방광 충진 중 수부에 직접 접근할 수 있도록 제거된 분리기 근육이 있는 분권화된(Ex Vivo) 뮤린 방광 모델

제거된 detrusor 근육을 가진 우리의 방광 모형은 방광 보충 도중 lamia propria 및 방광 루멘에 있는 비뇨기과 중재자의 가용성을 동시에 공부하는 새로운 실험적인 접근입니다. 이 모델은 비뇨기운, suburothelium 및 충전 하는 동안 방광 흥분성을 조절 하는 detrusor 근육 사이 신호 메커니즘에 새로운 통찰력을 제공할 수 있습니다. 10섭씨 KBS를 함유한 해부 현미경으로 그대로 소명방 표본을 해부 접시에 넣고 방광 주변의 결합 및 지방 조직을 청소하는 것으로 시작하십시오.

외식방의 돔의 작은 부분을 염기부근육의 가장 바깥쪽 가장자리를 통해 SUBurothelium lamia propria를 마주보고 있는 근육의 가장 안쪽 가장자리를 통해 KBS로 채워진 실가드 덮인 해부 접시에 고정하고, 요관과 방광목을 고정하여 방광 준비를 그대로 표시합니다. 미세 한 포셉을 사용하여, 부드럽게 요관과 방광 몸 사이의 모서리에 세로사의 조각을 당기고 투명성을 높이고 detrusor 근육 아래 의 부막의 마진을 구별하기 위해 현미경의 빛을 조절합니다. 준비 벽을 천공하지 않으려면 방광 점막의 측면 가장자리가 명확하게 보이는 동안에만 분리근을 잘라야합니다.

미세 기울어진 가위를 사용하여, 조직의 가장자리를 만지는 것을 피하면서 점막의 측면 가장자리를 관찰 할 수있는 준비를 통해 절단 된 부분을 부드럽게 당기면서 분리근 층의 내부 표면을 따라 방광 벽을 자르기 시작합니다. 방광 돔 위에 작은 조각의 분리근을 남겨 서 프로토콜의 나머지 단계에서 고정 될 수 있도록 하 고 37 섭씨 37 섭씨 산소로 20 폴리에틸렌 튜브의 2 센티미터 조각을 채우기 위해. 카테터를 방광 요도의 오리피스에 삽입한 후 카테터 팁이 방광의 대략적인 중앙에 도달할 때까지 카테터를 부드럽게 밀어 넣습니다.

그런 다음 이중 루프 6.0 나일론 봉합사로 방광 목의 주변 조직에서 카테터를 고정하십시오. 누출 조직을 확인한 후, 실가드 바닥으로 37도의 물자 켓 오르간 접시에 방광 을 넣고 카테터를 챔버 의 측면에 고정하여 관류 용액의 표면 위로 부동하지 않도록하십시오. 방광 카테터를 3방향 스톱콕과 37°C의 산소로 채워진 주입 주사기에 연결된 폴리에틸렌 20 튜브 조각에 연결하고, 충전 중 내막 압력의 충진량을 모니터링하기 위해 KBS를 돌보는 것으로 방광을 채우기 위해 주입 펌프를 시작합니다.

제제의 서브우로테리움 라미나 프로프리아 양내 중재자를 검출하기 위해, 다양한 적절한 실험 시점에서 목욕 용액의 알리쿼트를 수집하고 계획된 다운스트림 분석에 따라 샘플을 처리한다. 방광 준비 벽은 비뇨기과 서브로텔륨을 포함하지만, 분리 부드러운 근육은 없습니다. 압력 볼륨 관계는 손상되지 않고 비설된 준비에서 현저하게 유사합니다.

충전 중 서브우루알 라미나 프로프리아 측에서 방출되는 비뇨기류 유래 중재자를 측정하는 모델의 적합성은 퓨린 중재자의 방출을 용액으로 측정하여 시험할 수 있다. 입증된 바와 같이, 그대로 분리된 방광 제제를 함유한 욕조에서 무시할 수 있는 양의 퓨린을 검출할 수 있으며, 이러한 퓨린의 양은 방광 제제를 함유한 욕조에서 수집된 샘플에서 훨씬 더 높습니다. 특히, 충진의 끝에 루멘과 suburothelium lamina propria에서 수집된 견본에 있는 purines 및 대사산물의 분포는 현저하게 다릅니다.

ATP의 높은 형광 아날로그아테노 ATP를 첨가하여, 분리기 없는 제제의 서브우로살리알 측에 아테노 ATP의 감소와 아테노 ATP 제품, 아테노 ADP, 아테노 AMP 및 아테노 ADO의 증가를 초래한다. 마찬가지로, 루멘 제제에 아테노 ATP를 첨가하면 아테노 ATP의 감소와 아테노 ADP, 아테노 AMP 및 아테노 아도의 증가가 루멘에서 발생한다. 또한, 아테노 ATP를 서브우로텔륨 라미나 프로프리아 측에 첨가하면 루멘 내의 아테노 AMP 및 아테노 ADO의 출현이 초래되었다.

마찬가지로, 루멘에 아테노 ATP를 추가하면 아테노 AMP와 아테노 ADO가 서브로테륨 라미나 프로프리아에 나타난다. 이 절차에 따라, 흥분 및 억제 중재자의 가용성은 방광 충진의 다른 단계에서 라미나 프로프리아와 방광 루멘에서 측정 될 수있다. 중재자의 양자 간 트랜스우레컬 운송 및 중재자의 대사또한이 모델을 사용하여 연구 할 수 있습니다.

이 새로운 방광 모형을 사용하여 건강과 질병에서 방광 흥분성을 통제하는 비뇨기과 분리기 평활근 사이 본질적인, 현지 mechanosensitive 신호의 새로운 이해 귀착될 것입니다.