우리 감사 드리고 싶습니다 바이러스 성 벡터와 동물 코어 치료 마비에 마이애미 프로젝트에서 각각 lenti GFP 바이러스 및 제공 동물 관리, 생산 및 조직학 및 이미징 코어 cryostat, confocal 현미경의 사용에 대 한 고 스테레오 탐정 형광 현미경입니다. 자금 NINDS (09923), 국방부 (W81XWH-14-1-0482), NSF (DMR-1006510)에 의해 제공 했다. M.B. Bunge는 크리스틴 E 린 저명한 교수의 신경 과학 이다.

여성 성인 피셔 쥐 (180-200 g 몸 무게) NIH와 USDA 지침에 따라 보관 됩니다. 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 마이애미 대학의 모든 동물 절차 승인.
 1. 사전 이식 준비 <ol><li>도관 준비.
	<ol><li>잘라 도관 #10 블레이드 해 현미경을 사용 하 여 길이 5 m m. 
		참고: 2.4-2.7 m m; 사이 도관의 내부 직경은 외부 직경은 2.5-2.8 m m 사이.</li>
		<li>경도 측면 ( 그림 1A)을 따라 부드럽게 도관을 접어. 0.4 m m 길이 및 적어도 1mm 도관의 구멍에서 떨어져 똑 바른 가장자리 욕실이 위 ( 그림 1B)를 사용 하 여 약 1 m m에 대 한 4 개의 작은 절 개를 잘라.
		<ol><li>도관 ( 그림 1C)을 전개 하 고 만드는 두 개의 창을 나란히 같은 측면을 따라 두 절 사이 ( 그림 1D)를 잘라. 창문을 열어 하 고 포경을 따라 제대로 닫혀 수.</li>
		</ol></li> <li>10 cm 배양 접시에서 25 분 75% 에탄올에 도관을 소독. 1 버퍼링 하는 인산 염 (PBS) x 4 분 한 번 도관 린스 하 고 살 균 겸 새로운 10 cm 배양 접시에는 도관 전송. 각 25 분에 대 한 1 x PBS로 두 번 도관 린스.</li>
		<li>수술까지 1 x PBS에는 도관을 저장. 
		참고: 많은 도관 수 있다 살 균 되어야 한 번에. 별도 살 균 1.5 mL 원심 분리기 튜브 메 마른 그들을 유지 하는 도관 저장.</li>
	</ol></li> <li>녹색 형광 단백질 (GFP)-Schwann 세포 (SC) 준비 <ol><li>앞에서 설명한 43에서 성인 여성 피셔의 tibial 신경 정화 사우스 캐롤라이나 문화 쥐를 준비. 이 단계의 완료에 접시에 폴 리-L-리 신 (PLL) SCs-10 cm 배양 접시를 코팅 하 고 유지 하는 d 10/3 M 매체; 이러한 SCs 통로 0으로 정의 됩니다. 
		참고: d 10/3 M 매체는 다음 구성: 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 1% 페니실린-스 (펜/strep), 20 µ g/mL 뇌 하 수 체 추출, 2 µ M 산림, Dulbecco에서 2.5 nM heregulin &#39; s 수정이 글 &#39; s 매체 (DMEM).</li>
		<li>3 ~ 4 일 마다 신선한 d 10/3 M 매체 (mL/10-7cm 페 트리 접시)와 보충.</li>
		<li>분할 사우스 캐롤라이나 문화 합류 70-80%에 도달 하면.
		<ol><li>제거 매체와 행 크와 두 번 린스 &#39; s 균형 소금물 (HBSS) 칼슘 또는 마그네슘.</li>
			<li>각 10 cm 배양 접시에 0.25 %trypsin / EDTA의 5 mL을 추가 하 고 실 온 (RT)에서 5 분 동안 품 어.</li>
			<li>Trypsin 무력화 50 mL 원심 분리기 관으로 d 10 매체 (10 %FBS 1% 펜/strep DMEM에)의 5 mL을 추가.</li>
			<li>부드럽게 피펫으로 트립 신/EDTA 솔루션에는 페 트리 접시 SCs. 제거를 분리 하려면 여러 번 접시에서 세포 현 탁 액 고 그것 원심 분리기 튜브 이전 단계에서 준비 합니다. D 10 매체의 5 mL와 함께 접시를 헹 구 고 셀 수확을 최대화 하기 위해 원심 분리기 튜브에 배치.</li>
			<li>370 x g 4 o C. 제거는 상쾌한에 5 분 동안에 세포를 원심 및 각 페 트리 접시 분할에 대 한 4 mL d 10/3 M 매체에 셀 resuspend.</li>
			<li>10 cm 배양 접시에 1 mL의 사우스 캐롤라이나 정지 및 d 10/3 M 매체의 6 mL 분배; 각 페 트리 접시 분할 4 접시 귀 착될 것 이다. 이러한 SCs 통과 1로 정의 됩니다.</li>
			<li>신선한 d 10/3 M 매체는 하루 도금 후 도금 후 3-4 일 마다 Replenish.</li>
			<li>한번 SCs 합류 70-80%에 도달, 단계 1.2.3.1 1.2.3.6 반복. SCs는 지금 통로 2.</li>
		</ol></li> <li>50% 합류 한 번 도달 하는 SCs transduce, GFP d 10/3 M에서 인코딩 lentiviral 벡터와 하룻밤 30의 감염의 다양성에 매체 앞 44 , 45에서 설명한 .</li>
		<li>다음날과 도금 후 3-4 일 마다 신선한 d 10/3 M 매체와 보충.</li>
