The authors thank the three anonymous reviewers for their helpful comments on the manuscript. This work was partly supported by Grant-in-Aid for JSPS Fellows (26.11613).

NOTA: Questo articolo è basato sul nostro lavoro precedente 30. Alcune parti sono riprodotte con l&#39;autorizzazione dalla Società Botanica del Giappone e Springer Giappone. 1. L&#39;osservazione di Floral Visitatori <ol><li> La selezione dei campi di osservazione <ol><li> Cerca le aree in cui sono distribuiti i materiali vegetali, e selezionare i siti di studio candidato utilizzando le risorse affidabili, come libri illustrati, riviste accademiche, ecc Regolare il numero di siti di studio per soddisfare gli obiettivi di ricerca (ad esempio, una vasta gamma di posizioni per il confronto dei visitatori fiori in Giappone). </li><li> Controllare le posizioni delle popolazioni candidati selezionati e le distanze da importanti punti di partenza, quali istituti di ricerca e gli alloggi, se è necessaria la ricerca a lungo termine. </li><li> Stimare approssimativamente ogni dimensione della popolazione contando il numero di individui vegetali in una unità di superficie. Selezionare le grandi popolazioni di esperimento manipolatas utilizzando molti individui vegetali. </li><li> Pre-osservazione dei visitatori floreali <ol><li> Decidere quale indirizzare individui in ogni area sarà osservato durante lo stesso intervallo di tempo, a seconda della densità della popolazione. Selezionare 5-10 fiori appena aperti o rottura gemme come i fiori di destinazione, e respingere quelli degradati che sono già aperte. </li><li> Avviare l&#39;osservazione visiva per il periodo di un giorno intero, perché i fiori potrebbero essere visitati da diversi impollinatori nel tempo diverse categorie di 31,32. </li><li> Sui fogli di registrazione, registrare il nome della specie di visitatori floreali e il tempo di ogni visita per ora per ogni fiore. </li><li> Strettamente osservare se i visitatori floreali toccare le antere e / o stimmate; se lo fanno, registrare i visitatori come impollinatori. Se i visitatori floreali visitano solo i fiori e non toccare gli organi riproduttivi, registrarle come visitatori. </li><li> Utilizzando una rete di insetti o di aspiratore fatti a mano, catturare i visitatori floreali per identificare econservarli come campioni (Figura 1F). Uccidere i visitatori intrappolate rapidamente con acetato di etile o pressione delle dita al torace, e conservarli in un sacchetto molle o in un tubo di plastica o caso con etanolo al 100%. </li><li> Dopo l&#39;osservazione, identificare i nomi specifici dei campioni con caratteristiche morfologiche o, in caso di difficoltà di identificazione, richiedere l&#39;aiuto di esperti per ogni gruppo tassonomico. </li></ol></li></ol></li><li> Osservazione nel campo <ol><li> Selezionare i siti di ricerca in base alla loro accessibilità, dimensioni della popolazione, e il numero di visitatori floreali. Scegli periodi di tempo che includono un campione rappresentativo di visitatori floreali nella stagione della fioritura, e di determinare i periodi di osservazione sulla base di obiettivi di ricerca (ad esempio, per la ricerca sulle fluttuazioni visita frequenza di visitatori floreali, lunghi periodi di tempo devono essere impostati). </li><li> Preparare l&#39;apparecchio di controllo appropriato, ad esempio videocamere digitali (ad esempio, per la registrazione di notte, telecamere con funzione infrarossi devono essere utilizzati). </li><li> Selezionare i fiori bersaglio nello stesso modo come per 1.1.4. </li><li> Fissare le telecamere per treppiedi in alluminio. Impostare le telecamere con treppiedi davanti individui bersaglio, circa 50 cm di distanza. </li><li> Controllare e modificare la quantità di luce e la messa a fuoco dei materiali sulle schermate delle telecamere prima di girare. </li><li> Avviare l&#39;osservazione visiva e riprese video, allo stesso tempo per i fusi orari appropriati stimati dalle pre-osservazioni (nel caso di specie, periodi di osservazione sono stati per più di sei ore in media, da circa 05:00-13:00 pm ). </li><li> Identificare i nomi delle specie dei visitatori e impollinatori, e registrare i loro nomi e gli orari delle visite sui fogli di registrazione. </li><li> Cattura e identificare i visitatori e impollinatori nello stesso modo come in 1.1.4.5. </li><li> Ripetere i passaggi da 1.2.1 a 1.2.7 per ciascuna observatioperiodo di n. Impostare i periodi di osservazione sulla base degli obiettivi di ricerca e dei dati pre-osservazione. </li></ol></li><li> Analisi dei dati dopo l&#39;osservazione <ol><li> Identificare i nomi delle specie di esemplari catturati dopo l&#39;osservazione impollinatore nello stesso modo come in 1.1.4.6. </li><li> Controllare i video clip e annotare i nomi delle specie e dei loro tempi di visita nello stesso modo come per l&#39;osservazione visiva. </li><li> Calcolare le frequenze di visita al fiore per ogni ora di ogni visitatore floreali dai dati di osservazione e registrazione video visivi. Confrontare queste frequenze statisticamente tra i siti e gli anni di ogni visitatore con metodi statistici appropriati sulla base di statistiche fondamentali e utilizzando il software adatto, come R, SPSS, e / o SAS 33-35 (ad esempio, l&#39;analisi a due vie della varianza (ANOVA ) con onesto il test di Tukey differenza significativa (HSD) nel software R). </li></ol></li></ol> 2. Insaccamento e Cage Esperimenti<ol><li> I preparativi per l&#39;insaccamento e Esperimenti Cage <ol><li> Per gli esperimenti di insaccamento, preparare borse che hanno maglie di piccole dimensioni (~ 0,5-1 mm) e li usa per prevenire completamente fiore visita (ad esempio, borse in tessuto non tessuto sono stati utilizzati per gli esperimenti di insaccamento nel 2011 e 2012). </li><li> Per gli esperimenti gabbia, preparare schede di filo metallico o di maglia di plastica con un diametro che permette ai visitatori l&#39;obiettivo più piccoli di passare attraverso, ma esclude quelli più grandi, e collegare queste schede in rete in modo da formare una gabbia. Assicurarsi che non ci siano spazi più grandi del diametro della maglia. Regolare la dimensione e la forma delle gabbie in base alle specie vegetali di