샘플 컬렉션,에 디스 Klobetz-Rassam FCM의 분석에 대 한 지원에 대 한 Sabine 제이콥스 감사 PD 박사 중견 기업 수 의사. habil입니다. 통계 분석을 위한 Roswitha Merle 그리고 Wiebke Gentner 원고를 교정에 대 한. 연구의 일부인 베를린-브란덴부르크 연구 플랫폼 BB3R (www.bb3r.de)와 독일 연방 교육부의 연구에 의해 투자 되었다 (허가 번호: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).

학문과 독일 동물 복지 행위에 의해 규정 하는 지침에 따라 수행 했다 베를린 국가 기관에 의해 승인 되었다 ("Landesamt 위한 Gesundheit und Soziales", 허가 번호: G0053/15).
참고:이 프로토콜의 주요 목적은 glucocorticoid metabolites에 반복 된 마 취의 효과 조사 했다. 샘플 크기를 계산 하는 사용 되는 동물의 수를 결정 하기 위해 수행 되었다: n ≥ 2 × (s/μ1-μ2)2 × (zα +βz)2. μ1-μ2 는 전력 및 샘플 크기 계산 만들어집니다 모집단 평균 차이 (α = 5%, β = 80%); zα = 1.96 및 zβ = 0.84는 표준 정규 분포의 quantiles. 그림 1 에서는이 프로토콜의 타임 라인을 보여 줍니다. 매개 변수는 프로토콜의 제어 수준 차이 보여줍니다, 동물을 밀접 하 게 모니터링 해야 하 고 적당 한 기간 후에 다시 매개 변수를 측정 한다. 예를 들어 특성 불안 관련 행동을 증가 하는 경우이 동작이 테스트 해야 다시 1 주일 후, 전체 복구까지 기간을 결정할 수 있도록. 시간 포인트 및이 프로토콜에 정의 된 다른 프로시저와 함께 사용 하기 위해 적용할 수 있습니다. 시간 포인트를 변경할 때 프로토콜에 설명 된 대로 habituation 기간 유지 되어야 한다. 마우스의 동작에 영향을 줄 수 있는 요소를 줄이기 위해 마우스의 정상적인 동작을 방해 하지 않는 테스트 후 더 조작 해야 하는 테스트를 실시 한다. 그림 2 에 요약 점수 시트를 사용 하 여 프로토콜의 모든 테스트 요약 되어 있습니다. 그림 3 테스트 결과 해석 하는 방법에 대 한 개요를 주는 웰빙, 등급의 단순화 된 스케일을 제공 합니다.
1. 실험에 의해 처리를 마우스 habituating
<ol><li>그들은 다른 시설 또는 공급 업체에서 받은 후 적어도 2 주 동안 동물 시설에 길 들을 마우스를 허용 합니다.</li>
	<li>그룹에는 마우스를 집 고 12:12 h의 빛: 다크 사이클에 표준 조건 (실내 온도 22 ± 2 ° C, 상대습도 55 ± 10%)에서 그들을 유지 합니다.</li>
	<li>표준 농축으로 터널 및 면 nestlets와 모든 그룹을 제공 하 고 음식을 제공 광고 libitum물.</li>
	<li>터널 / 컵12테스트 전에 일주일 이상 처리 모든 쥐를 길 들. 참고: 스트레스 또는 불안, 차례로 웰빙에 영향을 미치는 또한이 프로토콜12의 결과에 영향을가지고 유도 수 쥐 꼬리 따기.</li>
</ol>2. 행동 시험장 및 기구 준비
참고: 테스트를 위해, 이상적으로 동물 지켜진다 룸 근처 별도 룸을 제공 합니다. 절차를 수행 하기 전에 테스트 룸 적어도 60 분에 자신의 홈 새에 쥐를 전송 합니다. 만약에 가능 하다 면, 절차를 실시 하는 동일한 테스트 룸에서이 프로토콜의 모든 테스트를 수행 합니다.
<ol><li>내 행동8 을 테스트 하 고 MGS13 (그림 4)에 사용 하기 위해 사진을 찍고 관찰 케이지를 준비 합니다.<ol>
<li>유리 상자를 사용 하 여 약 220 m m × 290 m m의 390 m m의 높이.</li>
		<li>침구 물자의 대략 0.5 cm이 상자의 바닥을 커버.</li>
		<li>새로운 환경으로 인 한 고통을 줄이기 위해 새로운 침구 소재 위에 홈 장에서 사용된 침구 물자의 피해 라.</li>
		<li>음식, 다이어트, 그리고 물으로 일반적으로 제공 되는 동일한 종류를 제공 합니다. 참고: 경우, 사용 물 병, 쥐 소재 침구와 물 그릇을 채울 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>감 금 소 준비 (III 입력: 420 mm × 260 × 150 m m)는 마우스는 개별적으로 보관 24 시간 관찰 기간에 대 한 (그림 5). 참고: 개별 주택 기간을 최소화 하기 위해이 기간 동안 동작, 홈 케이지 활동, 음식 섭취 및 배설물 corticosterone 대사 산물 (FCM)를 구축 하는 둥지에 대 한 데이터를 수집 합니다.<ol>
<li>장소는 고통을 줄이기 위해 케이지 (약 0.5 c m 깊이) 및 분산형 새로운 소재, 위에 홈 장에서 대변 없이 사용된 침구 물자의 자료를 새로운 침구.</li>
		<li>환경 농축 유일한 (참조 자료의 테이블)14으로 정의 된 무게의 표준화 된 평방 면 nestlet을 제공 합니다. 참고: 상업 nestlets 무게가 달라질 수 있습니다. 따라서, 우리는 집사에 의해 설명 하는 nestlet의 무게를 수정 하 고 2.7 g14대신 2.0 g를 사용.</li>
		<li>홈 케이지 활동을 측정 하는 적외선 센서를 사용 하는 경우는 케이지 상단 적외선 센서를 탑재 ( 재료의 표참조).</li>
		<li>음식, 다이어트로 일반적으로 제공 되는 동일한 종류를 제공 하 고 광고 libitum물.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모
참고:는 MGS 3 시간 지점에서 관측 장에 촬영에 대 한 사진: (i) 2 일전 기록 기준선 MGS 수준, 후 절차, (ii) 30 분 및 (iii) 150 분 후에 절차에 절차. 웰빙은 장애인, 점수는 MGS에 증가 합니다. 증가 MGS 점수는 아직도 150 분 후, 관찰 하는 경우 나중 단계에서 추가 사진 걸릴.
<ol><li>높은-정의 카메라를 사용 하 여 사진에 대 한.</li>
	<li>부드럽게 관측으로 마우스를 이동 하 고 마우스를 적어도 30 분 동안 새로운 환경에 길 들을 허용 합니다.</li>
	<li>지속적으로 대 한 걸릴 각 시간에 대 한 30-40 사진 포인트 1-2 분 이내.</li>
	<li>날카로운 정면 또는 측면 사진 선택 하 고 흐릿한 사진이 나 정면 또는 측면 보기 보다 다른 관점에서 마우스 얼굴을 보여 주는 사진 삭제 모든 사진을 정렬 합니다.</li>
	<li>임의로 각 시간 지점에서 (즉, 프로시저, 프로시저, 후 30 분 및 절차 후 150 분 2 일전) 각 마우스에 대 한 하나의 사진을 선택 합니다.</li>
	<li>시체 위치 표시13이 아닌 마우스의 머리만 표시 하 사진 자르기.</li>
	<li>각 사진에 대 한 하나의 시트 스프레드시트 파일을 만들고 각 시트를 MGS의 5 명의 얼굴 작업 단위를 포함 하는 테이블을 추가 합니다. 참고: 기준선 사진 뿐만 아니라 사진 post 프로시저 파일 포함 되어 있습니다.</li>
	<li>시트의 순서를 무작위.</li>
	<li>3 명의 독립적인 사람, 이전 MGS 랭 포드 외 에 의해 개발 된를 사용 하 고 그들이 점수 3 점 척도 사용 하 여 얼굴 작업 단위를 훈련 했다 컴퓨터 화면에 파일을 제시 (0 = 미제공, 1 = 알맞게 제시, 2 = 분명히 현재). 참고: 다음 매개 변수13기반 점수: 궤도 강화 ("축소의 궤도, 단단히 닫힌된 눈 꺼 풀 또는 눈 짜기"); 코 돌출 ("둥근 코의 다리에서 보이는 피부의 확장"); 뺨 볼록한 ("볼록 모양 뺨 근육의"); 귀 위치 ("귀 떨어져 뽑아 다시 그들의 초기 위치에서 또는 수직 능선 귀 다시 그려지기의 팁 때문에 그 형태를 갖춘"); 수염 변경 ("그들의 기준선에서 수염의 움직임 중 하나 위치 뒤로, 얼굴 또는 앞으로, 마치 끝;에 서 서 수염 수 있습니다 또한 덩어리 같이 ").</li>
	<li>(랭 포드 외. 에서 적응 하는 다음과 같이 점수를 분석 13)입니다.<ol>
<li>MGS 점수를 생성 하기 위해 각 사진에 대 한 모든 얼굴 작업 단위 평균. 참고: 경우 얼굴 행동 단위 중 하나 득점 하지 수, 나머지 얼굴 작업 단위 평균.</li>
		<li>초기 사진 MGS 차이 점수 각 마우스에 대 한 사진 게시 절차에 대 한 평균에서 평균을 뺍니다.</li>
		<li>명 (비패라메트릭 테스트 관련된 샘플에 대 한) MGS 차이 점수 차이 대 한 테스트. 참고: 경우에 중요 한 차이 (p < 0.05), 모든 사진의 점수 또는 점수 몇 사진 사람 사이 다른 지 여부를 결정 합니다. 후 자가 사실이 라면,이 사진의 점수를 반복 합니다. 그렇지 않으면, 사람 MGS 훈련을 반복 하 고 다시 사진 점수 한다.</li>
		<li>평균 MGS 차이 점수에서에서 얻은 각 마우스에 대 한 다른 득점 경우 모든 사람의 결과 크게 차이가 없습니다.</li>
		<li>MGS 차이 점수 연구 그룹 간의 평균을 비교 하는 비패라메트릭 통계 테스트를 사용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 내 행동8,,1516
