저자 아무 승인 있다.

이 프로토콜은 Chalmers 대학의 인간 연구 윤리 위원회의 지침을 따릅니다.
참고: 모든 단계 살 균 biosafety 내각 내에서 수행할 수 있습니다.
1. 소모품, Bioink, 및 세포의 준비
<ol>
	<li>두 개의 주사기를 얻을, bioink (그림 1b)에 대 한 다른 주사기는 한 주사기 (그림 1a) 셀 서 스 펜 션입니다.</li>
	<li>살 균 수동 혼합 단위그림 1(c) 듀얼 주사기 Luer 잠금 연결을 통해 결합 될 수 있다 얻을.</li>
	<li>볼륨 제어 속도로 동시에 두 개의 무 균 주사기에서 돌출 수 분배 장치를 (그림 1의d)를 가져옵니다. 참고:이 연구에 활용 하는 혼합 비율 10:1입니다. 따라서, 10:1 혼합 단위에 따라 12 mL 주사기와 1 mL 주사기를 사용 합니다.</li>
	<li>(그림 1e) 살 균 카트리지 및 직접에 bioink 및 세포 현 탁 액을 혼합 하는 살 균 여성 여성 Luer 잠금 커넥터를 가져옵니다.</li>
	<li>얻거나는 bioink 세포 현 탁 액과 혼합에 대 한 준비. 참고:이 프로토콜에 기반으로 하는 nanocellulose/alginate bioink 이용 되었다. 이 bioink는 포스트 인쇄 살 균 100 m m CaCl2 솔루션의 추가 통해 상호 연결 된.</li>
	<li>0.5 %trypsin / EDTA 용액을 사용 하 여 셀을 분리 하 고 trypan 블루 제외 방법17를 사용 하 여 셀의 총 수를 계산 합니다. 참고:이 프로토콜에서 인간의 섬유 아 세포 했다 활용 됩니다.</li>
	<li>어떤 셀 밀도 최종 인쇄 된 구문에서 원하는 결정 합니다. 이 대상 최종 셀 밀도 달성 하기 위해 희석 해야 합니다 수확된 셀의 농도 다음 방정식을 사용 하 여 계산 합니다. 참고:이 프로토콜에서 최종 셀 밀도 5 x 106 셀/mL의 이용 되었다.<ol>
		<li>원하는 셀 농도 실험에 대 한 선택: C셀 (셀/mL).</li>
		<li>Bioink 필요, Vbioink, 원하는 구문의 총 수에 따라 금액 계산: 
		Vbioink = V구성 × NContructs 참고: 예를 들어 구문 당 bioink의 볼륨은 100 µ L. 30 구조, 인쇄 하는 경우 필요한 bioink 볼륨 3 mL입니다.</li>
		<li>필요한 셀의 수를 계산. 
		N셀 C셀 (1.1 × Vbiolink) =</li>
		<li>Resuspend 1/10번째 는 bioink의 볼륨에서에서 (N셀) 셀: 
		V세포 현 탁 액 = 0.1 × Vbiolink 참고: 예를 들어, 경우 Vbioink V세포 현 탁 액 3 mL = = 0.1 × 3 = 0.3 mL</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 세포 현 탁 액 및 Bioink의 혼합
<ol>
	<li>셀 서 스 펜 션 주사기로 세포 현 탁 액을 전송 합니다.</li>
	<li>다른 주사기에는 bioink를 전송 하거나 포함 하는 bioink 주사기를 얻을.</li>
	<li>Bioink 주사기 플런저를 후퇴 하 고 분배 장치에 주사기를 삽입 합니다. 세로로 Luer 잠금 커넥터와 위쪽 (그림 1f1) 단위를 배치 합니다.</li>
	<li>Bioink 주사기로 비슷한 길이를 다시 셀 주사기의 플런저를 당겨 하 고 분배 장치 (그림 1f2)에 삽입 합니다.</li>
	<li>Luer 잠금 커넥터 (그림 1f3) 복잡 하 게 혼합 단위를 모두 주사기를 연결 합니다.</li>
	<li>돌출 주사기에 공기를 분배 장치에 밀어 혼합 시스템을 프라임. 못쓰게 솔루션 Luer 잠금 (그림 1g4)에 도달 하기 전에 중지 합니다.</li>
	<li>애 벌 칠, 후 충전 카트리지 Luer 잠금 커넥터 (그림 1g 5)를 통해 혼합 단위의 끝에 연결 합니다. 충전 카트리지에서 플런저 하단 첨부 파일 이전에 있는지 확인 합니다.</li>
	<li>천천히 카트리지 (그림 1i7)에 함께 bioink와 세포 현 탁 액을 혼합 분사 장치 (그림 1h6) 압축.</li>
	<li>Bioink-셀 혼합 혼합 후 연결할 피펫으로 멸 균 팁 충전 카트리지 아래쪽에 플런저를 밀어. 셀/bioink 혼합물은 혼합에 다시 압출 하지 있도록 압축 될 때까지 분배 하십시오.</li>
	<li>카트리지 뚜껑을 부드럽게 작업 대에 카트리지 (피스톤 끝)의 상단에 어떤 공기 방울을 이동 하려면 누릅니다. 참고:이 시점에서 셀/bioink 혼합은 인쇄에 대 한 준비. 다음 섹션에서는 특정 응용 프로그램 및 인쇄 절차 개요 것입니다.</li>
</ol>
3. 수동 주걱 혼합에 비해 혼합 단위를 사용 하 여 세포 생존 능력의 결정
<ol>
	<li>80% 합류에서 0.5%의 트립 신/EDTA 용액으로 인간의 섬유 아 세포 (통로 7)를 분리, 개수, 및 충분 한 세포 밀도 bioink와 혼합 후 최종 농도 달성 하기 위해 문화 매체에서 resuspend (1시 10분 셀: bioink 비율) 5 x 10의 6 셀/mL입니다.</li>
	<li>혼합 셀 중 수동 단위 기술 (단계 2)를 혼합 사용 하 여 bioink 또는 세포 생존 능력에 두 기술의 효과 평가 하는 주걱을 통해.</li>
	<li>수동 단위 기술 1, 2, 또는 3 번 100 m m CaCl2를 사용 하 여 교차 연결에 대 한 금형에 분배 하기 전에 혼합을 사용 하 여 bioink로 세포를 혼합. 참고: 추가 혼합을 수행 하는 카트리지 보다는 주사기에 직접 셀/bioink를 혼합. 다음 혼합 셀 주사기 구성 하지 않고 이전 프로토콜에 따라 혼합 장치를 통해 리믹스.</li>
	<li>혼합 주걱을 통해 30, 60, 90 또는 미 전송의 기간에 대 한 (각 혼합 시간)에 대 한 혼합물 100 mM CaCl2를 사용 하 여 교차 연결에 대 한 금형에 수동 기계를 사용 하 여 별도 bioink로 세포를 혼합.</li>
	<li>Cross-linking 문화와 표준 조건 하에서 완료 후에 잘 접시에 샘플을 전송.</li>
	<li>문화의 1 일 후 씻어 구문 (n = 그룹 당 3-4) 30 분에 대 한 혈 청 무료 세포 배양 매체에 얼룩 얼룩 솔루션 구문에서 셀 (4 µ M Calcein 오전, 1 µ M 브로민 homodimer-1) 30 분.<ol>
		<li>두 개의 추가 번 세척 하 고 37 ° c.에서 1 h의 총에 대 한 혈 청 무료 세포 배양 매체에서 샘플을 품 어</li></ol></li></ol>라이브 셀 이미징 솔루션에는 샘플을 전송 합니다.
	