destinazione e numeri individuali. </li></ol></li><li> Esperimenti insacco <ol><li> Selezionare 30 individui per un trattamento che non hanno alcun danno da erbivori o da un ambiente severo. Per il trattamento, scegliere un singolo fiore da ogni singolo impianto, o utilizzare singoli fiori su un singolo impianto. </li><li> Borsa tegli bersaglio fiori nel campo dopo etichettandoli con del nastro (numero di serie e l&#39;alfabeto; Figura 1g). Fare attenzione a non toccare le antere o le stigmate all&#39;interno dei sacchi per evitare la possibilità di auto-impollinazione. </li><li> Con attenzione risolvere i sacchetti ai fiori utilizzando una stringa morbida o filo (Figura 1d). </li><li> impostare con attenzione i singoli fiori in posizione verticale con supporti utilizzando morbida corda o filo per sostenere le persone nei confronti di inclinazione o collasso sotto il peso dei sacchetti o il vento, se necessario. Twist o vento una stringa o filo morbidamente intorno al gambo di un individuo di destinazione, in modo da non creare danni. </li><li> Trattamenti in esperimenti di insaccamento <ol><li> Per il trattamento &quot;di controllo&quot;, applicare le etichette ai fiori di destinazione e condurre nessun trattamento. Consentire ai visitatori floreali da visitare liberamente. </li><li> Per il trattamento &quot;Outcrossing&quot;, coprire i germogli fino a quando il fiore, e quindi rimuovere le antere dei fiori insaccato. Metti un po &#39;Pollen cereali da più persone sul stimmate. </li><li> Per il trattamento &quot;autofecondazione&quot;, coprire i germogli fino a quando i fiori aperti, e mettere il polline dai fiori delle stesse sul loro stimmate. Coprire di nuovo questi fiori trattati. </li><li> Per il trattamento &quot;Auto-sé&quot;, coprire le gemme con borse fino alla fine della stagione di fioritura. </li><li> Per il trattamento &quot;Breaking bocciolo&quot;, individuare i germogli di rottura che sono stati visitati e osservare l&#39;ingresso o l&#39;uscita di piccole api (Figure 1b, c). Rimuovere le antere dei germogli di rottura per evitare deposizioni polline ripetuti sullo stesso fiore, dopo la visita da parte delle piccole api, e la borsa queste gemme in fretta per evitare ulteriori visite. </li><li> Per il trattamento &quot;Fioritura&quot;, borsa i germogli fino alla fase di apertura per evitare visite nella fase di rottura con auricolari. Dopo di che, togliere le borse e permettono ai visitatori di raccogliere nettare e polline. </li><li> Per il trattamento &quot;Bud&quot;,rimuovere le antere dai germogli non aperti e li outcross artificialmente. Bag queste gemme in fretta per evitare visite di fiori. </li></ol></li></ol></li><li> Esperimenti Cage <ol><li> Coprire i soggetti vegetali bersaglio con gabbie preparate. Regolare la posizione dei fiori in gabbia a mano per evitare il contatto e polline deposizioni tra diversi stigmate (Figura 1e). </li><li> Per il trattamento &quot;gabbia&quot;, selezionare gli individui con i germogli non aperti e mettere etichette su di loro per l&#39;identificazione dei fiori selezionati. Cage gli individui con i germogli etichettati per rifiutare le influenze da prima della creazione di gabbie (ad esempio, gli insetti floreali non possono visitare i germogli non aperti, e solo gli effetti di insetti che visitano dopo il posizionamento delle gabbie può essere stimato). </li><li> Fissare le gabbie saldamente al suolo con pali di ferro per prevenire l&#39;ingresso di visitatori tra la base della gabbia e la terra. </li></ol></li><li> Analisi dei dati After l&#39;insaccamento e Esperimenti Cage <ol><li> Raccogliere tutti i fiori etichettate al termine della stagione di fioritura (Figura 1g) tagliando e separandoli dagli individui materni. Conserva ogni campione etichettato separatamente ad evitarne la contaminazione. </li><li> Verificare la presenza o l&#39;assenza di frutta impostato su ciascuna etichetta flower.Record i numeri seme del frutto nel caso di impostazione frutta. </li><li> Calcolare il rapporto dei numeri di frutta per fiori (rapporto frutta-set, definito come il numero di frutti diviso per il numero di fiori) e del numero di semi per frutto maturo (rapporto di semi-set, definito come il numero di semi diviso per il numero di ovuli) utilizzando tutti i numeri registrati. </li><li> Confrontare Statisticamente i rapporti di frutta- e semi-impostati tra i trattamenti con metodi e software adeguati, come quelli elencati in 1.3.3 (ad esempio, una via ANOVA con HSD di Tukey o il test esatto di Fisher nel software R 33). </li><li> Le indagini dei materiali con i risultati degli esperimenti di insacco <ol><li> Per verificare la necessità di impollinatori animali, statisticamente confrontare i risultati tra &quot;controllo&quot; e trattamenti di &quot;auto-self&quot;. </li><li> Per stimare il grado di limitazione polline, confrontare il &quot;controllo&quot; e trattamenti &quot;fecondazione incrociata&quot;. </li><li> Per eseguire il test di auto-compatibilità, confrontare il &quot;Outcrossing&quot; e trattamenti &quot;autofecondazione&quot;. </li></ol></li><li> Le valutazioni delle influenze di rompere con auricolari impollinazione <ol><li> Confrontare il &quot;controllo&quot; e trattamenti &quot;Bud&quot; per determinare se le stigmate delle gemme di rottura sono riproduttivo maturi e se il valore del trattamento &quot;controllo&quot; può essere utilizzato per il controllo in fase di rottura con auricolari. </li><li> Confrontare il &quot;Auto-sé&quot; e trattamenti di &quot;Breaking Bud&quot; per determinare se il successo riproduttivo dei fiori impollinati con piccole api alla rotturafase -BUD è statisticamente più elevata di quella degli impianti che effettuano autogamia (cioè, per verificare l&#39;esistenza di impollinazione rompere auricolari). Dopo di che, confrontare questi due trattamenti con il &quot;controllo&quot; per stimare l&#39;efficienza impollinazione di impollinazione rompere con auricolari. </li><li> Confrontare il &quot;Breaking bocciolo&quot;, &quot;Gabbia&quot; e &quot;trattamenti fioriti&quot; per stimare le influenze riproduttivi di impollinazione rompere con auricolari. </li></ol></li></ol></li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

