저자는 Linnea 탄 및 다이아나 Rydholm 축산에 대 한 감사합니다.

BALB/c 마우스 새끼 어느 섹스의 Ophthalmologic 및 비전 연구, 동물의 사용에 대 한 진술에 따라 사용 되었다 그리고 프로토콜 윤리적인 동물 연구에 대 한 스톡홀름의 위원회에 의해 승인 했다. 쥐 새끼, 12 h 주/야 주기, 음식 및 물, 간호 어머니 함께 되었고 매일 모니터링.
참고: 수술 절차에 대 한 마우스와 휘발성 isoflurane 마 취 유지 했다. 눈 연 고는 치료와 사용 되는 물질을 방해할 수도 눈 절차 동안 낙 심. 필요한 경우, 드라이 눈을 방지 하기 위해 살 균 정상적인 염 분 솔루션의 드롭 적용할 수 있습니다. 포도 구멍은 자가 치유, 치료 수술 도구와 무 균을 보장 하기 위해 포도 구멍 동안 찍은. 수술 후 치료는 피하, 정상적인 염 분 솔루션 수 분을 포함 그리고 tetracaine 염 산 염의 눈 국 소 관리와 진통. 새끼는 생리대에 sternal recumbency 간호 어머니의 깨끗 한 감 금 소에 게 반환 하기 전에 복구 허용 되었다. 새끼는 스트레스를 피하기 위해 같은 간호 어머니와 함께 유지 했다.
1입니다. 마 취
<ol><li>마 취 유도 챔버 하 isoflurane 마 취 관리도 결합 하는 작은 마우스 마스크를 준비 합니다. 참고: 모든 적용 가능한 윤리 허가와 모든 동물 실험을 수행 합니다.</li>
	<li>대기 공기에 3-4% 휘발성 isoflurane와 유도 챔버를 프리 필. 참고: 다른 마 취 물질 isoflurane 보다 다른 사용할 수 있습니다, 윤리 허가 따라. 휘발성 마 취 절차 통풍이 벤치 또는 연기 후드에서 수행 되어야 합니다.</li>
	<li>산 후 (P) 12.5-하루-옛 BALB/c 마우스 강아지 유도 챔버에 배치 합니다. 마 취 장치 isoflurane 유도 약 실에 제공할 준비가 되는지 확인 합니다. 참고: 마우스 강아지는 허약 하 고 최고의 아저씨에 의해 처리. 담가 또는 스트레스를 피하기 위해 간호 어머니와 새끼를 함께 유지.</li>
	<li>완벽 하 게 취 수를 강아지를 수 있습니다.</li>
	<li>부드럽게, 아저씨에 의해 마우스 강아지를 선택 합니다. 참고: 계속 유도 약 실 폐쇄에 항상 안전 하 고 안정적인 유도.</li>
	<li>설치류 마스크를 마우스를 전송 합니다. 마우스를 이동할 때 마스크 유도 실에서 마 취 흐름 전환 되었는지 확인 합니다.</li>
	<li>마 취를 확인 하는 발가락 핀치를 수행 합니다.</li>
</ol>2. 펑크 외과 Stereoscope 아래 절차
<ol><li>측면 recumbency 위치에 마우스를 놓습니다. 마스크는 물론 마우스 눈은는 stereoscope의 보기의 필드에 위치를 확인 합니다.</li>
	<li>그래서 눈은 stereoscope 쪽으로 향하도록 부드럽게 마우스 머리를 회전 합니다. 참고: 눈의 명확한 포커스는 stereoscope 아래 달성 되어야. 포지셔닝에 대 한 16 X의 확대는 권장, 40 X 수술 절차를 수행 하려면 사용 해야 합니다. 윤리적 허가 허용, 수염의 끝을 트리밍 눈의 시각화 용이 하 게 수 있습니다.</li>
	<li>등 쪽과 복 부 눈에 눈 꺼 풀에 하향 압력을 적용 하 여 강아지의 눈을 내 다 신중 하 게 작은 연결 집게를 사용 하 여.</li>
	<li>작은 집게로 강아지의 눈 뚜껑의 부드러운 하지만 회사 보류를 유지. 참고:이 좋습니다 눈 돌출을 수행 하 여 비 지배적인 손을 가진 잡고 뚜껑으로 지배적인 손에 빵 꾸 절차를 수행 해야 합니다.</li>
	<li>stereoscope를 사용 하 여 각 막 limbus를 찾습니다. 흰둥이 BALB/c limbus 원형 혈관 총 각 막에 후부에 의해 쉽게 식별할 수 있습니다.</li>
	<li>0.25 m m 직경 (30 G) 경사진된 바늘으로는 uvea의 후부 limbal 제한 근처 작은 포도 펑크를 수행 합니다. 만, 바늘의 팁을 사용 하 고 더 이상 절반 경사 (0.5 m m에 해당), 펑크는 uvea. 제대로 실행 하는 경우 포도 구멍 자체 씰링, 아직 연구 물질의 안 구내 주사 같은 찔린 상처를 통해 관리 될 수 있습니다. 참고: 마우스 안구 해부학과 경험, 포도 빵 꾸 ciliary 바디와 ora 참나무 사이의 실행 됩니다. 해야 합니다 주의 포도 빵 꾸를 수행 하는 동안 렌즈 파열을 피하기 위해.</li>
	<li>첫 번째 펑크 사이트에서 눈의 반대 사이트에 두 번째 포도 빵 꾸를 수행 합니다. 거리와 자국;의 위치를 최적화 가능한 지 되 고 12 시와 6 시 자국, 12 고려 합니다.</li>
	<li>포도 빵 꾸 절차 P24.5까지 4 일 마다 반복 합니다. 모든 연속 포도 펑크 전에 포도 빵 꾸, 또는 명백한 저하 눈 압력 동안 렌즈의 손상으로 인해 외상 성 백 내장의 존재에 특히 주의 지불 하는 동물 상태를 모니터링 합니다. 최적의 효과 대 한 이전 구멍으로 동일한 위치에서 반복 구멍을 실행에 대 한 목표.</li>
</ol>3. 비 침 투 적인 Vivo에서 모니터링
<ol><li>펑크 또는 각 실험 날 주사 전에 위에서 수행 마우스를 anesthetize.</li>
	<li>측면 recumbency 위치에 마우스와 함께 부드럽게 눈을 내 다.</li>
	<li>수술 stereoscope 아이리스 맥 관 구조에 초점.</li>
	<li>수술 stereoscope 장착 카메라와 함께 아이리스 맥 관 구조의 사진을 찍을. 참고: 필요 하지 않은 감수 분열을 유도 수 있지만 동물 당 홍 채 영역을 정상화 하는 데 도움이. 감수 분열 유도 에이전트를 선택할 때 윤리적인 허가 고려 하십시오. 아이리스 맥 관 구조의 주의 집중은 더 정량 분석을 촉진 한다. 40 X의 것이 좋습니다.</li>
</ol>4. 수술 치료
<ol><li>설치류 마스크에서 BALB/c 강아지를 제거 하 고 부드럽게 외과 매트와 겹쳐 난방 패드에 전송.</li>
	<li>구멍이 눈에 1 %tetracaine 솔루션의 한 방울을 적용 합니다. 참고: 다른 진통 솔루션 사용할 수 있습니다, 윤리 허가 따라.</li>
	<li>메 마른 정상적인 염 분 해결책의 200 µ L의 피하 주입으로 동물을 하이드 레이트.</li>
	<li>깨끗 한 마우스에 간호 어머니에 게 강아지를 반환 합니다.</li>
	<li>복구 프로세스를 모니터링 합니다. 강아지를 deambulate 담가 하 수 있어야 합니다.</li>
</ol>5. 눈 Enucleation
<ol><li>자 궁 경부 전위에 의해 동물을 안락사. 절차의 더 나은 시각화를 위한 enucleation 및 해 부 한 stereoscope 아래를 수행 합니다. 참고: 다른 안락사 절차는 사용할 수 있습니다. 윤리적 허가 엄격 하 게 준수 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>당겨 떨어져 눈에 노출을 개선 하기 위해 눈 꺼 풀.</li>
	<li>곡선 본 눈이 위 눈 뚜껑의 법 근처 작은 컷 (약 0.5 c m)를 확인 합니다.</li>
