indicam sem dados.

Watch this Scientific Journal Video about Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea at JoVE.com

Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

Para revelar a eficácia polinizador de uma determinada espécie de planta, foram desenvolvidos vários métodos de experimentos de campo. Este estudo demonstra os métodos básicos de experimentos de campo para a ecologia da polinização usando o estudo de caso de Lycoris sanguinea var. Sanguinea e do romance mecanismo de polinização, quebrando-bud polinização.

Experimentos de campo de Ecologia da polinização: o caso da<em&gt; Sanguinea de Lycoris</em&gt; Var.<em&gt; sanguinea</em

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify ...

field-experiments-pollination-ecology-case-lycoris-sanguinea-var

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

11.4K visualizações.  Chiba University.  Para revelar a eficácia polinizador de uma determinada espécie de planta, foram desenvolvidos vários métodos de experimentos de campo. Este estudo demonstra os métodos básicos de experimentos de campo para a ecologia da polinização usando o estudo de caso de Lycoris sanguinea var. Sanguinea e do romance mecanismo de polinização, quebrando-bud polinização. 

Vídeo: Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

Modifying the Bank Erosion Hazard Index (BEHI) Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

Understanding the source of pollution in a stream is vital to preserving, restoring, and maintaining the stream&#8217;s function and habitat it provides. Sediments from highly eroding streambanks are a major source of pollution in a stream system and have the potential to jeopardize habitat, infrastructure, and stream function. Watershed management practices throughout the Cleveland Metroparks attempt to locate and inventory the source and rate the risk of potential streambank erosion to assist in formulating effect stream, riparian, and habitat management recommendations. The Bank Erosion Hazard Index (BEHI), developed by David Rosgen of Wildland Hydrology is a fluvial geomorphic assessment procedure used to evaluate the susceptibility of potential streambank erosion based on a combination of several variables that are sensitive to various processes of erosion. This protocol can be time consuming, difficult for non-professionals, and confined to specific geomorphic regions. To address these constraints and assist in maintaining consistency and reducing user bias, modifications to this protocol include a &#8220;Pre-Screening Questionnaire&#8221;, elimination of the Study Bank-Height Ratio metric including the bankfull determination, and an adjusted scoring system. This modified protocol was used to assess several high priority streams within the Cleveland Metroparks. The original BEHI protocol was also used to confirm the results of the modified BEHI protocol. After using the modified assessment in the field, and comparing it to the original BEHI method, the two were found to produce comparable BEHI ratings of the streambanks, while significantly reducing the amount of time and resources needed to complete the modified protocol.

Modifying the Bank Erosion Hazard Index BEHI Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

Streambank erosion potential can be evaluated and ranked using David Rosgen&#8217;s Bank Erosion Hazard Index (BEHI), however this protocol has significant limitations. Here we present protocol modifications to address time constraints, allow nonprofessionals to complete accurate assessments, and account for non-alluvial stream conditions in Northeast Ohio.

Modificando o Index (BEHI) Protocolo Banco Erosão Hazard para Avaliação Rápida de Streambank Erosão na Northeastern Ohio

Understanding the source of pollution in a stream is vital to preserving, restoring, and maintaining the stream&#8217;s function and habitat it provides. ...

Ambiente

Calibrated Passive Sampling - Multi-plot Field Measurements of NH3 Emissions with a Combination of Dynamic Tube Method and Passive Samplers

Agricultural ammonia (NH3) emissions (90% of total EU emissions) are responsible for about 45% airborne eutrophication, 31% soil acidification and 12% fine dust formation within the EU15. But NH3 emissions also mean a considerable loss of nutrients. Many studies on NH3 emission from organic and mineral fertilizer application have been performed in recent decades. Nevertheless, research related to NH3 emissions after application fertilizers is still limited in particular with respect to relationships to emissions, fertilizer type, site conditions and crop growth. Due to the variable response of crops to treatments, effects can only be validated in experimental designs including field replication for statistical testing. The dominating ammonia loss methods yielding quantitative emissions require large field areas, expensive equipment or current supply, which restricts their application in replicated field trials. This protocol describes a new methodology for the measurement of NH3 emissions on many plots linking a simple semi-quantitative measuring method used in all plots, with a quantitative method by simultaneous measurements using both methods on selected plots. As a semi-quantitative measurement method passive samplers are used. The second method is a dynamic chamber method (Dynamic Tube Method) to obtain a transfer quotient, which converts the semi-quantitative losses of the passive sampler to quantitative losses (kg nitrogen ha-1). The principle underlying this approach is that passive samplers placed in a homogeneous experimental field have the same NH3 absorption behavior under identical environmental conditions. Therefore, a transfer co-efficient obtained from single passive samplers can be used to scale the values of all passive samplers used in the same field trial. The method proved valid under a wide range of experimental conditions and is recommended to be used under conditions with bare soil or small canopies (&#60;0.3 m). Results obtained from experiments with taller plants should be treated more carefully.