<ol><li>일반적으로 표준 불투명 플라스틱 물 병 (250 mL, 150 m m 길이, 55mm 직경, 병 목의 45 m m 직경)8에서 다이어트로 제공 140 ± 2g 음식 펠 릿을 배치 하 여 버 로우를 준비 합니다. 참고: 마우스 선호 넓은 튜브, 버 로우 68 m m의 직경을 가진 사용할 수 있습니다 디 콘16에 의해 설명 된 대로.</li>
	<li>장소 뚫으 집 안의 음식 펠 릿 순응에 대 한 일 절차 전에 가득합니다. 참고: 장에 일반 음식 분배 단위 비운 하지 해야 하지만 또한 있어야 음식 펠 릿으로 채워진 마우스 사용이.</li>
	<li>두 번, 프로시저 (기준선); 2 일전 테스트 수행 또한 마지막 30 분 게시물 절차를 실시 합니다.<ol>
<li>30 분 이상 관찰 케이지는 MGS에 대 한 사진을 찍은 길 들 마우스를 하자.</li>
		<li>장소는 플라스틱 물 병 음식 펠 릿 관찰 감 금 소의 뒤 벽에 평행으로 가득합니다.</li>
		<li>음식 펠 릿 (g)가 2 시간 후는 굴에 남아 있는 무게.</li>
	</ol>
</li>
	<li>초기 중량 (%)를 기준으로 마우스에 의해 뚫 으에서 제거 하는 음식 펠 릿의 무게를 계산 합니다.</li>
</ol>5. 24 시간 관찰 기간
참고: 마우스 2.2에 설명 된 대로 개별적으로 보관 됩니다. (그림 5), 24 h 동안 식품을 측정 하기 위해 섭취, 홈 케이지 활동, 둥지 건물 행동과 FCM 수준. 24 시간 관찰 두번 일어난다: (i) 2 일전 절차 초기 레벨, (ii) 절차의 날에.
<ol><li>
음식 섭취 량
	<ol>
<li>몸 무게 (점수 시트의 일부)에 어떤 변화를 평가 하기 위해 정기적으로 (예: 마 취, 마 취, 마 취 후에 2 일 및 마 취 후 주간 직전 2 일), 쥐를 무게. 참고: 체중 체중의 그램 당 음식 섭취 량을 계산 해야 합니다. 물 섭취 량 또한 24 h 관찰 기간 동안 측정할 수 있습니다. 음식 섭취 량이 감소 하는 경우 복지 장애가 있을 수 있습니다.</li>
		<li>케이지 (약 100 g)의 음식 단위에 제공 된 표준 음식 다이어트 (그램)의 초기 무게를 결정 합니다.</li>
		<li>24 시간 관찰 기간의 끝에 표준 음식 다이어트의 무게를 결정 합니다.</li>
		<li>신중 하 게 음식 흘림에 대 한 식품 단위 아래 케이지 측면을 검사 하 고 식품 단위에 남아 있는 음식 펠 릿의 무게에 발견 어떤 여분의 음식 펠 릿을 추가.</li>
		<li>단위 체중 당 음식 섭취 량을 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
홈 케이지 활동 참고: 적외선 센서를 사용 하 여 다음 지침 참조 ( 재료의 표참조), 하지만 홈 케이지 활동 또한 대체 프로그램으로 평가 될 수 있다. 제어 수준 (예: hypoactivity, 과다)에서 홈 케이지 활동의 편차 장애인된 복지의 징조 수 있습니다.<ol>
<li>프로그램을 시작 합니다.</li>
		<li>1 분의 샘플 간격 및 충 동 24 h에 대 한 매 순간 기록 됩니다 의미 24 h의 수집 시간을 선택 합니다. 참고: 경우는 실험 후 녹화 시작 여러 번 방을 입력만에서 데이터를 사용할 때 마우스 방해 되지 않은 기간 (즉, 어두운 기간 동안).</li>
		<li>자극의 10 분 간격으로 정리해.</li>
		<li>시간 곡선 (전류 × 분) 아래 영역을 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
둥지 빌딩 동작 참고: 복잡 하 고 높은 둥지 복지의 지표로 사용할 수 있습니다.<ol>
<li>배치 평방 면 nestlet ( 재료의 표참조) 무게로 정의 (예: 2.0 g) 감 금 소의 한가운데에.</li>
		<li>다음 아침, 약 2 시간 후에 표시등이 켜 디 콘14 에 따라 5-포인트 규모 (아래 참조)에 둥지를 점수. Nestlet 초기 체중의 5% 이상 하는 untorn nestlet 조각 무게. 둥지14 다음과 같이 점수<ol>
<li>그대로 nestlet의 90% 경우에 "1"의 점수를 할당 합니다.</li>
			<li>그것은 50-90% 그대로 하는 경우 "2"의 점수를 할당 합니다.</li>
			<li>할당 점수 "3"는 nestlet의 50-90% 났습니다.</li>
			<li>할당 "4" 90% 이상이 났습니다, 둥지는 평평 하 고, 그리고 그것의 둘레의 50% 미만 웅크리고 마우스 몸 높이 보다 더 높은 점수.</li>
			<li>할당 "5" 이상 90 %nestlet 났습니다 둥지 높은, 그리고 그것의 둘레의 50% 이상은 위로 컬된 마우스의 몸 높이 보다 더 높은 점수.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
지저분한 Corticosterone 대사 산물 참고: 컨트롤 수준 이상의 FCM의 증가 24 h postanesthetic 기간 동안 급성 스트레스 수준을 반영합니다.<ol>
<li>24 시간 관찰 기간의 끝에 집게를 사용 하 여 케이지에서 모든 건조 분 변 알갱이 수집 하 고 젖은 펠 릿 소변으로 오염 제거.</li>
		<li>황금 외 에 FCM를 추출 17, 다음과 같이입니다.<ol>
<li>60-70 ° C의 온도에서 건조 분 변 샘플</li>
			<li>박격포를 사용 하 여 배설물 샘플 균질</li>
			<li>멀티 소용돌이에 30 분 동안 원심 분리기 튜브에서 80% 메탄올의 1 mL와 0.05 g의 약 수를 흔들어.</li>
			<li>샘플 15 분 동안 2500 x g에서 원심</li>
			<li>다른 분리기 관으로 상쾌한의 0.5 mL를 플라스틱.</li>
			<li>-18 ° C의 최소한 배설물 샘플 (및 추출 물)을 저장</li>
			<li>FCM19 5α-pregnane-3b,11b,21-triol-20-one 효소 immunoassay (EIA)18,또는 다른 완전히 유효한 EIA를 사용 하 여 분석 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>기준선 FCM 농도 기준으로 FCM 농도의 백분율 변화를 계산 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. 무료 탐구 패러다임
<ol><li>랙에서 홈 케이지 하 고 24 시간 관찰 기간의 끝에 테이블 표면에 놓습니다.</li>
	<li>감 금 소의 더 긴 쪽으로 45 °의 각도에서 장에 gridded 케이지 상단 (없이 음식 또는 물 병)를 배치 합니다. 참고: 마우스에 대 한 은신처 역할 둥지를 파괴 하지 않습니다 하지만 둥지 위에 케이지 상단 대각선 배치.</li>
	<li>모니터 또는 비디오 기록 약 1.5 m의 거리에서 10 분 동안 쥐.<ol>
<li>타이머를 시작 합니다.</li>
		<li>항상 때 마우스 (케이지 상단에 모든 4 개의 발)와 케이지 위에 올라 또는 케이지 상단 (케이지 바닥에 하나 이상의 발)와 note 참고: 일부 마우스 케이지 상단을 등반 하 고 떠나 감 금 소의 가장자리를 따라 주문 수 있습니다. 일부 마우스는 또한 케이지 상단에 후면. 쥐 감 금 소 위에 아직도 마치 이러한 경우를 처리 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>버트 외. 다음 매개 변수를 평가 20.<ol>
<li>대기 시간 (초)에 첫번째 탐험을 분석 합니다.</li>
		<li>탐험의 수를 분석 합니다.</li>
		<li>탐험의 총 기간 (초)을 분석 합니다. 참고: 첫 번째 탐험, 탐험, 낮은 수 및 탐사의 낮은 총 기간에 높은 대기 시간이 높은 특성 불안 수준을 나타낼 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+individual+mouse+activity+in+group+housed+animals+of+different+inbred+strains+using+a+novel+automated+home+cage+analysis+system.">Analysis of individual mouse activity in group housed animals of different inbred strains using a novel automated home cage analysis system.</a> Front Behav Neurosci. 10 (106), (2016).</li><li>Saibaba, P., Sales, G. D., Stodulski, G., Hau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behaviour+of+rats+in+their+home+cages:+daytime+variations+and+effects+of+routine+husbandry+procedures+analysed+by+time+sampling+techniques.">Behaviour of rats in their home cages: daytime variations and effects of routine husbandry procedures analysed by time sampling techniques.</a> Lab Anim. 30 (1), 13-21 (1996).</li></ol>

