생체 내 전기 적 카디그래피는 단면 및 세로 연구에서 살아있는 제브라피시에서 전기 페노티핑을위한 유일한 진단 도구입니다. 우리의 접근 방식은 포유류에 대한 데이터 수집 시스템을 용도 변경하기 때문에 실용적이고 최소한의 침습적이며 비용 효율적입니다. 우리는 데이터 품질의 조기 검증을위한 실시간 ECG 해석 전략을 강조합니다.
인간과 제브라피시 EGs가 유사하기 때문에 생체 내 전기 카드로 인해 인간 심장 생리학을 모델링하는 데 얼룩말피의 사용뿐만 아니라 QT 연장과 같은 심장 독성에 대한 높은 처리량 약물 스크리닝을 용이하게 합니다. 올바른 리드 포지셔닝은 성공의 열쇠입니다. 일반 제브라피쉬 T 파가 가장 작기 때문에 더 큰 P와 R 파도보다 진폭을 최적화하는 데 우선순위를 두는 것입니다.
심전도 결과를 스스로 해석하기 위해 정상적이고 병리학적인 심전도 패턴을 연구하십시오. ECG 분석 소프트웨어의 자동 해석에만 의존하지 마십시오. 실험 당일, 제브라피쉬를 수족관에서 실험실로 운반합니다.
생체 내 ECG 레코딩 시스템을 설정하려면 필수 장비를 연결하고 심전도 리드의 세 가지 색상 코드, 스테인리스 스틸 전극을 증폭기의 세 가지 색상 일치 액세스 포털에 삽입합니다. 레벨 4 마취의 유도를 위해, 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인된 가장 낮은 미리 결정된 농도에서 마취의 용액을 포함하는 접시에 성인 얼룩말 물고기를 담급니다. Zebrafish가 레벨 4 마취를 3초 동안 유지한 후, 무딘 집게 한 켤레를 사용하여 3개의 심전도 전극을 배치하기 위해 슬릿, 복부 표면위로 물고기를 축축한 스폰지로 즉시 옮겨보겠습니다.
보퍼컬럼의 두 개의 하부 가장자리를 연결하는 가상 선 위에 1~2밀리미터 의 전구 동맥의 수준에서 복부 중진선에 양극을 부드럽게 삽입합니다. 음극을 소경및 0.5~ 1밀리미터를 성인 제브라피쉬 심실의 최대 apicobasal 길이보다 더 큰 거리에서 양극에 측면으로 방치한 다음, 항문 영역 근처에 참조 전극을 소우를 배치한다. 심전도 기록의 경우 시스템을 시작하고 ECG 데이터 수집 프로그램을 엽니다.
범위, 로우 패스 및 하이 패스에 대한 드롭다운 메뉴에서 원하는 설정을 선택합니다. 최대 신호 대 잡음 비율에 대한 리드 포지셔닝을 최적화하려면 Stop을 눌러 레코딩을 중지하고 각 심장에 대한 첫 번째 녹화 시도 직후 추적을 검토하십시오.
심전도가 정상이 될 것으로 예상되는 경우 모든 심전도 파형이 뚜렷하고 쉽게 볼 수 있으며 P 파형, 순 QRS 복합체 및 T 웨이브가 모두 긍정적인지 확인합니다. 가장 중요한 단일 단계는 신호 대 잡음 비율을 최대화하기 위한 리드 포지셔닝입니다. 각 물고기가 시정 피드백을 얻기 위해 첫 번째 심전도 기록 시도 후 네 가지 유효성 검사 기준을 적용합니다.
일반 심전도가 예상되는 경우, 이 네 가지 유효성 검사 기준이 모두 충족될 때까지 필요에 따라 전극을 재배치합니다. 통상의 T파가 예상되지만 T파가 너무 작으면 전극을 재배치하여 T 파 진폭을 극대화합니다. 리드 포지셔닝을 최적화한 후 ECG 레코딩을 다시 시작하여 후속 분석을 위해 ECG 스윕을 저장합니다.
심전도 기록 세션이 끝나면 물고기를 손상시키지 않고 전극을 조심스럽게 제거하십시오. 생존 연구에서는 생선을 트리카인이 없는 신선하고 산소가 많은 생선물로 옮기습니다. 이 비디오에서는 마취에서 물고기 회복을 독자의 시야를 용이하게하기 위해 산소 가 중단됩니다.
