성인 Zebrafish의 구강 삽 관 법: 생리 활성 화합물의 장의 이해를 평가 하기 위한 모델

이 방법은 점막 백신학 분야에서 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다, 이러한 생물학적은 삽관 후 로컬 사이트에서 면역 체계를 조절하는 방법과 같은 장 점막 이생물을 섭취하는 방법. 이 기술의 주요 장점은 설정하는 것이 간단하고 빠르며 사망률이 낮다는 것입니다. 이 방법은 점막 백신학에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다.

또한 화학 물질, 독성 또는 병원균과 같은 다른 화합물에 적용 될 수 있습니다. 이 방법의 시각적 데모는 구강 삽관 및 장 해부 단계에서와 같이 중요하며, 삽관에서 얼룩말물고기를 다치게하고 사망을 일으킬 수 있기 때문에주의해야합니다. 해부에서, 장의 끝은 매우 훌륭하고 깨지기 쉽습니다.

31 게이지 Luer 잠금 바늘에 약 1센티미터의 미세 실리콘 튜브를 놓습니다. 멸균 10 마이크로 리터 필터 파이펫 팁을 잘라 미세 한 끝을 가지고, 칼집으로 실리콘 튜브 위에 배치. 먼저 바늘 장치를 100 마이크로리터 루어 락 주사기에 부착하십시오.

먼저, 실험 전날 밤 실험 탱크로 물고기를 이동한다. 준비된 나노입자 용액을 잘 소용돌이시키고, 서스펜션의 원하는 부피를 끌어낼 수 있다. 물고기를 안전하게 마취한 후 그물을 사용하여 물고기를 젖은 플라스틱 트레이로 빠르게 옮기습니다.

바늘을 향하도록 동물을 수평으로 향하게 합니다. 한 손으로 물고기를 조심스럽게 지지하고 보호 된 바늘로 입을 엽니다. 그런 다음 입개시 약 1센티미터까지 식도 아래로 바늘을 부드럽게 삽입합니다.

바늘이 얼마나 멀리 가야하는지 보기가 어렵고 이것은 연습의 문제입니다. 바늘이 멈출 때 바늘을 느끼고 바늘을 조작하면 장치를 조금 더 삽입할 수 있는 올바른 각도를 찾을 수 있습니다. 나노 입자 현탁액을 물고기에 천천히 주입하여 현탁액이 아가미 나 입을 통해 바깥쪽으로 흐르지 않도록합니다.

그 후 바늘을 부드럽게 제거하고 물고기를 복구 탱크에 넣습니다. 물고기가 회복되는 동안, 어떤 이상에 대한 물고기를 모니터링. 물고기가 회복되면 실험 탱크 중 하나로 되돌아갑니다.

텍스트 프로토콜에 따라 물고기를 안락사한 후, 필터 용지에 물고기를 놓습니다. 날카로운 해부 가위를 사용하여 항문에서 오퍼큘럼으로 반원형 절개를 하고 미세 핀셋으로 절개를 엽니다. 그런 다음 장의 양쪽 끝을 자르고 모든 내부 장기를 꺼내 필터 용지에 놓습니다.

다음으로, 내장을 내부 장기에서 분리하고, 모든 장을 얻기 위해 주의를 기울여 스트레칭합니다. 마지막으로 핀셋을 사용하여 필터 용지에 내장을 굴려 접착제 조직을 분리합니다. 이 프로토콜을 사용하여, 혼합 된 성의 제브라피쉬는 성공적으로 다른 재조합 단백질 나노 입자로 삽관했다.

수제 구강 삽관 장치를 사용하여 사망률의 낮은 평균 비율을 달성했습니다. 재조합 TNF 알파로 만든 형광 나노 입자 포함 체의 전달을 평가하기 위해, 세포 측정 분석이 수행되었다. 형광 세포의 총 양은 관적 후 5 시간 및 24 시간 모두 대조군에서보다 나노 입자 삽관 된 그룹에서 상당히 높았다.

관착 장비는 저렴하고 정확하며 재사용이 가능합니다. 전체 관착 절차는 한 작업자에 의해 매우 신속하게 수행 할 수 있으며, 중요한 것은, 방법은 다른 연산자 간에 일치합니다. 다운스트림 분석과 우리의 삽관 방법의 조합은 경구 백신 개발에 이상적 일 수 있습니다.