Coleta de dados sobre a ingestão de lixo marinho em tartarugas marinhas e limiares para bom estado ambiental

O protocolo centra-se na coleta de amostras de tartarugas marinhas, descrevendo todos os passos da recuperação animal e necropsia para a classificação e quantificação do lixo marinho ingerido. Além disso, os resultados representativos mostram como usar os dados coletados para elaborar os possíveis limiares para o bom estado ambiental.

O seguinte protocolo destina-se a responder aos requisitos fixados pelas directivas-quadro da Estratégia Marinha da União Europeia (DQA) para os critérios D10C3 comunicados na decisão da Comissão (UE), relacionados com a quantidade de lixo ingerida por animais marinhos. São fornecidas metodologias padronizadas para extração de itens de serapilheira ingeridos de tartarugas marinhas mortas, juntamente com diretrizes sobre análise de dados. O protocolo começa com a coleta de tartarugas marinhas mortas e a classificação das amostras de acordo com o estado de decomposição. A necropsia da tartaruga deve ser realizada em centros autorizados e o protocolo descrito aqui explica o melhor procedimento para o isolamento do trato gastrointestinal (GI). As três partes do GI (esôfago, estômago, intestino) devem ser separadas, abertas longitudinais e conteúdo filtrado usando uma peneira de malha de 1 mm. O artigo descreve a classificação e quantificação da serapilheira ingerida, classificando os teores de GI em sete diferentes categorias de serapilheira Marinha e duas categorias de restos naturais. A quantidade de serapilheira ingerida deve ser relatada como massa seca total (peso em gramas, com duas casas decimais) e abundância (número de itens). O protocolo propõe dois cenários possíveis para alcançar o bom estado ambiental (GES). Primeiro: "deve haver menos de X% de tartarugas marinhas com Y g ou mais de plástico no GI em amostras de 50-100 tartarugas mortas de cada sub-região", onde Y é o peso médio do plástico ingerido e X% é o percentual de tartarugas marinhas com mais peso (em gramas) de plástico do que Y. O segundo, que considera que o alimento permanece versus plástico como um proxy de saúde individual, é: "deve haver menos de X% das tartarugas marinhas com mais peso de plástico (em gramas) do que restos de alimentos no GI em amostras de 50-100 tartarugas mortas de cada sub-região".

Lixo marinho é uma questão complexa para abordar, uma vez que pode entrar nos oceanos através de múltiplas fontes e formas. Mais de 80% da serapilheira que é encontrada em ambientes marinhos é composta de plástico¹. O papel deste material a partir de uma perspectiva econômica tem aumentado nos últimos 50 anos. Como conseqüência, sua produção também aumentou vinte desde 1960, atingindo 335 milhões toneladas em 2016. Este valor é esperado para dobrar ao longo dos próximos 20 anos². Além disso, estima-se que cerca de 5 a 13 milhões toneladas de plástico acabam nos oceanos a cada ano (o que equivale a 1,5 a 4% da produção plástica global)^2,3. O movimento plástico é influenciado por suas propriedades físicas (por exemplo, flutuabilidade) ou variáveis ambientais (por exemplo, maré e córrego), e o plástico pode ser acumulado em todos os compartimentos marinhos^4,5. Para enfrentar o problema plástico, é importante ter em mente que, como muitas outras questões ambientais, é transfronteiriço e, portanto, as soluções de governança são complexas para atender⁶. Para melhor alcançar esse objetivo, devemos levar em consideração os frameworks regionais e internacionais, de modo a aprimorar ou manter a conscientização e a proteção ambiental do meio marinho em todo o mundo⁷. O objectivo final da directiva-quadro da Estratégia Marinha da União Europeia (DQA) é alcançar um bom estado ambiental (GES) nas águas europeias em 2020, proteger a biodiversidade marinha e promover a utilização sustentável dos ambientes marinhos. Isso será feito através de 11 descritores qualitativos, dos quais o descritor 10 se concentra no lixo marinho e é definido como "Propriedades e quantidades de lixo marinho não causam danos aos ambientes costeiros e marinhos". Dentro deste descritor, a nova decisão da Comissão⁸ decidiu acrescentar critérios D10C3-"o montante do lixo e da micromaca ingerida por animais marinhos está a um nível que não afecta negativamente a saúde das espécies em causa"-uma vez que foi considerados critérios relevantes na avaliação do GES. Consequentemente, os Estados-Membros foram solicitados a elaborar uma lista de espécies, a desenvolver normas metodológicas e a definir valores-limite através da cooperação regional ou sub-regional.