	
	<li>FITC와 텍사스 레드 필터와는 거꾸로 한 현미경을 사용 하 여 10 배 확대에 디지털 컬러 카메라를 통해 이미지 및 이미지 분석 소프트웨어를 사용 하 여 분석.</li>
	<li>세포 생존 능력의 정량화에 대 한 각 구성에서 3 개의 이미지를 임의로 선택 합니다.</li>
	<li>생존 세포의 총 수를 라이브 셀의 비율에 따라 계산 합니다. Tukey의 다중 비교 테스트 뒤 일방통행 ANOVA 통해 데이터를 분석 합니다.</li>

4. 단일 셀 유형으로 연골 아날로그 Bioprinting
<ol>
	<li>원하는 조직 아날로그의 3D 모델을 그립니다. Gcode 파일 bioprinting에 변환 하 고 bioprinter1에 Gcode 파일 로드. 참고:이 프로토콜에 크기 4.8 x 4.8 x 0.9 m m3 평방 구조는 STL 파일로 내보낼 했다. 다음 설정을 사용 하 여 격자 구조의 Gcode 파일 생성: 레이어 두께, 0.3 m m; infill 패턴, 직선; infill 밀도, 25%; 속도, 10 m m/s입니다.</li>
	<li>분리 하 고 기본 인간의 코 chondrocytes (hNC) 환자 참조 된 프로토콜1에서 cryopreserve.</li>
	<li>해 동 및 cryopreserved hNCs를 확장 하 고 37 ° c.에 표준 문화 매체를 사용 하 여 단층 문화에 한 번 확장 80-90% 합류 0.5 %trypsin / EDTA 솔루션에서 세포를 분리 하 고 trypan 블루 제외 프로토콜을 사용 하 여 계산. 모든 실험은 통로 2에 hNCs를 사용 하 여 실시 했다.</li>
	<li>100 x 106 셀/mL 이내 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 페니실린-스, 그리고 준비는 bioink 혼합 50 µ g/mL ascorbic 산 보충 문화 매체의 300 µ L에는 hNCs를 resuspend.</li>
	<li>블렌드 nanocellulose/alginate에 hNC 세포 현 탁 액 단위 프로토콜 9 x 106 셀/mL의 최종 셀 농도를 10:1 bioink:cell 정지 비율로 혼합 수동 bioink 다음을 기반으로 합니다.</li>
	<li>그는 bioprinter 살 균 되 자외선 노출과 닦기를 통해 아래로 70% 에탄올으로 확인 합니다. 층 류 흐름에 캐비닛을 배치 하 여 불 임을 유지 합니다.</li>
	<li>Bioink/셀 서 스 펜 션의 혼합을 포함 하는 카트리지를 살 균 인쇄 노즐을 연결 하 고는 bioprinter에 삽입.</li>
	<li>수동으로 또는 프린터에 특정 프로토콜에 의해는 bioprinter를 보정.</li>
	<li>Bioprint 격자 구조 셀-라덴 구문 다음 인쇄 매개 변수를 사용 하 여: 25 G 25 kPa의 압력에 원뿔 노즐. Bioprint 셀-무료 구조 (셀을 포함 하는 셀 매체와 혼합) 컨트롤입니다.</li>
	<li>구문을 구문 100 m m CaCl2 5 분 린스의 이온 솔루션을 추가 하 여 상호 링크 하 고 표준 문화 조건 (37 ° C, 5% CO2, 그리고 95% 상대 습도)에서 문화 매체에서 품 어. 두 번째 또는 세 번째 매일 미디어를 변경 합니다.</li>
	<li>2-4 주에 조직학 분석을 위해 샘플을 수집 합니다. Alcian 블루 얼룩18를 사용 하 여 개 그 생산에 대 한 샘플을 얼룩.</li>
</ol>
5. 2 개의 세포 유형으로 피부 아날로그 Bioprinting
<ol>
	<li>원하는 조직 아날로그의 3D 모델 그리고 bioprinting Gcode 파일로 변환. Gcode 파일은 bioprinter에 로드 합니다. 참고:이 프로토콜에 크기 4.8 x 4.8 x 0.9 m m3 평방 구조는 STL 파일로 내보낼 했다. Gcode 파일은 다음 설정을 사용 하 여 격자 구조의 생성: 레이어 두께, 0.3 m m; infill 패턴, 직선; infill 밀도, 25%; 속도, 10 m m/s입니다.</li>
	<li>Bioprinting에 대 한 bioink에 혼합에 대 한 셀을 준비 합니다. 피부 유사 체의 제조에 대 한 2 개의 세포 유형 활용 했다. 두 세포 유형 bioink와 bioprinting로 혼합 했다.<ol>
		<li>기본 HDF를 얻을. 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 페니실린-스와 50 µ g/mL ascorbic 산 보충 DMEM 성장 매체에서이 세포를 유지 합니다. 80-90% 0.5 %trypsin / EDTA 솔루션 및 카운트와 합류에 셀을 분리 합니다.</li>
		<li>분리 하 고 기본 hNC 환자 참조 된 프로토콜1에서 cryopreserve. 해 동 한 단층 문화에서 cryopreserved hNCs를 확장 합니다. 80-90% 0.5 %trypsin / EDTA 솔루션 및 카운트와 합류에 셀을 분리 합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>100 x 106 셀/mL 성장 미디어 내에 두 종류를 resuspend. 믹스 미디어의 300 µ L에서 100 x 106 셀/mL의 최종 총 농도 달성 하기 위해 1:1 비율로 함께 셀 정지.</li>
	<li>블렌드 HDF 및 nanocellulose/alginate에 hNC의 50: 50 세포 현 탁 액 단위 프로토콜 9 x 106 셀/mL의 최종 셀 농도를 10:1 bioink:cell 정지 비율로 혼합 수동 bioink 다음을 기반으로 합니다.</li>
	<li>bioprinter 살 균 되 또는 무 균 유지 캐비닛 층 흐름에 배치 됩니다 확인 하십시오.</li>
	<li>Bioink/셀 서 스 펜 션의 혼합을 포함 하는 카트리지를 살 균 인쇄 노즐을 연결 하 고는 bioprinter에 삽입.</li>
	<li>bioprinter 중 하나를 수동으로 보정 또는 프린터에 특정 프로토콜.</li>
	<li>Bioprint 격자 구조 셀-라덴 구문 다음 인쇄 매개 변수를 사용 하 여: 25 G 25 kPa의 압력에 원뿔 노즐. Bioprint 셀-무료 구조 (셀을 포함 하는 셀 매체와 혼합) 컨트롤입니다.</li>
	<li>구문을 구문 100 m m CaCl2 5 분 린스의 이온 솔루션을 추가 하 여 상호 링크 하 고 표준 문화 조건 (37 ° C, 5% CO2, 그리고 95% 상대 습도)에서 문화 매체에서 품 어. 두 번째 또는 세 번째 매일 미디어를 변경 합니다.</li>
	<li>2-4 주에 조직학 분석을 위해 샘플을 수집 합니다. 콜라겐에 대 한 샘플의 얼룩이 나 Masson의 trichrome 얼룩19를 사용 하 여 생산.</li>
</ol>