저자는 공개 없다.

프로토콜은 단일 마 취 또는 반복된 isoflurane 마 취를 받은 C57BL/6JRj 쥐의 평가에 원래 개발 되었다. 결과 확인 고급 동작을 테스트 뿐만 아니라 다른 조치 (예: 자유 탐구 패러다임, MGS, 내 음식 섭취 량) 복지를 평가 하기 위한 중요 한 방법 이었다. 반복된 isoflurane 마 취 특성 불안 관련 행동, MGS, 내 행동에 단기 효과 발생합니다. 또한, 반복된 isoflurane 마 취 영향 음식 섭취10등장.
무료 답사 패러다임 표시 된 감소 된 예비 동작 하 고, 결과적으로, 특성 불안 상부 취 반복 했다 쥐에서와 비교 된 마우스 한 번만 취 컨트롤. 그러나, 모든 그룹의 쥐 gridded 케이지 톱10,20탐험. 불안 관련 문제를 조사할 때 그것은 특성 및 상태 불안21,22사이 구별 하는 것이 중요. 낯선 환경에서 마우스를 배치 상태 불안을 유도 합니다. 대조적으로, 자유 탐구 패러다임 자신의 집 새에 동물 있으며, 따라서, 특성 불안을 조사.
마우스 후 반복 된 마 취 감소 모터 활동에 의해 설명 될 수 없는 가운데 예비 동작에 감소. 어두운 기간 동안 홈 케이지 활동 연구 그룹 간에 크게 다 하지 않았다. 이 마우스 무료 탐구 패러다임 테스트를 수행 하는 경우 마 취에서 회복 이미 물리적으로 했다 나타냅니다.
MGS는 실제로 통증을 평가 하기 위해 개발 되었다 그러나 얼굴 표정 또한 스트레스와 긍정적인 감정을13,23으로 변경 되는 증거가 있다. 마우스 얼굴의 사진 표시 모두 단일 및 반복 isoflurane 마 취 즉시 마 취 후 기간에 단기에 점수는 MGS에 증가 했다. MGS 차이 점수 1 남아, 스트레스 수준의 가벼운10것으로 나타났다. 밀러 그 외 여러분 의 최근 관측 동의 결과 24 , 25 레벨 150 분을 제어를 반환 하는 마우스 마 취10게시물을 보여주었다.
내과 둥지 빌딩 동작 같은 고급 동작 종의 고 복지7 과 쥐26에 좋은 일반적인 건강에 대 한 지표로 사용할 수 있습니다. 그들의 모든 필수 요구 충족 하는 경우 마우스 럭셔리 동작 표시 합니다. 고급 동작을 복지 감소 있다면 먼저 장애인된5,7. 이전 연구 내와 둥지 건물 통증과 고통을6,8, 장애인 수 있습니다 하지만 또한 증거가 hippocampal 병 변 이러한 두 가지 동작이15,27 영향을 미칠 수 있다 , 28 , 29 , 30 , 31.
고급 동작 (동작 내) 초기 후 마 취 기간에서 하 고 다음 날 (둥지 빌딩 동작)의 아침에 의해 조사 되었다. 내는 행동 집사 외. 에서 개발 하 고 Jirkof 그 외 여러분 에 의해 채택에 대 한 테스트 순응 (개별 주택 대신 그룹 주택) 및 행동 측정 (24 h 대신만 2 시간)의 기간 수정 8 , 15 , 16.
그것은 주목할 만한 마 취 감소 내 행동을 반복 하는 웰빙의 장애 즉시 마 취10, Jirkof 그 외 여러분 에 의해 알려졌다 또한이 게시 했습니다 제안 8. 하지만 때 마우스 마 취에서 회복 하기 위해 더 많은 시간을 했다, 다음 날 아침에 그들은 건축 했다 높고 복잡 한 둥지 복지10을 경험 했다. 이러한 결과는 이전 시간32둥지 득점 이전 보고서에서 다. 따라서, 그것은 프로토콜을 이전 시간에에서 둥지를 점수 유용할 수 있습니다. 그러나, 둥지 빌딩 동작의 circadian 리듬 여전히 고려 되어야 한다, 쥐 어두운 단계32의 끝에 그들의 둥지를 준비 하는 경향이.
음식 섭취 량 소폭 반복 된 마 취 후 1 일 감소 했다 하지만 그것은 1 주일 후 증가 했다. 으로 마우스 몸 무게를 잃지 않 았 어 (Hohlbaum 외. 참조 10) 보상 메커니즘의 일종 발생 될 수 있습니다, 하 고 음식 섭취와 관련 하 여 복지의 손상 가벼운10으로 분류 한다. 음식 섭취는 수술 후 고통, 복지 및 수술 후 구역 질26 , 수술 후 스트레스27에 의해 손상 될 수 있습니다 쥐의 식욕에 대 한 통찰력을 제공 합니다.
FCM는 안정적으로 쥐33,,3435에 스트레스를 나타냅니다. 피크 FCM 농도 일반적으로 8-10 h는 스트레스 후에 발생 하지만18장 통과 시간 따라 달라 집니다. 따라서,이 프로토콜에 포함 되어 홈 케이지 활동 모니터링 결정적 이다. Circadian 리듬 효과 배설된 FCM18에 그것은 24 h. FCM 농도 반사 급성 스트레스를 24 h 후 마 취 기간 동안의 기간 동안 분 변 샘플을 수집 하는 것이 좋습니다. FCM 레벨 개인에 따라 다릅니다, 기준선을 기준으로 FCM 레벨의 백분율 변화 계산 했다. 현재 수 사의 FCM 결과 마 취에의 한 경험 없으며 반복 된 마 취 크게 hypothalamic-뇌 하 수 체-부 신 (HPA) 축 활동10증가 표시.
모두 모두, 결과 반복 isoflurane 마 취 단기 가벼운 조 난 발생과 복지 isoflurane 마 취10의 단일 경험 했던 것 보다 약간 더 이른 postanesthetic 기간에서 밝혔다.
복지를 평가 하기 위해 프로토콜 추가 조 난 동물에 부과 하지 해야 합니다. 현재의 프로토콜의 한계는 플라즈마 corticosterone 레벨36증가 알려져 24 시간 관찰 기간 동안 개별 주택 포함 이다. 그러나, 개별 주택 홈 케이지 활동, 음식 섭취, 둥지 빌딩 동작 및 FCM 레벨 개인에 대 한 유효한 데이터를 수집할 필요가 있다. 개별 주택 기간 그 4 개의 매개 변수 (즉, 24 h 관찰 기간) 동시에 조사 함으로써 최소화 했다. 결과 개별 주택에 의해 좌우 되지 않도록 하려면 컨트롤 마우스 같은 테스트를 받았다 하 고 그들의 결과 고려 했다. 메서드 그룹 주거 환경에 이러한 매개 변수를 측정할 수 있다면, 그들은 사용 (예:홈 케이지 활동37 와 음식 섭취 량에 대 한 자동된 홈 케이지 분석 시스템) 이어야 한다. 그러나, 자동화 된 홈 케이지 분석 시스템 추가 장비를 사용할 수 없습니다 필요 합니다. 연구 개인 대신 동물의 그룹에 초점을 맞추고, 홈 케이지 활동, 음식 섭취, 둥지 빌딩 동작, 그리고 FCM 수준 또한 쥐의 그룹에 대 한 평가 될 수 있습니다. 그들은 구별 될 수 있도록 눈에 띄게 표시 하 쥐만 필요 무료 탐구 패러다임 마찬가지 다. 그룹에 복지를 감소 하는 경우 그룹에 있는 모든 쥐를 신중 하 게 확인 한다 (를 사용 하 여 점수 시트 및 임상 시험) 마우스 또는 마우스 식별 하 우려. 그룹 수준에서 더 관측 그룹 값의 감도 결정 하기 위해 필요 합니다.
구체화, 관련이 프로토콜에 맞게 고 쥐의 복지에 특정 절차의 영향을 평가 하기 위해 지속적인 연구에 통합 될 수 있습니다. 특정 절차 및 연구 설계에 따라이 프로토콜에서 가장 적합 한 테스트를 선택 합니다. 여기, 내과 둥지 건물 테스트, MGS, 무료 탐구 패러다임 및 음식 섭취 량의 측정 특히 도움이 될 것 처럼 보였다. 마우스의 동작 circadian 리듬38다음과 같이, 그것은 정의 시간 지점에서 모든 그룹의 쥐에 행동 테스트를 수행 하는 것이 좋습니다. 마우스는38오후에서 보다 아침에 더 활동적이 다. 그러나, 연구 설계는 아침에 테스트를 위해 허용 하지 않는 경우 다른 시간에 테스트 할 수 있습니다. 그것은 또한 모든 그룹에 대 한 동일한 시간 포인트에 각 단일 테스트를 수행 하는 하는 것이 중요입니다. 그렇지 않으면, 매개 변수의 circadian 리듬의 영향 내부-또는 intergroup 차이가 발생할 수 있습니다. 또한, 컨트롤 마우스 치료 쥐 및 제어 마우스에서 결과 비교할 수 있도록 연구에 포함 되어야 합니다. 컨트롤 마우스 치료 쥐 같은 시간 지점에서 테스트 되어야 한다. 프로토콜 보여주는 그 복지 장애인, 경우 절차 세련 된, 그리고 프로토콜 반복 합니다. 이 이렇게 절차를 수정 하기 위해 노력 했다 효과적인 여부를 표시할 수 있습니다.
현재 프로토콜 심각도 프로시저에 의해 발생의 정도 추정 하는 일반적인 보조 될 수 있습니다. 따라서, 과학 및 동물-중심 수준에 절차의 엄격을 분류 도움이 됩니다. 그러나, 프로토콜 가벼운, 중간, 또는 심각한 절차를 분류 하기 위한 규모를 제공 하지 않습니다. 프로시저의 심각도 분류, 그것은 예제에 부속 서 VIII의 EU 지침 2010/63을 참조 하는 데 필요한.
결론적으로, 현재 프로토콜 쥐에 과학, 동물 중심의 방식으로 절차는 전신 마 취는 웰빙의 체계적인 평가 지원 합니다.