Após a primeira publicação científica em 1838⁹, na tempestade-Petrel com uma vara ingerida da vela, sobre 500espécies marinhas foram alistadas para ingerir a maca Marinha¹⁰,^{11,12,13 ,14}, e as tartarugas marinhas estiveram entre os primeiros táxons gravados para ingerir detritos plásticos¹⁵. Dada a sua propensão para a ingestão de lixo, a sua ampla distribuição e a grande variedade de habitats utilizados durante a sua vida, as tartarugas marinhas, em particular a espécie de cabeçalheira Caretta caretta (Linnaeus 1758), foi escolhida como um indicador potencial para a Bacia mediterrânea¹⁶, como o Fulmarus glacialis do pássaro de mar (linnaeus, 1761) para águas européias do Norte¹⁷. Mesmo depois de cinco décadas de pesquisa, a discussão da padronização do método tem sido muito limitada¹⁸ e uma abordagem coesa pela comunidade científica para quantificar a ingestão plástica por vida selvagem está faltando¹⁹. Protocolos de amostragem padronizados e métodos analíticos de detecção e métricas para avaliar a ingestão plástica por biota Marinha são necessários; um artigo recente mostrou os potenciais benefícios e limitações do uso de espécies marinhas como bioindicadores sobre a poluição plástica²⁰. Seguindo a proposta de Matiddi et al. em 2011²¹ para usar o cabeçalheira como bioindicador, e o grupo técnico sobre o relatório de lixo marinho²², um protocolo específico para considerar o lixo marinho ingerido por tartaruga marinha foi desenvolvido e testado por dez parceiros em sete países do mar Mediterrâneo e do Oceano Atlântico no âmbito do projecto europeu INDICIT (GA n ° 11.0661/2016/748064/SUB/ENV. C2). Este protocolo fornece metodologias padronizadas para a análise do lixo marinho ingerido por tartarugas marinhas, a fim de apoiar a nova decisão da Comissão (UE)⁸, critérios D10C3, onde os valores-limite são solicitados. De acordo com a definição fornecida pela COM⁸, o valor limiar é um número ou um intervalo que permite avaliar se o critério de nível de qualidade foi atingido, contribuindo assim para a avaliação do Ges. O protocolo proposto para a avaliação da serapilheira ingerida por tartarugas marinhas, será útil na coleta de dados sobre a composição e abundância de serapilheira e avaliará seu impacto sobre os ambientes marinhos. Além disso, a coleta desse tipo de dados padronizados ajudará a definir os valores de limiar. Aqui, consideramos dois tipos de cenários. O primeiro cenário leva em conta a maca de Fulmar ecoqo, que é implementado para a área OSPAR: "deve haver menos de X% de tartarugas marinhas com Y g ou mais de plástico no GI em amostras de 50-100 tartarugas mortas de cada sub-região, onde Y é a Clu e peso de plástico ingerido considerando todas as amostras e X% é a percentagem de tartarugas marinhas com mais peso (em gramas) de plástico do que Y. O segundo visa considerar um proxy de nível de saúde individual: "deve haver menos de X% de tartarugas marinhas com mais peso de plástico (em gramas) do que restos de alimentos no GI em amostras de 50-100 tartarugas mortas de cada sub-região", onde o peso de ingerido o plástico é comparado com o alimento restante em cada indivíduo.