	<li>노출된 periocular 공간을 사용 하 여 궤도에서 (아래) 세계 뒤에 마이크로 연결 집게를 삽입.</li>
	<li>조직을 둘러싼 눈을 살짝 위로 당겨. 주변 조직 가까이 눈 소켓을 사용 하 여, 안구에 보관 하지 마십시오.</li>
	<li>궤도 있는 곡선된 본 눈이 위 눈 지구에 뒤에 삽입 합니다.</li>
	<li>잘라 주위 조직을 통해 눈 소켓에서 뺍니다. 참고:이 해 부 기술은 눈 해부학을 유지 하 고 후속 분석을 혜택.</li>
	<li>눈에서 외부 조직의 제거를 진행 합니다. 선호 하는 경우, 수정 후 외부 조직의 제거를 수행할 수 있습니다. 참고: BALB/c 마우스는 멜 라 닌 결핍, 따라서 증가 대비, 어두운 배경에 권장 해 부 절차를 촉진 하기 위하여.</li>
	<li>짧게 페 트리 접시에 전체 눈 씻어 멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)으로 가득합니다.</li>
	<li>2 mL 튜브 4% 버퍼링 말린 솔루션의 1.5 mL를 포함 하는 눈을 전송 합니다.</li>
	<li>실 온에서 6 h에 대 한 눈을 수정. 참고: 조직의 강성 수 여 하 고 홍 채의 절 개를 용이 하 게 해결. 시간을 수정 해야 테스트 되며 다른 응용 프로그램에 대 한 조정.</li>
</ol>6. 아이리스 Stereoscope 아래 해 부 절차
<ol><li>1.5 mL 플라스틱 파스퇴르 피 펫 (또는 유사한), 튜브에서 통 솔루션을 제거 하 고 세 번 신선한 PBS로 눈을 씻어.</li>
	<li>위쪽으로 향하게 하는 앞쪽 챔버와 고정된 눈 부드러운 마른 표면 (해 부 대)에 배치 합니다.</li>
	<li>경사진 30g 바늘 후부는 limbus 진입점을 수행 합니다.</li>
	<li>작은 연결 집게와 이전 세그먼트를 잡고, 이전에 만든 오프닝으로 Clayman 욕실이 직선 위의 한 끝을 삽입 합니다. 참고: 그것은 비 지배적인 손 가진 집게와 지배적인 시저를 제어 하 고 좋습니다.</li>
	<li>회전 하는 동안 연결 집게와 눈 주위에 눈의 뒤 세그먼트를 제거 하려면 limbus 잘라. 참고: 조직에 크게 계속가 위 내 면 끝 과정을 용이 하 게 허용할 것 이다 부분 컷을 수행.</li>
	<li>아래쪽으로 직면 하 고, 노출은 렌즈 앞쪽 세그먼트를 놓습니다.</li>
	<li>신중 하 게 작은 집게로 잡아와 위쪽으로 당기는 렌즈를 제거 합니다. 참고: beveled 바늘 찔린 고 렌즈를 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>각 막 면이 아래로와 보기의 필드에 수직인 컷 앞쪽 세그먼트를 놓습니다.</li>
	<li>부드럽게 작은 연결 집게와 조직 ciliary 시체에 후부를 잡아.</li>
	<li>Clayman 욕실이 바로 위, 배수 채널을 제거 하 여 홍 채 격리 모양 몸 앞쪽 단지 트림을 진행 합니다. 확인 하는 배수 채널 제거 됩니다; 홍 채는 각 막 내에서 이동 해야 합니다.</li>
	<li>신중 하 게 각 막, PBS의 200 µ L을 포함 하는 96 잘 접시를 들고 작은 연결 집게와 앞쪽 아이피를 전송 합니다.</li>
	<li>각 막에 잘 들고 계속 하 고 홍 채는 피 펫으로 PBS를 가진 홍 조에 의해 해 부. 참고: 현재, 그리고 30 G 바늘의 경사 각 막, 일부 배수 채널에 아이리스 남아 점착 있을 경우 전치 홍 채 도움을 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>작은 연결 집게와 96-우물에서 각 막 제거 하 고 추가 분석에 대 한 잘 격리 된 아이리스를 유지.</li>
	<li>4 ° c.에 부동성 아이리스 샘플 저장 참고: 고정 되 고에 불구 하 고 아이리스 부동성 샘플의 장기 보관 권장 하지 않습니다.</li>
</ol>7. 가능한 실험적인 지요
<ol><li>해 부의 홍 채에 혈관을 시각화 하려면 부동성 전체 마운트 immunohistochemistry 혈소판 내 피 성장 세포 접착 분자 (PECAM)-1 등 표식 방법 얼룩 또는 isolectin B4. 또는, 높은 분자량 형광 표시 된 dextrans 같은 혈관 얼룩과 전신 관류를 사용 합니다.</li>
	<li>비보에 비 침 투 적인 이미지를 사용 하 여 실리콘에 플랫-마운트를 수행 하 고 전체 아이리스 맥 관 구조 적절 한 이미징 소프트웨어 계량. 참고: 맥 관 구조를 측정할 수 있습니다, vivo에서 그리고 생체 외에서densitometry를 사용 하 여 또는 맥 관 구조 분석 소프트웨어9.</li>
	<li>핵 산 및 단백질 추출, PCR 또는 immunoblotting 방법, 구멍이 눈의 분자 분석을 수행 하 여 다음에 대 한 전체 안구를 처리 합니다. 참고: 조직의 분자 분석은 최고의 고정 되지 않은 조직으로 수행 하지만 고정 되지 않은 홍 채의 절 개는 매우 도전, 그리고 전체 눈의 사용 이전의 연구8에서 통계적으로 유의 한 결과 렌더링은.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+collateral+circulation+in+the+primate+eye.">Anterior collateral circulation in the primate eye.</a> Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).</li><li>Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Angiogenesis.">Ocular Angiogenesis.</a> J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).</li><li>Breuss, J. M., Uhrin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-initiated+angiogenesis+and+the+uPA/uPAR+system.">VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system.</a> Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).</li><li>Rodrigues, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascular+glaucoma:+a+review.">Neovascular glaucoma: a review.</a> Int J Retina Vitreous. 2, 26 (2016).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model.">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li><li>DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+wound+repair:+when+enough+is+enough.">Angiogenesis and wound repair: when enough is enough.