Calibrated Passive Sampling - Multi-plot Field Measurements of NH3 Emissions with a Combination of Dynamic Tube Method and Passive Samplers

Ammonia emissions are a major threat to the environment by eutrophication, soil acidification and fine particle formation and stem mainly from agricultural sources. This method allows ammonia loss measurements in replicated field trials enabling statistical analysis of emissions and of relationships between crop development and emissions.

Calibrado amostragem passiva - Multi-enredo medições de campo de NH 3 Emissões com uma combinação de método do tubo Dinâmico e amostradores passivos

Agricultural ammonia (NH3) emissions (90% of total EU emissions) are responsible for about 45% airborne eutrophication, 31% soil acidification and 12% ...

Spotting Cheetahs: Identifying Individuals by Their Footprints

The cheetah (Acinonyx jubatus) is Africa's most endangered large felid and listed as Vulnerable with a declining population trend by the IUCN1. It ranges widely over sub-Saharan Africa and in parts of the Middle East. Cheetah conservationists face two major challenges, conflict with landowners over the killing of domestic livestock, and concern over range contraction. Understanding of the latter remains particularly poor2. Namibia is believed to support the largest number of cheetahs of any range country, around 30%, but estimates range from 2,9053 to 13,5204. The disparity is likely a result of the different techniques used in monitoring.
Current techniques, including invasive tagging with VHF or satellite/GPS collars, can be costly and unreliable. The footprint identification technique5 is a new tool accessible to both field scientists and also citizens with smartphones, who could potentially augment data collection. The footprint identification technique analyzes digital images of footprints captured according to a standardized protocol. Images are optimized and measured in data visualization software. Measurements of distances, angles, and areas of the footprint images are analyzed using a robust cross-validated pairwise discriminant analysis based on a customized model. The final output is in the form of a Ward's cluster dendrogram. A user-friendly graphic user interface (GUI) allows the user immediate access and clear interpretation of classification results.
The footprint identification technique algorithms are species specific because each species has a unique anatomy. The technique runs in a data visualization software, using its own scripting language (jsl) that can be customized for the footprint anatomy of any species. An initial classification algorithm is built from a training database of footprints from that species, collected from individuals of known identity. An algorithm derived from a cheetah of known identity is then able to classify free-ranging cheetahs of unknown identity. The footprint identification technique predicts individual cheetah identity with an accuracy of &gt;90%.

The cheetah (Acinonyx jubatus) is an iconic, endangered species, but conservation efforts are challenged by habitat shrinkage and conflict with commercial farmers. The footprint identification technique, a robust, accurate and cost-effective image classification system, is a new approach to monitoring cheetahs.

Spotting Cheetahs: Indivíduos Identificação por suas pegadas

The cheetah (Acinonyx jubatus) is Africa's most endangered large felid and listed as Vulnerable with a declining population trend by the IUCN1. It ranges ...

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and detritus, and excreting particulate and dissolved compounds, they serve as important agents for benthic-pelagic coupling. Accurately measuring the compounds removed and excreted by suspension feeders (such as sponges, ascidians, polychaetes, bivalves) is crucial for the study of their physiology, metabolism, and feeding ecology, and is fundamental to determine the ecological relevance of the nutrient fluxes mediated by these organisms. However, the assessment of the rate by which suspension feeders process particulate and dissolved compounds in nature is restricted by the limitations of the currently available methodologies. Our goal was to develop a simple, reliable, and non-intrusive method that would allow clean and controlled water sampling from a specific point, such as the excurrent aperture of benthic suspension feeders, in situ. Our method allows simultaneous sampling of inhaled and exhaled water of the studied organism by using minute tubes installed on a custom-built manipulator device and carefully positioned inside the exhalant orifice of the sampled organism. Piercing a septum on the collecting vessel with a syringe needle attached to the distal end of each tube allows the external pressure to slowly force the sampled water into the vessel through the sampling tube. The slow and controlled sampling rate allows integrating the inherent patchiness in the water while ensuring contamination free sampling. We provide recommendations for the most suitable filtering devices, collection vessel, and storing procedures for the analyses of different particulate and dissolved compounds. The VacuSIP system offers a reliable method for the quantification of undisturbed suspension feeder metabolism in natural conditions that is cheap and easy to learn and apply to assess the physiology and functional role of filter feeders in different ecosystems.

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

We introduce the VacuSIP, a simple, non-intrusive, and reliable method for clean and accurate point sampling of water. The system was developed and evaluated for the simultaneous collection of the water inhaled and exhaled by benthic suspension feeders in situ, to cleanly measure removal and excretion of particulate and dissolved compounds.