EU 지침 2010/631 규정 Russel과 Burch2 를 개발한 3R 원칙 (대체, 감소, 구체화) 동물 실험은 필요 때마다 적용 하는 것입니다. EU 지침의 궁극적인 목표는 모든 동물 실험, 밖으로 위상 하지만 지시문 인정, 시간이 되 고, 일부 동물 실험은 여전히 필요 인간과 동물 건강을 보호 하는 연구를 수행. 따라서, 동물 실험은 어떤 다른 방법으로 바꿀 수 없습니다, 경우는 최소한 실험실 동물의 신뢰할 수 있는 결과 얻을 하는 데 사용 될 것 이다. 또한, 고통, 고통, 및 실험 절차를 동반 하는 조 난의 양은 적절 한 수정 조치를 사용 하 여 최소화 합니다. EU 지침 2010/63 규정 한 절차의 심각도 prospectively 비 복구, 가벼운, 중간, 또는 심한1으로 분류 되어야 합니다. 심각도 분류에 사건-의해-사건을 기준으로 결정이 주어진된 절차의 심각도 평가를 과학적으로 소리 도구를가지고 중요 합니다.
모 튼과 그리피스3 에 의해 제안 된로 점수 시트 웰빙4에 부정적인 영향을 포함 하 여 정상 상태에서 어떤 편차를 감지에 필수적인 도구입니다. 점수 시트를 사용 하 회 결정 고통, 고통, 그리고 실험으로 인 한 조 난 및 개별 동물 (예를 들어, 몸 무게, 모피, 걸음 걸이)의 물리적 상태에 보이는 변화에 초점. 별관 8 세의 EU 지침 2010/63 각 심각도 카테고리의 예를 제공 합니다, 하지만 과학적으로 사용 하 여 주어진된 프로시저의 심각의 정도 추정 하 연구원은 아직도 부족 도구 데이터를 기반으로 합니다.
부정적인 복지를 보여주는 지표의 부재; 동물의 상태를 확인 하는 유일한 방법은 아니다. 긍정적인 복지를 가리키는 지표의 존재 또한 중요 한5,6,,78이다. 예를 들어 동물 내 같은 고급 동작을 표시 하 고 그들의 모든 필수 요구 충족 하는 경우에 건물 동작을 중첩. 고급 동작을 복지 감소 있다면5,7감소 처음. 복지를 평가에 사용 되는 프로토콜 상세 하 고 포괄적인 방식으로9에 웰빙을 평가 하기 위해 물리, 생리/생화학, 및 동물의 심리 상태를 가리키는 지표를 포함 해야 합니다.
세련미의 컨텍스트 내에서 프로토콜은 이러한 요구 사항을 충족 하 고 쥐10의에 전신 마 취와 관련 된 절차의 효과 평가 하기 위해 개발 되었다. 동시에 목표에 주어진된 실험 프로토콜의 쉽게 통합할 수 있도록 추가적인 스트레스를 최소화 했다. 프로토콜 내 행동, 활동, 음식 섭취, 중첩 등 홈 케이지 동작 및 특성 불안 관련 행동을 고려 합니다. 또한, 그것은 포함 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모 (MGS), 및 비-침략 적 분석 corticosterone 대사 산물의 배설물. 과학 고 동물을 중심으로 복지의 평가 촉진 하 고 심각성의 정도의 분류를 지 원하는 복지에 정보를 제공 하는 프로토콜은 설계 되었습니다. 점수 시트, 뿐만 아니라 그것은 절차의 심각도 분류에 대 한 유용한 정보를 제공할 수 있습니다. 프로토콜 수행 하기 쉬운 하 고 광범위 한 장비를 필요로 하지 않습니다, 연구의 결과 영향을 주지 않고 지속적인 실험으로 통합 될 수 있습니다. 주목 해야 한다 그 동물 연구: 보고의 Vivo 실험 (도착) 지침11 동물 실험, 설계, 분석, 개선 및 보고의 목표와 관련 된 모든 연구에서 관찰 될 것 이다.

