환자 유래 제노이식 모델 및 1차 세포주 약물 개발과 종양 생물학 연구의 개시 및 진행의 필수적인 부분이 되고 있습니다. 환자 유래 제노이식 모델은 암세포의 조직학적 외관을 보존하고, 종양 내 이질성을 유지하며, 종양 미세 환경의 관련 인간 성분을 더 잘 반영한다. 그의 모형은 그 때 전통적인 암 세포 주 다음 인간암의 더 정확한 표현을 위한 이고 새로운 항암 치료의 전임상 평가를 향상하기 위하여 잠재력을 가지고 있습니다.
또한, 이들 모델은 암 환자의 상이한 하위집단 간의 분자 특성 또는 종양 시그니처를 비교하는 데 유용할 수 있다. NSG 마우스는 면역 형결성 마우스 모델로 권장됩니다. 마우스의 가혹한 면역 결핍 때문에, 불임은 모든 실험에서 유지되어야 합니다.
멸균 조건하에서, 조심스럽게 종양 조직을 해부하고 여러 작은 조각으로 그들을 손질하는 집게와 가위를 사용합니다. 마우스를 마취한 후 멸균 가위를 사용하여 두 등대 측면에 1센티미터 절개를 합니다. 멸균 집게를 사용하여 피하 조직을 방해하십시오.
그런 다음 종양 조직의 조각을 잘라 깊은 부위에 놓습니다. 수술 봉합봉 바늘로 피하 봉합사에 의해 임플란트 영역을 닫습니다. 요오드로 상처를 살균하십시오.
그 후, 흉골 의 복리전을 유지하면서 마우스를 빈 케이지에 부드럽게 놓습니다. 마우스가 일어나서 약 3~4분 후에 걷기 시작해야 하기 때문에 세심한 주의를 기울이는 것입니다. 수술을 받지 않은 쥐와 분리된 새 케이지에 수술을 받은 마우스를 놓습니다.
이식 부위의 심플포션에 의해 종양 크기를 평가하고 일주일에 두 번 Vernier 캘리퍼로 측정합니다. 마우스를 안락사한 후 멸균 집게와 가위를 사용하여 마우스로부터 종양을 천천히 분리하십시오. 10센티미터 접시에 DPBS에서 종양 조직을 씻으시면.
당신은 해부하고 괴사 영역, 지방 조직, 혈전 및 결합 조직을 제거하기 위해 집게와 가위를 집게합니다. 다음으로, 곰팡이를 사용하여 종양 조직을 최대 두께를 1mm로 자른다. 10센티미터 접시에 DPBS로 종양 슬라이스를 씻으시면 됩니다.
바이트로화 과정을 시작하려면 집게를 사용하여 조각을 튜브 V1로 옮기고 섭씨 4도에서 4분 동안 배양합니다. 튜브를 짧게 굴려 반으로 뒤집고 4분간 섭씨 4도에서 배양합니다. 다음으로 V1 용액과 슬라이스를 10센티미터 접시에 붓고 집게를 사용하여 조각을 튜브 V2로 옮킨다. 섭씨 4도에서 4분간 배양하세요.
튜브를 짧게 굴려 반으로 뒤집어 섭씨 4도에서 4분간 배양합니다. 그 후 V2 용액과 슬라이스를 10센티미터 접시에 붓습니다. 슬라이스를 튜브 V3로 옮기고 섭씨 4도에서 5분간 배양합니다.
튜브를 짧게 굴려 반으로 뒤집고 섭씨 4도에서 5분간 배양합니다. 모든 조각이 튜브 의 바닥에 가라앉는지 확인합니다. 여러 조각이 떠있는 상태로 유지되면 튜브를 짧게 굴리고 반역하고 모든 조각이 완전히 가라 앉을 때까지 섭씨 4도에서 배양하십시오.
그런 다음 V3 용액을 붓고 10센티미터 접시에 슬라이스합니다. 조직 홀더를 적절한 길이로 자르고 멸균 거즈에 놓습니다. 조각을 홀더에 옮기습니다.
거즈로 홀더를 감싸는 다. 집게를 사용하여 홀더를 액체 질소에 놓고 5 분 동안 배양하게하십시오. 그 후 극저온 바이알에 조직 정보를 표시합니다.
액체 질소에 저장됩니다 바이알에 조직 슬라이스홀더를 전송합니다. 첫째, 절제된 견본 또는 수확한 PDX 조직에서 위암 견본을 절제합니다. 티슈를 얼음 위에 놓고 10센티미터 의 멸균 문화 접시로 옮기다.
집게와 가위를 사용하여 괴사 부위, 지방 조직, 혈전 및 결합 조직을 제거하십시오. 10센티미터 접시에 페니실린과 연쇄상 구균을 포함하는 DPBS로 종양 조직을 한 번 씻으시다. 다음으로, 접시뚜껑에 조각으로 종양을 잘라.
각 조각의 최대 두께는 1밀리미터여야 합니다. 타입-1 콜라게나아제와 트립신 용액의 7밀리리터를 포함하는 50 밀리리터 원심분리기 튜브로 조각을 옮기십시오. 혼합물을 잠시 소용돌이시다.
30~40분간 섭씨 37도의 수조에서 배양하여 5분마다 혼합물을 소용돌이시게 합니다. 그 후, 10%의 FBS로 보충된 RPMI-1640 배지의 동일한 부피를 추가하고 혼합물을 철저히 소용돌이시다. 40 마이크로리터 필터를 통해 느린 여과로 이 혼합물을 새로운 50 밀리리터 원심분리기 튜브로 옮킨다.
원심 분리기는 실온에서 5~7분 동안 113~163배 의 속도로 여과됩니다. 이 상체를 조심스럽게 제거하십시오. PBS의 5 밀리리터로 펠릿을 씻고 상체를 조심스럽게 제거합니다.
펠릿이 빨간색인 경우 적혈구가 포함되어 있습니다. 적혈구 용해 완충제 500 마이크로리터로 펠릿을 부드럽게 재중단하고 실온에서 5분 동안 배양합니다. 그런 다음 PBS의 5 밀리리터를 추가합니다.
원심분리기는 실온에서 5~7분 동안 113~163배의 속도로 제공됩니다. 상체를 조심스럽게 제거하고 배양 배지로 펠릿을 재연하고 혼합물을 멸균 10센티미터 접시로 옮킨다. 37도의 이산화탄소로 배양하여 2~3일마다 배지를 혈청 함유 매체로 교체하십시오.
이 연구에서는, 위암 PDX 모형 및 1 차적인 세포주 설치됩니다. 1 세대 종양은 적절한 크기에 도달하기 위해 3 주 이상 복용, 후대에있는 것보다 더 느리게 성장하는 것으로 볼 수 있습니다. 1세대 피하 종양 형성의 성공률은 80% 이상이며, PDX 모델에서 암세포의 정체는 H&E 염색에 의해 PDX 모델으로부터 확인된다.
냉동 보존 종양 조직에서 종양 형성의 성공률은 약 95%의 종양 세포가 형태학의 차이에 의해 쉽게 인식될 수 있는 것으로 여겨진다. 1 차세포는 현미경의 밑에 2개의 병리학자에 의해 독립적으로 인증됩니다. 추가 확인을 위해, H&E 염색은 고정 후에 암세포 형태를 관찰하기 위하여 이용됩니다.
1차 세포주의 성공적인 격리비율은 약 40%로 임상 결과를 예측하는 것으로 나타났으며 마커 식별, 생물학적 연구 및 개인화된 의학 전략에 의한 전임상 약물 평가에 사용되고 있다.
