시각화된 프로토콜은 방어 및 곰팡이 가미에 대한 광범위한 연구를 위한 참조 프레임을 제공합니다. 이 접근법의 주요 장점은 연구원들이 향후 작업에 대한 공통된 이해를 보장하기 위해 주요 방어 행동을 인식하는 데 도움이 된다는 것입니다. 곰팡이가 성장하는 개미에 대한 연구에 대한 참조는 이러한 행동에 익숙하지 않은 젊은 연구자에 특히 유용 할 가능성이 높습니다.
이러한 행동의 숫자는 드물다, 그래서 경험이 풍부한 연구원은 그들을 관찰 하지 않을 수 있습니다. 이 가이드는 일관된 정의와 함께 주요 방어 행동을 설명하여 연구 및 개미 종 에 걸쳐 비교를 용이하게할 것입니다. 또한, 통제 된 조건에서 행동을 이해 조건 제어 하기 어려운 자연 서식지에서 연구 도움이 될 것입니다.
우선, 에스코보시스 균주를 아크로미멕스 에키네티오 실험실 식민지에서 분리하고, 개미를 제거한 곰팡이 정원 조각을 며칠 동안 촉촉한 면모가 달린 페트리 접시에 넣고 에스코보시스가 발아하고 포자화할 때까지 분리합니다. 포자를 감자 덱스트로오스 식기 접시로 옮기고 2주 동안 약 23°C에서 배양합니다. 멸균 바늘을 사용하여 플레이트에서 성숙한 포자를 제거하십시오.
그런 다음 멸균 조건하에서 새 판에 포자를 접종하고 2 주 동안 섭씨 약 23도에서 배양하십시오. 최면이 전체 플레이트를 덮고 성숙한 갈색 포자로 성장하면 멸균 조건하에서 포자를 새로운 플레이트에 접종하십시오. 세 개의 원래 A.Echinatior 식민지를 사용하여, 각 부모 식민지에서 12 하위 식민지와 총 36 하위 식민지를 얻을.
개미 소개 4시간 전에 는 원래 식민지의 곰팡이 정원, 브램블 잎, 물에 젖은 면모 조각을 상자에 넣습니다. 감염될 하위 식민지의 경우 에스코보시스 포자가 있는 접종 루프를 채웁니다. 그런 다음 곰팡이 정원의 작은 부분을 10~20번 부드럽게 눌러 포자를 접종합니다.
대조군 하위 식민지의 경우, 멸균 접종 루프가 있는 곰팡이 정원을 10~20회 탭하여 에스코보시스 포자의 적용을 모방한다. 72 시간 감염 후 관찰에 대 한, 에스코보시스의 도입 후 72 시간 동안 방해 받지 않는 하위 식민지의 절반을 둡니다. 감염 후 0시간 동안 즉시 무리 2개, 미성년자 4명, 주요 작업자 4명을 기록하기 30분 전에 각 상자에 넣습니다.
그런 다음 기록 30분 전에 72시간 감염 후 관찰에 작업자의 동일한 혼합물을 추가합니다. 각 하위 식민지에 대해 4시간 동안 비디오 녹화를 수행합니다. 36개의 하위 식민지를 모두 녹화한 후, 각 하위 식민지의 각 개인에 대한 관심 의 행동을 검토하고 점수를 매다.
다음 클립은 관측 중에 관찰할 주요 뚜렷한 동작에 대한 설명을 제공합니다. 비디오를 검토하는 동안 개미가 다리 움직임을 중지하여 셀프 그루밍을 시작하는지 확인합니다. 안테나가 앞다리의 안테나 클리너를 통과하도록 확인합니다.
그런 다음 개미는 입 부분으로 다리와 안테나 클리너를 청소해야합니다. 또한 개미가 곰팡이 정원의 고정 지점에서 다리 움직임을 멈추는 경우 주의하십시오. 안테나가 고정되고 평행한지 관찰하여 곰팡이를 가리키며 하악골 끝에 가깝게 서로 거의 닿을 수 있습니다.