osservazioni di fiori ed esperimenti di insaccamento sono stati impiegati in questo studio per rivelare le frequenze di visita e la femmina successo riproduttivo delle piante, rispettivamente. In Dafni (1992) 38, il metodo videotape era efficace perché potrebbe registrare il tempo e la durata dei visitatori per analisi e prevenire preconcetto dell&#39;osservatore. Tuttavia, al momento, questo metodo richiede attrezzature costose, ed i tempi di osservazione fosse limitata dalla durata della batteria. Recentemente, il costo delle attrezzature per la produzione di registrazioni video è diminuito, e questo metodo tecnologico può essere impiegato in altre ricerche impollinatore. In questo studio, le frequenze di visita erano significativamente differenti tra le osservazioni visive e video al sito 3 (Tabella 2). Questo potrebbe essere stato causato da un eccesso di osservazione di visitatori di fiori, e gli errori umani, come questo può essere respinta. Dafni (1992) ha anche ricordato di insaccamento o esperimenti netti per studiare sistemi di allevamento 38. Non-WOVen sacchetti in tessuto sono stati utilizzati, che non sono stati pollen- o impermeabile. L. sanguinea var. sanguinea non è una specie di vento impollinazione, ma l&#39;acqua piovana potrebbe influenzare il successo riproduttivo dei fiori insaccato. paletti di ferro sono stati usati per sostenere gli individui con fiori insaccato dal peso dei sacchi bagnati, ma questi fattori potrebbero hanno colpito le capacità riproduttive dei fiori. Che copre l&#39;intero impianto da reti di insetti-esclusivo con i tifosi potrebbe essere l&#39;opzione migliore per rimuovere tali problemi metodologici. Inoltre, le gabbie sono stati utilizzati per la separazione di specie di api, che fu il primo esempio di studio pianta-gabbia. Questo studio ha dimostrato l&#39;efficacia di questo metodo, e possiamo applicarlo ad altri studi cui obiettivi richiedono la determinazione dell&#39;efficacia impollinazione di diversi gruppi funzionali, come piccole e grandi api. Queste osservazioni impollinatori hanno rivelato che la maggior parte dei visitatori floreali di Lycoris sanguinea </em&gt; var. sanguinea per tutta la stagione di fioritura erano japonicum Lasioglossum. Per fare osservazioni di successo, i pre-osservazioni di materiali bersaglio in alcuni siti di studio candidati dovrebbero essere fatte, che è descritto al punto 1.1 nella sezione Protocollo. Ad esempio, le identificazioni di alcuni visitatori floreali sono realizzati sulla base di osservazioni o immagini della fotocamera in un campo. Alcuni visitatori floreali appartenevano a gruppi tassonomici che erano difficili da individuare in un primo momento a causa delle loro caratteristiche morfologiche indistinguibili o attività in visita veloci, come le api halictid o hawkmoths notturni, rispettivamente. Pertanto, la ricerca preliminare su visite floreali potrebbe aiutare a identificare e registrare ogni visita. Per comprendere appieno l&#39;influenza delle condizioni ambientali, è importante selezionare idonei siti di studio per le osservazioni. Ad esempio, le condizioni di pioggia non sono adatti per le osservazioni impollinatori perché l&#39;aspetto ed i modelli di impollinazione potrebbero cambiare. Sei siti selezionati avevano oscillato in condizioni ambientali, non ci sarebbero state sufficienti dati di osservazione raccolti per analizzare gli obiettivi dello studio. In alternativa, i risultati avrebbero potuto essere frainteso a causa di differenze nelle condizioni climatiche che influenzano la composizione della comunità impollinatore 39. In questo studio, i visitatori floreali sono stati esaminati utilizzando osservazioni visive e registrazioni video (Tabella 1). Questi due metodi presentano vantaggi e svantaggi. In osservazioni visuali, gli oggetti possono essere visualizzate da angolazioni diverse e possono essere osservati più specifico. Tuttavia, le informazioni disponibili sugli obiettivi è limitata perché il record rimane solo come note di campo o fotografie digitali. Al contrario, i visitatori floreali possono essere più volte verificate con i video registrati. Sfortunatamente, questo metodo tende a produrre dischi inadatti per analisi, come out-of-focus e immagini sufficientemente illuminate. Oltre a questi metodi, somtecniche di registrazione specifici e sono stati sviluppati negli ultimi anni. Per esempio, in piante da fiore con impollinatori rari, come alcune piante di orchidee, fotografia intervallo utilizzando macchine fotografiche digitali è un approccio efficace per l&#39;identificazione impollinatore 40. Una videocamera digitale con un sensore di rilevamento del movimento video può registrare immagini chiare del movimento di impollinatori sui fiori, anche impollinatori rapidamente-movimento di notte 41. Inoltre, una telecamera ad alta velocità è stato utilizzato anche per osservare movimenti impollinatori lente, come il contatto di ogni pollinator sullo stimma 42. La registrazione del video e fotografia digitale sono metodi comuni per osservazioni sul campo, ed è importante per capire le caratteristiche di ogni metodo e per selezionare il più adatto. Gli esperimenti hanno suggerito insaccamento i gradi di dipendenza impollinatore di L. sanguinea var. sanguinea (Tabella 2). In questi metodi, il passaggio criticos sono la preparazione dei sacchi e gabbie. In questo caso, i sacchetti utilizzati erano di dimensioni adatte per i fiori (Figura 1d); tuttavia, può essere necessario preparare dimensioni più grandi o reti di insetto-esclusione, che può coprire intere individui vegetali. Il trattamento &quot;Auto-self&quot; ha avuto qualche frutto, ma un più ampio rapporto di semi-set, e questo potrebbe essere stato causato dal contatto tra lo stigma e le borse di polline-attached. Tali errori possono essere evitati utilizzando metodi appropriati per gli obiettivi di ogni esperimento. Insacco per le papille rottura ha mostrato l&#39;impollinazione da parte delle piccole api in fase di rottura con auricolari (Tabella 2). Piccole api tendevano a gestire le gemme rottura per raccogliere il polline più lungo degli altri insetti che hanno visitato fiori apertura. Queste differenze comportamentali potrebbero suggerire che la rottura con auricolari impollinazione non ha efficienze di impollinazione più elevati rispetto agli altri processi di impollinazione. Per rivelare queste differenze di comportamento, il successo di impollinazione persingola visita o di impollinazione efficienza di ogni impollinatori dovrebbero essere valutati 43,44. Preparando la non aperti, germogli insaccato, è stato possibile stimare gli effetti singolo visita sugli aspetti riproduttivi di impollinazione rompere con auricolari. Inoltre, nell&#39;esperimento gabbia, sono stati mantenuti i germogli non aperti. Questo metodo non può essere utilizzato per valutare l&#39;efficacia dell&#39;impollinazione da parte delle piccole api al solo la fase di fioritura. Un metodo alternativo sarebbe quello di coprire la gabbia con un panno che presenta lacune più piccole rispetto alle dimensioni di tutti i visitatori floreali che i fiori gabbia completamente aperta. Anche se le attuali esperimenti fornito buoni risultati, esperimenti sul campo hanno rivelato solo informazioni limitate sulle interazioni pianta-impollinatori. Ad esempio, è stato ipotizzato che la rottura con auricolari l&#39;impollinazione da parte delle piccole api potrebbe promuovere autofecondazione o l&#39;impollinazione geitonogamous. Questo processo di impollinazione avviene quando le piccole api si muovono nelle gemme di rottura. Alcuni grani di polline puòessere facilmente trasportato dello stesso fiore allo stigma. Inoltre, gli intervalli di foraggiamento delle piccole api stimata dai loro dimensioni del corpo erano brevi, promuovendo brevi intervalli di dispersione del polline 45,46. Queste previsioni sono difficili da indagare utilizzando solo esperimenti sul campo, anche se i movimenti di polline tra gli individui possono essere monitorati utilizzando polline marcato con un colorante fluorescente 47,48. Per esempio, il polimorfismo o microsatellite marcatori amplificato frammento lunghezza può essere utilizzato per stimare se i donatori di polline di ogni seme sono derivati da uguali o diversi individui 49,50. Negli ultimi anni, i movimenti di polline tra piante conspecifici sono stati seguiti con singolo polline tecniche di genotipizzazione 35. Questo metodo molecolare è stato usato per mostrare i significati per le valutazioni di efficienza impollinazione 36. Nel caso di specie, questa tecnica molecolare potrebbe rivelare le posizioni di arrivo dei grani di polline di germogli di rottura, che might indicano i gradi di flusso genico tra rottura gemme e fiori completamente aperti. Pertanto, un piano di ricerca globale, sulla base sia il lavoro sul campo e analisi molecolari, è necessario rivelare gli effetti di impollinatori.