<ol>
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이 논문의 저자는 CELLINK LLC의 직원이 있습니다.

에서와 같이이 원고, pre-cellularized bioinks bioprinted 중 연골을 조작 또는 아날로그 최대 4 주 동안 배양 된 피부를 했다. 수동 단위 기술 혼합을 사용 하 여 혼합 한 후 세포 생존 능력 전통적인 혼합 방법 보다는 더 높았다. 또한, 혼합 장치를 사용 하 여 혼합 프로세스의 단순화 처리 단계 수를 최소화 하 고 혼합의 정도에서 더 나은 일관성에 대 한 있습니다. 궁극적으로, 두 셀 유통 구조 및 실험적인 그룹 bioink, 시간과 더 나은 재현성 결과. 조직의 특정 ECM 등의 구성 요소 개 그 콜라겐의 난 문화의 4 주 후 각각 연골과 피부 유사 체에 대 한 관찰 되었다. 이 혼합 기술과 다른 조직 대상을 조작 하 선택한 구조 기하학의 유연성을 나타냅니다. 연골과 피부 유사 체의 제조 전시 독특한 설계 조직 목표에 대 한 nanocellulose-alginate bioink와 bioprinting의 두 사용의 유연성. 우리는 아래의 연구의 두 가지 구성 요소를 설명 합니다: (1) 수동 단위 기술, 그리고 (2) 연골과 피부 유사 체 내의 셀의 동작을 혼합.
개발과 bioink에 세포 현 탁 액의 혼합에 대 한 기술 최적화 이러한 구조의 제조에 중요 했다. 전통적인 낮은 점도 히드로 재료, 달리는 bioinks의 높은 점도 인쇄 하기 전에 bioink의 pre-cellularization에 어려움에 결과. bioink에 셀 설립의 전통적인 방법 대신, 점성 bioink에 세포 현 탁 액의 원스텝 혼합에 대 한 프로토콜 개발 및 논의. 또한, 조직 구조의 제조에서 혼합이 기술의 실용적인 응용 프로그램 평가 했다. 이 한 단계 혼합 방법은 전통적인 혼합 기술 포함 제어 혼합 비율, 높은 및 불규칙 한 전단 응력의 최소화를 통해 몇 가지 장점이 고 샘플을 제거 하는 닫힌된 시스템 혼합 용기에 닫습니다. 그러나,이 기술은 세포/bioink 혼합에 대 한 전통적인 방법에 비해 장점이 되도록 몇 가지 중요 한 단계가 있다. 셀 셀 주사기에 중단 하 고 잘 혼합 하기 전에 혼합 긴요 하다. 너무 큰 주사기에 해제 및 셀의 전송 사이의 시간 간격의 시작 혼합 공정 발생할 수 있습니다 고르지 혼합 및 인쇄 된 필 라 멘 트로 유통 될 토사에 셀. 경우 침전 관찰, 간단한 반전 (2-3 회)의 혼합 직전 수동 혼합 단위 어셈블리는 resuspend 세포와 혼합 전 균일 한 분포를 보장 하기에 충분. 그것도 주사기에서 공기 방울 제거 또는 최소화 혼합 비율이 일정 하 게 유지 되도록 사전에 중요 한. 큰 공기 방울 혼합 이전 bioink 카트리지에 남아, 경우에 솔루션을 통해 실행 혼합 단위는 추가 시간 철저 하 게 혼합 되도록 하는 것이 좋습니다. 공기 방울 남아 있으면 인쇄 카트리지/주사기의 부드러운 도청 잔류 공기 방울 치환 수 있습니다. 또한, 여러 재료 혼합 (여러 혼합 단위 또는 자료)은 필요한 경우 더 복잡 한 구조에 대 한, 혼합 수를 bioinks/세포 현 탁 액의 농도 조정 해야 합니다, 적절 한 혼합을 통해 희석 후 되도록 최종 농도 아직도 얻을 수 있다.
다른 혼합 기술에 비해 수동 혼합 단위 bioinks cellularize에 대 한 새로운 접근 이다. 혼합, 또는 주걱 또는 다른 도구와 함께 감동 듀얼 주사기 같은 다른 혼합 기술, 달리 수동 혼합 단위 배치 및 사용자가 혼합에 더 일관성을 수 있습니다. 수동 혼합 기법, 주걱 혼합, 등의 자연의 혼합의 속도에 더 큰 사용자-사용자 변화에 발생합니다. 또한, 단위 및 듀얼 주사기 혼합 혼합 수동 폐쇄 시스템 매뉴얼 페 트리 접시 또는 튜브에서 혼합에 비해 더 작은 샘플 손실이 있다.
Bioink의 단일 유형 및 1 개 또는 2 개의 세포 유형 모두 조직 아날로그가이 원고에 조작에 의하여 이루어져 있다. 그러나, 다른 세포 유형으로 뚜렷한 bioinks의 영역을 포함 하는 아키텍처의 구성 조직 아날로그의 bioprinting 더 많은 생리 적 조직 구조20,21의 제작에 필요한 있을 수 있습니다. 22. 더 독특한 구성으로 bioinks를 전문화 또는 기능 다양 bioinks 있는 고유한 구성 또는 기능23, 창조 하는 함께 기존 bioinks의 여러 종류의 혼합을 통해 생성 될 수 있습니다. 24. 이 피하 층 또는 bioink 구성25,26 의 기온 변화도의 개발을 보장 하기 위하여 필요한 수 조직 지역 뼈 연골 피부와 같은 조직 전환 영역에서 특히 중요 한 있을 수 있습니다. 기본 조직27에서 발견이 중요 한 영역입니다. 또한, 혼합 단위 성장 요인 및 bioprinting 이전 bioinks에 morphogens 혼합 활용 될 수 있습니다. 닫힌된 혼합 시스템으로 샘플 손실의 제거는 비싸고 낮은 농도 생리 활성 요소의 사용에 대 한 매력이 어디 샘플 손실 bioprinted 구문 내 그들의 최종 농도 변경에서 될 수 있습니다, 특히 그라디언트 관련 됩니다.
수동이이 연구에 활용 하는 단위를 혼합을 포함 하 여 어떤 혼합 기술로 제한 기계적으로 민감한 세포 유형에 손상의 위험입니다. 예를 들어 같은 줄기 세포를 고립 된 골 또는 태아, 또는 유도 만능 줄기 세포에서 기계적 손상28,29더 받습니다. 혼합의 행위 셀 혼합 공정에 관련 된 전단 세력 때문에 비정상적인 기계적 스트레스를 부여 하 고 그들은 생존30을 유지 하기 위해 균형 해야 합니다. 기본 섬유 아 세포와이 연구에서 chondrocytes 사용 결과 좋은 생존 (그림 2), 하는 동안 더 많은 연구는 안전 혼합 비율 및 더 민감한 셀 형식에 대 한 비율을 결정 하는 데 필요한. 그때까지, 그 생존 능력을 극대화 하기 위해 꾸준한 느린 속도에서 수행 혼합 것이 좋습니다. 또한,이 연구에서 선택한 셀 밀도 이전 연구1에 따라 결정 했다. 이 셀 밀도 모든 셀 형식에 적합 하지 않을 수 있습니다.특히, 높은 농도에서 세포를 혼합 세포 생존 능력 및 조직 형성31,32향상 될 수 있습니다 증가 셀 연락처 발생할 수 있습니다. 비슷한 맥락에서 수동 혼합 단위 셀 spheroids 또는 다른 셀의 집계33 bioinks로 혼합에 적용할 수 있습니다.
로 제안 하 고 혼합 단위 시스템 수동 점성 bioink으로 빠르게 세포 현 탁 액 혼합이 연구에서 설명. 셀에 기계적 손상에 대 한 위험이 여전히 남아 있다, 그러나 접근 내 단일 연구와 사용자가 더 많은 일관성을 수 있습니다. 이 접근을 이용 하 여 pre-cellularized bioinks 두 연골을 조작 하 여 최대 4 주 동안 배양 되었고 조직 특정 ECM 마커의 시연 아날로그 피부 사용 되었다. 미래 연구는 단위 시스템에서 더 복잡 한 조직 유사 체의 제조에 대 한 표준화 된 bioinks 전문된 bioinks 혼합을 혼합 하는 수동의 활용에 집중할 것 이다.