		<li>GFP-SCs 70-80% 합류, 도달 단계 1.2.3.1 1.2.3.5 반복 하지만 대신 d 10 매체의 6 mL에 GFP SCs를 resuspend. 1.5 mL 원심 분리기 튜브에 GFP-사우스 캐롤라이나 정지의 15 µ L를 분배 하 고 0.4 %trypan 블루 솔루션의 15 µ L를 추가 합니다. 원심 분리기 튜브를 부드럽게 터치 한 셀 계산 슬라이드의 챔버에 혼합물의 10 µ L를 분배 합니다.
		<ol><li>슬라이드 자동된 셀 카운터에 놓고 셀 밀도 결정.</li>
		</ol></li> <li>370 x g 4 o C. 제거는 상쾌한에 5 분 동안에 세포를 원심, 모든 3 x 10 6 GFP 냉동 매체의 1.5 mL와 함께 resuspend-극저온 유리병, 그리고-80에서 동결에 GFP-사우스 캐롤라이나 정지의 1.5 mL 디스 펜스 SCs. o 스토리지에 대 한 액체 질소로 이동 하기 전에 적어도 24 h에 대 한 C. 
		참고: 동결 매체: DMEM에 25 %FBS 8% 디 메 틸 sulfoxide.</li>
		<li>녹여 GFP-SCs 수술 전에 1 주일.
		<ol><li>50 mL 원심 분리기 관으로 추가 10 mL D10 매체.</li>
			<li>녹여 물 목욕에서 37 o C 부분적으로 해 동 때까지 냉동된 GFP SCs 튜브.</li>
			<li>극저온 유리병에서 GFP SC 현 탁 액을 제거 하 고 1.2.8.1에 50 mL 원심 분리기 튜브에 배치. 부드럽게 피펫으로 솔루션 고 반복적으로 아래로.</li>
			<li>370 x g 4 o C. 제거는 상쾌한에 5 분 동안에 세포를 원심 및 해 동 각 유리병에 대 한 4 mL d 10/3 M 매체에 셀 resuspend.</li>
			<li>10 cm 배양 접시에 GFP-사우스 캐롤라이나 정지 및 d 10/3 M 매체의 5 mL 2 mL 분배; 각 유리병 2 접시 초래 한다. GFP-SCs 통과 3로 정의 됩니다. 
			참고: 10 cm 배양 접시 일반적으로 수익률 약 8 x 10 6 GFP SCs 1 주일 후.</li>
		</ol></li> <li>수술 당일 단계 1.2.6 반복. 사용 셀 밀도 계산 단계 1.2.10.</li>
		<li>3 x 10 6 GFP SCs 살 균 1.5 mL 원심 분리기로 디스 펜스 aliquots 튜브 셀 밀도에 따라 단계 1.2.9에서에서 계산. 370 x g 4 o C에서 5 분에 GFP SC aliquots 원심 고는 상쾌한을 제거 합니다. 각 약 수와 원심 분리기에서 370 x g. DMEM/F12 매체의 1 mL을 추가 
		참고: 각 동물 받는 3 x 10 6 GFP-SCs. 보통 혈 청으로이 단계까지 GFP SCs와 함께 사용 됩니다.</li>
		<li>계속 GFP-SCs 이식의 시간까지 얼음에.</li>
	</ol></li></ol> 2. 흉부 레벨 8 (T8) Transection 완료 케 타 민 (60 밀리 그램/kg 체중) 및 xylazine (5의 복 주사와 <ol><li>수술 동물 준비 <ol><li>Anesthetize 여성 피셔 쥐 (180-200 g) mg/kg 몸 무게)입니다. 발가락을 꼬 집는 것을 선택 하 여 다음 단계로 진행 하기 전에 마 취의 깊이 모니터링 하 고 눈을 깜박이 응답.</li>
		<li>전기 깎기로 쥐의 뒤를 면도 하 고 70% 에탄올과 피부를 닦아냅니다. 두 눈에 안과 윤 활 유를 적용 합니다. 척추는 접근 하기 쉬운 롤에 약 37 o C. 장소는 동물에서 체온 유지에 생리대에 동물 수술 테이블에 전송. 
		참고: 롤 종이 타월 이나 살 균 될 수 있는 거 즈에 x2에 2에서 만들 수 있습니다. T7-T9 롤 위에 납작하게 누워 있을 때 더 큰 롤은 것이 좋습니다.</li>
	</ol></li> <li>T9 laminectomy T7 <ol><li>T9 T11 spinous 프로세스에 대 한 랜드마크를 찾습니다. 
		참고: T9, T10, T11 사이 격차는 작은 다른 세그먼트에 비해 난n 지역입니다. 롤에 쥐를 놓고, T9 T11 spinous 프로세스는 피부를 통해 작은 삼각형 범프 처럼 느낄 것 이다.</li>
		<li>는 T11에 T4에서 #10 블레이드를 사용 하 여 피부의 4 ~ 5 cm 중간 절 개를 확인 합니다. 지방 부에 무뚝뚝한 끝 곡선가 위 표면 지방 층에 작은 절 개를 만들기. 
		참고: 악기의 다른 종류는 지방 질을 분리 하에 사용할 수 있지만 무뚝뚝한 끝 곡선된가 위 지방 분리에 대 한 가장 효과적이 고 최소한 침략 적 방법을 사용.</li>
		<li>#10 잎의 뒷면을 사용 하 여 T7을 T9 spinous 프로세스를 찾습니다. 무딘 집게로 t 4에 대 한에 근육 누른 T6-T10에서 척추의 각 측면을 따라 근육에 절 개를 확인 합니다. 깨끗 한 오프닝을 만들고 동물에 최소한의 부상의 입을 최대한 척추에 가까운 컷 확인.</li>
		<li>각 개별 spinous 프로세스 t 7에서 근육과 인 대 사이의 T6와 T7 T7, T8, T8, T9, 절단 하 여 T9와 T9 T10 #10 블레이드와 격리.</li>
		<li>T9에 t 7에서 어떤 근육과 인 대는 하기에 제거 하는 rongeur를 사용 합니다. T7 t 9의 가로 프로세스 사이의 간격 표시 될 때까지 최대한 옆으로 근육과 인 대 제거.</li>