Uma série de parâmetros "básicos" e "opcionais" são propostos para serem recolhidos. Os parâmetros básicos correspondem aos parâmetros mínimos fundamentais para realizar os critérios D10C3, enquanto os parâmetros opcionais permitem adquirir mais conhecimento sobre o comportamento/biologia das tartarugas marinhas. Uma folha de dados de observação e uma lista de material necessário para amostragem de indivíduos no campo e análise de serapilheira no laboratório são fornecidas aqui, a fim de facilitar o registro de dados e análise estatística, seguindo uma tabela padronizada. As subcategorias de lixo marinho são escolhidas de acordo com a forma e o tipo de itens. Restos de comida de tartaruga marinha e qualquer coisa natural que são itens não alimentares (pedra, madeira, pomes, etc.) são solicitados para considerar os limiares e a dieta do animal. Todas as atividades experimentais deste protocolo foram conduzidas em tartarugas mortas de acordo com a lei dos países envolvidos e as regras internacionais. Todas as necropsias devem ser executadas nos centros autorizados.

1. amostragem da carcaça: Preencha a folha de observação (apêndice 1 em arquivos complementares 1 e 2)

1. Preencha os detalhes de contato, incluindo nome, contato (telefone, e-mail) e instituição do (s) observador (es) (coletor de dados).
2. Identificar as espécies da seguinte forma: CC (Caretta caretta, Linnaeus 1758); DC (Dermochelys coriacea, Vandelli 1761); Cm (Chelonia mydas, Linnaeus 1758); Ei (Eretmochelys imbricata, Linnaeus 1766); Lo (Lepidochelys olivacea, Eschscholtz 1829); LK (Lepidochelys kempii, garman 1880); ND (Natator depressus, garman 1880).
3. Tags: se uma tag já existe no Flipper, especifique o número (N °. Indique a presença e o número de fichas eletrônicas. Caso contrário, anote NO.
4. Especifique o código de identificação animal. Por exemplo: "duas letras para o país" _ "duas letras para o local (por exemplo, região ou instituição)" _ "YY" _ "MM" _ "DD" _ "chip Number".
5. Observe a data de descoberta (YY/mm/dd).
6. Especifique o local de descoberta que é a área de recuperação ou coordenadas em graus decimais.
7. Relate o nível de condição corporal do espécime: 1 (vivo) ,2 (recém-morto recentemente), 3 (parcialmente decomposto-os órgãos internos ainda estão em boas condições) ,4 (as escalas de pele decompostas avançadas são levantadas ou perdidas), 5 (mumificada-parte do esqueleto ou parte do corpo estão faltando). Consulte a Figura 1.
8. Circunstâncias da descoberta: Anote as circunstâncias entre as quatro categorias: encalhe (animal encontrado na praia ou na linha costeira); Capturas por captura/pescas (animal capturado ativamente por pescadores, por exemplo, ingestão de um gancho, preso em uma rede, trazido de volta por pescadores, etc.); Encontrado no mar (animal descoberto na superfície do mar); Morto no centro de recuperação (o animal chegou vivo, mas morreu durante a sua recuperação).

Figura 1: nível de condição corporal do espécime ou estado de decomposição. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

2. necropsia de tartarugas marinhas: medições biométricas e extração do conteúdo do trato gastro-intestinal