최근 몇 년 동안, 3 차원 (3D) bioprinting 기술 연구원, 기술 조직 유사 체의 제조에 더 널리 활용 될 수 있도록 더 접근 되고있다. Bioprinting 생물 의학 연구의 다각적인 조직 구문 신속 하 고 반복 가능한 제조를 촉진 하 여 혁명을 약속 드립니다. Bioprinting 기술의 핵심 3 차원에서 생체 재료 (bioinks 라고도 함)의 증 착을 정확 하 게 제어 하는 능력에 낳는다. 매트릭스 구성, 생리 활성 요소, 및 기본 조직 구조 정리 더 정확 하 게 수 있는 셀의 별개의 영역으로 복잡 한 장비의 세대 수 있습니다.
Bioprinting은 연골1, 피부2,3, 근육 및 뼈4를 포함 하 여 많은 조직의 응용 프로그램에 대 한 구조의 제조에 이용 되었습니다. 이 조직 때문에 그들의 본질적인 전기 마이크로-아키텍처 레이어, 레이어 증 착을 통해 재현 부에 대 한 적합 한 bioprinting에 대 한 매력이 있습니다. 특히, 피부 bioprinting 같은 레이어, 레이어 증 착 기술을 통해 제조를 위해 적당 한 잘 정의 된 다층된 구조5를 소유한 다. 또한, bioprinting 구조는 필요한 해 부 치수를 생성 하기 위해 이용 될 수 있다와 형태는 조직 복구를 제거. 환자 특정 크기와 모양6 생체 재료를 생성 하는 기능 등 많은 조직의 부분 수리에 대 한 수요를 해결 하기 위해 시작할 수에 국한 되지 않는 뼈 결함, 연골 손상 및 피부 장애의 정도에서 변화 한다 환자-환자입니다.
이 연구에서 두 조직 아날로그 (관절 연골과 피부) pre-cellularized bioinks bioprinting를 통해 조작 했다. 셀 서 스 펜 션 도전이 될 수 있다 세포 생존 능력을 보존 하는 동안 균일 한 셀 배포를 보장할 수 있는 bioink의 적절 한 혼합을 보장 합니다. Bioinks bioprinting 통해 압출에 적합 자주 높은 점성 그리고 균질 성 혼합 되도록 혼합 하는 광범위 한 필요. 셀에 기계적 손상 거친 혼합 조건 하에서 발생 하 고 생존에 부정적인 영향을 미칠 수 있습니다. 연구 결과 잉크젯 인쇄 프로세스 동안 대부분 세포 죽음 혼합7,8등 준비 하는 동안 발생 하는 것으로 나타났습니다. 전통적인 혼합 교 반9 낮은 점도 bioinks 잉크젯 인쇄10적합에 대 한 충분 한 될 수도 있지만, 높은 점도 bioink로 셀의 혼합 압출 bioprinting를 위해 더 적당 한 더 어렵습니다. 해결이 필요, 혼합 노즐의 사용 더 인쇄 과정11동안 bioinks의 혼합에 대 한 인기가 되고있다. 이들이 믹서는 또한 널리 이용 되어 마이크로 연구 중요 한12가 낮은 레이놀즈 수와 액체의 혼합에. bioink으로 세포 현 탁 액을 혼합 하는 연속 혼합 공정 활용 인쇄 과정에서 균일성에 대 한 수 것입니다. 그러나, 이후 셀 정지는 bioink에 비해 낮은 점도가지고, 인쇄 과정9,,1314중 셀의 침전 방지에 어려움 발생 합니다. 또는, 인쇄 하기 전에 bioink로 셀의 혼합이 문제를 해결 수 있습니다.
최소화 하기 위해 세포 죽음을 bioink으로 혼합 하는 동안, 우리는 최소한의 단계에서 bioink 셀 바꿀 수동 섞는 단위에 따라 기술을 개발. 혼합 장치를 통해 자료의 흐름을 통해 생성 된 혼란 혼합 reproducibly 조화 두 가지 구성 요소가 함께15,16에 충분 하다. 이 방법은 주로 어떤 bioink는 압출 bioprinting 적합으로 어떤 세포 현 탁 액의 혼합을 단순화 하기 위해 개발 되었다. 혼합 과정에서 단계 수 혼합 사용자-사용자 변형 제거를 최소화 했다. 과도 한 혼합 단계 셀 관련 하는 경우에 특히 시간이 걸릴 하 고 모든 bioinks, 적용 되지 않습니다 될 수 있습니다. 보조, 우리 독립적인 무 균 유지와 샘플 손실을 최소화 하는 혼합 공정 개발 목적.
이 원고, 혼합 세포 현 탁 액 bioink 수동 처리를 최소화 하 고 높은 세포 생존 능력 및 유니폼 배포 단위 기술 혼합을 사용 하 여 보여 줍니다. 이러한 pre-cellularized bioinks 다음 bioprint 연골 또는 피부 최대 6 주에 대 한 교양을 각각 하나 또는 두 개의 셀 종류와 구성에 활용 됩니다. 활용 하는 bioink 이전 bioprinting1에 대 한 적합성 표시는 alginate nanocellulose 조화입니다.