생존 연구에서 마취에서 회복을 용이하게하기 위해 파스퇴르 파이펫을 사용하여 물고기가 정기적 인 아가미 운동이나 수영을 재개 할 때까지 아가미 위에 물을 적극적으로 분출한 다음 물고기를 마취에서 완전히 회복한 다음 물고기를 수족관으로 되돌리십시오. 물고기는 적어도 5 초 동안 똑바로 수영 할 수 있을 때 마취에서 완전히 회복된 것으로 간주됩니다. 분석 설정을 정의하려면 ECG 데이터 분석 프로그램을 열고 ECG 관심 파일을 열어 전체 ECG 추적을 표시합니다.
마우스를 사용하여 심전도 추적에 대한 관심 있는 부분을 드래그하여 분석합니다. 심전도 분석 메뉴에서 심전도 설정을 선택하여 대화 상자를 열어 소프트웨어 자동 분석을 위한 다양한 매개 변수 설정을 미리 정의합니다. 심장 리듬과 속도를 분석하고 심장 리듬이 부비동인지 아닌지, 규칙적이거나 불규칙한지 결정합니다.
심박수를 확인하려면 심방 및 심실 속도가 PP 및 RR 간격을 각각 기반으로 하기 때문에 소프트웨어가 모든 P 및 R 파를 올바르게 식별했는지 확인합니다. 잘못 배치된 커서를 적절한 P 및 R 파동으로 이동하여 자동 식별 실수를 수정합니다. 간격과 파 지속 시간을 계산하려면 ECG 분석 및 평균 보기를 열어 여러 연속 심장 주기를 단일 평균 신호로 연결합니다.
소프트웨어가 P 웨이브, QRS 복합체 및 T 웨이브의 시작 과 끝을 올바르게 식별한 다음 잘못 배치된 커서를 적절한 위치로 이동하여 자동 식별 실수를 수정합니다. 심전도 측정을 내보내려면 테이블 뷰를 선택하여 모든 심전도 측정을 검토하고 관심 측정값을 스프레드시트에 붙여 넣습니다. 심전도 추적을 내보내려면 돋보기를 사용하여 심전도 스윕에 대한 관심 있는 부분을 강조표시하고 스윕을 원하는 문서에 복사하여 붙여넣습니다.
두 개의 아트리아와 두 개의 심실이있는 인간의 심장에 계약할 때, 제브라피쉬 심장에는 아트리움이 하나뿐이고 심실이 하나뿐입니다. 명백한 해부학적 단순함에도 불구하고, 제브라피쉬 심장은 인간의 심장과 여러 심전도 특징을 공유합니다. 적절한 리드 배치는 추정된 심장 주축과 리드를 정렬해야 합니다.
전극이 진피에 너무 피상적으로 삽입되면 납은 간접적으로 간주되고 전압 신호가 작습니다. 전극이 가슴 근육에 적절한 1밀리미터 깊이에 삽입되면 납은 반직접화되고 전압 신호가 증가합니다. 그러나 전극이 심실 에 1밀리미터 보다 더 깊게 삽입되면, 리드가 직접화되고 전압 신호가 더욱 증가하며, R 파 진폭은 전극을 적절한 깊이로 삽입할 때와 비교하여 4배 증가한다.
너무 깊게 삽입 된 전극의 심전도 흔적은 새로운 ST 우울증과 새로운 T 웨이브 반전과 같은 심실 심근에 부상의 새로운 징후를 보여줍니다. 양극과 음극이 배치에서 전환되면 모든 심전도 파형의 비정상적인 반전이 관찰됩니다. 부적절한 수준의 침전 깊이는 생체 내 심전도 기록의 품질을 손상시킬 수 있습니다.
물고기를 죽이지 않고 움직이지 않을 만큼 깊이 마취하는 것을 기억하십시오. 전극을 배치하여 신호 대 잡음 비율을 최대화하고 자동 소프트웨어 분석에 지나치게 의존하지 않도록 합니다. 이 최소 침습 생존 절차에 따라 부분 절제, 심장 절제술 또는 약물 반응 또는 세로 연구에서 연쇄 심전도 조사와 같은 다른 절차를 수행 할 수 있습니다.
전신 독성은 트리카인을 포함한 모든 마취제의 잠재적 합병증입니다. 이러한 독성은 개별 에이전트의 복용량을 낮추기 위하여 다중 마취제의 시너지를 활용하여 감소될 수 있습니다.