</a> J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).</li><li>Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+angiogenesis:+Wound+healing+as+a+model.">Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model.</a> Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).</li><li>Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., Andr&#233;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+in+vivo+model+of+puncture-induced+iris+neovascularization.">A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization.</a> PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).</li><li>Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Computational+Tool+for+Quantitative+Analysis+of+Vascular+Networks.">A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks.</a> PloS One. 6 (11), (2011).</li><li>Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+neovascularization:+basic+mechanisms+and+therapeutic+advances.">Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances.</a> Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).</li><li>Kvanta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+angiogenesis:+the+role+of+growth+factors.">Ocular angiogenesis: the role of growth factors.</a> Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).</li><li>Salman, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasilicone+Bevacizumab+Injection+for+Iris+Neovascularization+after+Vitrectomy+for+Proliferative+Diabetic+Retinopathy.">Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).</li><li>Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology+and+Features+of+Eyes+with+Rubeosis+Iridis+among+Korean+Patients:+A+Population-Based+Single+Center+Study.">Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study.</a> PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).</li><li>Speier, S., Nyqvist, D., K&#246;hler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye.">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li><li>Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascularization+of+the+Iris+-+an+Experimental-Model+in+Cats.">Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats.</a> Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).</li><li>Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Mechanisms+of+Iris+Neovascularization+Secondary+to+Retinal+Vein+Occlusion.">Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).</li><li>Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Experimental-Model+of+Ectropion+Uveae+and+Iris+Neovascularization+in+the+Cat.">An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat.</a> Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).</li><li>Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+is+sufficient+to+produce+iris+neovascularization+and+neovascular+glaucoma+in+a+nonhuman+primate.">Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).</li><li>Paula, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+Rubeosis+Iridis+Induced+by+Intravitreal+Latex-derived+Angiogenic+Fraction.">Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction.</a> Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).</li><li>Takei, A., Ekstr&#246;m, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+of+Prolyl+Hydroxylase+Domain+2+Inhibits+Hypoxia-inducible+Angiogenesis+in+a+Model+of+Choroidal+Neovascularization.">Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization.</a> Sci Rep. 7, 42546 (2017).</li></ol>