<table><tbody><tr><td>STARTINK Kit</td><td>CELLINK</td><td>SK0001</td><td>Kit that contained all the elements for the CELLMIXER procedure</td></tr><tr><td>Live/Dead Kit</td><td>Life Technologies</td><td>L3224</td><td>Kit for the analysis of cell viability after mixing</td></tr><tr><td>Masson&#039;s Trichrome</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&lt;strong&gt;HT15-1KT&lt;/strong&gt;</td><td>Kit for the analysis of collagen I deposition in the skin constructs</td></tr><tr><td>Alcian Blue</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&lt;strong&gt;B8438-250ML&lt;/strong&gt;</td><td>Kit for the analysis of glycosaminoglycan deposition in the skin constructs</td></tr><tr><td>INKREDIBLE+ bioprinter</td><td>CELLINK</td><td>Gen1+</td><td>Printer utilized in the study</td></tr><tr><td>DMEM with Glutamax</td><td>Thermofisher</td><td>10566016</td><td>Media for culture of the cells</td></tr><tr><td>10% fetal bovine serum</td><td>Thermofisher</td><td>A3160402</td><td>Media supplement</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Life Technologies</td><td>15070063</td><td>Media supplement</td></tr><tr><td>live cell imaging solution</td><td>thermofisher</td><td>A14291DJ</td><td>component utilized using live/dead imaging</td></tr><tr><td>inverted microscope</td><td>Olympus</td><td>IX73</td><td>microscope utilized</td></tr><tr><td>a digital color camera</td><td>Olympus</td><td>XC10</td><td>microscope camera utilized</td></tr><tr><td>cellSens imaging software</td><td>Olympus</td><td>n/a</td><td>stock software with the microscope</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td>n/a</td><td>open source image analysis software</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 7</td><td>GraphPad</td><td>n/a</td><td>software for statistical analysis</td></tr><tr><td>Slic3r software (v1.2.9)</td><td>Slic3r</td><td>n/a</td><td>open-source software to convert .stl file to gcode</td></tr><tr><td>primary adult human dermal fibroblasts</td><td>ATCC</td><td>PCS-201-012</td><td>cell source for fibroblasts</td></tr></tbody></table>

bioprinting of cartilage and skin tissue analogs utilizing a novel passive mixing unit technique for bioink precellularization

Bioprinting 조직 엔지니어링 응용 프로그램에 대 한 구문 신속 하 고 재현성 제조 강력한 기술입니다. 이 연구에서는 연골과 피부 유사 체 소설 수동 단위 기술 혼합을 이용 하 여 bioink pre-cellularization 후 조작 했다. 이 기술은 높은 점성 bioink에 세포 현 탁 액의 혼합에 관련 된 단계를 단순화 하는 목적으로 개발 되었다. Bioprinting를 통해 입금 하는 필 라 멘 트의 해상도 셀 영역의 셀 없이 증 착 또는 바늘을 방해할 수 있습니다 큰 세포 덩어리의 보존을 피하기 위해 인쇄 전에 배포에 균일의 보증을 필요로 합니다. 우리는 빠르게 연골과 피부 유사 체의 bioprinting 전에 bioink와 세포 현 탁 액을 혼합 하는 기능을 보여 줍니다. 두 조직 아날로그 최대 4 주 동안 배양 수 있습니다. 조직학 분석 시연 세포 생존 능력 및 조직의 특정 세포 외 기질 (ECM) 마커 있다 (개 그), 콜라겐 등의 난 각각.