그런 다음, 광택은 곰팡이를 핥기 위해 등장해야합니다. 하나 이상의 개미는 또한 서로 신랑 수 있습니다. 이 동작 동안 개미는 모든 움직임을 멈추고 신체 접촉을 유지하면서 밀접하게 함께 서 있습니다.
그런 다음 그루밍 개미는 안테나를 받는 개미쪽으로 가리키고 수신기를 가볍게 탭해야합니다. 그루밍 개인의 입 상하 부분은 수신기 개미를 핥기 위해 나오는 광택과 함께 열려 있습니다. 개미가 대사 선그루링을 시작하기 위해 움직임을 멈추는 시기를 관찰한다.
개미는 한쪽에 몸을 숙이고 글로샤로 다른 앞다리를 핥는 동안, 선의 개구부를 문지르기 위해 앞다리 중 하나에 다시 도달해야합니다. 그런 다음 개미가 반대 쪽 다리로 동작을 반복합니다. 개미가 곰팡이 정원의 고정 지점에서 다리 의 움직임을 중지하면 안테나가 움직이지 않고 평행하여 곰팡이 정원의 고정 지점을 가리킵니다.
그런 다음 개미가 눈에 보이는 에스코보시스 포자를 잡고 둥지에서 수행합니다. 개미는 또한 곰팡이의 고정 지점에서 다리 의 움직임을 중지, 곰팡이의 조각을 향해 느슨하게 안테나를 가리키고 안테나와 곰팡이 조각을 누릅니다. 그 후, 개미는 곰팡이 작물의 나머지 부분에서 곰팡이 조각을 분리합니다.
개미가 곰팡이 정원의 고정 지점에서 다리 움직임을 멈출 때 또 다른 잠재적 인 행동이 관찰 될 수 있습니다. 개미는 가스터를 구부리고 서로 향하여 배설물 한 방울을 입 부위에 가립니다. 개미는 한 번에 하나, 개미는 하악을 통해 앞다리를 당기고 안테나 클리너를 통해 안테나를 당깁니다.
이 연구의 주요 목적은 잎 절단 개미에서 질병 방어 행동을 보여주는 짧은 클립의 카탈로그를 만드는 것이었습니다. 프로토콜에 설명된 동작은 실험적인 감염 시나리오에서 득점되었다. 통제 식민지에서, 작은 노동자는 주요 노동자보다 더 정원 작물을 손질.
감염된 식민지에서, 대조군 식민지에 비해 곰팡이 손질을 증가시키는 비 중요한 경향이 있었다. 배설물 그루밍의 비유의 증가는 감염과 관련이 있었지만, 사소한 근로자와 주요 근로자 사이의 차이는 발견되지 않았습니다. 포자 잡초와 곰팡이 잡초는 감염된 식민지와 대조군 사이에 현저한 차이가 관찰되지 않고 빈도가 낮았습니다.
감염이 관찰되기 때문에 시간이 지남에 따라 증가하는 곰팡이 잡초에 대한 경향. 초기 단계 감염을 가진 감염된 식민지의 몇몇은 4 시간 관측 기간 후에 남아 있는 눈에 띄는 포자가 있었습니다. 흥미롭게도, 후기 감염 조건에서 개미는 식민지 중 어느 에서도 포자를 완전히 제거 할 수 없었습니다.
따라서 이 실험의 결과는 클립 컴파일이 행동 연구에 어떻게 사용될 수 있는지, 사소한 및 주요 작업자 행동에 대한 평균 주파수를 계산하는 방법에 대한 예시적인 예입니다. 우리는 곰팡이가 성장하는 개미의 방어에 기여하는 행동을 문서화하고 체계적으로 영화에서 이러한 행동을 식별, 설명 및 캡처했습니다. 우리의 결과는 광범위한 행동과 관련항균 화합물에 직면했을 때 병원체가 식민지를 감염시키기 어려운 이유를 제안하는 필드에 있는 연구를 강화합니다.
우리는 현장에서 미래의 작업을위한 새로운 도구를 제공하고 행동 카탈로그가 합의와 간소화 된 정의, 관찰 및 행동에 대한 해석을 확보하는 데 가치가 있기를 바랍니다.