interazioni pianta-impollinatori sono i principali esempi per lo studio della biologia evolutiva e l&#39;ecologia. I rapporti mutualistici tra fiori e impollinatori si pensa siano promosso la diversificazione delle angiosperme 1,2 a seguito della selezione naturale, anche se altri fattori biotici e abiotici hanno anche esercitato un&#39;influenza 3,4,5. Si ritiene anche che i tratti floreali hanno cambiato per adattarsi alle impollinatori più efficaci e di produrre più frutti e delle sementi 6. Queste credenze sono stati costruiti anche grandi studi basati su diversi indici, come ad esempio l&#39;efficacia di impollinazione, che coinvolgono varie interpretazioni 7. Piante da fiore che sono generalizzati i sistemi di impollinazione sono visitati da vari tipi di impollinatori 8. Qui, un visitatore di fiori è stata definita come una specie animale che hanno visitato per ottenere una ricompensa floreale, e impollinatori sono stati definiti come i visitatori floreali che impollinano.Alcuni di questi visitatori portano granelli di polline conspecifici per le stimmate dei fiori visitati e possono essere classificate come impollinatori. Altri visitatori possono anche avere un po &#39;di polline intraspecifica; essi potrebbero condurre meno l&#39;impollinazione a causa di mancate corrispondenze comportamentali o morfologiche tra gli impollinatori ei fiori. Queste differenze comparabili nel contributo alla riproduzione delle piante in grado di produrre vari gradi di pressione selettiva sui tratti floreali 9 e potrebbero causare la divergenza adattativa di piante da fiore. Pertanto, anche se la composizione della comunità impollinatore e della specie abbondanza relativa sono importanti 10, la valutazione accurata dell&#39;efficacia di ogni visitatore è anche fondamentale per determinare la adattativa e / o processi evolutivi delle piante. In questo studio, le stime quantitative di efficienza impollinatori, definita come la produzione di frutta e semi per la frequenza di visita, sono stati determinati 11. Le specificheSono stati osservati i e la frequenza di ogni visitatore floreale, e gli effetti riproduttivi sui fiori visitati sono stati stimati. La registrazione delle visite floreali attraverso osservazioni umani è un metodo classico in ecologia impollinazione. Tuttavia, questo metodo impone un notevole onere osservatori, che devono rimanere davanti piante e per prendere accurate, misurazioni a lungo termine. Di recente, le tecnologie di ripresa e la registrazione sono rapidamente sviluppate e videocamere digitali a basso costo hanno consentito l&#39;introduzione di registrazione video alle osservazioni impollinatori 12,13. Questi metodi possono facilitare la raccolta di informazioni di base sui visitatori floreali e potrebbero contribuire a sviluppare una comprensione dell&#39;ecologia impollinazione di una specie vegetale di destinazione. Tuttavia, le frequenze di visita degli impollinatori non sono necessariamente correlati alla loro efficacia impollinazione 7,14, ed è importante per valutare gli effetti qualitativi di ciascuna pollinatorsul fiore di fitness. L&#39;impollinazione efficacia è stata valutata attraverso il numero di granelli di polline sul stimmate 15,16, tubetto pollinico crescita 17,18 e frutta e / o produzione di sementi 19,20. Insaccamento esperimenti, condotti utilizzando sacchetti di visitatori esclusiva, sono i metodi tipici per prove self-compatibilità, autogamia 21,22, e la presenza di apomixes 23. Inoltre, la valutazione dell&#39;efficacia impollinazione per un certo pollinator nell&#39;assemblaggio visitatore è stata spesso condotta in ambienti dove altri visitatori floreali sono stati limitati (cioè, una gabbia metallica, rete, o sacchetto con una maglia abbastanza piccolo da escludere impollinatori più grandi che è insieme a piante da fiore). Ad esempio, sono stati condotti esperimenti di insaccamento con piccoli sacchetti di rete per rivelare la capacità di impollinazione delle formiche o tripidi 24,25. Inoltre, gli esperimenti di esclusione uccello usando una gabbia di filo o rete hanno dimostrato gli impollinatori efficaci di taxa Aloe26-28. Gli obiettivi di questo studio erano: 1) per introdurre i metodi utilizzati in un precedente lavoro e 2) per migliorare questi metodi per uso generale in altri studi sui visitatori floreali, le loro frequenze di visita, ei loro effetti sulla forma fisica impianto Lycoris sanguinea var.. sanguinea è una delle specie incluse nel genere Lycoris, che viene distribuito ampiamente in tutto il Giappone e stretto in Corea 29 e ha a forma di imbuto rosso-arancio fiori (Figura 1a). Un precedente studio ha rivelato che L. sanguinea var. sanguinea è stata visitata da più specie di insetti, tra cui un non identificate specie di api per piccoli gruppi e le specie più grandi Amegilla Florea 29. Tuttavia, la frequenza di visita e l&#39;impollinazione efficacia di questi visitatori non sono stati identificati. osservazioni impollinatori per l&#39;identificazione dei visitatori floreali sono state eseguite prima. Visitazione da piccole api è stato observ ati sui fiori che non erano ancora completamente aperto (rottura gemme, le figure 1b, c). Le piccole api mossi in fretta intorno alle antere undehisced nei germogli di rottura e raccolte polline con le loro mandibole. L&#39;ipotesi era che le piccole api potrebbero essere impollinatori in fase di rottura con auricolari, perché il divario tra le antere e le stimmate nei fiori erano più piccole rispetto alla lunghezza del corpo delle api. Pertanto, gli esperimenti sono stati condotti insacco per testare la capacità di impollinazione delle piccole api in fase di rottura con auricolari, e inoltre di esaminare le strategie riproduttive di L. sanguinea var. sanguinea. Queste gemme sono stati insaccato dopo le piccole api visitati, che hanno permesso una stima della capacità di impollinazione delle api. Gli individui sono stati ingabbiati con boccioli chiusi. Una gabbia a maglie è stato usato, attraverso i quali solo piccole api potrebbero passare, consentendo una stima delle efficienze impollinazione delle piccole api nell&#39;intero flowefase anello.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="535">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:200px;">recording sheet</td>
			<td style="width:159px;">any</td>
			<td style="width:112px;">NA</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">insect net</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">pooter</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">ethyl acetate</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">100% Ethanol</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">plastic tube</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">plastic case</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">soft bag</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">digital video camera(s)</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">tripod(s)</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">bags</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">wire or plastic mesh boards</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">iron wires</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">labeling tape</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">stick supporters</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">soft strings or wire</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">pincette(s)</td>
			<td>any</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