이 원고는 결과 두 개의 섹션으로 나누어집니다. 첫째, 세포 생존 능력 후 기계적인 방법 또는 수동 혼합 단위 혼합 분석 했다. 다음, 연골 및 피부 구문은 경작 되었고 관련 조직학 표식에 대 한 분석.
셀 유통 동질적인 두 경우 모두에서 나타났다. 그러나, 주걱 (그림 2b)를 사용 하 여 손으로 혼합의 행동 수동 혼합 단위 (그림 2는)와 혼합 하는 것 보다 더 많은 차이 있다. 범위, 속도, 그리고 주걱으로 혼합 기술을 매우 사용자에 따라 달라 집니다. 그러나, 수동 섞는 단위와 bioink로 세포를 혼합 혼합 표준화 하 고 일괄 처리를 통해 변화를 최소화 합니다. 또한, 30, 60, 90 s 혼합 시간 5 월 bioink의 대량으로 많은 양의 세포의 혼합에 대 한 충분 한 수 없습니다. 주걱으로 혼합을 통해 보다 엄격한 블렌딩 할 수 있습니다. 비교, 수동 혼합 단위를 활용 하 여 더 나은 혼합 하는 동안 bioink에 셀의 혼합 비율을 유지 하 고 균질 혼합 수행 되도록 보장. 또한, 샘플 손실 어디 bioink 남아 있을 수 있습니다 뒤에 접시, 튜브, 및 그들의 높은 점도 인해 혼합 도구에서 전통적인 혼합 기술로 관심사 이다. 세포 생존 능력은 섞는 단위와 혼합에 대 한 높은 (&#62; 90%) 1, 2, 또는 3 번. 수동 혼합 단위 이용 되었다 때 일정 한 속도로 천천히 혼합 약 1 분을 했다 혼합. 30 그리고 60 s 90 보다 큰에 대 한 혼합 후 높은 생존 능력을 전시 주걱으로 혼합 하는 동안 다른 그룹에 비해 생존에 큰 감소 귀착되 었 다 혼합의 s (77.9 ± 14%, p &#60; 0.05)그림 2(c). 이 과도 한 혼합 세포에 손상을 일으키는 원인일 수 있습니다. 장기 라이브/죽은 얼룩 14 일 및 문화의 28 일 후 보충 그림 1에 표시 됩니다. 셀 하루 14, 확산 시작 높은 하루 28, 확산 하 고 좋은 생존을 나타냅니다.
문화, 후 연골과 피부 조직 아날로그 조직학 통해 분석 되었다. 0, 14, 그리고 28 일에 연골 구문 분석에서는 수량에 Alcian 블루 얼룩 (그림 3a-3_c)를 통해 같이 개 그의 범위 증가. 하루에 14 얼룩은 위치에 있는 셀에 인접 하는 동안 얼룩의 부재는 날 0, 것으로 나타났습니다. 그러나, 문화의 하루 28, Alcian 블루 chondrocytic ECM의 형성을 보여주는 구조에 걸쳐 발견 된다. Bioprinted 피부 구조는 조직학 얼룩 콜라겐의 Masson의 Trichrome 얼룩 (그림 3d-3 층)을 활용 하 여 내가 통해 분석 되었다. 연골 구조와 마찬가지로, 0 샘플 전시 아니 콜라겐 증 착. 문화의 하루 14, 콜라겐의 상당한 예금 셀 주위 및 구성의 표면을 따라 지적 했다. 이 조밀한 콜라겐 레이어 구조 표면에 및 대량 내 발견 했다 더 하루 28, 강화 되었다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56372/56372fig1.jpg"> 
그림 1 : 혼합 단위 시스템 수동. 세포 현 탁 액, (b) 12 mL 주사기 (e), (d) 수동 혼합 단위, (c) 분배 단위, bioink 카트리지, (f) 어셈블리 bioink 주사기 (1) 및 셀의 작성에 대 한 (는) 1 mL 주사기 서 스 펜 션 주사기 (2) 분배 단위, 수동 혼합 단위 주사기 (3), 여성 여성 Luer 잠금 커넥터 (4)의 첨부 파일 (g)와 충전 카트리지 (5)의 첨부 파일의 끝에 부착 완료 (h, 어셈블리 ) 총리는 혼합 단위 (6), (나)를 분배 단위를 압축 분배 단위는 bioink와 세포 현 탁 액을 혼합 하 여 충전 카트리지 (7)으로 분배에 밀어 계속. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56372/56372fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56372/56372fig2.jpg"> 
그림 2 : 세포 생존 이미지 및 분석. 수동 단위 1, 2, 또는 3 배 혼합과 혼합 후 라이브 (녹색)와 죽은 (레드) 인간의 섬유 아 세포를 보여주는 대표 이미지 (a) 또는 30, 60, 또는 90 초 (b)에 대 한 주걱과 1 일 3D 문화. 4 배 확대에 이미지 표시 됩니다. 규모 막대 표시 200 µ m. (c) % 평균 생존 인간의 섬유 아 세포의 1 일 단위 또는 주걱 및 3D 문화를 혼합 하는 수동과 혼합 후. 오차 막대의 평균, 표준 편차를 표시 * 0.005. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56372/56372fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56372/56372fig3.jpg"> 
그림 3: 조직 특정 세포 외 매트릭스 증 착. 14, 그리고 (c) 28 Bioprinted 연골 구조 있다 0, (b) Alcian (a)에서 파란색을 활용 하 여 대 한 스테인드. 5 배 확대에서 캡처 이미지입니다. 콜라겐에 대 한 Masson의 Trichrome (d)를 사용 하 여 0, (e) 14, 난 스테인드 Bioprinted 피부 구조와 (f) 28. 5 배 확대에서 캡처 이미지입니다. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56372/56372fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Supplementary Figure 1" src="/files/ftp_upload/56372/56372supfig1.jpg"> 
보충 그림 1: 14 (a), 일과 일 28 (b)에서 세포 생존 능력. 눈금 막대는 200 µ m, 그린 라이브 셀 참조, 레드 죽은 세포를 말합니다. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56372/56372supfig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

연골과 피부 조직 아날로그 소설 수동 Bioink Precellularization에 대 한 단위 기술 혼합을 이용 하 여 Bioprinting

연골과 피부 아날로그 bioprinted nanocellulose-alginate 근거한 bioink를 사용 하 여 했다. bioinks 번 수동 혼합 장치를 통해 인쇄 하기 전에 cellularized 했다. 구문 균일 하 게 cellularized, 높은 생존 능력, 그리고 차별화의 유리한 마커 전시를 시연 했다.

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...

bioprinting-cartilage-skin-tissue-analogs-utilizing-novel-passive

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Bioengineering

13.5K 조회수.  CELLINK LLC. 연골과 피부 아날로그 bioprinted nanocellulose-alginate 근거한 bioink를 사용 하 여 했다. bioinks 번 수동 혼합 장치를 통해 인쇄 하기 전에 cellularized 했다. 구문 균일 하 게 cellularized, 높은 생존 능력, 그리고 차별화의 유리한 마커 전시를 시연 했다.

비디오: Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

Human Cartilage Tissue Fabrication Using Three-dimensional Inkjet Printing Technology

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and regenerative medicine. With digital control&#160;cells, scaffolds, and growth factors can be precisely deposited to the desired two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) locations rapidly. Therefore, this technology is an ideal approach to fabricate tissues mimicking their native anatomic structures. In order to engineer cartilage with native zonal organization, extracellular matrix composition (ECM), and mechanical properties, we developed a bioprinting platform using a commercial inkjet printer with simultaneous photopolymerization capable for 3D cartilage tissue engineering. Human chondrocytes suspended in poly(ethylene glycol) diacrylate (PEGDA) were printed for 3D neocartilage construction via layer-by-layer assembly. The printed cells were fixed at their original deposited positions, supported by the surrounding scaffold in simultaneous photopolymerization. The mechanical properties of the printed tissue were similar to the native cartilage. Compared to conventional tissue fabrication, which requires longer UV exposure, the viability of the printed cells with simultaneous photopolymerization was significantly higher. Printed neocartilage demonstrated excellent glycosaminoglycan (GAG) and collagen type II production, which was consistent with gene expression. Therefore, this platform is ideal for accurate cell distribution and arrangement for anatomic tissue engineering.