		<li>T9 spinous 프로세스는 rongeur 제거합니다. T8 spinous 프로세스 무딘 집게와 리프트 T9, T10 프로세스 사이의 작은 오프닝에서 T9 lamina 상승를 부드럽게 잡고.</li>
		<li>Lamina 오프닝에서 시작 하 고 t 9에서 rongeur와 rostrally 이동 제거 합니다. 가능한 만큼 많이 옆으로; lamina를 제거 지 뿌리는 laminectomy 후 표시 되어야 합니다.</li>
		<li>는 lamina 제거 되 면 T8 및 t 7에 대 한 과정을 반복. 
		참고: laminectomy, 동안를 사용 하 여 흡수 스피어스는 laminectomy 계속 하는 동안 혈액을 제거. 과다 출혈이 발생 하는 경우 압축된 스폰지에 출혈 사이트 놓고 염 혈액 응고에 도움이 추가.</li>
	</ol></li> <li>T8에서 transection <ol><li>T9에 T7 주위 견인 장소. 모든 하기 제거 되 면 가로 프로세스 사이의 간격 T8에 특히 볼 수 있는지 확인 합니다. 또한 바깥쪽으로 튀어나온 뼈 조각 없습니다 보장 하기 위해 t 9 T7 사이 양쪽에 길이 따라 뼈 검사. 
		참고: T8에이 격차는 전체 transection 수행 중요 합니다. 길이 따라 척추 쉽게 도관 삽입을 위해 제거 되어야 합니다.</li>
		<li>컷은 등 쪽 그리고 복 부 뿌리 T8 사용 하 여 위아래 각도 봄이 위. 척수에 염 분을 추가 하 고 기다리는 혈액 응고. 참고:이 단계는 적절 한 도관 삽입을 위해 중요 하다.</li>
		<li>T8에서 가로 프로세스 사이의 간격 척수 위에 각도 봄이 위 놓고 한 컷 척수를 완전히 끊을 수 있도록. 압축 된 거품의 작은 조각 결과 2-2.5 m m 간격으로 배치 하 고 지역에 식 염 수를 즉시 추가.</li>
	</ol></li></ol> 3. 도관 삽입 <ol><li>1 x PBS에서 도관 꺼내 hemostasis 도달 절단된 코드 젊고 아름 다운 여자를 기다리는 동안. 얇은 긴 조각으로 흡수 삼각형을 잘라 고 그들 도관 초과 PBS를 제거 합니다. 미리 잘라 창이 열려 확인.</li>
	<li>염 분을 제거 하 고 혈액 흡수 삼각형의 얇은 긴 조각을 사용 하 여. 좋은 분리를 보장 하는 microspatula를 사용 하 여 척수의 두 젊고 아름 다운 여자를 들어올립니다. 부드럽게 rostral 그 루터 기는 microspatula와 들어올린 자신을 직면 하는 windows와 함께 그 루터 기에 도관을 풀. 전체 그 루터 기를 삽입 하 고 도관에 아무 초과 출혈이 있다.</li>
	부드럽게 <li>꼬리 밑둥 들어올린 그 루터 기에는 도관의 다른 쪽 끝을 풀. 전체 그 루터 기 삽입 되 고 창 ( 그림 2A) 등 쪽 표면에는 있는지 확인 하십시오.</li>
</ol> 4. Schwann 세포 / 주 사용 매트릭스 (재료의 표 참조) 준비 및 사출 <ol><li>hemostasis 도달 절단된 코드를 기다리는 동안 GFP SC 펠 릿 (단계 1.2 준비) 위의 매체를 제거. 차가운 DMEM/F12의 10 µ l에 GFP SCs를 resuspend. 세포 현 탁 액을 감기 주사 젤의 10 µ l을 추가 하 고 반복 pipetting으로 잘 혼합. 도관 삽입 완료 될 때까지 얼음에 GFP-SC/DMEM/F12/주 사용 매트릭스 혼합물을 유지.</li>
	<li>는 등 쪽 표면에 창문 ( 그림 2A)를 확인 한 후 미리 잘라 창 46 중 하나를 통해 도관에 GFP-SC/DMEM/F12/주 사용 매트릭스 혼합물의 20 µ l 주사 사용 하는 팁과는 micropipette 로드 서쪽 오 점. 사우스 캐롤라이나/DMEM/F12/주 사용 매트릭스 혼합물 도관을 연극 해야, 흡수 삼각형으로 과잉을 제거 합니다. 주사; 후 창 닫기 아니다 봉합 필요 ( 그림 2B).</li>
</ol> 5. 상처 폐쇄와 수술 후 케어 <ol><li>봉합 근육 레이어 및 표면 뚱뚱한 층. 70% 에탄올과 다음 주식 (예를 들어, 상처 클립을 사용 하 여)와 피부를 깨끗 한 피부를 종료. 그들은 식이 되 찾을 때까지 열 레 귤 레이트 인큐베이터에서 동물을 유지. 동물 감 금 소에 다시 전송 합니다. 오래 먹이 튜브 물 제공 하 고 장소 알 약을 음식에 쉬운 접근을 위한 침구.</li>
	<li>관리 Buprenorphine (0.1 mg/kg 체중) 피하 통증을 줄이기 위해 수술 후 즉시 시작 하는 3 일 동안 하루에 두 번. Gentamycin (5 mg/kg 체중)을 방지 하 고 감염을 줄이기 위해 수술 후 즉시 7 일 동안 하루에 한 번 피하 주사. 10 mL lactated Ringers 솔루션의 수 화에 대 한 일 동안 하루에 두 번 피하 주사.</li>
	<li>빈 방광 수동으로 두 번 방광까지 하루 함수 반환 합니다. 방광 감염 발생 하는 경우 다음 관리 10 mL의 염 분 피하까지 소변 명확 하 게 된다. 이틀에 개선 경우 주사 gentamycin (5 mg/kg 체중, 하루에 한 번씩) 피하까지 소변 분명해.</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