field experiments of pollination ecology: the case of lycoris sanguinea var. sanguinea

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify the pollination effectiveness of each pollinator for visited flowers. Pollinator observations have been one of the most common methods to identify pollinators, and bagging and cage experiments have been conducted to show the effectiveness of specific pollinators. In a previous study of Lycoris sanguinea var. sanguinea, its effective pollinators, the visitation frequencies of each floral visitor, and its reproductive strategies were not identified. This study reports the observation that small bees visited flowers that were partially opened (breaking buds). To the best of our knowledge, this phenomenon has not been reported previously. Further, this study investigates the hypothesis that small bees can pollinate at that flowering stage. This study demonstrates the basic methods of field experiments in pollination ecology using L. sanguinea var. sanguinea. Pollinator observations and digital video showed the visitation frequencies of each floral visitor. Bagging and cage experiments revealed that these flowers could be pollinated fully and that breaking-bud pollination could be important for the pollination of this plant species. The advantages and disadvantages of each method are discussed, and recent developments, including laboratory experiments, are described.

Cinque le popolazioni sono stati selezionati per le osservazioni impollinatori. Nella fase di pre-osservazione, sono state confermate le visite di varie specie di insetti ai fiori di apertura e le piccole api a gemme di rottura. Osservazioni visitatori floreali hanno rivelato che la maggior parte dei visitatori di tutti e cinque i siti di studio erano gli individui delle piccole specie di api japonicum Lasioglossum. Il record totale visita ha dimostrato che i rapporti di visita di questa specie erano più del 90% in tre siti (Figura 2). Al contrario, i rapporti tra la seconda più frequente visitatore, Amegilla Florea, sono stati inferiori del 10% in questi campi. Queste specie di api toccato anche le stimmate di fiori visitati, e sono stati registrati come impollinatori. Altri visitatori fiori frequente, come Episyrphus balteatus, raccolti polline senza contatto con le stimmate, e sono stati identificati come i visitatori. A un certo sito, le analisi dei dati ha mostrato che la visitafrequenze di piccole api registrate da osservazioni visuali erano significativamente superiori a quelli registrati dal video (Tabella 1: ANOVA: Sito 2: df = 1, F = 0.471, p = 0,50; Sito 3: df = 1, F = 12.12 , p &lt;0.001; sito 4: df = 1, F = 1.019, p = 0,33; sito 5: df = 1, F = 1.605, p = 0.22, rispettivamente). esperimenti di insaccamento e gabbia sono state condotte a Sito 1 nel 2011 e 2012. I sacchetti non tessuti in tessuto, con maglie di dimensioni inferiori rispetto alle dimensioni del corpo dei visitatori floreali, e gabbie di rete metallica, con una maglia più grandi delle piccole api, ma più piccoli di altri visitatori, sono stati preparati. sono state osservate le visite frequenti di piccole api ai fiori in gabbia, e sono state applicate le gabbie. Il risultato del trattamento &quot;Breaking bocciolo&quot; ha mostrato la capacità di impollinazione delle piccole api visitano rottura gemme. Confronti di fruttae set di semi tra i trattamenti descritti in 2.4.5 rivelato i tratti riproduttivi di Lycoris sanguinea var sanguinea, che è prevalentemente animali a impollinazione ( &quot;Control&quot; vs. &quot;Auto-sé&quot;:. test esatto di Fisher per il set di frutta; p &lt;0,001 ) con condizioni parzialmente polline limitata ( &quot;Control&quot; vs &quot;Outcrossing&quot;: il test esatto di Fisher per l&#39;allegagione; P = 0.16; test esatto di Fisher per il set di semi: P = 0.37). I confronti anche suggerito che questa pianta ha auto-compatibilità ( &quot;Outcrossing&quot; contro &quot;autofecondazione&quot;: il test esatto di Fisher per l&#39;allegagione; P = 0.48; test esatto di Fisher per il set di semi: P = 0,32), che era coerente con le precedenti relazioni 36,37. Inoltre, il confronto degli altri trattamenti hanno suggerito le capacità di impollinazione impollinazione rottura con auricolari in L. sanguinea var. sanguinea. Lo stigma di questa pianta è matura nella fase di gemma (&amp;# 34; di controllo &quot;contro&quot; Bud &quot;: il test esatto di Fisher per l&#39;allegagione; P = 0.80; test esatto di Fisher per il set di semi: P = 0.41), e il valore di&quot; Control &quot;è stato utilizzato per i confronti al breaking- . bocciolo stadio il trattamento &quot;Breaking bocciolo&quot; ha mostrato un insieme più elevato di frutta rispetto alla &quot;auto-self&quot; (test esatto di Fisher per l&#39;allegagione; P = 0,02), che indica la presenza di deposizione di polline da parte delle piccole api per stimmate alla rottura con auricolari fase. Tuttavia, non è stato possibile dimostrare i progressi di questo processo di impollinazione. i tre trattamenti descritti in 2.4.6.2 ( &quot;controllo&quot;, &quot;auto-self&quot; e &quot;Breaking bocciolo&quot;) ha mostrato differenze significative (ANOVA per l&#39;allegagione; df = 2, F = 18.46; p &lt;0.001; ANOVA per il set di semi: df = 2, F = 3,6593, p = 0,03), ma HSD di Tukey ha suggerito che la rottura con auricolari l&#39;impollinazione non è molto efficace ( &quot;Breaking gemma&quot;; vs &quot;Auto-self&quot;: allegagione: P = 0,10; set di semi: P = 0.03). Inoltre, il confronto tra i tre trattamenti in 2.4.6.3 non hanno mostrato differenze significative (ANOVA a due vie: df = 2, F = 0,6881, p = 0,50; ANOVA a due vie per il set di semi: df = 2, F = 1,2376, P = 0.30). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/54728/54728fig1.jpg" /> Figura 1:.. Materiali Impianti e attrezzature sperimentali (a) Un fiore delle specie vegetali bersaglio, Lycoris sanguinea var sanguinea. (B) Una gemma di rottura. (C) Una piccola ape visitando i germogli di rottura per raccogliere granelli di polline. (D) Un esempio dall&#39;esperimento insaccamento. (E) Una gabbia di rete metallica che copre alcuni germogli chiusi. (F) Un aspiratore utilizzato principalmente per la cattura di piccoli api. (g </strong&gt;) Un esempio del sistema di etichettatura. &quot;C&quot; significa che questo fiore è stato utilizzato per l&#39;esperimento insacco per la rottura gemme. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54728/54728fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="figura 2" src="/files/ftp_upload/54728/54728fig2.jpg" /> Figura 2: tassi di Visitazione di Lasioglossum japonicum di fiori e boccioli di rottura e di Amegilla Florea completamente aperto ai fiori aperti Il rapporto di questa figura si basa su precedenti lavori 25.. Il visitatore più frequente è stata la piccola ape L. japonicum, e il successivo è stato l&#39;ape più grande A. Florea. Le informazioni per i siti studiati è la seguente: Sito 1 = Parco Naturale Izumi, Chiba Pref .; Sito 2 = Sonnou no Mori, Chiba Pref .; Sito 3 = Sugawara Santuario, Kanagawa Pref .; Site 4 = Parco Naturale Mannyou, Tochigi Pref .; eSito 5 = Kogushi Katakuri no Sato, Gunma Pref. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54728/54728fig2large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Tabella 1" src="/files/ftp_upload/54728/54728table1.jpg" /> Tabella 1: confronto tra le osservazioni visive e video-registrato di visitatori floreali nel 2013. Questa tabella indica il tempo di osservazione, ha osservato il numero di fiori, e il numero di visita di piccole e grandi api in ogni sito. &quot;Video&quot; &quot;Visual&quot; e sono i valori da osservazioni visive e registrazioni video, rispettivamente. frequenze Visitazione con deviazioni standard sono tra parentesi. Il valore con un asterisco è significativamente diverso rispetto agli altri metodo di osservazione da ANOVA (cioè il rapporto visita di piccoli api all&#39;osservazione visiva è significativamente superiore a quella del video recorde al sito 3). <img alt="Tabella 2" src="/files/ftp_upload/54728/54728table2.jpg" /> Tabella 2: I risultati della insaccamento e gli esperimenti gabbia nel 2011 e 2012. Le abbreviazioni sono i seguenti: n = numero flower utilizzato in ogni trattamento; no. di frutta = numero di frutti-set; no. di semi = numero di semi-set; frutta set = rapporto frutta-set; e set di semi = rapporto di semi-set. rapporti set di semi sono dati con deviazioni standard. I trattini indicano alcun dato.