The methods described in this paper show how to convert a commercial inkjet printer into a bioprinter with simultaneous UV polymerization. The printer is capable of constructing 3D tissue structure with cells and biomaterials. The study demonstrated here constructed a 3D neocartilage.

입체 잉크젯 인쇄 기술을 사용하여 인간의 연골 조직 제작

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and ...

연구

생체공학

Viability of Bioprinted Cellular Constructs Using a Three Dispenser Cartesian Printer

Tissue engineering has centralized its focus on the construction of replacements for non-functional or damaged tissue. The utilization of three-dimensional bioprinting in tissue engineering has generated new methods for the printing of cells and matrix to fabricate biomimetic tissue constructs. The solid freeform fabrication (SFF) method developed for three-dimensional bioprinting uses an additive manufacturing approach by depositing droplets of cells and hydrogels in a layer-by-layer fashion. Bioprinting fabrication is dependent on the specific placement of biological materials into three-dimensional architectures, and the printed constructs should closely mimic the complex organization of cells and extracellular matrices in native tissue. This paper highlights the use of the Palmetto Printer, a Cartesian bioprinter, as well as the process of producing spatially organized, viable constructs while simultaneously allowing control of environmental factors. This methodology utilizes computer-aided design and computer-aided manufacturing to produce these specific and complex geometries. Finally, this approach allows for the reproducible production of fabricated constructs optimized by controllable printing parameters.

A Cartesian bioprinter was designed and fabricated to allow multi-material deposition in precise, reproducible geometries, while also allowing control of environmental factors. Utilizing the three-dimensional bioprinter, complex and viable constructs may be printed and easily reproduced.

세 디스펜서 데카르트 프린터 사용 Bioprinted 세포를 구축의 생존

Tissue engineering has centralized its focus on the construction of replacements for non-functional or damaged tissue. The utilization of ...

Bioprinting Cellularized Constructs Using a Tissue-specific Hydrogel Bioink

Bioprinting has emerged as a versatile biofabrication approach for creating tissue engineered organ constructs. These constructs have potential use as organ replacements for implantation in patients, and also, when created on a smaller size scale as model "organoids" that can be used in in vitro systems for drug and toxicology screening.
Despite development of a wide variety of bioprinting devices, application of bioprinting technology can be limited by the availability of materials that both expedite bioprinting procedures and support cell viability and function by providing tissue-specific cues. Here we describe a versatile hyaluronic acid (HA) and gelatin-based hydrogel system comprised of a multi-crosslinker, 2-stage crosslinking protocol, which can provide tissue specific biochemical signals and mimic the mechanical properties of in vivo tissues. 
Biochemical factors are provided by incorporating tissue-derived extracellular matrix materials, which include potent growth factors. Tissue mechanical properties are controlled combinations of PEG-based crosslinkers with varying molecular weights, geometries (linear or multi-arm), and functional groups to yield extrudable bioinks and final construct shear stiffness values over a wide range (100 Pa to 20 kPa). Using these parameters, hydrogel bioinks were used to bioprint primary liver spheroids in a liver-specific bioink to create in vitro liver constructs with high cell viability and measurable functional albumin and urea output. This methodology provides a general framework that can be adapted for future customization of hydrogels for biofabrication of a wide range of tissue construct types.

We describe a set of protocols that together provide a tissue-mimicking hydrogel bioink with which functional and viable 3-D tissue constructs can be bioprinted for use in in vitro screening applications.

Bioprinting Cellularized는 조직 고유의 하이드로 겔 Bioink를 사용하여 구축

Bioprinting has emerged as a versatile biofabrication approach for creating tissue engineered organ constructs. These constructs have potential use as ...

Automated Robotic Dispensing Technique for Surface Guidance and Bioprinting of Cells

This manuscript describes the introduction of cell guidance features followed by the direct delivery of cells to these features in a hydrogel bioink using an automated robotic dispensing system. The particular bioink was selected as it allows cells to sediment towards and sense the features. The dispensing system bioprints viable cells in hydrogel bioinks using a backpressure assisted print head. However, by replacing the print head with a sharpened stylus or scalpel, the dispensing system can also be employed to create topographical cues through surface etching. The stylus movement can be programmed in steps of 10 &#181;m in the X, Y and Z directions. The patterned grooves were able to orientate mesenchymal stem cells, influencing them to adopt an elongated morphology in alignment with the grooves&#39; direction. The patterning could be designed using plotting software in straight lines, concentric circles, and sinusoidal waves. In a subsequent procedure, fibroblasts and mesenchymal stem cells were suspended in a 2% gelatin bioink, for bioprinting in a backpressure driven extrusion printhead. The cell bearing bioink was then printed using the same programmed coordinates used for the etching. The bioprinted cells were able to sense and react to the etched features as demonstrated by their elongated orientation along the direction of the etched grooves.

This protocol describes a bioprinting methodology using an automated robotic depositing system that incorporates etched topographical guidance cues with the precision deposition of a cell bearing hydrogel bioink. The printed cells are directly delivered to the etched features and are able to sense and orientate with them.

세포의 표면지도 및 Bioprinting에 대한 자동화 된 로봇 분배 기법

This manuscript describes the introduction of cell guidance features followed by the direct delivery of cells to these features in a hydrogel bioink using ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic bioprinting to generate a scaffold with multilayer interlacing hydrogel microfibers. To achieve smooth bioprinting, a core-sheath microfluidic printhead containing a composite bioink formulation extruded from the core flow and the crosslinking solution carried by the sheath flow, was designed and fitted onto the bioprinter. By blending gelatin methacryloyl (GelMA) with alginate, a polysaccharide that undergoes instantaneous ionic crosslinking in the presence of select divalent ions, followed by a secondary photocrosslinking of the GelMA component to achieve permanent stabilization, a microfibrous scaffold could be obtained using this bioprinting strategy. Importantly, the endothelial cells encapsulated inside the bioprinted microfibers can form the lumen-like structures resembling the vasculature over the course of culture for 16 days. The endothelialized microfibrous scaffold may be further used as a vascular bed to construct a vascularized tissue through subsequent seeding of the secondary cell type into the interstitial space of the microfibers. Microfluidic bioprinting provides a generalized strategy in convenient engineering of vascularized tissues at high fidelity.

We provide a generalized protocol based on a microfluidic bioprinting strategy for engineering a microfibrous vascular bed, where a secondary cell type could be further seeded into the interstitial space of this microfibrous structure to generate vascularized tissues and organoids.