효과적인 transection 모델을 만드는 가장 중요 한 단계는 하나 또는 두 개의 상처에서 척수 절단은. Rostral와 꼬리 척수 젊고 아름 다운 여자 사이 2-2.5 m m 간격 transection 사이트에 존재 해야 합니다. 나타나지 않는 이러한 격차에 대 한 세 가지 가능성이 가장 높은 이유는 (1) 등/복 부 뿌리 제대로 제거 되지 않은, (2) 복 부 두 라 적절 하 게, 제거 되지 않았습니다 및 (3) 동물 그녀 아래 배치 롤에 제대로 ...

척수 부상 수리는 관련 된, 예를 들어 조합 처리 전략을 필요로 하는 복잡 하 고 어려운 문제, 세포와 이식된 세포 기능 및 축 삭에 대 한 유리한 microenvironment를 제공 하는 소재를 사용 하 여 다시 부상의 생성 사이트 Hemisection1,2,,34,5,6,7,,89 및 완료 transection10 ,11,12,13,14,15,,1617,18,19 ,20,,2122 모델 소재 기반 브리지 치료의 효과 평가 하기 위해 자주 사용 됩니다. Hemisection 모델을 사용 하 여의 장점은 그것 완료 transection에 비해 브리징 구문에 대 한 더 많은 안정성을 제공입니다. 그러나, hemisection 모델, 그것은 절약된 조직의 존재로 인해 적용 된 치료 방법의 결과로 축 삭 재생을 증명 어렵다. 완전 한 transection 모델은 축 삭 재생을 보여 주기 위해 가장 엄격한 방법입니다.
다양 한 자연 및 합성 물질 주사 젤으로 사용 하기 위해 연구, 미리 형성 된 젤 hemisection에 타 박상 또는 hemisection 모델 또는 구조적된 도관 배치 또는 transection 모델 (에 대 한 자세한 리뷰23 를 완료합니다 , 24 , 25). 제자리에서 고 주 사용 매트릭스/SC 혼합물의 이식 및 축 삭 교차점26,27 미리 gelled 매트릭스/SC 임 플 란 트에 비해 호스트 코드 사이 더 인터페이스를 만듭니다 5 , 18 , 19 , 28. 제자리에서 고 허용 더 엄밀 하 고 구조화 된 도관 또는 덜 moldable 미리 형성 된 젤 수 없습니다 반면 불규칙 한 호스트 인터페이스 주위 윤곽을 매트릭스. 구조화 된 도관 자주 주사 매트릭스 달리 연락처 지침과 임 플 란 트 안정성을 제공합니다. 여기에 제시 된 프로토콜 설명 주사 지하실 멤브레인 매트릭스 (예: matrigel, 주사 매트릭스 여기로 테이블의 자료를 참조 하는 참조) 및 구조화 된 도관을 이용 하는 수술 가장 엄격한 척수 손상 모델에서 축 삭 재생을 평가 합니다.
Electrospun 폴 리-vinylidenedifluoride-trifluoroethylene (PVDF TrFE) 정렬 된 섬유 빈 도관 우리의 실험적인 접근 방식에 사용 됩니다. PVDF TrFE는 기계적으로 변형 하는 경우 임시 충전을 생성 하 neurite 연장 및 축 삭 재생을 촉진을 보여줘 왔다 압 전 폴리머29,30 생체 외에서그리고 vivo에서 31. 전기는 빠르게 제어 속성 섬유 정렬, 섬유 직경, 및을 위한 발판의 두께 등 다양 한 고분자를 사용 하 여 신뢰할 수 있는 섬유 건설 기계를 생산할 수 있는 일반적인 비 계 제조 방법 신경 및 기타 응용 프로그램32,,3334
쥐 척수 부상 사이트에 이식 하는 SCs의 수많은 학문은 치료 효능5,9,,1819,20,21 설명 했다 ,26. 이러한 이식 병 변 주위의 조직에 대 한 신경, 병 변 캐비티 크기를 줄일 수 있으며 병 변/이식 사이트 및 myelination 재생성 된 축 삭의 축 삭 재생을 촉진. 인간의 SCs autologously 이식 될 수 있습니다, 그리고 이점을 비교 될 때 대부분의 다른 관련 된 신경 세포24. 말 초 신경 생 검 후 SCs 수 고립 된 고 정화 및 인간으로 이식에 대 한 원하는 금액을 확산 것입니다. 척수 부상 환자에 대 한 헌 SC 이식 이란35,36,,3738, 중국39,40, 안전한 것으로 입증 되었습니다 및 미국41,42. SCs는 수많은 neurotrophic 요인 및 축 삭 성장을 위한 중요 한 세포 외 기질 단백질을 분 비 하 고 말 초 신경 손상 후 축 삭 재생에 필수적인 역할을 알려져 있습니다. 우리의 목표는 여기 도관 디자인 완전 한 쥐 척수 transection 모델에 SC 이식의 결과 개선 하기 위해 조사할 수 있는 방법을 설명 하는 것입니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cryogenic vials</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>5000-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cm Petri dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25382-428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium: nutrient mixture F-12</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11039-021</td>
			<td>&#34;DMEM/F12&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>&#34;Pen/Strep&#34; in protcol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH300-70-03</td>
			<td>&#34;FBS&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pituitary extract</td>
			<td>Biomedical Technologies</td>
			<td>BT-215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heregulin</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2636</td>
			<td>&#34;PLL&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>&#34;DMEM&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14170-112</td>
			<td>&#34;HBSS&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryspin-EDTA</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female Fischer rat (160-180g)</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissor, straight</td>
			<td>FST</td>
			<td>15018-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Vedco Inc</td>
			<td>5098976106</td>
			<td>100 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd Inc</td>
			<td>AnaSed</td>
			<td>20 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin</td>
			<td>APP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 63323-010-02</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Spatula</td>
			<td>FST</td>
			<td>10089-11</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved scissors with blunt end</td>
			<td>FST</td>
			<td>14017-18</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11006-12</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rongeur</td>
			<td>FST</td>
			<td>16121-14</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled spring scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15006-09</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorption triangles</td>
			<td>FST</td>
			<td>18105-03</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>9083300</td>
			<td>&#34;Compressed foam&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#10 blades</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>06-3010</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>&#34;Injectable matrix&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-green fluorescent protein antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB16901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse RT97 hybridoma antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>RT97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-neurofilament antibody</td>
			<td>Encor Biotechnology, Inc</td>
			<td>PRCA-NF-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyclonal Rabbit anti-Glial Fibrillary Acidic Protein antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z033401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 goat anti-chicken IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-11039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-11035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 goat anti-mouse IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscopy</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>clsi</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of schwann cells inside pvdf-trfe conduits to bridge transected rat spinal cord stumps to promote axon regeneration across the gap

