11.19 : High-Performance Liquid Chromatography: Instrumentatie

High-Performance Liquid Chromatography, of HPLC, is een analytische techniek die vloeibare monsters onder hoge druk scheidt. Een HPLC-instrument bestaat uit glazen flessen voor het opslaan van oplosmiddelen, zogenaamde mobiele fase reservoirs. HPLC-kwaliteit oplosmiddelen worden gebruikt om een ​​hoge zuiverheid te behouden en de opgeloste gassen worden verwijderd met behulp van een ontgasser, zoals een vacuümpompsysteem of sparging met helium. De oplosmiddelen worden vervolgens in de analytische kolom gepompt met behulp van een schroefaangedreven spuit of heen en weer gaande pompen. De meeste moderne HPLC-instrumenten gebruiken heen en weer gaande zuigerpompen die een gepulseerde mobiele fasestroom creëren, die wordt gladgestreken door ze aan te sluiten op een pulsdemper. Bij sommige analyses wordt gradiëntelutie gebruikt. Deze techniek omvat het geleidelijk veranderen van de samenstelling van de mobiele fase, wat de scheiding van complexe mengsels kan verbeteren op basis van hun polariteit. Gradiëntregelaars worden gebruikt om de stroomsnelheid van oplosmiddelen tijdens dit proces te handhaven.

Voordat de mobiele fase de kolom bereikt, wordt het monster geïntroduceerd bij de lusinjector of auto-injector. De mobiele fase, samen met het monster, komt in de kolom, die is gevuld met een stationaire fase. De analytische kolom wordt in een kolomoven geplaatst om een ​​constante temperatuur te behouden. Soms worden pre-kolommen zoals scavenger- en guardkolommen gebruikt om de levensduur van de kolom te beschermen. Zodra de analytcomponenten zijn gescheiden, reizen ze naar de detector, die ze identificeert en de resultaten omzet in een chromatogram dat de computer weergeeft. Ten slotte gaat het eluens - het oplosmiddel dat de gescheiden componenten draagt ​​- ofwel in het afval of wordt verzameld bij de fractionele collector.