이 방법은 신경 질환의 자연사 동안 신경 화학의 변경과 같은 신경 과학의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 제안된 microdiasis EEG 기술의 주요 장점은 그러한 결합된 접근이 질병 발달 및 진행의 특정 단계 내에서 신경 전달물질 방출의 변화의 쌍을 허용한다는 것입니다. 패라데이 케이지 외부에 위치한 앰프를 켜는 것으로 시작합니다.
EEG 소프트웨어를 열고 EEG 인수를 시작하고 연결되지 않은 케이블에서 생성된 EEG 신호를 관찰합니다. 다음으로, 한 손의 두 개의 뻗은 손가락 사이에 동물의 머리를 잡고 다른 자유 손을 사용하여 전극 받침대에 커넥터를 나사로 연결하여 테더링 된 EEG 기록 시스템에 동물을 연결합니다. 단일 동물의 전극 신호에 따라 증폭기의 각 채널에 증폭 계수를 설정하여 EEG 신호가 스케일에 있습니다.
그런 다음 동물이 연구원의 직접적인 관찰하에 적어도 한 시간 동안 새로운 케이지를 탐험하게하십시오. 동물의 상품에 따라 케이블을 조정하고 케이블이 동물의 움직임과 누워 있는 자세를 방해하지 않도록 합니다. 마지막으로 비디오 카메라에서 올바른 이미지 프레임이 있는지 확인한 다음 비디오 EEG 녹화를 시작합니다.
먼저 제조업체 사용자의 가이드에 따라 첫 번째 사용을 위해 미세 투석 프로브를 준비하고 링거의 솔루션으로 채웁니다. 그런 다음 FEP 튜브의 10 센티미터 길이 조각을 잘라 다른 색상의 튜빙 어댑터를 사용하여 프로브의 입구와 출구 캐뉼라에 연결합니다. 튜빙이 모든 연결에서 데드 스페이스없이 어댑터에 닿는지 확인합니다.
동물의 머리를 단단히 잡고 핀셋을 사용하여 가이드에서 더미 캐뉼라를 제거합니다. 가이드 캐뉼라에 미세 투석 프로브를 삽입하고 모델링 점토를 사용하여 캐뉼라를 더욱 단단히 굳게 합니다. 다음으로, 동물을 테더드 EEG 레코딩 시스템에 연결한다.
그런 다음 동물을 플렉시 유리 실린더에 넣고 새로운 환경을 탐험하게하십시오. 깨어 자유롭게 움직이는 쥐의 움직임을 따르십시오. 그런 다음, 튜브 어댑터를 사용하여 링거의 용액을 포함하는 무딘 22 게이지 바늘과 프로브의 입구를 2.5 밀리리터 주사기에 연결합니다.
링거 용액 1밀리리터를 10초 만에 프로브에 밀어 넣고 2.5 밀리리터 주사기의 피스톤을 지속적으로 밀어넣습니다. 프로브가 사용할 준비가 된 시기를 의미하려면 콘센트에 나타나는 액체의 방울을 확인합니다. 마지막으로, 링거의 용액으로 어댑터를 튜브링하여 FEP 튜빙에 연결된 2.5 밀리리터 주사기를 채우고 주입 펌프에 장착합니다.
분당 두 개의 마이크로리터에서 펌프를 시작하고 밤새 실행합니다. 비디오 EEG를 통해 샘플 수집 3시간 전에 발작이 없는 것을 확인한 후, 링거의 솔루션으로 채워진 FEP 튜빙 주사기를 운반하는 펌프를 중지하십시오. 100 밀리머 칼륨 용액을 포함하는 수정 된 링거의 솔루션으로 채워진 튜브 어댑터가있는 FEP 튜빙에 연결된 2.5 밀리리터 주사기의 또 다른 세트를 마운트하십시오.
분당 두 개의 마이크로리터에서 펌프를 시작하고 실행합니다. 시스템에 기포가 없는지 확인하고 튜브가 모든 연결에서 데드 스페이스가 없는 어댑터에 닿는지 확인합니다. 그런 다음 출구에 나타나는 액체의 방울을 확인하여 프로브가 사용할 준비가 되었는지를 확인합니다.
다음으로 링거 용액으로 채워진 주사기의 FEP 튜브를 각 동물의 프로브 입구 캐뉼라에 연결하고 콘센트 끝에 액체 방울이 나타나는 것을 기다립니다. 프로브의 콘센트를 FEP 튜브에 연결하여 테스트 튜브의 수집으로 이어집니다. FEP 튜브를 0.2 밀리리터 테스트 튜브에 천공 캡으로 삽입하고 모델링 점토 조각으로 고정하여 튜브가 제자리에 유지되도록 하십시오.
시스템을 평형화하기 위해 샘플을 수집하지 않고 60 분 동안 두 개의 마이크로 리터에서 펌프를 실행 한 후, 기준 조건하에서 5 연속 30 분 투석 샘플을 수집하고 얼음에 샘플을 저장합니다. 10분 후, 100밀리머 칼륨 링거용액을 함유한 주사기에서 튜브를 일반 링거의 솔루션으로 전환하고 펌프를 실행하도록 합니다. 제5차 후평형 투석을 수집한 후 1시간 동안 10분마다 20개의 미세리터 분수를 수집합니다.
그런 다음 30분 짜리 투석 샘플을 추가로 수집하고 펌프를 중지합니다. 마지막으로, HPLC 분석 전까지 실험 후 샘플을 영하 80도에서 저장합니다. 실험이 완료되면 사용된 미세 투석 프로브를 증류수로 헹구고 다음 사용까지 깨끗한 증류수로 채워진 유리병에 보관하십시오.
마지막으로, 증류수로 전체 미세 투약 설정을 헹구고 70 %의 에탄올이 뒤따릅니다. 에탄올을 공기로 대체하고 멸균 환경에 설치하십시오. 이들은 질병의 만성 단계 도중 통제와 간질 쥐의 해마에서 기록된 대표적인 EEG 흔적입니다.
대조쥐에서는 EEG 변경이 관찰되지 않았으며, 동기화된 발록실 간질 활성은 간질 쥐의 행동 발작 전후 약 500밀리초 를 관찰하였다. 만성 간질 쥐에서 발견되는 기저 조미료 농도는 대조군 동물보다 상당히 높았다. 높은 칼륨은 대조군 쥐에서 약 30 분 동안 및 만성 간질 쥐에서 약 60 분 동안 글루타민산염의 추가 방출을 불러 일으켰습니다.
이 절차를 시도하는 동안 장치로 이식 된 동물은 장기간 실험 과정에서 잃어 버리기 쉽기 때문에 가벼운 헤드 세트와 충분히 긴 케이블을 사용하여 동물의 이동성을 방해하지 않도록하는 것이 중요합니다. 적절한 분석 에세이의 가용성에 따라, 이 방법은 EEG 기록을 동시에 사용할 때 뇌의 다른 가용성 분자를 테스트하는 데 더 사용될 수 있다. 그것의 발달 후에, 이 기술은 간질학의 필드에 있는 연구원이 측두엽 간질의 경우에 흥분성 신경 전달에 있는 변경에 통찰력을 제공하기 위하여 허용했습니다.
이 비디오를 시청 한 후, 우리는 당신이 자유롭게 움직이는 간질 쥐에서 깊이 전극 EEG 기록과 함께 생체 균에서 수행하는 방법에 대한 더 나은 이해를 해야합니다 믿습니다.