쥐에서 척수 부상에 대 한 다양 한 모델 중에서 박상 모델 그것은 인간의 척수 상해의 가장 일반적인 유형 때문에 가장 자주 사용 됩니다. 전체 transection 모델 비록 타 박상 모델로 하지으로 임상으로 관련 축 삭 재생을 평가 하기 위해 가장 엄격한 방법입니다. 타 박상 모델에서 조직 게시물 부상을 나머지의 존재로 인해 부 화 또는 절약 axons에서 재생성 구별 하기가 어렵습니다. 완전 한 transection 모델에는 브리징 방법은 격차를 만들어 연속성 있는 rostral에서 꼬리 젊고 아름 다운 여자를 치료의 효과 평가 하는 데 필요한입니다. 신뢰할 수 있는 브리징 수술 수술 방법에 따른 가변성을 감소 결과 측정을 테스트 하는 필수적 이다. 여기에 설명 된 프로토콜 Schwann 세포 (SCs)를 준비 하는 데 사용 됩니다 이식, 흉부 레벨 8 (T8)에서 척수의 완전 한 transection 전 도관에 도관을 삽입 하 고 도관으로 SCs를 이식. 이 접근은 또한 제자리에 고 SC 이식 호스트 조직으로 rostral와 꼬리 인터페이스를 통해 향상 된 축 삭 성장을 허용 하는 주 사용 지하실 멤브레인 행렬의 사용 합니다.