<table><tbody><tr><td>Isofluran</td><td>CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH</td><td>1214</td><td></td></tr><tr><td>InfraMot - Sensore Units</td><td>TSE Systems</td><td>302015-SENS</td><td></td></tr><tr><td>InfraMot - Control Units</td><td>TSE Systems</td><td>302015-C/16</td><td></td></tr><tr><td>InfraMot - Software</td><td>TSE Systems</td><td>302015-S</td><td></td></tr><tr><td>Nestlet N</td><td>Ancare - Plexx</td><td>NES3600</td><td></td></tr><tr><td>Camera EOS 350D</td><td>Canon</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

systematic assessment of well-being in mice for procedures using general anesthesia

3R 원칙 (대체, 감소, 구체화) 개발 Russel과 뉴욕 생명에 의해, 따라 과학 연구 가능한 동물 실험에 대 한 대안을 사용 해야 합니다. 동물 실험에 대안이 있을 때, 사용 하는 실험실 동물의 총 수는 귀중 한 데이터를 얻는 데 필요한 최소 이어야 한다. 또한, 고통, 고통, 및 실험 절차를 동반 하는 고통을 최소화 하기 위해 적절 한 수정 조치를 적용 합니다. 고통, 고통, 및 조 난의 정도 분류 하는 데 사용 하는 카테고리는 비-복구, 가벼운, 중간, 또는 심한 (EU 지침 2010/63). 확인 하려면 개별 경우에는 카테고리 적용, 과학적으로 소리 도구를 사용 하 여 결정적 이다.
여기 잘이 평가 프로토콜 절차는 전신 마 취는 설계 되었습니다. 프로토콜 내과 복지의 지표로 동작을 구축 하는 둥지 같은 집 케이지 활동, 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모와 럭셔리 동작에 초점을 맞추고. 그것은 또한 불안 관련 행동 특성에 대 한 무료 탐구 패러다임을 사용합니다. 급성 스트레스의 지표로 지저분한 corticosterone metabolites 24 h 후 마 취 기간 동안 측정 된다.
프로토콜은 마우스 따라 전신 마 취의 과학적으로 단단한 정보를 제공 합니다. 그것의 단순 프로토콜 수 있습니다 쉽게 적응 되며 계획 된 연구에서 통합. EU 지침 2010/63에 따라 카테고리에서 조 난을 분류 하는 규모를 제공 하지는 않습니다, 그것은 과학적으로 사운드 데이터를 사용 하 여 프로시저의 심각의 정도 추정 하는 연구를 도울 수 있다. 과학, 동물을 중심으로 복지의 평가 개선할 수 있는 방법을 제공 합니다.