저자는 공개 없다.

현재 프로토콜에서 포도 펑크에 의해 아이리스 혈관 반응의 유도 대 한 새로운 방법을 제공 됩니다. 찔린 상처 치유 메커니즘을 트리거합니다 하 고 아이리스10,11혈관 응답을 촉진 합니다. 이것은 PDR, NVG, 눈의 뒤 세그먼트에서 망막에서 악화 신생 응답 rubeosis iridis, 홍 채12의 증가 vascularization의 임상 상태에서 완결 등 눈 병 리와 ,13.
각 막 avascular 이며 투명도 결과로 독특한 콜라겐 구조를 소유한 다. 이 맞춰 시각화 아이리스 맥 관 구조에 대 한 눈의 앞쪽 세그먼트의 제품은 비 침범 성 방법13,14 vivo에서 홍 채 혈관의 직접 시각화 하 여 달성입니다. 아이리스 neovascularization의 이전 동물 모델에 의존 했습니다 어디 복잡 한 외과 개입 했다 수행된15,,1617, 눈 큰 동물 특정 신생 물질의 안 구내 주사 18 , 19.이 방법에서는, 색소 결핍 BALB/c 마우스의 사용 아이리스 맥 관 구조에는 vivo에서,의 직접 관찰을 가능 하 게 하 고 따라서 를 공부 하는 새로운 도구를 제공 하는 마우스에 아이리스 neovascularization의 비 침범 성 정량화를 허용 vivo에서 신생.
또한, 마우스 홍 채 절 개에 대 한 제시 방법 혈관 특정 마커 펑크 유발 아이리스 neovascularization의 분석을 수 있습니다. 여기, 아이리스 했다 illustratively PECAM-1 항 체와 스테인드 선박과 형광 현미경 검사 법에 의해 시각. 부동성, 전체 마운트 immunostaining 프로토콜은 쉽게 달성 하 고 상당히 일상적인. 또한,이 모델에서 혈관에 관류 메서드를 수행할 수 있습니다. 혈관 특정 얼룩 아이리스 혈관 구조 및 따라서 사용자 기반에 의해 정량화 평가 또는 소프트웨어 분석, 홍 채 neovasculature9부여합니다. 앞에서 설명한8,20, 아이리스 neovasculature의 그림은 하루 15 포스트-puncture-유도에서 평가 했다. 그럼에도 불구 하 고, 아이리스 vascularization에 효과 빠르면 4 일 후-puncture-유도, 펑크 유발 아이리스 neovascularization 모델의 평가 특정에 따라 다른 시간 지점에서 밖으로 실시 될 수 제안 관찰 될 수 있다 실험 요구 사항입니다.
그것은이 프로토콜 특히 다른 동물 모델에 상대적인 마우스 눈의 크기와 관련 된 몇 가지 과제를 제시 하는 상태로 주목 된다. 렌즈 접촉을 피 하거나 눈에 손상 포도 빵 꾸 절차를 실행 하는 동안 주의 취해야 한다. 눈 상태 관찰은 파라마운트, 및 동물 실험 관련 백 내장을 표시 또는 눈 압력에 드롭 해야 제외 하 고 적절 하 게 안락사. 마우스의 홍 채는 매우 약하고 다소 촌 스 러 워 있습니다. 적절 한 해 부와 조직의 격리 프로토콜에 대 한 또 다른 중요 한 단계를 제공 합니다. 배수 채널에서 정확한 분리는 앞쪽 상공에서의 변위에 대 한 필요 합니다. 또한, 취약성, 때문 아이리스 격리 다운스트림 분자 분석 손상 조직의 고정을 해야 합니다. 하지만, 고정 되지 않은 전체-눈의 분자 분석은 제시 방법8에 성공적으로 적용 되었다.
요약, 설명된 프로토콜 소설 펑크 유발 아이리스 neovascularization 마우스 모델을 제공합니다. 이 모델에는 비보에 비 침 투 적인 직접 시각화 신생의 허용의 이점이 있다. 또한, 작은 설치류를 사용 하 여 렌더링 제시 모델 rubeosis iridis의 연구에 대 한 매력적인 눈 큰 동물의 사용을 방지 하 고 윤리적 제한을 동반 합니다. 또한, 절차 자체 봉인 펑크, vivo에서 신생의 새로운 모델의 유용성을 강화를 통해 프로 또는 안티 신생 물질의 주사로 결합할 수 있습니다.

