조밀도 기온 변화도 원심 분리를 사용 하 여 차동 품질의 정자 컬렉션

이 방법은 정자 질의 화학 적 결단체와 같은 정자 생리학 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다른 방법에 비해 적응성뿐만 아니라 품질에 의해 샘플의 대량을 분리 할 수있는 능력입니다. 이 방법은 정자 품질의 차이에 대한 통찰력을 제공 할 수 있지만, 그것은 또한 다른 밀도를 가진 혼합 세포 유형 또는 세포 전 성분과 같은 다른 샘플에 적용 될 수있다.

시작하려면 두 개의 별도 튜브에 2 개의 3 밀리리터 Percoll 희석기를 만듭니다. 깨끗한 테스트 튜브에서 PBS 2 밀리리터로 정액 샘플 1 밀리리터를 희석시 희석시. 부드럽게 파이프하여 용액을 혼합합니다.

멸균 원물 튜브에 낮은 밀도 Percoll 솔루션의 3 밀리리터를 추가합니다. 그런 다음, 조심스럽게 파이펫 3 낮은 밀도 Percoll 솔루션 아래 고밀도 Percoll 용액의 밀리리터. 원문 관을 45도 각도로 기울이는 동안, 페콜 밀도 그라데이션 위에 희석된 정액 샘플의 파이펫 3 밀리리터.

빈 튜브를 준비한 후, 원심분리기는 20분 동안 1500 Gs에서 두 튜브를 원심분리합니다. 원심 분리 후 욕조에서 세 개의 뚜렷한 정액 층이 형성되었는지 확인하십시오. 파이펫을 사용하여 맨 위 층부터 시작하여 중간 층으로 시작하여 튜브 의 하단에 하드 펠릿으로 끝나는 세 층의 정액층을 수집합니다.

각 층을 멸균 마이크로 원심분리기 튜브로 이송합니다. PBS의 1.5 밀리리터로 각 정액 샘플을 희석시키고 1500 Gs에서 샘플을 1500 Gs로 10분 동안 희석시. 마지막으로, 상체를 부어 운동성 버퍼로 펠릿을 재구성합니다.

이 프로토콜에서 Percoll 밀도 그라데이션 원심 분리 기술 또는 PDGC는 정액 샘플을 세 개의 별개의 층으로 분리하는 데 사용되었습니다. 정자는 고밀도 용액, 고밀도 및 저밀도 솔루션 사이의 중간 품질 층, 저밀도 솔루션 위의 낮은 품질 층으로 분리됩니다. 정자 품질에 있는 이 다름은 생존, 이동성 및 침투성에 있는 다름에 의해 입증됩니다.

이 절차를 시도하는 동안 샘플을 실온으로 가져와야한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. PDGC의 성공은 그라데이션의 신중한 준비뿐만 아니라 격리 된 레이어의 신중한 수집에 의존한다. 개발 후, 이 기술은 조류 종에서 다산의 바이오 마커를 탐구하는 정자 perdiomics의 분야에서 우리의 연구를위한 길을 열었습니다.