1. Arranje para o transporte do animal ao centro autorizado para o Necropsy. No caso de um animal extremamente decomposto, avaliar a integridade do trato digestivo antes da eliminação no centro autorizado. Se a necropsia não puder ser feita imediatamente após a recuperação, congele a carcaça a-20 ° c.
2. Antes da operação de necropsia, registre as medições biométricas na seção específica do arquivo de recuperação. O comprimento curvo da carapaça, entalhe à ponta²³, é obrigatório; as outras medidas são opcionais (por exemplo, largura da carapaça curvada, peso).
3. Realizar um exame externo do corpo animal e relatar as informações na seção específica do arquivo de necropsia. Igualmente Inspecione a cavidade oral para a presença possível de material extrangeiro.
4. Separe e retire o plastron da carapaça fazendo uma incisão ao longo da borda como destacado pela linha amarela (Figura 2a).
5. Use uma lâmina curta ou corte com uma inclinação horizontal evitando danificar as partes interiores (Figura 2 b-c). A ligação do ligamento à cinta peitoral e pélvica deve ser cortada quando o plastron é destacado da carapaça de modo que seja fácil de alcançar e segurar.
6. Expor o trato gastro-intestinal (GI) removendo os músculos peitorais e o coração da tartaruga (Figura 2D).
7. Opcional Avaliar o estado trófico qualitativamente avaliando a atrofia dos músculos peitorais (nenhum-moderado-severo) e espessura de gordura nas cavidades articulares e na membrana coelômica (abundante-normal-baixa-None).
8. Extraia o GI e coloque-o na tabela de exame. Faça isso com dois operadores para facilitar as ações. Enquanto um operador mantém a carcaça deitada de um lado, a outra separa os ligamentos dos diferentes órgãos e as membranas da carapaça usando pequenas lâminas ou tesouras e remove o GI do animal (Figura 2F).
9. Isolar o esôfago, estômago e intestino usando grampos de plástico. Coloque-os no esôfago perto da boca, na valva esofágica, na cavilha e nas cloacae, o mais próximo possível do orifício anal, como indicado pelas setas amarelas (Figura 2F).
10. Registre o sexo do animal quando possível.
11. Separe o esôfago, estômago e intestino definitivamente, colocando uma segunda braçadeira (correspondente ao ponto de corte) para evitar o derramamento do conteúdo.
12. Abra a seção GI longitudinalmente usando uma tesoura (ou os dedos quando possível) e, em seguida, coloque diretamente o material contido em uma peneira de malha de 1 mm limpando as paredes GI com água corrente.
13. Tome nota de cada anomalia no GI (por exemplo, úlceras, perfurações, aderências, inflamação).
14. Inspecione o conteúdo no peneira para detectar eventualmente qualquer alcatrão, óleo ou material frágil que deve ser removido e tratado separadamente.
15. Enxágüe o conteúdo através da peneira, a fim de remover a porção líquida, muco e matéria digerida não identificável.
16. Repita a sequência para cada porção GI separadamente.
17. Congelar todo o material coletado pelas peneiras ou armazená-lo em frascos contendo 70% de solução alcoólica.
    Nota: para mais detalhes na anatomia da tartaruga de mar Veja também Wyneken (2001)²⁴.

Figura 2 : Sequência de necropsia de tartaruga. (a) vista ventral de uma tartaruga morta. A linha amarela indica a maneira de cortar, a fim de separar o plastron do resto da tartaruga. (b, c) Cortes horizontais para impedir afetar os órgãos interiores. (d) vista ventral da tartaruga aberta. (e) extração do trato gastrointestinal. (f) vista de todo o GI, as setas amarelas indicam onde as braçadeiras devem ser unidas a fim separar as três seções diferentes do soldado. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

3. coleta e análise de dados: classificação de serapilheira Marinha

1. Rotule o código de exemplo e a respectiva seção GI.
2. Esvazie os frascos em uma peneira de malha de 1 mm, reunindo todo o material.
3. Relave o material coletado com água, a fim de eliminar o álcool e limpar a maca.
4. Separar o lixo marinho dos componentes orgânicos ou outros materiais, identificando a categoria de lixo marinho por análise visual, classificando o material em uma placa de Petri, e submergulhando os itens coletados nas diferentes categorias.
5. Preencha a folha de dados com informações coletadas.
6. Use o estereomicroscópio para dar uma olhada mais de perto em qualquer material não identificável.
7. Seque o lixo marinho à temperatura ambiente ou num forno a 35 ° c durante 12 h.
8. Seque a fração orgânica em um forno a 35 ° c por 12 h ou em um secador.
9. Relate o número e o peso seco das diferentes categorias de lixo marinho.
10. Relatar o peso seco da fração orgânica subdividida em alimentos permanecem (s) e não-alimentares naturais permanecem (s). A massa seca total (peso em gramas, exata para a 2^ª casa decimal) é a principal informação utilizada no programa de monitoramento, seguida pelo número de itens (abundância).
11. Registre outras informações, como a cor dos itens, volume de serapilheira, diferentes incidências de serapilheira no esôfago, estômago e intestino, e incidência por categoria de serapilheira, pois isso é útil para pesquisa e análise de impacto. Os dados brutos fornecerão informações variadas para cada seção única do GI; o conteúdo total do lixo marinho dentro das três partes será contabilizado nos dados finais.