홍 채, 모양 체 및 맥락 막, 눈의 가장 vascularized 조직 uvea 구성 되어 있습니다. 홍 채 맥 관 구조는 눈의 앞쪽 챔버에 항상성 유지에 필수적 이다. 동맥과 정 맥 사이의 풍부한 anastomotic 연결, 결과로 아이리스 혈관 영양소 뿐만 아니라 자체, 아이리스 하지만1눈 앞쪽 전체 세그먼트에 산소의 공급을 제공합니다.
새로운 혈관, 또는 기존의 것 들에서 신생 혈관의 형성은 개발 및 상처 치유2등 생리 적 과정에 기본적 이다. 신생은 가늘게 정식 요인, 플라스 미노 겐 활성 제 억제 물 (파이), 혈관 내 피 성장 인자 (VEGF) 등 여러 염증 성 요인의 군중에 의해 통제 되 고 이러한 요소의 불균형에 pathologic 이어질 수 있습니다. 신생3.
눈, neovascularization 증식 당뇨 성 망막 증 (PDR) 등 신생 녹 내장 (NVG) 시력을 위협 하는 질병의 원인입니다. 이러한 눈 질환에 초점 neovascularization는 일반적으로 망막 조직에 염증 성 불균형에 있으며 모두 후부와 앞쪽 눈 실에서 눈의 신생 요인 rubeosis iridis와 연결 되어 있는 홍 채 병 적인 neoangiogenesis4임상 용어. 이러한 병 리 신생을 성인 아이리스의 기능을 나타냅니다. 마우스에서 눈 맥 관 구조 성숙 출생 후 이며 성숙 산 후 계속. 개발의이 특성은 산소에 유도 된 망막, 밀접 하 게 조산5의 망막 질환의 임상 상태를 모방 하는 모델의 마우스 모델에 악용 됩니다. 또한, 신생 염증과 재생 메커니즘6, 치유 하는 상처에 중추적인 역할 그리고 상처 자체 치유 신생 모델7과 연결 되었습니다.
이 연구에서 우리는 펑크 유발 아이리스 neovascularization의 모델을 설명합니다. 포도 자국 limbus의 외부 한계 근처는 상처 치유 시스템을 실행 하 여 홍 채 neovascularization를 유도 수행 됩니다. 때문에 각 막의 투명도, 아이리스 맥 관 구조 될 수 있습니다 쉽게 비보 비 침 투 적인 방법으로 분석. 구멍이 눈 플라스 미노 겐 활성화 및 염증 성 마커8의 증가와 관련 있다 홍 채, 혈관 침대의 증가 제시. 제시 모델 신생 신생 화합물, 상영을 공부 하 고 새로운 도구로 큰 잠재력을가지고 고 직접 vivo에서 신생 프로세스의 시각화를 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bonn eye scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>23060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas curved scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas straight scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective adapter for camera</td>
			<td>Handcrafted</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or any system that allows adapting a camera to the microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad 100-110 watts</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Available in pet/veterinarian stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic 30g beveled needle</td>
			<td>KDM GmBH germany</td>
			<td>911914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iphone 4S</td>
			<td>Apple</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>Or other high resolution image acquistion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>KDG 9623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McPherson tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E1815 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>63140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minims tetracaine hydrochloride</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 % (w/v) Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral-buffered formalin</td>
			<td>Bioreagens</td>
			<td>0018-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline solution</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>210352</td>
			<td>0.9 % (w/v) NaCl in injectable water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Balanced and buffered PBS pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 10 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 3 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe Seal Tube 2.0 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>72.685.200</td>
			<td>Or any eppendorf style tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC plate 96-well</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 3.5 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>86.1171</td>
			<td>Or any other Pasteur pipette style</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Univentor 400 anesthesia unit</td>
			<td>Univentor Limited</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild M650 surgical microscope</td>
			<td>Wild Heerbrugg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or other surgical or magnifying stereoscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis