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Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

Per rivelare l&#39;efficacia impollinatore di una data specie di piante, sono stati sviluppati diversi metodi di esperimenti sul campo. Questo studio dimostra i metodi di base di esperimenti sul campo per l&#39;ecologia l&#39;impollinazione utilizzando il caso di studio di Lycoris sanguinea var. Sanguinea e il meccanismo di impollinazione romanzo, rompendo con auricolari impollinazione.

Gli esperimenti sul campo di Ecologia: il caso di<em&gt; Sanguinea Lycoris</em&gt; Var.<em&gt; sanguinea</em

Plant-pollinator interactions have been studied for approximately one hundred years. During that time, many field methods have been developed to clarify ...

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Field Experiments of Pollination Ecology: The Case of Lycoris sanguinea var. sanguinea

11.4K Views.  Chiba University.  Per rivelare l'efficacia impollinatore di una data specie di piante, sono stati sviluppati diversi metodi di esperimenti sul campo. Questo studio dimostra i metodi di base di esperimenti sul campo per l'ecologia l'impollinazione utilizzando il caso di studio di Lycoris sanguinea var. Sanguinea e il meccanismo di impollinazione romanzo, rompendo con auricolari impollinazione. 

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Modifying the Bank Erosion Hazard Index (BEHI) Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

Understanding the source of pollution in a stream is vital to preserving, restoring, and maintaining the stream&#8217;s function and habitat it provides. Sediments from highly eroding streambanks are a major source of pollution in a stream system and have the potential to jeopardize habitat, infrastructure, and stream function. Watershed management practices throughout the Cleveland Metroparks attempt to locate and inventory the source and rate the risk of potential streambank erosion to assist in formulating effect stream, riparian, and habitat management recommendations. The Bank Erosion Hazard Index (BEHI), developed by David Rosgen of Wildland Hydrology is a fluvial geomorphic assessment procedure used to evaluate the susceptibility of potential streambank erosion based on a combination of several variables that are sensitive to various processes of erosion. This protocol can be time consuming, difficult for non-professionals, and confined to specific geomorphic regions. To address these constraints and assist in maintaining consistency and reducing user bias, modifications to this protocol include a &#8220;Pre-Screening Questionnaire&#8221;, elimination of the Study Bank-Height Ratio metric including the bankfull determination, and an adjusted scoring system. This modified protocol was used to assess several high priority streams within the Cleveland Metroparks. The original BEHI protocol was also used to confirm the results of the modified BEHI protocol. After using the modified assessment in the field, and comparing it to the original BEHI method, the two were found to produce comparable BEHI ratings of the streambanks, while significantly reducing the amount of time and resources needed to complete the modified protocol.

Modifying the Bank Erosion Hazard Index BEHI Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

Streambank erosion potential can be evaluated and ranked using David Rosgen&#8217;s Bank Erosion Hazard Index (BEHI), however this protocol has significant limitations. Here we present protocol modifications to address time constraints, allow nonprofessionals to complete accurate assessments, and account for non-alluvial stream conditions in Northeast Ohio.

Modifica della Banca Erosione Hazard Index (Behi) Protocollo per la rapida valutazione dei corsi d&#39;acqua Erosion in Northeastern Ohio

Understanding the source of pollution in a stream is vital to preserving, restoring, and maintaining the stream&#8217;s function and habitat it provides. ...

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Calibrated Passive Sampling - Multi-plot Field Measurements of NH3 Emissions with a Combination of Dynamic Tube Method and Passive Samplers

Agricultural ammonia (NH3) emissions (90% of total EU emissions) are responsible for about 45% airborne eutrophication, 31% soil acidification and 12% fine dust formation within the EU15. But NH3 emissions also mean a considerable loss of nutrients. Many studies on NH3 emission from organic and mineral fertilizer application have been performed in recent decades. Nevertheless, research related to NH3 emissions after application fertilizers is still limited in particular with respect to relationships to emissions, fertilizer type, site conditions and crop growth. Due to the variable response of crops to treatments, effects can only be validated in experimental designs including field replication for statistical testing. The dominating ammonia loss methods yielding quantitative emissions require large field areas, expensive equipment or current supply, which restricts their application in replicated field trials. This protocol describes a new methodology for the measurement of NH3 emissions on many plots linking a simple semi-quantitative measuring method used in all plots, with a quantitative method by simultaneous measurements using both methods on selected plots. As a semi-quantitative measurement method passive samplers are used. The second method is a dynamic chamber method (Dynamic Tube Method) to obtain a transfer quotient, which converts the semi-quantitative losses of the passive sampler to quantitative losses (kg nitrogen ha-1). The principle underlying this approach is that passive samplers placed in a homogeneous experimental field have the same NH3 absorption behavior under identical environmental conditions. Therefore, a transfer co-efficient obtained from single passive samplers can be used to scale the values of all passive samplers used in the same field trial. The method proved valid under a wide range of experimental conditions and is recommended to be used under conditions with bare soil or small canopies (&#60;0.3 m). Results obtained from experiments with taller plants should be treated more carefully.

Calibrated Passive Sampling - Multi-plot Field Measurements of NH3 Emissions with a Combination of Dynamic Tube Method and Passive Samplers

Ammonia emissions are a major threat to the environment by eutrophication, soil acidification and fine particle formation and stem mainly from agricultural sources. This method allows ammonia loss measurements in replicated field trials enabling statistical analysis of emissions and of relationships between crop development and emissions.