이 프로토콜은 원래 C57BL/6JRj 마우스 isoflurane 마 취에의 한 경험을 다음의 평가를 개발 (일 분 마 취 세션, n = 13 여성) 또는 반복된 isoflurane 마 취 (6 45 분 마 취 세션 3-4 일 마 취 세션, n = 13 여성) 컨트롤 마우스의 비교 (n = 6 여성)10, 아니 마 취를 받은 하지만 같은 조치에 따라 시험. 우리는 isoflurane 마 취와 반복된 isoflurane 마 취의 치료 되지 않는 통제 쥐에 비해 C57BL/6JRj 마우스에의 한 경험의 영향을 평가. 여기, 여성 C57BL/6JRj 마우스의 대표적인 결과, 일부 데이터를 포함 하 여 이전 출판 Hohlbaum 외. 10, 뿐만 아니라 이전 되지 않은 결과 표시 됩니다.
통계 분석
탐험 데이터 분석 및 정상에 대 한 테스트는 각 매개 변수에 대해 수행 했다. (즉, 제어, 단일 isoflurane 마 취, 반복 isoflurane 마 취 그림 전설에 명시 된 대로 해당 테스트를 사용 하 여 분석 되었다 연구 그룹 간의 차이점. 데이터를 만났을 때 정규 분포 가정, 1 방향 배치법 수행 되었다. 비-일반적으로 분산 된 데이터 Kruskal-월리스-테스트 차이 사용 하 여 분석 되었다 p < 0.05에서 중요 한 고려 되었다.
초기 계획 값
수집 절차를 실시 하기 전에 초기 계획 값이 치료 그룹 각각 매개 변수에서 다른 지 여부를 확인 하려면 중요 합니다. 그림 6, 그림 7, 그림 8, 그림 9 및 그림 10에 표시 된 대로 MGS의 기준선 수준 점수 (p = 0.762, Kruskal-월리스-테스트), 내 같은 고급 동작 (p = 0.896, Kruskal-월리스-테스트)와 중첩 (p = 0.723, Kruskal-월리스-테스트), 음식 섭취 량 (p = 0.398, 1 방향 ANOVA), 홈 케이지 활동 (p = 0.208, Kruskal-월리스-테스트) 그룹 사이 크게 차이가 없. 또한, 초기 FCM 농도에 중요 한 차이가 발견 되었다 (대괄호 [ng/50 밀리 그램] 평균, interquartile 범위: 제어: 123.01 (82.70-193.46), 단일 마 취: 118.31 (101.73-153.54), 반복 된 마 취: 129.55 (92.58-139.48)) (p 0.904, Kruskal-월리스-테스트 =). 기준선 수준에 차이가 발생 하는 경우 델타 값을 계산할 수 있습니다.
마우스 얼굴을 찡 그리기 규모
컨트롤 대 상당한 높은 점수 마 취의 단일 경험 후 발견 된 평균 MGS 점수를 비교 하면 (p = 0.001) 마지막 마 취 세션 반복 후 (p = 0.021) 마지막 마 취 (그림 6A) 후 30 분에 발생 . 마지막 마 취 후 150 분 이상 그룹 간의 차이가 있었다 (p = 0.910).
프로토콜에 설명 된 대로 기준선 MGS 점수는 모든 경우에 0 크거나 사실 고려, MGS 차이 점수 계산 했다. 두 단일 마 취 경험 (p = 0.002) 및 반복 된 마 취 (p = 0.008) 마 취 후 30 분에 컨트롤 대 MGS 차이 점수를 증가. 마지막 마 취 후 150 분, 모든 마우스 제어 수준으로 돌아왔다 (p = 0.617) (그림 6B)10.
내는 행동
마 취는 크게 식품의 무게의 비율을 감소 반복 컨트롤 대 굴에서 제거 하는 쥐를 쥐 똥 (p = 0.036, Kruksal-월리스-테스트) (그림 7)10.
둥지 빌딩 동작
마 취, 반복 된 마 취, 그리고 컨트롤의 단일 경험 사이 둥지 점수에 중요 한 차이가 있었다 (p = 0.240, Kruksal-월리스-테스트) (그림 8)10.
음식 섭취 량
마지막 마 취 후 1 일에서 크게 보였다 반복 된 마 취를 받은 했다 쥐 단일 마 취 경험 했다 쥐와 비교 하는 음식 섭취 량 감소 (p = 0.047, 1 방향 ANOVA). 대조적으로, 1 주일 후, 받은 마우스 반복 마 취 컨트롤 보다 훨씬 더 많은 음식 소비 (p = 0.012, 1 방향 ANOVA) 또는 단일 마 취 받은 쥐 (p = 0.001, 1 방향 ANOVA) (그림 9)10.
홈 케이지 활동
마지막 마 취 후 1 일에서 활동 곡선 아래의 영역에 표시 된 어두운 기간 동안 홈 케이지 활동 크게 차이가 없 단일 마 취, 반복 된 마 취, 또는 제어 치료 받은 쥐 들 (p = 0.498, Kruskal-Wallis-Test) (그림 10)10.
무료 답사 패러다임
모든 마우스 탐험 케이지 상단 때 테스트를 실시 했다. 그러나, 마지막 마 취 후 1 일 받은 마우스 반복 마 취 (대괄호 [s] 평균, interquartile 범위: 78.00 (55.00 89.00)) 컨트롤 보다 훨씬 나중에 시간 케이지 상단을 탐험 (31.00 (18.25 42.75); p = 0.009, Kruskal-Wallis-Test)와 단일 마 취 받은 쥐 (27.00 (21.00-45.50); p = 0.001, Kruskal-월리스-테스트), 이전10출판. 매개 변수 총 기간 탐사 (그림 11A) 및 탐험 (그림 11B)의 수는 첫 번째 탐험에 대기 시간에 유사한. 마 취는 크게 제어 대 탐험의 수를 감소 반복 (p = 0.023, Kruskal-월리스-테스트) 및 탐사의 총 기간 (p = 0.032, Kruskal-월리스-테스트) 마지막 마 취 후 1 일에 단일 마 취 대. 8 일 마지막 마 취, 모든 매개 변수, 즉, 첫 번째 탐험에 대기 시간 후에 (제어: 27.50 (13.50-47.25); 단일 마 취: 18.00 (9.50-38.50), 반복 된 마 취: 20.00 (12.50-42.00); p = 0.722, Kruskal-월리스-테스트), 수 탐험 (p = 0.057), 탐험의 기간 총 고 (p = 0.579), 연구 그룹 (그림 11) 사이 더 이상 달랐다.
지저분한 corticosterone 대사 산물
초기 계획 값 획득, 비율 변경 비례를 고려 하기 위해 초기 계산 및 그룹 간의 중요 한 차이가 나타났다 (p = 0.119, Kruskal-월리스-테스트) (그림 12)10.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig1.jpg"> 그림 1 : 프로토콜의 라인 시간. 회색 및 흰색 색된 필드 어둠을 상징 하 고 각각의 하루, 기간 빛. 절차에 따라이 프로토콜 적용할 수 있습니다. "뚫 으에 habituation" 쥐 내 테스트를 실시 수 있습니다 전에 새 장에 그들의 가정, 뚫으로 플라스틱 물병을 사용 하 여 acclimatized 해야 의미 합니다. B, 기준 값; FCM, 지저분한 corticosterone 대사 산물 이 그림 Hohlbaum 그 외 여러분 에서 수정 되었습니다. 10. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig2.jpg"> 그림 2 : 요약 점수 시트. 이 시트는 모든 테스트를 포함 하 고 각 개별 마우스에 대 한 밖으로 채워질 수 있다. 테스트를 실시 하는 경우 날짜 및 시간 추가 되어야 합니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig3.jpg"> 그림 3 : 복지의 등급 비늘. 비늘 에서부터 "복지 손상 되지 않는" (녹색) "손상" (레드) 증진과 익스프레스 단순화 된 방법으로 테스트 결과의 의미. 복지에 대 한 지표에 대 한 지식의이 단계에서 우리 각 테스트, 일반적인 계산 서에 대 한 복지의 등급에 명확한 계산 서를 만들 수 없습니다. MGS, 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모 <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig4.jpg"> 그림 4 : 관찰 케이지. 이 케이지는 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모 (MGS)에 따라 분석 사진을 내는 동작의 테스트에 사용 됩니다. 장의 앞은 분명 고, 쥐의 털 색에 따라 다른 3 개의 벽 한다 색깔 검은색 또는 흰색 생쥐와 대조. 유리 상자의 바닥 홈 장에서 사용된 침구 물자를 포함 하 여 침구 물자의 약 0.5 c m으로 덮여 있다. 표준 음식과 물을 제공 됩니다. 만약에 가능 하다 면, 그릇 보다는 물병 사용 되어야 한다, 때문에 쥐 소재 침구와 그릇을 채울 수 있습니다. 적어도 30 분의 습관 들 임 기간 후 뚫으 추가 됩니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig5.jpg"> 그림 5 : 24 h 관찰 기간. 마우스는 24 h에 대 한 개별적으로 보관 되어 둥지 건물 동작, 홈 케이지 활동, 및 음식 섭취 량을 평가 하 고 지저분한 corticosterone 대사 산물 (FCM)를 측정 하는 분 변 샘플을 수집 하 (유형 III 케이지: 420 mm × 260 × 150 mm; 소재 침구 약 0.5 c m 사용 깊은 위에 흩어져 홈 장에서 소재 침구, 목화 nestlet, 수도 물 및 표준 음식 다이어트 광고 libitum). 적외선 센서는 감 금 소의 정상에 거치 된다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig6.jpg"> 그림 6 : 마우스 얼굴을 찡 그리기 규모 (MGS). 상자 모서리는 25일 , 75일 사분 위 수, 상자 interquartile 범위 (IQR)를 나타냅니다. 수염 1.5 × IQR 보다 더 큰 값을 나타냅니다. 점들은 outliers 1.5-3.0 × IQR 사이의 값을 가진입니다. 컬러 별표는 outliers 3.0 × IQR 보다 큰 값으로. (A) 의미 MGS 점수. (B) 의미 MGS 점수 차이가. p 값 Kruskal-월리스-테스트를 사용 하 여 계산 된: * p < 0.05; * * p < 0.01입니다. 때문에 기술적인 고장 (카메라, 규모), 단일 마 취 그룹에 4 쥐 통계에서 제외 했다. 이 그림 Hohlbaum 그 외 여러분 에서 수정 되었습니다. 10. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig7.jpg"> 그림 7 : 내는 동작. 상자 모서리는 25일 , 75일 사분 위 수, 상자 interquartile 범위 (IQR)를 나타냅니다. 수염 1.5 × IQR 보다 더 큰 값을 나타냅니다. 컬러 별표는 outliers 3.0 × IQR 보다 큰 값으로. p 값 Kruskal-월리스-테스트를 사용 하 여 계산 된: * p < 0.05. 때문에 기술적인 고장 (카메라, 규모), 단일 마 취 그룹에 4 쥐 통계 분석에서 제외 했다. 이 그림 Hohlbaum 그 외 여러분 에서 수정 되었습니다. 10. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig8.jpg"> 그림 8 : 둥지 빌딩 동작. 상자 모서리는 25일 , 75일 사분 위 수, 상자 interquartile 범위 (IQR)를 나타냅니다. 수염 1.5 × IQR 보다 더 큰 값을 나타냅니다. 점들은 outliers 1.5-3.0 × IQR 사이의 값을 가진입니다. p 값 Kruskal-월리스-테스트;를 사용 하 여 계산 된 d, 하루입니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig8large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig9.jpg"> 그림 9 : 음식 섭취 량. 데이터는 평균 ± 표준 편차. p 값 1 방향 배치법 (post hoc Tukey HSD)를 사용 하 여 계산 된: * p < 0.05; * * p < 0.01입니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig9large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig10.jpg"> 그림 10 : 케이지 활동 홈. 상자 모서리는 25일 , 75일 사분 위 수, 상자 interquartile 범위 (IQR)를 나타냅니다. 수염 1.5 × IQR 보다 더 큰 값을 나타냅니다. 점들은 outliers 1.5-3.0 × IQR 사이의 값을 가진입니다. p 값 Kruskal-월리스-테스트를 사용 하 여 계산 된 <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig10large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 11" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig11v2.jpg"> 그림 11 : 무료 탐구 패러다임. 상자 모서리는 25일 , 75일 사분 위 수, 상자 interquartile 범위 (IQR)를 나타냅니다. 수염 1.5 × IQR 보다 더 큰 값을 나타냅니다. 점들은 outliers 1.5-3.0 × IQR 사이의 값을 가진입니다. 컬러 별표는 outliers 3.0 × IQR 보다 큰 값으로. (탐험의 A) 총 기간입니다. (B) 탐험의 수입니다. p 값 Kruskal-월리스-테스트를 사용 하 여 계산 된: * p < 0.05. 이 그림 Hohlbaum 그 외 여러분 에서 수정 되었습니다. 10. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig11v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 12" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57046/57046fig12.jpg"> 그림 12 : 지저분한 corticosterone 대사 산물 (FCM). 상자 모서리는 25일 , 75일 사분 위 수, 상자 interquartile 범위 (IQR)를 나타냅니다. 수염 1.5 × IQR 보다 더 큰 값을 나타냅니다. 컬러 별표는 outliers 3.0 × IQR 보다 큰 값으로. 이전에 2 일 및 1 일 절차를 게시 FCM 수준은 측정 했다. 해당 초기 값을 기준으로 FCM 농도의 백분율 변화 [%] 계산 했다. Kruskal-월리스-테스트를 사용 하 여 데이터를 분석 했다 <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57046/57046fig12large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Systematic Assessment of Well-Being in Mice for Procedures Using General Anesthesia

우리는 전신 마 취를 사용 하 여 프로시저 동안 쥐에 복지를 평가 하기 위해 프로토콜을 개발. 복지의 수준 뿐만 아니라 glucocorticoid 대사 산물 분석 했다 나타내는 행동 매개 변수의 시리즈. 프로토콜은 과학, 동물 중심 방식에서 심각도의 정도 추정 하는 일반적인 보조로 사용할 수 있습니다.

일반 마 취 기계를 사용 하 여 프로시저에 대 한 마우스에 웰빙의 체계적인 평가

In keeping with the 3R Principle (Replacement, Reduction, Refinement) developed by Russel and Burch, scientific research should use alternatives to animal ...

systematic-assessment-well-being-mice-for-procedures-using-general

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Behavior

12.1K 조회수.  Freie Universität Berlin. 우리는 전신 마 취를 사용 하 여 프로시저 동안 쥐에 복지를 평가 하기 위해 프로토콜을 개발. 복지의 수준 뿐만 아니라 glucocorticoid 대사 산물 분석 했다 나타내는 행동 매개 변수의 시리즈. 프로토콜은 과학, 동물 중심 방식에서 심각도의 정도 추정 하는 일반적인 보조로 사용할 수 있습니다.