VacuSIP, um método melhorado para Inex<em&gt; In Situ</em&gt; Medição de partículas e dissolvidos compostos Processado por alimentadores de suspensão ativa

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and ...

Modification and Application of a Leaf Blower-vac for Field Sampling of Arthropods

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropod populations in rice. When used in combination with an enclosure, application of this sampling device provides absolute estimates of the populations of arthropods as numbers per standardized sampling area. The sampling efficiency depends critically on the sampling duration. In a mature rice crop, a two-minute sampling in an enclosure of 0.13 m2 yields more than 90% of the arthropod population. The device also allows sampling of arthropods dwelling on the water surface or the soil in rice paddies, but it is not suitable for sampling fast flying insects, such as predatory Odonata or larger hymenopterous parasitoids. The modified blower-vac is simple to construct, and cheaper and easier to handle than traditional suction sampling devices, such as D-vac. The low cost makes the modified blower-vac also accessible to researchers in developing countries.

Assessment of arthropod abundance in crops is critical for investigating population dynamics and species interactions. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropods in rice.

Modificação e Aplicação de uma Folha Blower-vac para Campo Amostragem de Artrópodes

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the ...

Reliable Method for Assessing Seed Germination, Dormancy, and Mortality under Field Conditions

We describe techniques for approximating seed bank dynamics over time using Helianthus annuus as an example study species. Strips of permeable polyester fabric and glue can be folded and glued to construct a strip of compartments that house seeds and identifying information, while allowing contact with soil leachate, water, microorganisms, and ambient temperature. Strips may be constructed with a wide range of compartment numbers and sizes and allow the researcher to house a variety of genotypes within a single species, different species, or seeds that have experienced different treatments. As opposed to individual seed packets, strips are more easily retrieved as a unit. While replicate packets can be included within a strip, different strips can act as blocks or can be retrieved at different times for observation of seed behavior over time. We used a high temperature glue gun to delineate compartments and sealed the strips once the seed and tags identifying block and removal times were inserted. The seed strips were then buried in the field at the desired depth, with the location marked for later removal. Burrowing animal predators were effectively excluded by use of a covering of metal mesh hardware cloth on the soil surface. After the selected time interval for burial, strips were dug up and seeds were assessed for germination, dormancy and mortality. While clearly dead seeds can often be distinguished from ungerminated living ones by eye, dormant seeds were conclusively identified using a standard Tetrazolium chloride colorimetric test for seed viability.

Here we present a protocol for assessing seed survivorship, germination and dormancy under field conditions using buried, labeled seed strips and tetrazolium chloride (TZ) viability testing.

Método confiável para avaliar a germinação de sementes, dormência, e Mortalidade em condições de campo

We describe techniques for approximating seed bank dynamics over time using Helianthus annuus as an example study species. Strips of permeable polyester ...

Construction of a Compact Low-Cost Radiation Shield for Air-Temperature Sensors in Ecological Field Studies

Low cost temperature sensors are increasingly used by ecologists to assess climatic variation and change on ecologically relevant scales. Although cost-effective, if not deployed with proper solar radiation shielding, the observations recorded from these sensors will be biased and inaccurate. Manufactured radiation shields are effective at minimizing this bias, but are expensive compared to the cost of these sensors. Here, we provide a detailed methodology for constructing a compact version of a previously described custom fabricated radiation shield, which is more accurate than other published shielding methods that attempt to minimize shield size or construction costs. The method requires very little material: corrugated plastic sheets, aluminum foil duct tape, and cable ties. One 15 cm and two 10 cm squares of corrugated plastic are used for each shield. After cutting, scoring, taping and stapling of the sheets, the 10 cm squares form the bottom two layers of the solar radiation shield, while the 15 cm square forms the top layer. The three sheets are held together with cable ties. This compact solar radiation shield can be suspended, or placed against any flat surface. Care must be taken to ensure that the shield is completely parallel to the ground to prevent direct solar radiation from reaching the sensor, possibly causing increased warm biases in sun-exposed sites in the morning and afternoon relative to the original, larger design. Even so, differences in recorded temperatures between the smaller, compact shield design and the original design were small (mean daytime bias = 0.06 &#176;C). Construction costs are less than half of the original shield design, and the new design results in a less conspicuous instrument that may be advantageous in many field ecology settings.

With the advent of small, low-cost environmental sensors, it is now possible to deploy high-density networks of sensors to measure hyper localized temperature variation. Here, we provide a detailed methodology for constructing a compact version of a previously described custom-fabricated radiation shield for use with inexpensive thermochrons.