이 수술 기법을 사용 하 여 목표 구조화 된 도관 및 완료 transected 척수에 이식 후 SC 함수를 최대화 하는 주 사용 매트릭스의 사용을 평가 하는 것입니다. 이식 후 3 주 동물 4 %paraformaldehyde 끼얹는다는 고 척추 열 조잡 해 부하 고 다른 24 h에 대 한 동일한 정착 액에 고정. 척수 후 해 부 고 cryostat 화살 섹션에 대 한 샘플은 cryoprotection에 대 한 30% 자당 해결책으로 됩니다. 1 m m ?...

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Transplantation of Schwann Cells Inside PVDF-TrFE Conduits to Bridge Transected Rat Spinal Cord Stumps to Promote Axon Regeneration Across the Gap

이 문서는 완전 한 transection 후 척수 젊고 아름 다운 여자와 채우기 Schwann 세포 (SCs)와 다리 하 고 격차에 걸쳐 축 삭 재생을 촉진 주사 지하실 멤브레인 매트릭스 사이 빈 도관을 삽입 하는 기법을 설명 합니다.

PVDF TrFE 도관 격차에 걸쳐 축 삭 재생을 촉진 하 Transected 쥐 척수 젊고 아름 다운 여자를 다리 안에 이식 Schwann 세포

Among various models for spinal cord injury in rats, the contusion model is the most often used because it is the most common type of human spinal cord ...

transplantation-schwann-cells-inside-pvdf-trfe-conduits-to-bridge

Research

JoVE Journal

Medicine

6.9K 조회수.  University of Miami Miller School of Medicine. 이 문서는 완전 한 transection 후 척수 젊고 아름 다운 여자와 채우기 Schwann 세포 (SCs)와 다리 하 고 격차에 걸쳐 축 삭 재생을 촉진 주사 지하실 멤브레인 매트릭스 사이 빈 도관을 삽입 하는 기법을 설명 합니다.

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Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

연구

의학

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory testing in rat SCI models is needed. However, until recently, no single testing approach had been validated for SCI so that standardized methods have not been implemented across labs. Additionally, available testing methods could not be implemented acutely or when severe motor impairments existed, preventing studies of the development of SCI-induced allodynia3. Here we present two validated sensory testing methods using von Frey Hair (VFH) monofilaments which quantify changes in tactile sensory thresholds after SCI4-5. One test is the well-established Up-Down test which demonstrates high sensitivity and specificity across different SCI severities when tested chronically5. The other test is a newly-developed dorsal VFH test that can be applied acutely after SCI when allodynia develops, prior to motor recovery4-5. Each VFH monofilament applies a calibrated force when touched to the skin of the hind paw until it bends. In the up-down method, alternating VFHs of higher or lower forces are used on the plantar L5 dermatome to delineate flexor withdrawal thresholds. Successively higher forces are applied until withdrawal occurs then lower force VFHs are used until withdrawal ceases. The tactile threshold reflects the force required to elicit withdrawal in 50% of the stimuli. For the new test, each VFH is applied to the dorsal L5 dermatome of the paw while the rat is supported by the examiner. The VFH stimulation occurs in ascending order of force until at least 2 of 3 applications at a given force produces paw withdrawal. Tactile sensory threshold is the lowest force to elicit withdrawal 66% of the time. Acclimation, testing and scoring procedures are described. Aberrant trials that require a retest and typical trials are defined. Animal use was approved by Ohio State University Animal Care and Use Committee.

We describe two tactile sensory testing methods for acute or chronic periods of spinal cord injury in rats. These validated procedures can detect the development and maintenance of allodynia-like sensations.

쥐의 척수를 다친 후에 급성 및 만성 촉각 감각 테스트

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory ...