비디오: Systematic Assessment of Well-Being in Mice for Procedures Using General Anesthesia

Nest Building as an Indicator of Health and Welfare in Laboratory Mice

The minimization and alleviation of suffering has moral and scientific implications. In order to mitigate this negative experience one must be able to identify when an animal is actually in distress. Pain, illness, or distress cannot be managed if unrecognized. Evaluation of pain or illness typically involves the measurement of physiologic and behavioral indicators which are either invasive or not suitable for large scale assessment. The observation of nesting behavior shows promise as the basis of a species appropriate cage-side assessment tool for recognizing distress in mice. Here we demonstrate the utility of nest building behavior in laboratory mice as an ethologically relevant indicator of welfare. The methods presented can be successfully used to identify thermal stressors, aggressive cages, sickness, and pain. Observation of nest building behavior in mouse colonies provides a refinement to health and well-being assessment on a day to day basis.

We demonstrate the utility of nest building behavior in laboratory mice as an indicator of welfare. Nest scoring is a sensitive technique that is altered by temperature, illness, and aggression. The time to integrate into nest test (TINT) is a simple cage-side assessment that can detect postoperative pain.

실험실 쥐의 건강과 복지의 지표로 둥지 건물

The minimization and alleviation of  suffering has moral and scientific implications. In order to mitigate this  negative experience one must be able to ...

연구

행동분석학

Automated, Quantitative Cognitive/Behavioral Screening of Mice: For Genetics, Pharmacology, Animal Cognition and Undergraduate Instruction

We describe a high-throughput, high-volume, fully automated, live-in 24/7 behavioral testing system for assessing the effects of genetic and pharmacological manipulations on basic mechanisms of cognition and learning in mice. A standard polypropylene mouse housing tub is connected through an acrylic tube to a standard commercial mouse test box. The test box has 3 hoppers, 2 of which are connected to pellet feeders. All are internally illuminable with an LED and monitored for head entries by infrared (IR) beams. Mice live in the environment, which eliminates handling during screening. They obtain their food during two or more daily feeding periods by performing in operant (instrumental) and Pavlovian (classical) protocols, for which we have written protocol-control software and quasi-real-time data analysis and graphing software. The data analysis and graphing routines are written in a MATLAB-based language created to simplify greatly the analysis of large time-stamped behavioral and physiological event records and to preserve a full data trail from raw data through all intermediate analyses to the published graphs and statistics within a single data structure. The data-analysis code harvests the data several times a day and subjects it to statistical and graphical analyses, which are automatically stored in the &#34;cloud&#34; and on in-lab computers. Thus, the progress of individual mice is visualized and quantified daily. The data-analysis code talks to the protocol-control code, permitting the automated advance from protocol to protocol of individual subjects. The behavioral protocols implemented are matching, autoshaping, timed hopper-switching, risk assessment in timed hopper-switching, impulsivity measurement, and the circadian anticipation of food availability. Open-source protocol-control and data-analysis code makes the addition of new protocols simple. Eight test environments fit in a 48 in x 24 in x 78 in&#160;cabinet; two such cabinets (16 environments) may be controlled by one computer.

Fully automated system for measuring physiologically meaningful properties of the mechanisms mediating spatial localization, temporal localization, duration, rate&#160;and probability estimation, risk assessment, impulsivity, and the accuracy and precision of memory, in order to assess the effects of genetic and pharmacological manipulations on foundational mechanisms of cognition in mice.

마우스의 자동화, 정량인지 / 행동 검사 : 유전학, 약리학, 동물인지 및 학부 교육을위한

We describe a high-throughput, high-volume, fully automated, live-in 24/7 behavioral testing system for assessing the effects of genetic and ...

Use of the Open Field Maze to Measure Locomotor and Anxiety-like Behavior in Mice

Animal models have proven to be invaluable to researchers trying to answer questions regarding the mechanisms of behavior. The Open Field Maze is one of the most commonly used platforms to measure behaviors in animal models. It is a fast and relatively easy test that provides a variety of behavioral information ranging from general ambulatory ability to data regarding the emotionality of the subject animal. As it relates to rodent models, the procedure allows the study of different strains of mice or rats both laboratory bred and wild-captured. The technique also readily lends itself to the investigation of different pharmacological compounds for anxiolytic or anxiogenic effects. Here, a protocol for use of the open field maze to describe mouse behaviors is detailed and a simple analysis of general locomotor ability and anxiety-related emotional behaviors between two strains of C57BL/6 mice is performed. Briefly, using the described protocol we show Wild Type mice exhibited significantly less anxiety related behaviors than did age-matched Knock Out mice while both strains exhibited similar ambulatory ability.

A protocol is provided to use an Open Field Maze to access general locomotor activity, anxiety and emotionality in a laboratory mouse model.

열기 필드 미로의 사용은 마우스의 운동력과 불안 같은 행동을 측정하기 위해

Animal models have proven to be invaluable to researchers trying to answer questions regarding the mechanisms of behavior. The Open Field Maze is one of ...

Assessment of Social Interaction Behaviors

Social interactions are a fundamental and adaptive component of the biology of numerous species. Social recognition is critical for the structure and stability of the networks and relationships that define societies. For animals, such as mice, recognition of conspecifics may be important for maintaining social hierarchy and for mate choice 1.
A variety of neuropsychiatric disorders are characterized by disruptions in social behavior and social recognition, including depression, autism spectrum disorders, bipolar disorders, obsessive-compulsive disorders, and schizophrenia. Studies of humans as well as animal models (e.g., Drosophila melanogaster, Caenorhabditis elegans, Mus musculus, Rattus norvegicus) have identified genes involved in the regulation of social behavior 2. To assess sociability in animal models, several behavioral tests have been developed (reviewed in 3). Integrative research using animal models and appropriate tests for social behavior may lead to the development of improved treatments for social psychopathologies.
The three-chamber paradigm test known as Crawley's sociability and preference for social novelty protocol has been successfully employed to study social affiliation and social memory in several inbred and mutant mouse lines (e.g. 4-7). The main principle of this test is based on the free choice by a subject mouse to spend time in any of three box's compartments during two experimental sessions, including indirect contact with one or two mice with which it is unfamiliar. To quantitate social tendencies of the experimental mouse, the main tasks are to measure a) the time spent with a novel conspecific and b) preference for a novel vs. a familiar conspecific. Thus, the experimental design of this test allows evaluation of two critical but distinguishable aspects of social behavior, such as social affiliation/motivation, as well as social memory and novelty. "Sociability" in this case is defined as propensity to spend time with another mouse, as compared to time spent alone in an identical but empty chamber 7. "Preference for social novelty" is defined as propensity to spend time with a previously unencountered mouse rather than with a familiar mouse 7. This test provides robust results, which then must be carefully analyzed, interpreted and supported/confirmed by alternative sociability tests. In addition to specific applications, Crawley's sociability test can be included as an important component of general behavioral screen of mutant mice.

Here we describe a detailed protocol for examination of sociability in mice by using Crawley's sociability and preference for social novelty test. We describe the advantages and possible applications for this procedure, including critical details important for correct interpretation of the results.

사회적 상호 작용 동작 평가

Social interactions are a fundamental and adaptive component of the biology of numerous species. Social recognition is critical for the structure and ...