우리 신생의 비 침범 성 평가 위한 일반적인 모델으로 찔린 유도 아이리스 neovascularization의 모델을 설명합니다. 이 모델은 또한 신생 녹 내장, 당뇨병 성 망막 증의 시력을 위협 하는 합병증을 타겟팅에 대 한 관련. 이 메서드와 BALB/c 마우스에 자체 봉인 포도 구멍의 시리즈에 의해 아이리스 혈관 반응의 유도에 따라 마우스 눈 맥 관 구조의 산 후 성숙의 활용. 마우스 강아지 포도 자국에서 출생 후 하루 12.5, 새끼 자연스럽 게 열 때 그들의 눈, 산 후 날 24.5까지 받을. 때문에 각 막의 투명도, 아이리스 맥 관 구조 분석할 수 있습니다 쉽게 시간을 통해 비 침 투 적인 비보에 방법으로. 또한, BALB/c 마우스의 반투명 아이리스 최소한의 일반적인 배경 얼룩과 자세한 immunohistologic 분석에 대 한 flatmounted 수 있습니다. 이 모델에서 신생 주로 염증에 의해 구동 됩니다 하 고 플라스 미노 겐 활성화 시스템. 펑크 유발 모델 작은 설치류에 아이리스 neovascularization를 유도 하기 위해 처음 이며 직접 비 침범 성 비보에 신생 과정의 분석을 허용의 이점이 있다. 또한, 모델 신생 vivo에서 관점의 연구의 가능성을 강조는 신생 변조 물질과 결합할 수 있습니다.