Calibrato passivo di campionamento - Multi-trama di campo Misure di NH<sub&gt; 3</sub&gt; Emissioni con una combinazione di metodo del tubo dinamico e campionatori passivi

Agricultural ammonia (NH3) emissions (90% of total EU emissions) are responsible for about 45% airborne eutrophication, 31% soil acidification and 12% ...

Spotting Cheetahs: Identifying Individuals by Their Footprints

The cheetah (Acinonyx jubatus) is Africa's most endangered large felid and listed as Vulnerable with a declining population trend by the IUCN1. It ranges widely over sub-Saharan Africa and in parts of the Middle East. Cheetah conservationists face two major challenges, conflict with landowners over the killing of domestic livestock, and concern over range contraction. Understanding of the latter remains particularly poor2. Namibia is believed to support the largest number of cheetahs of any range country, around 30%, but estimates range from 2,9053 to 13,5204. The disparity is likely a result of the different techniques used in monitoring.
Current techniques, including invasive tagging with VHF or satellite/GPS collars, can be costly and unreliable. The footprint identification technique5 is a new tool accessible to both field scientists and also citizens with smartphones, who could potentially augment data collection. The footprint identification technique analyzes digital images of footprints captured according to a standardized protocol. Images are optimized and measured in data visualization software. Measurements of distances, angles, and areas of the footprint images are analyzed using a robust cross-validated pairwise discriminant analysis based on a customized model. The final output is in the form of a Ward's cluster dendrogram. A user-friendly graphic user interface (GUI) allows the user immediate access and clear interpretation of classification results.
The footprint identification technique algorithms are species specific because each species has a unique anatomy. The technique runs in a data visualization software, using its own scripting language (jsl) that can be customized for the footprint anatomy of any species. An initial classification algorithm is built from a training database of footprints from that species, collected from individuals of known identity. An algorithm derived from a cheetah of known identity is then able to classify free-ranging cheetahs of unknown identity. The footprint identification technique predicts individual cheetah identity with an accuracy of &gt;90%.

The cheetah (Acinonyx jubatus) is an iconic, endangered species, but conservation efforts are challenged by habitat shrinkage and conflict with commercial farmers. The footprint identification technique, a robust, accurate and cost-effective image classification system, is a new approach to monitoring cheetahs.

Spotting Cheetahs: Identificazione degli individui per le loro impronte

The cheetah (Acinonyx jubatus) is Africa's most endangered large felid and listed as Vulnerable with a declining population trend by the IUCN1. It ranges ...

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and detritus, and excreting particulate and dissolved compounds, they serve as important agents for benthic-pelagic coupling. Accurately measuring the compounds removed and excreted by suspension feeders (such as sponges, ascidians, polychaetes, bivalves) is crucial for the study of their physiology, metabolism, and feeding ecology, and is fundamental to determine the ecological relevance of the nutrient fluxes mediated by these organisms. However, the assessment of the rate by which suspension feeders process particulate and dissolved compounds in nature is restricted by the limitations of the currently available methodologies. Our goal was to develop a simple, reliable, and non-intrusive method that would allow clean and controlled water sampling from a specific point, such as the excurrent aperture of benthic suspension feeders, in situ. Our method allows simultaneous sampling of inhaled and exhaled water of the studied organism by using minute tubes installed on a custom-built manipulator device and carefully positioned inside the exhalant orifice of the sampled organism. Piercing a septum on the collecting vessel with a syringe needle attached to the distal end of each tube allows the external pressure to slowly force the sampled water into the vessel through the sampling tube. The slow and controlled sampling rate allows integrating the inherent patchiness in the water while ensuring contamination free sampling. We provide recommendations for the most suitable filtering devices, collection vessel, and storing procedures for the analyses of different particulate and dissolved compounds. The VacuSIP system offers a reliable method for the quantification of undisturbed suspension feeder metabolism in natural conditions that is cheap and easy to learn and apply to assess the physiology and functional role of filter feeders in different ecosystems.

VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders

We introduce the VacuSIP, a simple, non-intrusive, and reliable method for clean and accurate point sampling of water. The system was developed and evaluated for the simultaneous collection of the water inhaled and exhaled by benthic suspension feeders in situ, to cleanly measure removal and excretion of particulate and dissolved compounds.

VacuSIP, un metodo migliorato per Inex<em&gt; In Situ</em&gt; Misura di particolato e sciolto composti elaborati da Alimentatori sospensioni attive

Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and ...

Modification and Application of a Leaf Blower-vac for Field Sampling of Arthropods

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropod populations in rice. When used in combination with an enclosure, application of this sampling device provides absolute estimates of the populations of arthropods as numbers per standardized sampling area. The sampling efficiency depends critically on the sampling duration. In a mature rice crop, a two-minute sampling in an enclosure of 0.13 m2 yields more than 90% of the arthropod population. The device also allows sampling of arthropods dwelling on the water surface or the soil in rice paddies, but it is not suitable for sampling fast flying insects, such as predatory Odonata or larger hymenopterous parasitoids. The modified blower-vac is simple to construct, and cheaper and easier to handle than traditional suction sampling devices, such as D-vac. The low cost makes the modified blower-vac also accessible to researchers in developing countries.

Assessment of arthropod abundance in crops is critical for investigating population dynamics and species interactions. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropods in rice.

Modifica e applicazione di una Leaf Blower-Vac per Campo di campionamento di Artropodi

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the ...

Reliable Method for Assessing Seed Germination, Dormancy, and Mortality under Field Conditions

We describe techniques for approximating seed bank dynamics over time using Helianthus annuus as an example study species. Strips of permeable polyester fabric and glue can be folded and glued to construct a strip of compartments that house seeds and identifying information, while allowing contact with soil leachate, water, microorganisms, and ambient temperature. Strips may be constructed with a wide range of compartment numbers and sizes and allow the researcher to house a variety of genotypes within a single species, different species, or seeds that have experienced different treatments. As opposed to individual seed packets, strips are more easily retrieved as a unit. While replicate packets can be included within a strip, different strips can act as blocks or can be retrieved at different times for observation of seed behavior over time. We used a high temperature glue gun to delineate compartments and sealed the strips once the seed and tags identifying block and removal times were inserted. The seed strips were then buried in the field at the desired depth, with the location marked for later removal. Burrowing animal predators were effectively excluded by use of a covering of metal mesh hardware cloth on the soil surface. After the selected time interval for burial, strips were dug up and seeds were assessed for germination, dormancy and mortality. While clearly dead seeds can often be distinguished from ungerminated living ones by eye, dormant seeds were conclusively identified using a standard Tetrazolium chloride colorimetric test for seed viability.

Here we present a protocol for assessing seed survivorship, germination and dormancy under field conditions using buried, labeled seed strips and tetrazolium chloride (TZ) viability testing.