Este protocolo, derivado da diretriz²² da msfd e foi coconstruído e melhorado por mais de 50 partes interessadas (biólogos de centros de resgate, redes de encalhe, laboratórios veterinários e de pesquisa) de 7 países em todo o Mediterrâneo e as costas atlânticas europeias, propõe uma avaliação homogeneizada, viável e fácil da ingestão de serapilheira por tartarugas marinhas. O protocolo foi testado em tartarugas-cabeçadas, e a maioria das manipulações também são aplicáveis a outras espécies de tartarugas marinhas. O primeiro resultado importante deste protocolo é a descrição de itens de serapilheira Marinha sete categorias de acordo com suas características visuais (Figura 3). Esta classificação foi derivada pelo Fulmar ecoqo^17,25, e modificada de acordo com a experiência dos autores na ecologia de tartarugas marinhas. A primeira categoria, e geralmente a menos abundante, é o plástico industrial (PLA IND) compreendido da pelota e dos grânulo plásticos, geralmente forma cilíndrica e redonda, mas também formas ovais ou cúbica, encontradas raramente para ser ingerida pela tartaruga do Loggerhead ^{16 anos} de ^, a segunda categoria ²⁶. The compreende os restos de materiais folha-like (uso She), tais como sacos plásticos, folhas agriculturais ou folha plástica. Eles aparecem em formas irregulares, mas são sempre finos e flexíveis. A terceira categoria inclui cordas, filamentos, e outros materiais do threadlike tais como os restos de engrenagem de pesca do fantasma feitos geralmente do nylon (uso thr). A quarta categoria inclui todos os plásticos espumados (uso FOA) tais como a espuma de poliestireno ou a borracha macia espumado. A quinta categoria inclui fragmentos de itens plásticos duros (use FRA). Os fragmentos são altamente abundantes no conteúdo do GI e podem ser encontrados em uma variedade de cores diferentes. São derivados das partes maiores quebradas e são geralmente rígidos, com formas irregulares e bordas curvadas afiadas. Todos os outros artigos plásticos que incluem elásticos, borracha densa, partes do balão, e balas macias do ar-injetor, são categorizados como o outro plástico do usuário (uso POTH). Todo o lixo marinho não-plástico, como pontas de cigarro, jornais, lixo e poluente duro estão incluídos na última categoria de lixo diferente de plástico (outro), mesmo que eles não são facilmente encontrados em tartarugas marinhas. As outras duas categorias não classificadas como lixo marinho, são (i) restos da dieta natural da tartaruga (foo) e (II) qualquer item natural, não reconhecido como presa para a tartaruga marinha, como pedra, madeira ou pomes (NFO).

A Figura 4 mostra um exemplo de resultados representativos na massa seca de categorias de serapilheira Marinha, onde o plástico tipo folha (use She) foi a classe mais abundante, e os sacos plásticos ou partes deles foram os principais itens ingeridos. Resultados semelhantes são mostrados na Figura 5 em termos do número de itens (abundância). A tabela 1 mostra um resultado de exemplo da análise de massa seca de serapilheira em seis áreas diferentes, o que é útil para fixar o valor limiar de acordo com os requisitos da Msfd da União Europeia. Estas áreas devem ser representadas, por exemplo, por países ou subregiões da bacia mediterrânica. A média relatada é calculada usando todos os indivíduos examinados, incluindo amostras sem lixo marinho ingerido. De acordo com o nosso exemplo, a área 5 representou a zona mais clara da bacia mediterrânica e os dados desta área poderiam ser utilizados para definir o valor limiar a atingir. Para esta área, o primeiro cenário poderia ser: "deve haver menos de 25% das tartarugas marinhas com 0,5 g ou mais de plástico no GI em amostras de 50-100 tartarugas marinhas". O segundo cenário poderia ser: "deve haver menos de 32% das tartarugas marinhas com mais gramas de plástico do que restos alimentares (foo) no GI em amostras de 50-100 tartarugas marinhas".