P12.5에서 흰둥이 BALB/c 마우스 새끼 4 매일 반복 하는 포도 자국을 복종 되었다 (실험적인 하루 0, 4, 8, 12), P24.5까지. P27.5, 마우스 했다 안락사 고 홍 신중 하 게 해 부 (실험 하루 15). 사진 마우스 눈의 홍 채 혈관 반응의 비 침범 성 평가 평가 모든 펑크 시리즈 각 실험 하루에서 전에 수술 stereoscope에 연결 된 카메라와 함께 촬영 했다. 포도 자국 상처 치유 시스템 (그림 1)을 실행 하 여 홍 채에서 혈관 응답을 유도. 때문에 각 막과 멜 라 닌 결핍 BALB/c 마우스의 투명도, 증가 아이리스 맥 관 구조 실험 하루 4 (P16.5)에서 쉽게 볼 수 이며 프로토콜의 기간 내내 강렬 하 게. PECAM-1 Immunohistochemistry 이미지 컨트롤 (그림 2)에 비해 구멍이 눈의 홍 채에 전반적인 맥 관 구조에서 증가 나타냅니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig1.jpg"> 그림 1: 펑크 유발 홍 채 신생의 비 침 투 적인 모니터링. 하루 0, 4, 8, 12, 및 15의 제어 및 구멍이 눈의 대표 이미지. 아이리스 혈관 응답 구멍이 눈에 앞으로 4 일에서 분명 하다. 눈금 막대 = 1 m m. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig2.jpg"> 그림 2: 펑크 유도 눈에 홍 채 혈관 응답. PECAM-1 하루 15 홍에서 얼룩의 설명 이미지 전체 보기로 표시 영역 (사각형), 제어를 확대 하 고 눈 구멍. 눈금 막대 = 400 µ m (맨 위); 200 µ m (아래) 구멍이 홍 채에 혈관 분 지의 증가 note <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

아이리스 neovascularization, 허 혈 성 망막 질환의 일반적인 합병증은 신생 녹 내장 시력을 위협 하 될 수 있습니다. 여기, 우리는 신생 변조 물질의 비 침범 성 평가 위해 사용할 수 있는 실험 아이리스 neovascularization를 유도 하는 murine 프로토콜을 설명 합니다.

마우스 모델 Rubeosis Iridis의 아이리스 Neovascularization 펑크 유발

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

8.7K 조회수.  Karolinska Institutet. 아이리스 neovascularization, 허 혈 성 망막 질환의 일반적인 합병증은 신생 녹 내장 시력을 위협 하 될 수 있습니다. 여기, 우리는 신생 변조 물질의 비 침범 성 평가 위해 사용할 수 있는 실험 아이리스 neovascularization를 유도 하는 murine 프로토콜을 설명 합니다.

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A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

의 마우스 모델 Utero에 이식

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

연구

의학

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the low-molecular-weight-heparin (LMWH), enoxaparin. There are also urgent clinical situations where it would be important if this could be determined rapidly. The present assay is designed to accomplish this. We only assayed human blood samples that were spiked with known concentrations of enoxaparin. The essential feature of the present assay is the quantification of the efficacy of enoxaparin in a patient's blood sample by degrading it to complete inactivity with heparinase. Two blood samples were drawn into Vacutainer tubes (Becton-Dickenson; Franklin Lakes, NJ) that were spiked with enoxaparin; one sample was digested with heparinase for 5 min at 37 &deg;C, the other sample represented the patient's baseline anticoagulated status. The percent shortening of clotting time in the heparinase-treated sample, as compared to the baseline state, yielded the anticoagulant contribution of enoxaparin. We used the portable, battery operated Hemochron 801 apparatus for measurements of clotting times (International Technidyne Corp., Edison, NJ). The apparatus has 2 thermostatically controlled (37 &deg;C) assay tube wells. We conducted the assays in two types of assay cartridges that are available from the manufacturer of the instrument. One cartridge was modified to increase its sensitivity. We removed the kaolin from the FTK-ACT cartridge by extensive rinsing with distilled water, leaving only the glass surface of the tube, and perhaps the detection magnet, as activators. We called this our minimally activated assay (MAA). The use of a minimally activated assay has been studied by us and others. 2-4 The second cartridge that was studied was an activated partial thromboplastin time (aPTT) assay (A104). This was used as supplied from the manufacturer. The thermostated wells of the instrument were used for both the heparinase digestion and coagulation assays. The assay can be completed within 10 min. The MAA assay showed robust changes in clotting time after heparinase digestion of enoxaparin over a typical clinical concentration range. At 0.2 anti-Xa I.U. of enoxaparin per ml of blood sample, heparinase digestion caused an average decrease of 9.8% (20.4 sec) in clotting time; at 1.0 I.U. per ml of enoxaparin there was a 41.4% decrease (148.8 sec). This report only presents the experimental application of the assay; its value in a clinical setting must still be established.