Metodo affidabile per valutare la germinazione dei semi, dormienza, e mortalità in normali condizioni operative

We describe techniques for approximating seed bank dynamics over time using Helianthus annuus as an example study species. Strips of permeable polyester ...

Construction of a Compact Low-Cost Radiation Shield for Air-Temperature Sensors in Ecological Field Studies

Low cost temperature sensors are increasingly used by ecologists to assess climatic variation and change on ecologically relevant scales. Although cost-effective, if not deployed with proper solar radiation shielding, the observations recorded from these sensors will be biased and inaccurate. Manufactured radiation shields are effective at minimizing this bias, but are expensive compared to the cost of these sensors. Here, we provide a detailed methodology for constructing a compact version of a previously described custom fabricated radiation shield, which is more accurate than other published shielding methods that attempt to minimize shield size or construction costs. The method requires very little material: corrugated plastic sheets, aluminum foil duct tape, and cable ties. One 15 cm and two 10 cm squares of corrugated plastic are used for each shield. After cutting, scoring, taping and stapling of the sheets, the 10 cm squares form the bottom two layers of the solar radiation shield, while the 15 cm square forms the top layer. The three sheets are held together with cable ties. This compact solar radiation shield can be suspended, or placed against any flat surface. Care must be taken to ensure that the shield is completely parallel to the ground to prevent direct solar radiation from reaching the sensor, possibly causing increased warm biases in sun-exposed sites in the morning and afternoon relative to the original, larger design. Even so, differences in recorded temperatures between the smaller, compact shield design and the original design were small (mean daytime bias = 0.06 &#176;C). Construction costs are less than half of the original shield design, and the new design results in a less conspicuous instrument that may be advantageous in many field ecology settings.

With the advent of small, low-cost environmental sensors, it is now possible to deploy high-density networks of sensors to measure hyper localized temperature variation. Here, we provide a detailed methodology for constructing a compact version of a previously described custom-fabricated radiation shield for use with inexpensive thermochrons.

Costruzione di uno scudo compatto basso costo radiazione per sensori di temperatura dell'aria negli studi di campo ecologico

Low cost temperature sensors are increasingly used by ecologists to assess climatic variation and change on ecologically relevant scales. Although ...

Visualizing Efficacy of Pesticides Against Disease Vector Mosquitoes in the Field

Efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects such as mosquitoes, sand flies, and filth-breeding flies is not uniform across ecological zones. To best protect public and veterinary health from these insects, the environmental limitations of pesticides need to be investigated to inform effective use of the most appropriate pesticide formulations and techniques. We have developed a research program to evaluate combinations of pesticides, pesticide application equipment, and application techniques in hot-arid desert, hot-humid tropical, warm and cool temperate, and urban locations to derive pesticide use guidelines specific to target insect and environment. To these ends we designed a system of protocols to support efficient, cost-effective, portable, and standardized evaluation of a diverse range of pesticides and equipment across multiple environments. At the core of these protocols is the use of an array of small cages with colony-reared sentinel mosquitoes (adults and immatures) and sand flies (adults), strategically arranged in natural habitats and exposed to pesticide spray. Spatial and temporal patterns of pesticide efficacy are derived from percent mortality in sentinel cages, then mapped and visualized in a geographic information system. Maps of sentinel mortality data may be statistically compared to evaluate relative efficacy of a pesticide across multiple environments, or to study multiple pesticides in a single environment. Protocols may be modified to accommodate a variety of scenarios, including, for example, the vertical orientation of sentinels in canopy habitats or simultaneous testing of ground and aerial application methods.

The efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects is not uniform across different ecological zones. Here we present a system of techniques using captive vector insects as sentinels for pesticide efficacy to derive electronic maps supporting the standard evaluation of pesticides across multiple environments.

Efficacia dei pesticidi contro le zanzare vettore di malattia nel campo di visualizzazione

Efficacy of public health pesticides targeting nuisance and disease-vector insects such as mosquitoes, sand flies, and filth-breeding flies is not uniform ...

Long-term Video Tracking of Cohoused Aquatic Animals: A Case Study of the Daily Locomotor Activity of the Norway Lobster (Nephrops norvegicus)

We present a protocol related to a video-tracking technique based on the background subtraction and image thresholding that makes it possible to individually track cohoused animals. We tested the tracking routine with four cohoused Norway lobsters (Nephrops norvegicus) under light-darkness conditions for 5 days. The lobsters had been individually tagged. The experimental setup and the tracking techniques used are entirely based on the open source software. The comparison of the tracking output with a manual detection indicates that the lobsters were correctly detected 69% of the times. Among the correctly detected lobsters, their individual tags were correctly identified 89.5% of the times. Considering the frame rate used in the protocol and the movement rate of lobsters, the performance of the video tracking has a good quality, and the representative results support the validity of the protocol in producing valuable data for research needs (individual space occupancy or locomotor activity patterns). The protocol presented here can be easily customized and is, hence, transferable to other species where the individual tracking of specimens in a group can be valuable for answering research questions.

Long-term Video Tracking of Cohoused Aquatic Animals: A Case Study of the Daily Locomotor Activity of the Norway Lobster Nephrops norvegicus

Here we present a protocol to individually track animals over a long period of time. It uses computer vision methods to identify a set of manually constructed tags by using a group of lobsters as case study, simultaneously providing information on how to house, manipulate, and mark the lobsters.

A lungo termine dei Video rilevamento di Cohoused animali acquatici: un caso di studio dell'attività locomotrice quotidiana di scampi (Nephrops norvegicus)

We present a protocol related to a video-tracking technique based on the background subtraction and image thresholding that makes it possible to ...

Standard Operating Procedure for Lyssavirus Surveillance of the Bat Population in Taiwan

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are natural reservoirs of most lyssaviruses, a lyssavirus surveillance program of bats has been conducted in Taiwan since 2008 to understand the ecology of these viruses in bats. In this program, non-governmental bat conservation organizations and local animal disease control centers cooperated to collect dead bats or bats dying of weakness or illness. Brain tissues of bats were obtained through necropsy and subjected to direct fluorescent antibody test (FAT) and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for detection of lyssavirus antigens and nucleic acids. For the FAT, at least two different rabies diagnosis conjugates are recommended. For the RT-PCR, two sets of primers (JW12/N165-146, N113F/N304R) are used to amplify a partial sequence of the lyssavirus nucleoprotein gene. This surveillance program monitors lyssaviruses and other zoonotic agents in bats. Taiwan bat lyssavirus is found in two cases of the Japanese pipistrelle (Pipistrellus abramus) in 2016&#8211;2017. These findings should inform the public, health professionals, and scientists of the potential risks of contacting bats and other wildlife.

This protocol introduces a standard laboratory operating procedure for diagnostic testing of lyssavirus antigens in bats in Taiwan.

Procedura operativa standard per la sorveglianza lyssavirus della popolazione bat a Taiwan

Viruses within the genus Lyssavirus are zoonotic pathogens, and at least seven lyssavirus species are associated with human cases. Because bats are ...