다세포 스페로이드의 생산 및 다중 파라미터 Live Cell Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy (FLIM)

본 연구에서는 생세포 현미경을 이용하여 세포 대사 및 산소 분포를 분석할 수 있는 스페로이드 형성 방법을 제시하고 비교합니다. 최근 몇 년 동안 형광 수명 이미징 현미경은 살아있는 세포에서 NADPH 및 FAD와 같은 대사 바이오마커를 조사하는 데 광범위하게 사용되었으며, 세포 및 조직 산소화의 이미징과 함께 이러한 측정을 다중화하기 위해 여러 형광 나노입자가 개발되었습니다. 다세포 스페로이드, 오가노이드 및 장기 칩(organ-on-a-chip)은 복잡한 생체 내 미세환경을 복제할 수 있어 동물 연구의 필요성을 최소화할 수 있습니다.

스페로이드 생산을 위해 우리는 다양한 형성 방법을 보여주며 낮은 처리량에서 높은 처리량에 이르기까지 다양할 수 있습니다. 또한 광학 접근성, 형광 수명 이미징 현미경과의 호환성, 세포외 기질 구성 요소를 포함할 수 있는 가능성을 강조합니다. 따라서 3D in vitro 모델이 2D 배양에 비해 더 나은 컨텍스트를 제공하더라도 높은 변동성, 낮은 재현성 및 불완전한 실험 보고가 여전히 문제로 남아 있습니다.

스페로이드 크기, 영양소 조성, 세포외 점도, 심지어 스페로이드 형성 방법과 같은 매개변수는 모두 세포 이질성을 증가시킬 수 있습니다. 이 프로토콜을 통해 우리는 스페로이드 생산 방법을 조화시키고 표준화하는 것을 목표로 하며, FLIM 현미경을 사용하여 스페로이드의 연속 및 다중 파라미터 분석에 중요한 핵심 측면을 강조합니다.