Demonstration of a rapid quantitative assay of the inhibition of blood coagulation by the low-molecular-weight-heparin, enoxaparin. The contribution of enoxaparin is assessed by removing its influence through digestion with heparinase. A fuller description of the assay is detailed in our published paper.1 The assay still requires clinical confirmation.

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&kappa;B Reporter Transgenic

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as pre-clinical models to test interventions. In these methods, we describe a technique in which lipopolysaccharide (LPS) is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple, effectively modeling mastitis, or inflammation, of the gland. This simulated infection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, as visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse1.
Our ultimate goal in developing these methods was to study the inflammation associated with mastitis in the lactating gland, which often includes redness, swelling, and immune cell infiltration2,3. Therefore, we were keenly aware that incision or any type of wounding of the skin, the nipple, or the gland in order to introduce the LPS could not be utilized in our methods since the approach would likely confound the read-out of inflammation. We also desired a straight-forward method that did not require specially made hand-drawn pipettes or the use of micromanipulators to hold these specialized tools in place. Thus, we determined to use a commercially available insulin syringe and to inject the agent into the mammary duct of an intact nipple. This method was successful and allowed us to study the inflammation associated with LPS injection without any additional effects overlaid by the process of injection. In addition, this method also utilized an NF-&kappa;B luciferase reporter transgenic mouse and bioluminescent imaging technology to visually and quantitatively show increased NF-&kappa;B signaling within the LPS-injected gland4.
These methods are of interest to researchers of many disciplines who wish to model disease within the lactating mammary gland, as ultimately, the technique described here could be utilized for injection of a number of substances, and is not limited to only LPS.

Described here is a technique in which lipopolysaccharide is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple to simulate mastitis, a condition commonly caused by bacterial infection. Lipopolysaccharide injection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse.

유선염의 마우스 모델로 LPS의 Intraductal 주입 : 신호는 NF-κB 리포터 트렌스 제닉을 통해 시각화

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for personalized medicine after stratification, explaining the current interest in developing a reproducible and low-cost xenotransplant model for this disease. The chick chorioallantoic membrane is a natural immunodeficient host capable of sustaining grafted tissues and cells without species-specific restrictions. In addition, it is easily accessed, manipulated and imaged using optical and fluorescence stereomicroscopy. Histology further allows detailed analysis of heterotypic cellular interactions.
This protocol describes in detail the in ovo grafting of the chorioallantoic membrane with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines (Saos-2 and SW1353). The chick survival rates are up to 75%. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior. For localized grafting of single cell suspensions, ECM gel provides significant advantages over inert containment materials. The Ki67 proliferation index is related to the distance of the cells from the surface of the CAM and the duration of application on the CAM, the latter determining a time frame for the addition of therapeutic products.

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The in ovo chorioallantoic membrane (CAM) is grafted with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior.

<em&gt; OVO에서</em육종을위한 Xenograftmodel으로&gt; CAM-분석

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

마우스의 각막 신생 혈관의 알칼리 화상 상해 모델

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

같은 뇌 Microslices의 흥분 독성 자극<em&gt; 체외</em&gt; 스트로크의 모델

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

레이저에 의한 맥락막 신생 혈관에 대한 마우스 모델

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

Tachycardia-Induced Cardiomyopathy As a Chronic Heart Failure Model in Swine

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment methods. Here, we present such a model by tachycardia-induced cardiomyopathy, which can be produced by rapid cardiac pacing in swine.
A single pacing lead is introduced transvenously into fully anaesthetized healthy swine, to the apex of the right ventricle, and fixated. Its other end is then tunneled dorsally to the paravertebral region. There, it is connected to an in-house modified heart pacemaker unit that is then implanted in a subcutaneous pocket. 
After 4 - 8 weeks of rapid ventricular pacing at rates of 200 - 240 beats/min, physical examination revealed signs of severe heart failure - tachypnea, spontaneous sinus tachycardia, and fatigue. Echocardiography and X-ray showed dilation of all heart chambers, effusions, and severe systolic dysfunction. These findings correspond well to decompensated dilated cardiomyopathy and are also preserved after the cessation of pacing.
This model of tachycardia-induced cardiomyopathy can be used for studying the pathophysiology of progressive chronic heart failure, especially hemodynamic changes caused by new treatment modalities like mechanical circulatory supports. This methodology is easy to perform and the results are robust and reproducible.

Here, we present a protocol to produce tachycardia-induced cardiomyopathy in swine. This model represents a potent way to study the hemodynamics of progressive chronic heart failure and the effects of applied treatment.

돼지에서 만성 심장 마비 모델로 tachycardia 유발 심근

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...