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current estimates put the prevalence of amblyopia at approximately 1-3%1-3, the majority of cases being monocular2. Amblyopia is most frequently caused by ocular misalignment (strabismus), blur induced by unequal refractive error (anisometropia), and in some cases by form deprivation.
Although amblyopia is initially caused by abnormal visual input in infancy, once established, the visual deficit often remains when normal visual input has been restored using surgery and/or refractive correction. This is because amblyopia is the result of abnormal visual cortex development rather than a problem with the amblyopic eye itself4,5 . Amblyopia is characterized by both monocular and binocular deficits6,7 which include impaired visual acuity and poor or absent stereopsis respectively. The visual dysfunction in amblyopia is often associated with a strong suppression of the inputs from the amblyopic eye under binocular viewing conditions8. Recent work has indicated that suppression may play a central role in both the monocular and binocular deficits associated with amblyopia9,10 .
Current clinical tests for suppression tend to verify the presence or absence of suppression rather than giving a quantitative measurement of the degree of suppression. Here we describe a technique for measuring amblyopic suppression with a compact, portable device11,12 . The device consists of a laptop computer connected to a pair of virtual reality goggles. The novelty of the technique lies in the way we present visual stimuli to measure suppression. Stimuli are shown to the amblyopic eye at high contrast while the contrast of the stimuli shown to the non-amblyopic eye are varied. Patients perform a simple signal/noise task that allows for a precise measurement of the strength of excitatory binocular interactions. The contrast offset at which neither eye has a performance advantage is a measure of the "balance point" and is a direct measure of suppression. This technique has been validated psychophysically both in control13,14 and patient6,9,11 populations.
In addition to measuring suppression this technique also forms the basis of a novel form of treatment to decrease suppression over time and improve binocular and often monocular function in adult patients with amblyopia12,15,16 . This new treatment approach can be deployed either on the goggle system described above or on a specially modified iPod touch device15.

Amblyopia is a developmental disorder of the visual cortex that is often accompanied by strong suppression of one eye. We present a new technique for measuring and treating interocular suppression in patients with amblyopia that can be deployed using virtual reality goggles or a portable iPod Touch device.

약시의 억제의 측정 및 치료

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Brain Injury

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI). Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, social, and economical effects are staggering. Therefore, further research into the effects of TBI and effective treatments is necessary. The controlled cortical impact (CCI) model induces traumatic brain injuries ranging from mild to severe. This method uses a rigid impactor to deliver mechanical energy to an intact dura exposed following a craniectomy. Impact is made under precise parameters at a set velocity to achieve a pre-determined deformation depth. Although other TBI models, such as weight drop and fluid percussion, exist, CCI is more accurate, easier to control, and most importantly, produces traumatic brain injuries similar to those seen in humans. However, no TBI model is currently able to reproduce pathological changes identical to those seen in human patients. The CCI model allows investigation into the short-term and long-term effects of TBI, such as neuronal death, memory deficits, and cerebral edema, as well as potential therapeutic treatments for TBI.

Traumatic brain injuries (TBIs) remain a serious health problem. Using the controlled cortical impact surgery model, research on the effects of TBI and possible treatment methods may be performed.

외상성 뇌 손상에 대한 제어 피질 충격 모델

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI).  Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, ...

A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter connected to a radio transmitter into the femoral artery of rats that underwent a T4 spinal cord transection with or without grafting of embryonic brainstem-derived neural stem cells expressing green fluorescent protein. Compared to other methods such as cannula insertion or tail-cuff, telemetry is advantageous to continuously monitor blood pressure and heart rate in freely moving animals. It is also capable of long term multiple data acquisitions. In spinal cord injured rats, basal cardiovascular data under unrestrained condition and autonomic dysreflexia in response to colorectal distension were successfully recorded. In addition, cardiovascular parameters before and after SCI can be compared in the same rat if a transmitter is implanted before a spinal cord transection. One limitation of the described telemetry procedure is that implantation in the femoral artery may influence the blood supply to the ipsilateral hindlimb.

We present a protocol for using a radio-telemetric system to record cardiovascular parameters in T4 spinal cord transected rats eight weeks after embryonic brainstem neural stem cell grafting into the lesion site. Telemetry is an advanced technique to accurately evaluate cardiovascular function in conscious freely moving spinal cord injured rats.

무선 원격 측정 시스템은 척수 절개 및 배아 신경 세포 이식 줄기와 흰쥐의 심장 혈관 기능을 모니터링 할 수

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can be used both to investigate the biological responses to injury and to test potential therapies. Contusion or compression injury delivered to the surgically exposed spinal cord are the most widely used models of the pathology. In this report the experimental contusion is performed by using the Infinite Horizon (IH) Impactor device, which allows the creation of a reproducible injury animal model through definition of specific injury parameters. Stem cell transplantation is commonly considered a potentially useful strategy for curing this debilitating condition. Numerous studies have evaluated the effects of transplanting a variety of stem cells. Here we demonstrate an adapted method for spinal cord injury followed by tail vein injection of cells in CD1 mice. In short, we provide procedures for: i) cell labeling with a vital tracer, ii) pre-operative care of mice, iii) execution of a contusive spinal cord injury, and iv) intravenous administration of post mortem neural precursors. This contusion model can be utilized to evaluate the efficacy and safety of stem cell transplantation in a regenerative medicine approach.

Spinal cord injury is a traumatic condition that causes severe morbidity and high mortality. In this work we describe in detail a contusion model of spinal cord injury in mice followed by a transplantation of neural stem cells.

