Retrobulbar Sinus 주사에 의한 출생 후, 청소년 및 Runted 성인 마우스에 대한 체계적인 치료

우리의 연구는 특히 유기산혈증으로 알려진 대사 질환 그룹에 초점을 맞춘 희귀 유전 질환에 대한 유전자 치료법 개발과 관련이 있습니다. 본 연구의 목표는 인간 대상 임상시험으로 진행하는 데 가장 적합한 접근법을 결정하는 것입니다. 10년 전만 해도 그렇지 않았던 다양한 유전 질환을 치료하기 위해 다중 유전자 치료제가 승인되었습니다.

실제로, 유기산혈증에 대한 여러 유전자 치료 임상시험이 완료되었거나 진행 중이거나 계획되어 있습니다. 심각한 유전 질환의 미러링 모델로의 전신 전달은 마우스가 성인 크기에 도달하지 못할 수 있기 때문에 어려울 수 있습니다. 이 retrobulbar injection 프로토콜은 심각한 표현형을 가진 모델을 미러링하여 유전자 치료를 테스트할 수 있게 하고 환자를 위한 새로운 치료법을 개발할 수 있기를 바랍니다.

먼저 각 주입에 대해 멸균 1.5ml 마이크로 원심분리 튜브에 멸균 PBS를 사용하여 AAV를 원하는 주입 부피와 농도로 희석합니다. 일회용 멸균 주사기를 주입하기 전에 플런저를 위아래로 여러 번 움직여 플런저를 부드럽게 누를 수 있도록 합니다. 그런 다음 기포가 없는지 확인하여 주사기를 원하는 부피까지 채웁니다.

오른손잡이인 경우 마취된 마우스를 주둥이가 오른손을 향하도록 왼쪽에 놓고 오른쪽 눈에 주사를 주입합니다. 그런 다음 주사할 안구에 안과 마취제를 한두 방울 떨어뜨립니다. 멸균 흡수성 거즈 패드를 사용하여 과도한 안과 마취액을 제거합니다.

손가락 끝으로 피부, 등쪽, 배쪽을 눈으로 부드럽게 눌러 마우스의 안구가 소켓에서 부분적으로 돌출되도록 합니다. 이제 바늘을 30도 각도로 경사지게 내측 안각에 삽입합니다. 천천히 그리고 부드럽게 주사기 플런저에 압력을 가하여 주입액을 전달합니다.

마지막으로 마우스에서 안면 마스크를 제거하여 마취 후 회복을 허용합니다. methylmalonyl coenzyme CoA mutase RNA의 발현은 성공적인 retrobulbar injection을 나타내는 간세포에서 관찰되었습니다.