Figura 3 : Exemplos de categorias de serapilheira marinhas estabelecidas para monitorização da ingestão de tartarugas marinhas. (a) IND PLA, (b) Use ela, (c) Use thr, (d) Use Foa, (e) Use FRA, (f) Use Poth, (g) Other, (h) foo. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 4 : Exemplo de resultados de pesos do lixo marinho ingerido por tartarugas marinhas as várias categorias. Os valores médios de peso são relatados em gramas de itens por indivíduo (± SE). Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 5 : Exemplo de resultados para o número de categorias de lixo marinho ingeridas por tartarugas marinhas. O número médio de itens por indivíduo (± SE) é relatado. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Tabela 1: exemplo de resultados de diferentes áreas (por exemplo, países, sub-regiões, etc.), utilizando massa seca de lixo marinho. Por favor, clique aqui para baixar esta tabela como um arquivo Excel.

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Este protocolo permite avaliar a abundância total de serapilheira Marinha e a identificação das principais categorias de serapilheira ingeridas por tartarugas marinhas. É menos dispendioso em comparação com outros programas de monitorização com atividades marítimas, porque as tartarugas marinhas podiam ser recolhidas após encalhe na praia ou ser recuperado pelos pescadores. A identificação de categorias de lixo marinho é fácil e rápida, pois o limite inferior no tamanho do item é de 1 mm. Uma limitação do protocolo é o uso da tartaruga marinha, Considerando que todas as 7 espécies de tartarugas marinhas estão listadas no apêndice I da Convenção sobre o comércio internacional de espécies de fauna e flora selvagens ameaçadas de extinção²⁷; Conseqüentemente, somente o pessoal autorizado pode segurar animais vivos e inoperantes ou partes deles. O manejo e a recuperação das tartarugas devem ser relatados e coordenados com as autoridades correspondentes. Precauções sanitárias devem ser tomadas ao manusear animais selvagens mortos ou vivos para minimizar os riscos de zoonose. Este protocolo foi testado em espécies de cabeçadas, mas é aplicável a todas as sete espécies de tartarugas. A análise dos dados deve ser realizada separadamente para cada espécie. As condições corporais do espécime como consideradas cinco níveis de vivas a tartarugas mumificadas. O nível 1 (Alive) é considerado para uma classificação mais detalhada da condição corporal do espécime, caso a tartaruga tenha morrido no centro de resgate após a recuperação. O protocolo é aplicável a indivíduos mortos dos níveis 2 a 4, mas também em indivíduos que morreram após a recuperação (circunstâncias: morto no centro de recuperação). Os níveis 2 e 3 são adequados para o protocolo, enquanto o nível 4 permite medir dados biométricos e avaliar a presença/ausência de serapilheira ingerida para a avaliação da frequência de ocorrência (FO%), e o percentual de tartarugas com lixo marinho ingerido na amostra inteira. Indivíduos do nível 5, onde geralmente o conteúdo gastrointestinal foi perdido não podem ser considerados para a coleta e quantificação da ingestão de serapilheira. Tirar fotos do animal antes de manusear, poderia fornecer informações adicionais sobre a amostra como a causa provável de morte ou lesões principais e emaranhamento. É importante incluir uma barra de escala nas imagens. Mesmo que muitas vezes as tartarugas marinhas tivessem anzóis de pesca no seu GI, os dados não têm de ser incluídos na análise porque os ganchos de pesca em que as vítimas de espinhel são ativamente capturados não são considerados como "lixo marinho". A presença de gancho deve ser registrada nas notas. A coleta de dados deve ser realizada separadamente em cada parte do GI (esôfago, estômago, intestino), a fim de avaliar o grau de tolerância à ingestão de serapilheira Marinha, considerando o bloqueio do GI ou a capacidade de eliminá-lo através da defecação, como demonstrado em estudos anteriores^{16,28,29,30,31,32}. Uma etapa crítica do protocolo pode ser encontrada na coleção do número de itens. As partes múltiplas podiam ser derivadas da fragmentação do mesmo objeto dentro do soldado ou em conseqüência da ingestão separada. A interpretação subjetiva de um único item ou múltiplas peças separadas pode corresponder a um potencial viés no número de registro (Figura 6). Por esse motivo, os valores-limite foram elaborados utilizando-se apenas os dados de massa de serapilheira ingerida, como o Fulmar ecoqo^17,25.