신경과학

Implantation of Radiotelemetry Transmitters Yielding Data on ECG, Heart Rate, Core Body Temperature and Activity in Free-moving Laboratory Mice

The laboratory mouse is the animal species of choice for most biomedical research, in both the academic sphere and the pharmaceutical industry. Mice are a manageable size and relatively easy to house. These factors, together with the availability of a wealth of spontaneous and experimentally induced mutants, make laboratory mice ideally suited to a wide variety of research areas.
In cardiovascular, pharmacological and toxicological research, accurate measurement of parameters relating to the circulatory system of laboratory animals is often required. Determination of heart rate, heart rate variability, and duration of PQ and QT intervals are based on electrocardiogram (ECG) recordings. However, obtaining reliable ECG curves as well as physiological data such as core body temperature in mice can be difficult using conventional measurement techniques, which require connecting sensors and lead wires to a restrained, tethered, or even anaesthetized animal. Data obtained in this fashion must be interpreted with caution, as it is well known that restraining and anesthesia can have a major artifactual influence on physiological parameters1, 2.
Radiotelemetry enables data to be collected from conscious and untethered animals. Measurements can be conducted even in freely moving animals, and without requiring the investigator to be in the proximity of the animal. Thus, known sources of artifacts are avoided, and accurate and reliable measurements are assured. This methodology also reduces interanimal variability, thus reducing the number of animals used, rendering this technology the most humane method of monitoring physiological parameters in laboratory animals3, 4. Constant advancements in data acquisition technology and implant miniaturization mean that it is now possible to record physiological parameters and locomotor activity continuously and in realtime over longer periods such as hours, days or even weeks3, 5.
Here, we describe a surgical technique for implantation of a commercially available telemetry transmitter used for continuous measurements of core body temperature, locomotor activity and biopotential (i.e. onelead ECG), from which heart rate, heart rate variability, and PQ and QT intervals can be established in freeroaming, untethered mice. We also present pre-operative procedures and protocols for post-operative intensive care and pain treatment that improve recovery, well-being and survival rates in implanted mice5, 6.

A surgical technique for implantation of commercially available telemetry transmitters used for continuous measurement of biopotential (one-lead ECG), heart rate, core body temperature and locomotor activity in freely moving mice is shown. Recommendations and protocols for post-operative care and pain relief, improving recovery, well being and survival rate are also presented.

ECG, 심장 박동, 코어 바디 온도 및 자유 이동 실험실 마우스의 활동에 데이터를 항복 Radiotelemetry 송신기의 주입

The laboratory mouse is the animal species of choice for most biomedical research, in both the academic sphere and the pharmaceutical industry. Mice are a ...

의학

A Behavioral Test Battery for the Repeated Assessment of Motor Skills, Mood, and Cognition in Mice

Pharmacological and toxicological studies in neurodegeneration require comprehensive behavioral analysis in mice because motor dysfunctions and dysfunctions in mood and cognition are common and often shared symptoms in neurodegenerative diseases. Shown here is a behavioral test battery for motor, mood, and cognition, which can be repeatedly tested in a longitudinal study. This battery assesses the overall behavioral phenotype in mice by examining each domain of behavior with at least two independent well-accepted tests (i.e., open-field test and rotarod test for motor function, social interaction test, elevated plus maze test, and forced swim test for emotional function, and Morris water maze test and novel object recognition test for cognitive function). Therefore, this sensitive and comprehensive test battery is a powerful tool for the study of behavioral alternation in neurodegeneration.

A comprehensive behavioral test battery of motor skills, mood&#8212;including social interaction, depression, and anxiety&#8212;and cognition is designed for the repeated assessment of neurodegeneration-related behavioral changes in mice.

모터 기술, 분위기, 그리고 쥐에 있는 인식의 반복 된 평가 행동 테스트 배터리

Pharmacological and toxicological studies in neurodegeneration require comprehensive behavioral analysis in mice because motor dysfunctions and ...

A Chronic Immobilization Stress Protocol for Inducing Depression-Like Behavior in Mice

Depression is not yet fully understood, but various causative factors have been reported. Recently, the prevalence of depression has increased. However, therapeutic treatments for depression or research on depression is scarce. Thus, in the present paper, we propose a mouse model of depression induced by movement restriction. Chronic mild stress (CMS) is a well-known technique to induce depressive-like behavior. However, it necessitates a complex procedure consisting of a combination of various mild stresses. In contrast, chronic immobilization stress (CIS) is a readily accessible chronic stress model, modified from a restraint model that induces depressive behavior by restricting movement using a restrainer for a certain period. To evaluate the depressive-like behaviors, the sucrose preference test (SPT), the tail suspension test (TST), and the ELISA assay to measure stress marker corticosterone levels are combined in the present experiment. The described protocols illustrate the induction of CIS and evaluation of the changes in behavior and physiological factors for the validation of depression.

This article provides a simplified and standardized protocol for induction of depressive-like behavior in chronically immobilized mice by using a restrainer. In addition, behavior and physiological techniques to verify induction of depression are explained.

마우스에서 우울증과 같은 행동을 유도하기위한 만성 고정 스트레스 프로토콜

Depression is not yet fully understood, but various causative factors have been reported. Recently, the prevalence of depression has increased. However, ...

Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

One desirable endpoint of general anesthesia is the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is less straightforward than it is in human patients. A widely used behavioral surrogate for hypnosis in rodents is the loss of righting reflex (LORR), or the point at which the animal no longer responds to their innate instinct to avoid the vulnerability of dorsal recumbency. We have developed a system to assess LORR in 24 mice simultaneously while carefully controlling for potential confounds, including temperature fluctuations and varying gas flows. These chambers permit reliable assessment of anesthetic sensitivity as measured by latency to return of the righting reflex (RORR) following a fixed anesthetic exposure. Alternatively, using stepwise increases (or decreases) in anesthetic concentration, the chambers also enable determination of a population's sensitivity to induction (or emergence) as measured by EC50 and Hill slope. Finally, the controlled environmental chambers described here can be adapted for a variety of alternative uses, including inhaled delivery of other drugs, toxicology studies, and simultaneous real-time monitoring of vital signs.

Loss of the righting reflex has long served as a standard behavioral surrogate for unconsciousness, also called hypnosis, in laboratory animals. Alterations in volatile anesthetic sensitivity caused by pharmacological interventions can be detected with a carefully controlled high-throughput assessment system, which may be adapted for delivery of any inhaled therapeutic.

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

Assessment of Mouse Judgment Bias through an Olfactory Digging Task

Judgment biases (JB) are differences in the way that individuals in positive and negative affective/emotional states interpret ambiguous information. This phenomenon has long been observed in humans, with individuals in positive states responding to ambiguity 'optimistically' and those in negative states instead showing 'pessimism'. Researchers aiming to assess animal affect have taken advantage of these differential responses, developing tasks to assess judgment bias as an indicator of affective state. These tasks are becoming increasingly popular across diverse species and fields of research. However, for laboratory mice, the most widely used vertebrates in research and a species heavily relied upon to model affective disorders, only one JB task has been successfully validated as sensitive to changes in affective state. Here, we provide a detailed description of this novel murine JB task, and evidence of its sensitivity to mouse affect. Though refinements are still necessary, assessment of mouse JB opens the door for answering both practical questions regarding mouse welfare, and fundamental questions about the impact of affective state in translational research.

This article provides a detailed description of a novel mouse judgment bias protocol. Evidence of this olfactory digging task's sensitivity to affective state is also demonstrated and its utility across diverse research fields is discussed.

후각 파기 작업을 통한 마우스 판단 편향 평가

Judgment biases (JB) are differences in the way that individuals in positive and negative affective/emotional states interpret ambiguous information. This ...

<meta charset="utf8"></head><body>마우스 모델의 자폐 스펙트럼 장애에 대한 행동 분석

Strategies for Assessing Autistic-Like Behaviors in Mice

Autism spectrum disorder (ASD) is a neurobiologically complex condition with a heterogeneous genetic etiology. Clinically, ASD is diagnosed by social communication impairments and restrictive or repetitive behaviors, such as hand flapping or lining up objects. These behavioral patterns can be reliably observed in mouse models with ASD-linked genetic mutations, making them highly useful tools for studying the underlying cellular and molecular mechanisms in ASD. Understanding how genetic changes affect the neurobiology and behaviors observed in ASD will facilitate the development of novel targeted therapeutic compounds to ameliorate core behavioral impairments. Our lab has employed several protocols encompassing well-described training and testing procedures that reflect a wide range of behavioral deficits related to ASD. Here, we detail two assays to study the core features of ASD in mouse models: self-grooming (a measure of repetitive behavior) and the three-chamber social interaction test (a measure of social interaction approach and preference for social novelty).

<meta charset="utf8"></head><body>생쥐의 자폐증과 유사한 행동을 평가하기 위한 전략

Rodent models are valuable tools for studying core behaviors related to autism spectrum disorder (ASD). In this article, we expound on two behavioral tests for modeling the core features of ASD in mice: self-grooming, which assesses repetitive behavior, and the three-chamber social interaction test, which documents social impairments.

생쥐의 자폐증과 유사한 행동을 평가하기 위한 전략

Autism spectrum disorder (ASD) is a neurobiologically complex condition with a heterogeneous genetic etiology. Clinically, ASD is diagnosed by social ...