Construção de um escudo de radiação compacto de baixo custo para sensores de temperatura do ar em estudos ecológicos

Low cost temperature sensors are increasingly used by ecologists to assess climatic variation and change on ecologically relevant scales. Although ...

Visualizing Efficacy of Pesticides Against Disease Vector Mosquitoes in the Field

Efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects such as mosquitoes, sand flies, and filth-breeding flies is not uniform across ecological zones. To best protect public and veterinary health from these insects, the environmental limitations of pesticides need to be investigated to inform effective use of the most appropriate pesticide formulations and techniques. We have developed a research program to evaluate combinations of pesticides, pesticide application equipment, and application techniques in hot-arid desert, hot-humid tropical, warm and cool temperate, and urban locations to derive pesticide use guidelines specific to target insect and environment. To these ends we designed a system of protocols to support efficient, cost-effective, portable, and standardized evaluation of a diverse range of pesticides and equipment across multiple environments. At the core of these protocols is the use of an array of small cages with colony-reared sentinel mosquitoes (adults and immatures) and sand flies (adults), strategically arranged in natural habitats and exposed to pesticide spray. Spatial and temporal patterns of pesticide efficacy are derived from percent mortality in sentinel cages, then mapped and visualized in a geographic information system. Maps of sentinel mortality data may be statistically compared to evaluate relative efficacy of a pesticide across multiple environments, or to study multiple pesticides in a single environment. Protocols may be modified to accommodate a variety of scenarios, including, for example, the vertical orientation of sentinels in canopy habitats or simultaneous testing of ground and aerial application methods.

The efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects is not uniform across different ecological zones. Here we present a system of techniques using captive vector insects as sentinels for pesticide efficacy to derive electronic maps supporting the standard evaluation of pesticides across multiple environments.

Visualizando a eficácia de pesticidas contra mosquitos vetores de doenças no campo

Efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects such as mosquitoes, sand flies, and filth-breeding flies is not uniform ...

Long-term Video Tracking of Cohoused Aquatic Animals: A Case Study of the Daily Locomotor Activity of the Norway Lobster (Nephrops norvegicus)

We present a protocol related to a video-tracking technique based on the background subtraction and image thresholding that makes it possible to individually track cohoused animals. We tested the tracking routine with four cohoused Norway lobsters (Nephrops norvegicus) under light-darkness conditions for 5 days. The lobsters had been individually tagged. The experimental setup and the tracking techniques used are entirely based on the open source software. The comparison of the tracking output with a manual detection indicates that the lobsters were correctly detected 69% of the times. Among the correctly detected lobsters, their individual tags were correctly identified 89.5% of the times. Considering the frame rate used in the protocol and the movement rate of lobsters, the performance of the video tracking has a good quality, and the representative results support the validity of the protocol in producing valuable data for research needs (individual space occupancy or locomotor activity patterns). The protocol presented here can be easily customized and is, hence, transferable to other species where the individual tracking of specimens in a group can be valuable for answering research questions.

Long-term Video Tracking of Cohoused Aquatic Animals: A Case Study of the Daily Locomotor Activity of the Norway Lobster Nephrops norvegicus

Here we present a protocol to individually track animals over a long period of time. It uses computer vision methods to identify a set of manually constructed tags by using a group of lobsters as case study, simultaneously providing information on how to house, manipulate, and mark the lobsters.

Acompanhamento a longo prazo de vídeo de animais aquáticos, Cohoused: um estudo de caso da atividade locomotora diária do lagostim (Nephrops norvegicus)

We present a protocol related to a video-tracking technique based on the background subtraction and image thresholding that makes it possible to ...

Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are natural reservoirs of most lyssaviruses, a lyssavirus surveillance program of bats has been conducted in Taiwan since 2008 to understand the ecology of these viruses in bats. In this program, non-governmental bat conservation organizations and local animal disease control centers cooperated to collect dead bats or bats dying of weakness or illness. Brain tissues of bats were obtained through necropsy and subjected to direct fluorescent antibody test (FAT) and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for detection of lyssavirus antigens and nucleic acids. For the FAT, at least two different rabies diagnosis conjugates are recommended. For the RT-PCR, two sets of primers (JW12/N165-146, N113F/N304R) are used to amplify a partial sequence of the lyssavirus nucleoprotein gene. This surveillance program monitors lyssaviruses and other zoonotic agents in bats. Taiwan bat lyssavirus is found in two cases of the Japanese pipistrelle (Pipistrellus abramus) in 2016&#8211;2017. These findings should inform the public, health professionals, and scientists of the potential risks of contacting bats and other wildlife.

This protocol introduces a standard laboratory operating procedure for diagnostic testing of lyssavirus antigens in bats in Taiwan.

Procedimento de funcionamento padrão para a vigilância do Lyssavirus da população do bastão em Formosa

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...