Figura 6 : A fragmentação de itens individuais pode ocorrer antes da ingestão ou durante o processo de alimentação, produzindo viés na contagem. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

O protocolo requer a categorização de diferentes itens de plástico de acordo com suas formas (USE SHE, USE THR). Esta subdivisão é útil para identificar a fonte de lixo marinho com uma lista de itens de acordo com a sua abundância. Ele assessores políticos em seus programas de medidas, fornecendo provas rápidas de sua eficiência na segmentação de itens, avaliando a sua força. Por exemplo, a proibição de sacolas plásticas nos mercados deve corresponder a uma redução da categoria de uso de SHE ingerida (Figura 4, Figura 5) em amostras de tartarugas marinhas coletadas no futuro. A aplicação deste protocolo permitirá que os Estados-membros da UE respondam aos requisitos da MSFD, avaliando as suas próprias linhas de base e definindo os valores-limite em que o GES é atingido. Os limiares devem ser determinados em áreas imaculadas ou próximas das zonas imaculadas. Devido à ubiqüidade do plástico no meio marinho, uma área intocada não existe. De acordo com os dados de exemplo (tabela 1), a área 5, foi a zona mais clara e poderia representar o valor (Y) a ser atingido para a bacia do Mediterrâneo. Os Estados-Membros devem decidir os limiares de acordo com a redução significativa da sua própria distância a partir deste valor. De acordo com uma revisão recente¹⁸, as unidades de ingestão de lixo marinho devem ser normalizadas para o tamanho da tartaruga, especialmente se o objetivo é comparar diferentes classes etárias. No entanto, uma relação entre a massa de serapilheira ingerida e o tamanho das tartarugas foi detectada por diferentes autores com valores positivos, negativos ou zero^{16,26,32,33, 34}. Nosso protocolo não inclui o tamanho animal no primeiro cenário, mas poderia ser possível estimar a carga de corpo, avaliando a massa da tartaruga usando o comprimento curvado da carapaça (CCL)³⁵ e use a relação do peso do peso plástico da tartaruga em vez de somente gramas de plástico ingerido (Y). Em qualquer caso, sugerimos verificar eventuais diferenças significativas antes de fundir as tartarugas do estágio oceânico com os nerióticos ou juvenis precoces com adultos, a fim de melhor estratificar as amostras^16,26. O segundo cenário está mais relacionado ao estado de saúde individual e pode responder melhor aos critérios D10C3: "a quantidade de serapilheira e de micromaca ingerida por animais marinhos está em um nível que não afeta negativamente a saúde da espécie em causa ". De fato, o impacto dos itens plásticos ingeridos consiste mais freqüentemente em efeitos subletais, em vez de letais^{28,36,37,38,39}. Nós igualmente encontramos raramente uma oclusão ou uma perfuração devido à ingestão plástica, que poderia causar a morte das tartarugas. Os efeitos subletais não são fáceis de serem detectados e distinguem-se dos impactos devidos a outros poluentes⁴⁰. Diluição dietética ou assimilação de contaminantes acontece quando o lixo marinho está dentro do GI da tartaruga⁴¹. Assim, a amostra com mais gramas de plástico do que restos de comida poderia indicar um animal em uma condição de saúde muito ruim. A fim de permanecer em consonância com o Fulmar ecoqo^17,25 usado pelos países do norte da Europa, ambos os cenários consideram o peso plástico em vez do peso do lixo marinho.

Finalmente, é importante esclarecer as diferenças entre (i) analisar a ingestão de plástico em tartarugas marinhas como indicador de impacto sobre a população com consequências para a conservação da população e (II) analisar a ingestão de plástico em tartarugas marinhas como Bio-indicador de impacto sobre o ambiente costeiro e marinho^20,40. Para entender as implicações desse impacto na conservação da população de tartarugas, mais informações são necessárias e uma melhor estratificação de dados é necessária⁴². Confrontando a opinião de 35 especialistas de 13 nações, que são especialistas em biologia da tartaruga marinha e conservação, é evidente que as tartarugas marinhas têm sido amplamente estudadas ao longo dos anos, embora ainda seja necessário investigar as interações com o ser humano e, por conseguinte, avaliar o estado da população e as potenciais ameaças⁴³.