공학에 대 한 미세 Bioprinting 나가도록 조직 및 Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

κ-Carrageenan Sub-Microgel Medium을 사용한 3D 바이오프린팅의 발전

Embedded Bioprinting of Tissue-like Structures Using &#954;-Carrageenan Sub-Microgel Medium

Embedded three-dimensional (3D) bioprinting utilizing a granular hydrogel supporting bath has emerged as a critical technique for creating biomimetic scaffolds. However, engineering a suitable gel suspension medium that balances precise bioink deposition with cell viability and function presents multiple challenges, particularly in achieving the desired viscoelastic properties. Here, a novel &#954;-carrageenan gel supporting bath is fabricated through an easy-to-operate mechanical grinding process, producing homogeneous sub-microscale particles. These sub-microgels exhibit typical Bingham flow behavior with small yield stress and rapid shear-thinning properties, which facilitate the smooth deposition of bioinks. Moreover, the reversible gel-sol transition and self-healing capabilities of the &#954;-carrageenan microgel network ensure the structural integrity of printed constructs, enabling the creation of complex, multi-layered tissue structures with defined architectural features. Post-printing, the &#954;-carrageenan sub-microgels can be easily removed by a simple phosphate-buffered saline wash. Further bioprinting with cell-laden bioinks demonstrates that cells within the biomimetic constructs have a high viability of 92% and quickly extend pseudopodia, as well as maintain robust proliferation, indicating the potential of this bioprinting strategy for tissue and organ fabrication. In summary, this novel &#954;-carrageenan sub-microgel medium emerges as a promising avenue for embedded bioprinting of exceptional quality, bearing profound implications for the in vitro development of engineered tissues and organs.

저자 스포트라이트: 고해상도 3D 바이오프린팅을 위한 균질 κ-Carrageenan Sub-Microgel Baths 개발

This study introduces a novel &#954;-carrageenan sub-microgel suspension bath, displaying remarkable reversible jamming-unjamming transition properties. These attributes contribute to the construction of biomimetic tissues and organs in embedded 3D bioprinting. The successful printing of heart/esophageal-like tissues with high resolution and cell growth demonstrates high-quality bioprinting and tissue engineering applications.

κ-Carrageenan Sub-Microgel Medium을 사용한 조직 유사 구조의 임베디드 바이오프린팅

Embedded three-dimensional (3D) bioprinting utilizing a granular hydrogel supporting bath has emerged as a critical technique for creating biomimetic ...

공학

Novel Process for 3D Printing Decellularized Matrices

3D bioprinting aims to create custom scaffolds that are biologically active and accommodate the desired size and geometry. A thermoplastic backbone can provide mechanical stability similar to native tissue while biologic agents offer compositional cues to progenitor cells, leading to their migration, proliferation, and differentiation to reconstitute the original tissues/organs1,2. Unfortunately, many 3D printing compatible, bioresorbable polymers (such as polylactic acid, PLA) are printed at temperatures of 210 &#176;C or higher - temperatures that are detrimental to biologics. On the other hand, polycaprolactone (PCL), a different type of polyester, is a bioresorbable, 3D printable material that has a gentler printing temperature of 65 &#176;C. Therefore, it was hypothesized that decellularized extracellular matrix (DM) contained within a thermally protective PLA barrier could be printed within PCL filament and remain in its functional conformation. In this work, osteochondral repair was the application for which the hypothesis was tested. As such, porcine cartilage was decellularized and encapsulated in polylactic acid (PLA) microspheres which were then extruded with polycaprolactone (PCL) into filament to produce 3D constructs via fused deposition modeling. The constructs with or without the microspheres (PLA-DM/PCL and PCL(-), respectively) were evaluated for differences in surface features.

This protocol describes the production of polycaprolactone (PCL) filament with embedded polylactic acid (PLA) microspheres which contain decellularized matrices (DM) for 3D printing of structural tissue engineering constructs.

3D 인쇄에 대 한 새로운 과정 Decellularized 행렬

3D bioprinting aims to create custom scaffolds that are biologically active and accommodate the desired size and geometry. A thermoplastic backbone can ...

Pancreatic Tissue-Derived Extracellular Matrix Bioink for Printing 3D Cell-Laden Pancreatic Tissue Constructs

The transplantation of pancreatic islets is a promising treatment for patients who suffer from type 1 diabetes accompanied by hypoglycemia and secondary complications. However, islet transplantation still has several limitations such as the low viability of transplanted islets due to poor islet engraftment and hostile environments. In addition, the insulin-producing cells differentiated from human pluripotent stem cells have limited ability to secrete sufficient hormones that can regulate the blood glucose level; therefore, improving the maturation by culturing cells with proper microenvironmental cues is strongly required. In this article, we elucidate protocols for preparing a pancreatic tissue-derived decellularized extracellular matrix (pdECM) bioink to provide a beneficial microenvironment that can increase glucose sensitivity of pancreatic islets, followed by describing the processes for generating 3D pancreatic tissue constructs using a microextrusion-based bioprinting technique.

Decellularized extracellular matrix (dECM) can provide suitable microenvironmental cues to recapitulate the inherent functions of target tissues in an engineered construct. This article elucidates the protocols for the decellularization of pancreatic tissue, evaluation of pancreatic tissue-derived dECM bioink, and generation of 3D pancreatic tissue constructs using a bioprinting technique.

인쇄 3D 세포 -라덴 췌장 조직 구성을 인쇄를위한 췌장 조직 유래 세포 외 매트릭스 바이오 잉크

The transplantation of pancreatic islets is a promising treatment for patients who suffer from type 1 diabetes accompanied by hypoglycemia and secondary ...

연골과 피부 조직 아날로그 소설 수동 Bioink Precellularization에 대 한 단위 기술 혼합을 이용 하 여 Bioprinting

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세 디스펜서 데카르트 프린터 사용 Bioprinted 세포를 구축의 생존

Bioprinting Cellularized는 조직 고유의 하이드로 겔 Bioink를 사용하여 구축

세포의 표면지도 및 Bioprinting에 대한 자동화 된 로봇 분배 기법

공학에 대 한 미세 Bioprinting 나가도록 조직 및 Organoids

κ-Carrageenan Sub-Microgel Medium을 사용한 조직 유사 구조의 임베디드 바이오프린팅

κ-Carrageenan Sub-Microgel Medium을 사용한 조직 유사 구조의 임베디드 바이오프린팅

κ-Carrageenan Sub-Microgel Medium을 사용한 조직 유사 구조의 임베디드 바이오프린팅

3D 인쇄에 대 한 새로운 과정 Decellularized 행렬

인쇄 3D 세포 -라덴 췌장 조직 구성을 인쇄를위한 췌장 조직 유래 세포 외 매트릭스 바이오 잉크