척수 손상의 실험 Contusive 모델에서 신경 줄기 세포 이식

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Reproducible Motor Deficit Following Aortic Occlusion in a Rat Model Of Spinal Cord Ischemia

Spinal cord ischemia is a fatal complication following thoracoabdominal aortic aneurysm surgery. Researchers can investigate the strategies for preventing and treating this complication using experimental models of spinal cord ischemia. The model described here demonstrates varying degrees of paraplegia that relate to the length of occlusion following thoracic aortic occlusion in a rat spinal cord ischemia model.
A 2-Fr. balloon-tipped catheter was advanced through the femoral artery into the descending thoracic aorta until the catheter tip was placed at the left subclavian artery in anesthetized male Sprague-Dawley rats. Spinal cord ischemia was induced by inflating the catheter balloon. After a set period of occlusion (9, 10, or 11 min), the balloon was deflated. Neurologic assessment was performed using the motor deficit index at 24 h after surgery, and the spinal cord was harvested for histopathological examination.
Rats that underwent 9 min of aortic occlusion showed mild and reversible motor impairment in the hind limb. Rats subjected to 10 min of aortic occlusion presented with moderate but reversible motor impairment. Rats subjected to 11 min of aortic occlusion displayed complete and persistent paralysis. The motor neurons in the spinal cord sections were more preserved in rats subjected to shorter duration of aortic occlusion.
Researchers can achieve a reproducible hind limb motor deficit following thoracic aortic occlusion using this spinal cord ischemia model.

This study demonstrates the technique to make a minimally invasive and easily reproducible model of spinal cord ischemia in rats. Various degrees of hind limb motor deficit can be produced by controlling the aortic occlusion time.

척수 쇄 허혈 모델에서 대동맥 폐쇄 후 재현성 운동 부족

Spinal cord ischemia is a fatal complication following thoracoabdominal aortic aneurysm surgery. Researchers can investigate the strategies for preventing ...

A Clinical Trial Assessing the Safety, Efficacy, and Delivery of Olive-Oil-Based Three-Chamber Bags for Parenteral Nutrition

Limited evidence exists to precisely estimate efficacy and safety differences between parenteral nutrition (PN) prepared using olive-oil-based three-chamber bags (3CBs) and soybean-oil-based compounded bags (CoBs) in hospitalized adult patients. We designed a multicenter, randomized, prospective, open-label, noninferiority protocol to compare the efficacy, safety, and distribution of olive-oil-based 3CBs and soybean-oil-based CoB formulations in adult Chinese patients requiring PN during surgical intervention. Subjects were randomized to receive either one of the study treatments using an interactive voice or web-based recognition system in accordance with the randomization code. Randomization was further stratified based on the study site and surgical category. Both treatment groups received similar amounts of calories and protein. In addition, the two study treatments contained a similar composition of the amino-acid component. The only difference between the two PN formulations was the lipid constitution. The duration of administration of study treatments was a minimum of 5 days up to a maximum of 14 days after the surgical procedure. The primary efficacy endpoint was serum prealbumin levels on day 5 of the study. Noninferiority was proved if the anti-log of the lower bound of the 95% confidence interval (CI) of the treatment difference was at least 0.80. Other efficacy measures included treatment preparation time; duration to achieve tolerability of oral nutrition; associated infectious complications; length of hospitalization; and laboratory assessment of markers of nutrition, inflammation, metabolism, and oxidative stress. A total of 458 patients were enrolled in the study. The results showed that olive-oil-based 3CBs were non-inferior to soybean-based CoBs, besides being well tolerated. The infection rate was found to be significantly lower in the olive-oil-based 3CB group. Thus, this study may be used as a reference for future research on lipid emulsion and 3CBs.

Here, we present a protocol for a study comparing the efficacy, safety, and delivery of olive-oil-based 3CB and soybean-oil-based CoB formulations in adults requiring parenteral nutrition. The results revealed that olive-oil-based 3CBs is non-inferior and well tolerated compared to soybean formulations.

Limited evidence exists to precisely estimate efficacy and safety differences between parenteral nutrition (PN) prepared using olive-oil-based ...

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand and face transplants and, more recently, abdominal wall, uterus, and urogenital transplants. Functional outcomes have exceeded initial expectations, and most recipients enjoy an improved quality of life. However, as clinical experience accumulates, chronic rejection and complications from the immunosuppression must be addressed. In many cases where grafts have failed, the causative pathology has been ischemic vasculopathy. <span style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">The biological mechanisms of the acute and chronic rejection associated with VCA, especially ischemic vasculopathy, are important areas of research. However, due to the very small number of VCA patients, the evaluation of proposed mechanisms is better addressed in an experimental model. Multiple groups have used animal models to address some of the relevant unsolved questions in VCA rejection and vasculopathy. Several model designs involving a variety of species are described in the literature. Here we present a reproducible model of VCA heterotopic hindlimb osteomyocutaneous flap in the rat that can be utilized for translational VCA research. This model allows for the serial evaluation of the graft, including biopsies and different imaging modalities, while maintaining a low level of morbidity.

Vascularized composite allograft offers life-altering benefits to transplant recipients, but the biological causes of graft rejection and vasculopathy remain poorly understood. The rodent surgical model presented here offers a reproducible, clinically relevant model of transplantation, allowing researchers to evaluate rejection events and potential therapeutic strategies to prevent their occurrence.

변형 된 이종 성 복합체 동종 요법 연구에 대 한 쥐에서 변성 이성애 자 골 진 피부 플랩 모델

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

온난 허혈/재관류 손상의 쥐 폐 이식 모델: 결과 개선을 위한 최적화

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...