Isto significa que um único protocolo não pode ser considerado exaustivo para todos os estudos temáticos e mais são necessários para compreender o impacto do plástico ao nível da população.

Mesmo plástico resistente poderia ser considerado para causar um baixo nível de danos às tartarugas marinhas, no que diz respeito à captura de capturas ou habitat, sua redução tem sido desafiador nos últimos anos e métodos rápidos de medição devem ser elaborados. Há uma controvérsia no uso de tartarugas encalhado para fins de monitoramento porque, de acordo com alguns autores, eles não são representativos de toda a população⁴⁰, enquanto outros declararam que as tartarugas encalhado não representam um viés de Marinha taxas de ingestão de serapilheira na população de fundo⁴⁴. Além disso, em muitos países não há uma rede de encalhe bem organizada ou um sistema que liga centros de resgate aos pescadores e há uma falta de informação sobre a mortalidade por capturas e pós-libertação por parte das pescas. Assim, as amostras ociosos nem sempre podem ser consideradas como tartarugas doentes sem comportamento alimentar normal por um período de tempo antes de morrer e chegar à praia; muitas delas são tartarugas "morte no mar" lavadas em terra e são geralmente usadas como amostras em atividades de monitoramento^26,32,38,45. Nós acreditamos que as amostras encalhados são úteis em fornecer a informação no nível de abundância Marinha do lixo no ambiente e nós sugerimos excluir somente as tartarugas com o intervalo gastrintestinal completamente vazio desta análise porque poderiam ser doentes de uma longa tempo antes da morte. A utilização deste protocolo permitiria avaliar o estado ambiental e a disponibilidade de lixo marinho para os organismos marinhos. Também poderia ser útil para melhorar o nosso conhecimento sobre o comportamento da tartaruga. O significado do método em relação às diretrizes de TS-ML do MSFD²², é devido à harmonização em sete países e ao número de amostras em que foi testado (n = 700). O nível de condição corporal do espécime foi definido e as categorias de ingestão de lixo marinho foram reduzidas de acordo com os resultados preliminares. Além disso, esta é a primeira vez que os resultados representativos foram mostrados e conectados aos limiares do GES.

O protocolo é uma ferramenta eficiente para os pesquisadores entenderem o impacto do plástico no meio marinho, globalmente ou em escala local, e para comparar dados padronizados com os países vizinhos. Este resultado não pôde ser alcançado antes, devido às discrepâncias nos dados entre diferentes países, impedindo qualquer comparação espacial.

Os autores não têm nada a revelar.

Os autores são gratos aos centros de resgate franceses (Jean-Batiste Senegas), redes de encalhe (Jacques Sacchi) e laboratórios veterinários (Joanne Belfort) e Jessiaca Martin e Marie Sabatte, Cetacean e rede de encalhe de tartarugas marinhas do Valencia Comunidade, incluindo a unidade de Zoologia Marinha do Instituto Cavanilles (Universidade de Valência) e o serviço de biodiversidade da Generalitat Valenciana, o fundo regional Português para a ciência e tecnologia dos Açores (Maria vale), o resgate italiano Centros (Stazione Zoologica "Anton Dohrn" Nápoles e sardinian CREs) os laboratórios veterinários (IZSLT M. Aleandri Roma; IZSAM G. Caporale Teramo; IZSS G. Pegreffi Otistano;. IZS CReTaM Palermo), membros do Conselho Consultivo da INDICIT e da op para sua sugestão, e os ministérios ambientais e governos regionais dos países participantes para o seu apoio.

Dois revisores anônimos para suas sugestões e comentários.

O presente protocolo foi realizado pelo consórcio INDICIT no quadro do projecto europeu DG-ENV GA n. 11.0661/2016/748064/SUB/ENV. C2.